CN111423449B - 从荸荠中分离的新苯骈二氧六环型木脂素及其制备保肝药物用途 - Google Patents
从荸荠中分离的新苯骈二氧六环型木脂素及其制备保肝药物用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111423449B CN111423449B CN202010392662.3A CN202010392662A CN111423449B CN 111423449 B CN111423449 B CN 111423449B CN 202010392662 A CN202010392662 A CN 202010392662A CN 111423449 B CN111423449 B CN 111423449B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- benzodioxan
- gel column
- ethyl acetate
- silica gel
- preparing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D493/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
技术领域
本发明属于医药领域,涉及从荸荠中分离得到的新苯骈二氧六环型木脂素及其制备方法,以及该化合物在制备保肝药物的用途。
背景技术
荸荠(Chinese water chestnut),拉丁学名为:Eleochairis toberosa,俗称马蹄,是莎草科(Cyperaceae)荸荠属(Eleocharis R.Br.)多年水生草本植物荸荠的地下球茎。荸荠是一种药食同源的食物,肉质细嫩、汁多味甜、清脆爽口,有“地下雪梨”之美誉。据《中药大辞典》记载:“荸荠性味甘、微寒、无毒,有温中益气、清热开胃、消食化痰之功效”。中医认为,荸荠性味甘寒,具有清热化痰、生津开胃、明目清音、消食醒酒等保健功效。现代研究发现,荸荠中含有多酚类、萘醌类、黄酮类、挥发油类等化合物。同时发现,荸荠具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化和降血糖等多种生物活性。
发明内容
发明人采用生物活性指导分离的方法,从荸荠的活性部位中分离得到一种新的苯骈二氧六环型木脂素,发明人基于APAP诱导HL-7702细胞肝损伤模型,采用MTT法对该化合物进行保肝活性筛选,发现该化合物具有一定的保肝活性。
为达到上述目的,本发明采用以下技术方案:
如式Ⅰ所示,一种从荸荠中分离得到的新苯骈二氧六环型木脂素:
化合物Ⅰ的化学名称:7-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-8-甲醇基-2'-甲氧基-3′,4′-(8′-异丙醇基-呋喃)-5'-丙烯基-二氧六环木脂素。
本发明的另一个目的是提供所述的苯骈二氧六环型木脂素的制备方法,荸荠采用85~95%乙醇回流提取2~4次,保证其保肝活性成分得到充分提取和富集,综合采用硅胶柱色谱、凝胶色谱和制备液相色谱从活性部位中分离得到式Ⅰ所示的苯骈二氧六环型木脂素。
具体包括以下步骤:
步骤(1)、将干燥的荸荠地下球茎粉碎成粗品,用85~95%乙醇加热回流提取2~4次,每次3~5小时,得到总提取液;
步骤(2)、总提取液40~50℃真空浓缩干燥,得到总提取物;
步骤(3)、将总提取物混悬于水中,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位;
步骤(4)、乙酸乙酯部位经过两次硅胶柱层析,再经Sephadex LH-20凝胶柱柱层析,最后采用制备液相色谱分离得到式Ⅰ所示的苯骈二氧六环型木脂素。
步骤(1)中,将干燥的荸荠地下球茎粉碎成80~100目粗品。
步骤(2)中,所述的总提取物与水的体积比为1:0.8~1.5。
步骤(4)中,第一次硅胶柱层析以100~200目硅胶为填料,以石油醚-乙酸乙酯=15:1~1:1V/V为洗脱液进行梯度洗脱。
第二次硅胶柱层析以200~300目硅胶柱为填料,以石油醚-乙酸乙酯=10:1~4:1V/V为洗脱剂进行梯度洗脱。
Sephadex LH-20凝胶柱的洗脱液为CH2Cl2-MeOH=1:1V/V。
制备液相色谱采用YMC-Pack ODS-A柱:250×10mm,S-5μm,12nm,流动相:30%~50%甲醇,流速:2~4mL/min,波长:205~330nm。
本发明的另一个目的是提供所述的苯骈二氧六环型木脂素在制备保肝药物中的用途。
优选的,本发明所述的苯骈二氧六环型木脂素在制备治疗或预防APAP诱发的药物性肝损伤的药物中的用途。
本发明的有益效果:
本发明苯骈二氧六环型木脂素结构新颖,提取方法简便快捷、高效彻底,易于操作。本发明基于APAP诱导HL-7702细胞肝损伤模型,采用MTT法对苯骈二氧六环型木脂素进行保肝活性筛选,首次公开了新的苯骈二氧六环型木脂素在制备保肝药物的用途。
附图说明
图1是本发明苯骈二氧六环型木脂素的制备流程图。
图2是本发明苯骈二氧六环型木脂素的偶联相关图。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的技术方案,但并不以此限定本发明保护范围。
实施例1
如图1所示,从荸荠中分离新苯骈二氧六环型木脂素,步骤如下:
步骤(1)、将干燥的荸荠地下球茎(18.0千克)粉碎成粗品(90目),用90%乙醇回流提取3次(4小时/次)得到总提取液;
步骤(2)、总提取液在低温(45℃)真空条件下浓缩干燥,得到总提取物(1.3千克);
步骤(3)、按照总提取物和水的体积比=1:1,将总提取物均匀混悬于水中,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,分别得到石油醚部位(58.5克)、乙酸乙酯部位(350.3克)、正丁醇部位(568.0克);
步骤(4)、基于生物活性指导分离的方法,基于对乙酰氨基酚(APAP)诱导HL-7702细胞肝损伤模型,采用MTT法对上述不同萃取部位进行保肝活性筛选,确定乙酸乙酯部位为保肝活性部位;
步骤(5)、乙酸乙酯部位上硅胶(100-200目)柱,用石油醚-乙酸乙酯(15:1→1:1,V/V)洗脱系统进行梯度洗脱,得到3个馏分A(91.6克)、B(131.2克)、C(107.7克);再次对这3个馏分进行保肝活性筛选,确定馏分B为保肝活性馏分;
步骤(6)、馏分B上硅胶(200-300目)柱,用石油醚-乙酸乙酯(10:1→4:1)洗脱系统进行梯度洗脱得到亚馏分B-1(30.8克)、B-2(54.4克)、B-3(43.6克);
步骤(7)、亚馏分B-2上Sephadex LH-20凝胶柱,用CH2Cl2-MeOH(1:1,V/V)进行洗脱,得到次馏分B-2-1(12.9克)、B-2-2(20.4克)、B-2-3(17.7克);
步骤(8)、次馏分B-2-2通过制备液相色谱分离(波长:210nm,流动相:40%甲醇,流速:3mL/min,YMC-Pack ODS-A柱:250×10mm,S-5μm,12nm),最终得到化合物Ⅰ(11.34毫克)。
化合物Ⅰ为浅黄色固体,HR-ESI-MS m/z 507.1636[M+Na]+提示其分子式为C26H28O9(calcd.for C26H28O9Na,507.1631)。化合物Ⅰ的UV(MeOH)λmax:210、260、286nm;IRνmax:3345、1612、1514、1387、1237cm-1;1H NMR(CD3COCD3,400MHz)和13C NMR(CD3COCD3,100MHz)数据见表1。
根据化合物Ⅰ的波谱数据和HMBC和1H-1H COSY偶联相关信息(图2),经SciFinder检索,鉴定化合物Ⅰ为一个新的苯骈二氧六环型木脂素。
表1、化合物Ⅰ的1H NMR、13C NMR和HMBC相关数据
实施例2化合物Ⅰ保肝活性筛选
(1)实验材料
RPMI-1640培养基,无支原体胎牛血清,对乙酰氨基酚,胰酶,HL-7702细胞等。
化合物Ⅰ用二甲基亚砜溶解后,用含10%小牛血清RPMI-1640培养基配制成2mg/mL备用。
(2)实验方法
对乙酰氨基酚母液配制:精密称取对乙酰氨基酚45.36mg,加入10mL RPMI-1640培养基,超声10min让其完全溶解,用0.22μm微孔滤膜滤过除菌得浓度为30mmol/L的母液,4℃保存。
化合物Ⅰ药液:精密称取一定量化合物Ⅰ,加入一定量无水乙醇溶解,然后加入RPMI-1640培养基配制成浓度为500μmol/L的母液,用RPMI-1640培养基分别稀释母液至10、20、40、80、160、320μmol/L,用0.22μm微孔滤膜过滤除菌后备用,现用现配。
APAP诱导HL-7702细胞肝损伤模型的建立:用RPMI-1640培养基将对乙酰氨基酚母液稀释成浓度为5、10、15、20、25、30mmol/L的APAP溶液,备用。将HL-7702细胞溶液以7×104个/mL密度接种于96孔培养板中,培养24h待细胞贴壁后,吸出原培养基,空白组加入纯RPMI-1640培养基,模型组加入含不同浓度APAP的RPMI-1640培养基各100μL,每组6个复孔。培养6、9、12、24h后,采用MTT法检测各组细胞的存活率,确定最佳损伤浓度和最佳损伤时间,用于本实验细胞损伤模型的建立。
化合物活性筛选:设置6个给药组、1个模型组、1个正常组。HL-7702细胞置于含10%小牛血清RPMI-1640培养基中培养,待HL-7702细胞达到对数生长期后,用胰酶消化液制成单细胞悬液,将细胞按照7×104个/mL密度接种于96孔培养板中,培养24h后,吸出原培养基,给药组分别加入不同浓度的化合物Ⅰ药液(化合物的浓度分别为10、20、40、80、160、320μmol/L)100μL,正常组和模型组加入纯RPMI-1640培养基100μL;每组6个复孔;继续培养12h后模型组和给药组添加含最佳损伤浓度的APAP培养基,正常组加入纯RPMI-1640培养基溶液,MTT法检测各组细胞的存活率。
MTT法检测细胞存活率:在APAP作用12h之后,向96孔培养板中每孔中加入浓度为5mg/mL的MTT溶液20μL,放入培养箱孵育4h,用一次性注射器轻轻吸出原培养液后加入DMSO150μL,振荡器振荡10min,迅速用酶标仪在490nm波长测量各孔吸光度值。并按下式计算细胞存活率。
细胞存活率(%)=实验组A490 nm/正常组A490 nm×100%
(3)实验结果
由表2可知,基于APAP诱导HL-7702细胞肝损伤模型对化合物Ⅰ进行体外肝细胞损伤活性筛选,化合物Ⅰ具有一定的保肝活性,且化合物Ⅰ的保肝活性呈浓度依赖性,这为化合物Ⅰ在制备保肝药物奠定了重要的理论基础。
表2、化合物Ⅰ的保肝活性筛选结果(mean±SD,n=6)
注:与模型组比较:*p<0.05,**p<0.01。
Claims (8)
2.权利要求1所述的苯骈二氧六环型木脂素的制备方法,其特征在于包括如下步骤:
步骤(1)、将干燥的荸荠地下球茎粉碎成粗品,用85~95%乙醇回流提取2~4次,每次3~5小时,得到总提取液;
步骤(2)、总提取液40~50℃真空浓缩干燥至无醇味,得到总提取物;
步骤(3)、将总提取物混悬于水中,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位;
步骤(4)、乙酸乙酯部位经过两次硅胶柱层析,再经Sephadex LH-20凝胶柱层析,最后采用制备液相色谱分离得到式Ⅰ所示的苯骈二氧六环型木脂素。
3.根据权利要求2所述的苯骈二氧六环型木脂素的制备方法,其特征在于步骤(4)中,第一次硅胶柱层析以100~200目硅胶为填料,以石油醚-乙酸乙酯=15:1~1:1V/V为洗脱液进行梯度洗脱。
4.根据权利要求2所述的苯骈二氧六环型木脂素的制备方法,其特征在于步骤(4)中,第二次硅胶柱层析以200~300目硅胶柱为填料,以石油醚-乙酸乙酯=10:1~4:1V/V为洗脱剂进行梯度洗脱。
5.根据权利要求2所述的苯骈二氧六环型木脂素的制备方法,其特征在于步骤(4)中,Sephadex LH-20凝胶柱的洗脱液为CH2Cl2-MeOH=1:1V/V。
6.根据权利要求2所述的苯骈二氧六环型木脂素的制备方法,其特征在于步骤(4)中,制备液相色谱采用YMC-Pack ODS-A柱:长度250,内径10mm,粒径5μm,微孔径12nm,流动相:30%~50%甲醇,流速:2~4mL/min,波长:205~330nm。
7.权利要求1所述的苯骈二氧六环型木脂素在制备保肝药物中的用途。
8.根据权利要求7所述的用途,其特征在于所述的苯骈二氧六环型木脂素在制备治疗或预防APAP诱发的药物性肝损伤的药物中的用途。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010392662.3A CN111423449B (zh) | 2020-05-11 | 2020-05-11 | 从荸荠中分离的新苯骈二氧六环型木脂素及其制备保肝药物用途 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010392662.3A CN111423449B (zh) | 2020-05-11 | 2020-05-11 | 从荸荠中分离的新苯骈二氧六环型木脂素及其制备保肝药物用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111423449A CN111423449A (zh) | 2020-07-17 |
CN111423449B true CN111423449B (zh) | 2021-03-30 |
Family
ID=71555209
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010392662.3A Active CN111423449B (zh) | 2020-05-11 | 2020-05-11 | 从荸荠中分离的新苯骈二氧六环型木脂素及其制备保肝药物用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN111423449B (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112174976A (zh) * | 2020-11-19 | 2021-01-05 | 江西中医药大学 | 从水芹菜中分离的二苯并呋喃型木脂素及其方法和在抗痛风性关节炎上的用途 |
CN116003357B (zh) * | 2023-01-05 | 2024-02-27 | 江西中医药大学 | 一种从佛手中分离的查尔酮骈木脂素化合物及其抗非酒精性脂肪肝用途 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20050092648A (ko) * | 2004-03-16 | 2005-09-22 | (주)바이오플란텍 | 폴리프레놀의 추출방법 |
CN102861112B (zh) * | 2012-08-31 | 2014-12-10 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 海滨锦葵木脂素提取物、其制备方法及其应用 |
CN108948038B (zh) * | 2018-07-09 | 2020-09-22 | 江西中医药大学 | 一种新紫檀烷型黄酮类化合物及其用途 |
CN110396074A (zh) * | 2019-08-06 | 2019-11-01 | 江西中医药大学 | 一种苯丙素类化合物及其制备方法和用途 |
CN111039950B (zh) * | 2019-12-04 | 2021-03-23 | 江西中医药大学 | 一种生物碱化合物及其制备方法和用途 |
-
2020
- 2020-05-11 CN CN202010392662.3A patent/CN111423449B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN111423449A (zh) | 2020-07-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111423449B (zh) | 从荸荠中分离的新苯骈二氧六环型木脂素及其制备保肝药物用途 | |
CN103435580B (zh) | 灵芝酚a及其在制药和食品中的应用 | |
CN105384753A (zh) | 一种用于神经保护的柠檬苦素化合物 | |
CN112898446B (zh) | 一种葛根多糖提取物及其提取方法和应用 | |
CN101619054B (zh) | 一个香豆素类活性成分及其制备方法与应用 | |
CN109010415B (zh) | 一种石油醚绿豆提取物及其制备方法和用途 | |
CN107137438A (zh) | 蜡梅属植物抗结核杆菌的用途 | |
CN116211903A (zh) | 一种北沙参发酵物及其水提物、产品和应用 | |
AU2021101352A4 (en) | Method for Extracting Epoxy Compounds and Acid Anhydrides from Figs | |
CN107986968B (zh) | 一种二咖啡酰基琥珀酰甲酯奎宁酸类化合物及制备方法和应用 | |
CN107163041A (zh) | 一种β‑咔啉化合物及其合成方法和应用 | |
CN113730466A (zh) | 一种黑莓提取物的制备方法及其应用 | |
CN113248483A (zh) | 天胡荽黄酮苷类单体异牡荆素的制备方法及应用 | |
CN108546247B (zh) | 一种生物碱类化合物在制备抗肥胖药物中用途 | |
CN112851612A (zh) | 一种从牛蒡叶中提取的具有降低胆固醇活性化合物及其制备方法与应用 | |
CN105646406A (zh) | 一种新的环金合欢烷型倍半萜类化合物及其制备方法和医药用途 | |
CN111440186A (zh) | 一种从小马泡中提取的、具有保肝效果的香豆素骈高异黄酮化合物及其制备方法和用途 | |
CN111892634A (zh) | 一种源于生等的糖苷化合物、提取方法及其应用 | |
CN112870192B (zh) | 生物碱类化合物在制备抑制血小板聚集药物中的应用 | |
CN105213364B (zh) | 凯林内酯的应用 | |
CN112794812B (zh) | 从香蕉花中提取的生物碱类化合物及其提取方法 | |
CN103113384B (zh) | 一种名为茯砖素b的儿茶素类衍生物及其制备方法和应用 | |
CN105343052B (zh) | 紫花前胡苷元的应用 | |
CN113563359B (zh) | 一种倍半萜二聚体化合物及其制备方法和应用 | |
CN114621094B (zh) | 具有胰岛保护的化合物及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |