CN111410681B - 一类重复小单元序列抗菌肽类似物及其应用 - Google Patents

一类重复小单元序列抗菌肽类似物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一类重复小单元序列抗菌肽类似物，其是以色氨酸和精氨酸为基本氨基酸组成，并以WRX为骨架序列进行重复性排列，然后进行C末端酰胺化得到，标记为(WRX)n，其中n＝2，3，4，5；X＝I、L、F、W、K。其骨架序列仅含3个氨基酸，因此设计简单，制造成本低。该抗菌肽类似物具有较强的抗菌活性和较高的细胞选择性；其中，(WRK)4和(WRK)5对A.baumannii ATCC 19606菌株的抗菌活性均与抗生素Gentamicin相当，且二者的治疗指数分别高达102.4和128，具有很好的细胞选择性。因此，本发明设计的重复小单元序列抗菌肽类似物在制备高效低毒抗菌药物中具有很好的应用前景。

Description

一类重复小单元序列抗菌肽类似物及其应用
技术领域
本发明属于生物化学技术领域，涉及一类重复小单元序列抗菌肽类似物，本发明同时还涉及该类抗菌肽类似物在制备高效低毒抗菌药物中的应用。
背景技术
“ESKAPE”病原体通常与抗菌素耐药性息息相关(Nature 2019,1-6)。“ESKAPE”的耐药性，主要与其细菌细胞膜渗透性有关：绝大多数抗生素均在细菌胞内发生分子内作用而导致细菌死亡，当连续使用大量的抗生素后，细菌细胞膜通透性发生改变，抗生素不能有效透过细菌细胞膜，限制了细菌内部抗生素的积累，从而导致耐药性的发生(LancetInfect.Dis.2006,6,589-601)。阳离子抗菌肽(CAMPs)由于其独特、理想的膜渗透活性，成为开发理想抗菌药物的最佳候选(Nature 2002,415,389)。目前，已在抗菌肽数据库中发现了超过3000个AMPs。虽然AMPs作为抗菌剂被广泛研究和测试，但其复杂的合成路线、缺乏选择性等阻碍了其在临床的应用。
短肽基序在识别、结合、信号转导、催化、细胞粘附、运动、生长甚至凋亡、机体防御和保护等许多生物学功能中发挥着重要作用(Langmuir.2020Feb 2)。典型的两亲性α-螺旋肽或其他抗菌肽通常需要形成一定的构象，才能实现有效的膜渗透作用。而短肽序列本身往往具有无序的结构，这种无序性恰好可以使其结构更灵活，更容易与细菌细胞膜作用(Angew.Chem.,Int.Ed.49(2010)8462-8465)。如Haoning Gong等人报道了含重复单元序列的抗菌肽G3：G(IIKK)3I-NH2具有较为理想的抗菌活性(ACS Appl MaterInterfaces.2019Sep25；11(38):34609-34620)；紧接着，Kang Liu等人设计了脂肪酸修饰的重复单元序列抗菌肽C16-G3(IIKK)3I-NH2，也表现出较好的抗菌活性(Langmuir.2020Feb2)。而申请号为201810286215.2的发明专利(一种富含色氨酸抗菌肽WK12及其制备方法和应用)公布的一种序列为WRLRWKTRWRLK-NH2的重复单元序列抗菌肽，其以(WXYX)3为序列模板，抗菌活性强，细胞选择性较高，但该抗菌肽是从已有猪源性抗菌肽PMAP-36的特征性片段中截取和改造而得到的，且含有W、R、L、K、T等多种氨基酸，存在因设计复杂而造成制造成本高的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一类设计简单、制造成本低、具有较强的抗菌活性和较高细胞选择性的重复小单元序列抗菌肽类似物。
本发明的另一目的是提供上述重复小单元序列抗菌肽类似物在制备高效低毒抗菌药物中的应用。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
一、重复小单元序列抗菌肽类似物的结构设计
本发明涉及的重复小单元序列抗菌肽类似物，是以色氨酸和精氨酸为基本氨基酸组成，并以WRX为骨架序列进行重复性排列，然后进行C末端酰胺化得到，标记为(WRX)n，其中n＝2，3，4，5；X＝I、L、F、W、K。
具体地，本发明涉及的重复小单元序列抗菌肽类似物其结构式如下：
Figure BDA0002430604300000021
标记为(WRI)n，n＝2，3，4，5；
Figure BDA0002430604300000022
标记为(WRL)n，n＝2，3，4，5；
Figure BDA0002430604300000023
标记为(WRF)n，n＝2，3，4，5；
Figure BDA0002430604300000024
标记为(WRW)n，n＝2，3，4，5；
Figure BDA0002430604300000025
标记为(WRK)n，n＝2，3，4，5。
作为本发明技术方案的进一步优选，所述抗菌肽类似物包括(WRI)3，(WRL)3，(WRF)3，(WRW)2，(WRW)5，(WRK)4和(WRK)5，其氨基酸序列分别如SEQ ID No.1至SEQ ID No.7所示。
上述重复小单元序列抗菌肽类似物均采用经典固相合成法制备得到。
二、重复小单元序列抗菌肽类似物在制备高效低毒抗菌药物中的应用
1、体外抗菌实验
采用二倍稀释法测定上述重复小单元序列抗菌肽类似物对细菌菌株的最低抑菌浓度(MIC)，评估其抗菌活性。所选用的细菌菌株包括：革兰氏阴性菌(E.coli ATCC 25922，P.aeruginos ATCC 27853，A.baumannii ATCC 19606)，革兰氏阳性菌(S.aureus ATCC25923，S.epidermidis ATCC 12228,B.subtilis ATCC23857)。实验方法为：将生长至对数中期的细菌在MH培养基中稀释成浓度为1×106CFU/mL的细菌悬浮液；将抗菌肽类似物溶解于无菌水，并用二倍稀释法配制成一系列不同浓度的抗菌肽溶液，再与等体积细菌悬浮液混合，于96孔培养板中37℃孵育18-24h观察，无肉眼可见细菌生长的最小浓度即为对应最低抑菌浓度(MIC)。上述实验以抗生素Gentamicin作阳性对照，平行重复三次，结果如表1所示。
表1本发明重复小单元序列抗菌肽类似物对抗标准菌株的最低抑菌浓度
Figure BDA0002430604300000031
表1结果表明，本发明重复小单元序列抗菌肽类似物对常见菌株均具有较强的抗菌活性，抗菌肽类似物(WRK)4、(WRK)5对革兰氏阴性菌A.baumannii ATCC19606的抗菌活性与抗生素Gentamicin相当。
2、溶血实验
取新鲜小鼠血液，经1000g离心10min弃去上层血清，下层血细胞用PBS(10mM，pH7.4)清洗后，配制成含有8％血细胞的悬浮液，加于96孔板中；将抗菌肽类似物溶解于PBS中，用二倍稀释法配制成不同浓度的肽溶液，将其等体积与上述血细胞悬浮液加于96孔板中，37℃孵育1h；共孵物1200g离心15min后，酶标仪检测上清液在490nm处的吸光值；PBS空白溶液作阴性对照，1％TritonX-100作阳性对照，根据公式：Hemolysis rate(％)＝[(OD490nm peptides-OD490nm negative control)/(OD490nm positive control-OD490nm negative control)]×100％，计算溶血率，并结合MIC，计算治疗指数，结果如表2。
表2本发明重复小单元序列抗菌肽类似物治疗指数(TI)
Figure BDA0002430604300000041
MHC10：引起10％溶血率的最低检测浓度；
GM：MIC的几何平均数；
TI：治疗指数，TI＝MHC10/GM；
表2结果表明，本发明重复小单元序列抗菌肽类似物溶血毒性低，计算其治疗指数发现，该重复小单元序列抗菌肽类似物具有较高的治疗指数，其中(WRK)4和(WRK)5的治疗指数分别高达102.4和128，具有很好的细胞选择性。
本发明相较于现有技术的有益效果为：
1、本发明涉及的重复小单元序列抗菌肽类似物，其是以色氨酸和精氨酸为基本氨基酸组成，并以WRX为骨架序列进行重复性排列，然后进行C末端酰胺化得到。该重复小单元序列抗菌肽类似物命名为(WRX)n，其中n＝2，3，4，5；X＝I、L、F、W、K。其骨架序列仅含3个氨基酸，因此设计简单，制造成本低。
2、本发明涉及的重复小单元序列抗菌肽类似物，具有较强的抗菌活性和较高的细胞选择性；其中，抗菌肽类似物(WRK)4和(WRK)5对革兰氏阴性菌A.baumannii ATCC 19606的抗菌活性均与抗生素Gentamicin相当，且二者的治疗指数分别高达102.4和128，具有很好的细胞选择性。因此，本发明设计的重复小单元序列抗菌肽类似物在制备高效低毒抗菌药物中具有很好的应用前景。
附图说明
图1为本发明抗菌肽类似物(WRI)3的质谱图；
图2为本发明抗菌肽类似物(WRL)3的质谱图；
图3为本发明抗菌肽类似物(WRF)3的质谱图；
图4为本发明抗菌肽类似物(WRW)2的质谱图；
图5为本发明抗菌肽类似物(WRW)5的质谱图；
图6为本发明抗菌肽类似物(WRK)4的质谱图；
图7为本发明抗菌肽类似物(WRK)5的质谱图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明重复小单元序列抗菌肽类似物的合成方法及其体外抗菌活性和溶血毒性进行详细说明。
实施例1：(WRI)3的合成及其体外抗菌活性和溶血毒性研究
(1)(WRI)3的合成
①树脂的活化及预处理
称取0.69g的MBHA树脂(取代值0.44mmol/g)于合成仪中，经DCM溶液溶胀30min后，茚三酮显色法检验，树脂呈无色透明状，表明树脂正常。
②(WRI)3-resin的合成
对上述检验正常的MBHA树脂经含有体积分数20％哌啶的DMF溶液脱去Fmoc保护基，茚三酮显色法检验，树脂呈蓝紫色，表明Fmoc保护基已脱去；将Fmoc-Ile-OH(399mg)、HOBT(123mg)、HBTU(342mg)、DIEA(0.3ml)于8ml DMF中溶解混匀，并与上述脱去Fmoc保护基的MBHA树脂混合，缩合反应1h；茚三酮显色法检验，树脂呈无色透明状，则表明缩合反应成功，得到Fmoc-Ile-resin；方法同上，依次缩合反应后续氨基酸：Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Ile-OH(399mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Ile-OH(399mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)，其中HOBT、HBTU和DIEA用量同上，得到Fmoc-Trp-Arg-Ile-Trp-Arg-Ile-Trp-Arg-Ile-resin，即Fmoc-(WRI)3-resin；同样用含有20％哌啶的DMF溶液脱去Fmoc-(WRI)3-resin末端Fmoc保护基，得到(WRI)3-resin。
③多肽切割
以体积比9.5:0.25:0.25的TFA、三异丙基硅烷和水的混合溶液为切割试剂将(WRI)3-resin进行切割，经冰乙醚和水萃取后，冷冻干燥，得到粗肽冻干粉末；
④多肽纯化
将上述得到的粗肽冻干粉末经RP-HPLC分离纯化，收集流出液，再冷冻干燥，经质谱鉴定得(WRI)3，其分子量为1383Da，质谱图见图1，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；其中，RP-HPLC纯化条件：流动相A：0.05％TFA/水；流动相B：0.05％TFA/乙腈；线性梯度洗脱，收集主要吸收峰流出液。
(2)(WRI)3的体外抑菌活性研究
将生长至对数期的细菌用MH肉汤培养基稀释成1×10^6CFU/mL的细菌悬浮液；将(WRI)3溶解于无菌水中，经二倍稀释法配成一系列不同浓度的(WRI)3溶液，与上述细菌悬浮液等体积混合，于96孔培养板中37℃孵育18-24h后观察，无肉眼明显细菌生长的最小浓度即为(WRI)3的最低抑菌浓度MIC。
结果如表1，(WRI)3对常见细菌菌株表现出明显的抗菌活性。
(3)(WRI)3的溶血毒性研究
取新鲜小鼠血液，经1000g离心10min弃去上层血清，下层血细胞用PBS(10mM，pH7.4)清洗后，配制成含有8％血细胞的悬浮液，加于96孔板中；将(WRI)3溶解于PBS中，用二倍稀释法配制成不同浓度的(WRI)3溶液，将其等体积与上述血细胞悬浮液加于96孔板中，37℃孵育1h；共孵物1200g离心15min后，，酶标仪检测上清液在490nm处的吸光值；PBS空白溶液作阴性对照，1％TritonX-100作阳性对照，根据公式：Hemolysis rate(％)＝[(OD490nm peptides-OD490nm negative control)/(OD490nm positive control-OD490nm negative control)]×100％，计算溶血率，并结合MIC，计算治疗指数。
结果如表2，(WRI)3无明显的溶血毒性，其治疗指数为47.99，具有较高的细胞选择性。
实施例2：(WRL)3的合成及其体外抗菌活性和溶血毒性研究
(1)(WRL)3的合成
①树脂的活化及预处理
同实施例1。
②(WRL)3-resin的合成
同实施例1，对上述检验正常的MBHA树脂，脱去Fmoc保护基；将Fmoc-Leu-OH(399mg)、HOBT(123mg)、HBTU(342mg)、DIEA(0.3ml)于8ml DMF中溶解混匀，并与上述脱去Fmoc保护基的MBHA树脂混合，缩合反应1h；茚三酮显色法检验，树脂呈无色透明状，则表明缩合反应成功，得到Fmoc-Leu-resin；方法同上，依次缩合反应后续氨基酸：Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Leu-resin(399mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Leu-resin(399mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)，其中HOBT、HBTU和DIEA用量同上，得到Fmoc-Trp-Arg-Leu-Trp-Arg-Leu-Trp-Arg-Leu-resin，即Fmoc-(WRL)3-resin；同样用含有20％哌啶的DMF溶液脱去Fmoc-(WRL)3-resin末端Fmoc保护基，得到(WRL)3-resin。
③多肽切割
同实施例1。
④多肽纯化
同实施例1，经质谱鉴定得(WRL)3，其分子量为1383Da，质谱图见图2，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
(2)(WRL)3的体外抑菌活性研究
同实施例1。
结果如表1，(WRL)3对常见细菌菌株表现出明显的抗菌活性。
(3)(WRL)3的溶血毒性研究
同实施例1。
结果如表2，(WRL)3具有低溶血毒性，其治疗指数为32，具有较高的细胞选择性。
实施例3：(WRF)3的合成及其体外抗菌活性和溶血毒性研究
(1)(WRF)3的合成
①树脂的活化及预处理
同实施例1。
②(WRF)3-resin的合成
同实施例1，对上述检验正常的MBHA树脂，脱去Fmoc保护基；将Fmoc-Phe-OH(464mg)、HOBT(123mg)、HBTU(342mg)、DIEA(0.3ml)于8ml DMF中溶解混匀，并与上述脱去Fmoc保护基的MBHA树脂混合，缩合反应1h；茚三酮显色法检验，树脂呈无色透明状，则表明缩合反应成功，得到Fmoc-Phe-resin；方法同上，依次缩合反应后续氨基酸：Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Phe-OH(464mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Phe-OH(464mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)，其中HOBT、HBTU和DIEA用量同上，得到Fmoc-Trp-Arg-Phe-Trp-Arg-Phe-Trp-Arg-Phe-resin，即Fmoc-(WRF)3-resin；同样用含有20％哌啶的DMF溶液脱去Fmoc-(WRF)3-resin末端Fmoc保护基，得到(WRF)3-resin。
③多肽切割
同实施例1。
④多肽纯化
同实施例1，经质谱鉴定得(WRF)3，其分子量为1486Da，质谱图见图3，氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。
(2)(WRF)3的体外抑菌活性研究
同实施例1。
结果如表1，(WRF)3对常见细菌菌株表现出明显的抗菌活性。
(3)(WRF)3的溶血毒性研究
同实施例1。
结果如表2，(WRF)3具有低溶血毒性，其治疗指数为18.29，具有较高的细胞选择性。
实施例4：(WRW)2的合成及其体外抗菌活性和溶血毒性研究
(1)(WRW)2的合成
①树脂的活化及预处理
同实施例1。
②(WRW)2-resin的合成
同实施例1，对上述检验正常的MBHA树脂，脱去Fmoc保护基；将Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、HOBT(123mg)、HBTU(342mg)、DIEA(0.3ml)于8ml DMF中溶解混匀，并与上述脱去Fmoc保护基的MBHA树脂混合，缩合反应1h；茚三酮显色法检验，树脂呈无色透明状，则表明缩合反应成功，得到Fmoc-Trp-resin；方法同上，依次缩合反应后续氨基酸：Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)，其中HOBT、HBTU和DIEA用量同上，得到Fmoc-Trp-Arg-Trp-Trp-Arg-Trp-resin，即Fmoc-(WRW)2-resin；同样用含有20％哌啶的DMF溶液脱去Fmoc-(WRW)2-resin末端Fmoc保护基，得到(WRW)2-resin。
③多肽切割
同实施例1。
④多肽纯化
同实施例1，经质谱鉴定得(WRW)2，其分子量为1074Da，质谱图见图4，氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
(2)(WRW)2的体外抑菌活性研究
同实施例1。
结果如表1，(WRW)2对常见细菌菌株表现出明显的抗菌活性。
(3)(WRW)2的溶血毒性研究
同实施例1。
结果如表2，(WRW)2具有低溶血毒性，其治疗指数为16，具有较高的细胞选择性。
实施例5：(WRW)5的合成及其体外抗菌活性和溶血毒性研究
(1)(WRW)5的合成
①树脂的活化及预处理
同实施例1。
②(WRW)5-resin的合成
同实施例4，得到Fmoc-Trp-Arg-Trp-Trp-Arg-Trp-resin；以相同方法依次缩合后续氨基酸：Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)，其中HOBT、HBTU和DIEA用量同上，得到Fmoc-Trp-Arg-Trp-Trp-Arg-Trp-Trp-Arg-Trp-Trp-Arg-Trp-Trp-Arg-Trp-resin，即Fmoc-(WRW)5-resin；同样用含有20％哌啶的DMF溶液脱去Fmoc-(WRW)5-resin末端Fmoc保护基，得到(WRW)5-resin。
③多肽切割
同实施例1。
④多肽纯化
同实施例1，经质谱鉴定得(WRW)5，其分子量为2660Da，质谱图见图5，氨基酸序列如SEQ ID No.5所示。
(2)(WRW)5的体外抑菌活性研究
同实施例1。
结果如表1，(WRW)5对常见细菌菌株表现出明显的抗菌活性。
(3)(WRW)5的溶血毒性研究
同实施例1。
结果如表2，(WRW)5具有较低的溶血毒性，其治疗指数为6。
实施例6：(WRK)4的合成及其体外抗菌活性和溶血毒性研究
(1)(WRK)4的合成
①树脂的活化及预处理
同实施例1。
②(WRK)4-resin的合成
同实施例1，对上述检验正常的MBHA树脂，脱去Fmoc保护基；将Fmoc-Lys(Boc)-OH(422mg)、HOBT(123mg)、HBTU(342mg)、DIEA(0.3ml)于8ml DMF中溶解混匀，并与上述脱去Fmoc保护基的MBHA树脂混合，缩合反应1h；茚三酮显色法检验，树脂呈无色透明状，则表明缩合反应成功，得到Fmoc-Trp-resin；方法同上，依次缩合反应后续氨基酸：Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Lys(Boc)-OH(422mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Lys(Boc)-OH(422mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)、Fmoc-Lys(Boc)-OH(422mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)，其中HOBT、HBTU和DIEA用量同上，得到Fmoc-Trp-Arg-Lys-Trp-Arg-Lys-Trp-Arg-Lys-Trp-Arg-Lys-resin，即Fmoc-(WRK)4-resin；同样用含有20％哌啶的DMF溶液脱去Fmoc-(WRK)4-resin末端Fmoc保护基，得到(WRK)4-resin。
③多肽切割
同实施例1。
④多肽纯化
同实施例1，经质谱鉴定得(WRK)4，其分子量为1899Da，质谱图见图6，氨基酸序列如SEQ ID No.6所示。
(2)(WRK)4的体外抑菌活性研究
同实施例1。
结果如表1，(WRK)4对常见细菌菌株表现出一定的抗菌活性，对革兰氏阴性菌A.baumannii ATCC 19606的抗菌活性与抗生素Gentamicin相当。
(3)(WRK)4的溶血毒性研究
同实施例1。
结果如表2，(WRK)4无明显溶血毒性，其治疗指数为102.4，具有理想的细胞选择性。
实施例7：(WRK)5的合成及其体外抗菌活性和溶血毒性研究
(1)(WRK)5的合成
①树脂的活化及预处理
同实施例1。
②(WRK)5-resin的合成
同实施例6，得到Fmoc-Trp-Arg-Lys-Trp-Arg-Lys-Trp-Arg-Lys-Trp-Arg-Lys-resin；以相同的方法依次缩合后续氨基酸：Fmoc-Lys(Boc)-OH(422mg)、Fmoc-Arg(pbf)-OH(585mg)、Fmoc-Trp(Boc)-OH(390mg)，其中HOBT、HBTU和DIEA用量同上，得到Fmoc-Trp-Arg-Lys-Trp-Arg-Lys-Trp-Arg-Lys-Trp-Arg-Lys-Trp-Arg-Lys-resin，即Fmoc-(WRK)5-resin；同样用含有20％哌啶的DMF溶液脱去Fmoc-(WRK)5-resin末端Fmoc保护基，得到(WRK)5-resin。
③多肽切割
同实施例1。
④多肽纯化
同实施例1，经质谱鉴定得(WRK)5，其分子量为2369Da，质谱图见图7，，氨基酸序列如SEQ ID No.7所示。
(2)(WRK)5的体外抑菌活性研究
同实施例1。
结果如表1，(WRK)5对常见细菌菌株表现出明显的抗菌活性，对革兰氏阴性菌A.baumannii ATCC 19606的抗菌活性与抗生素Gentamicin相当。
(3)(WRK)5的溶血毒性研究
同实施例1。
结果如表2，(WRK)5无明显的溶血毒性，其治疗指数高达128，具有理想的细胞选择性。
Figure BDA0002430604300000131
Figure BDA0002430604300000141
序列表
<110> 倪京满，王锐
<120> 一类重复小单元序列抗菌肽类似物及其应用
<160> 7
<210> 1
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Trp Arg Ile Trp Arg Ile Trp Arg Ile
1               5
<210> 2
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Trp Arg Leu Trp Arg Leu Trp Arg Leu
1               5
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Trp Arg Phe Trp Arg Phe Trp Arg Phe
1               5
<210> 4
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Trp Arg Trp Trp Arg Trp
1               5
<210> 5
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
Trp Arg Trp Trp Arg Trp Trp Arg Trp Trp Arg Trp Trp Arg Trp
1               5                   10                  15
<210> 6
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 6
Trp Arg Lys Trp Arg Lys Trp Arg Lys Trp Arg Lys
1               5                   10
<210> 7
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 7
Trp Arg Lys Trp Arg Lys Trp Arg Lys Trp Arg Lys Trp Arg Lys
1               5                   10                  15

Claims (2)

1.一类重复小单元序列抗菌肽类似物，其特征是，所述抗菌肽类似物是以色氨酸和精氨酸为基本氨基酸组成，并以WRX为骨架序列进行重复性排列，然后进行C末端酰胺化得到，其结构通式为(WRX)n，其中n=2，3，4，5；X=I、L、F、W、K；
所述抗菌肽类似物结构式为(WRI)3 ，(WRL)3，(WRF)3，(WRW)2，(WRW)5，(WRK)4或(WRK)5，其氨基酸序列分别如SEQ ID No.1至SEQ ID No.7所示。
2.如权利要求1所述的一类重复小单元序列抗菌肽类似物在制备高效低毒抗菌药物中的应用。
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