CN1114105C - 酶免疫试剂盒及其生产工艺方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及孕妇产前病原体IgM抗体测试技术领域。本发明包括盒体，设在盒体内的多孔板条和设在盒内的用液，在多孔板条的每一孔内包被能引起胎儿先天畸形的TORCH病毒抗原，检测TORCH-IgM抗体，包被液内含有碳酸氢钠、碳酸钠、尿素、盐酸胍和双蒸水，用液包含有洗涤液、封闭液、稀释液、酶底物和抗人IgM的酶联物。本发明在板条每个孔中可以一次同时检出TOX、RV、CMV、HSV四种病原体的IgM，易于TORCH-IgM合检初筛，简化了操作，节约了成本，使用方便，效果好。

Description

酶免疫试剂盒及其生产工艺方法

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及孕妇产前病原体IgM抗体测试技术领域。

背景技术

为了搞好计划生育工作，实行优生优育，在妇女怀孕后一般要检测TORCH(弓形体、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒)特异性IgM抗体。目前，国际上用间接酶免疫吸附试验来检测TORCH-IgM的诊断试剂盒有：美国Maxim生物技术公司、HOPE公司、加拿大Microbix公司的产品，上述这些试剂盒，都只能在不同的板条孔中分别检测TOX、RV、CMV、HSV四种病原体的IgM，以上方法有三个共同的缺点，一是IgM型类风湿因子(IgM-RF)的干扰作用，它本质是抗自身IgG的IgM，抗原与其特异性的IgG形成复合物结合IgM-RF引起假阳性反应；二是特异IgG能竞争性地占有IgM与抗原的结合部位产生假阴性反应；三是检测成本高，每个被检者每次得花160元左右。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种克服上述缺陷的试剂盒，检测时，可在板条每个孔中同时检出TOX、RV、CMV、HSV四种病原体的IgM，易于TORCH-IgM合检初筛，简化了操作，节约了成本，使用方便，效果好。

本发明的技术方案是这样实现的：

本发明包括盒体，设在盒体内的多孔板条和设在盒体内的用液，在多孔板条的每孔内，由包被液包被能引起胎儿先天性畸形的TORCH抗原，来检测孕妇血TORCH-IgM抗体，包被液和其他用液所含成份分别为：

(1)包被液含有碳酸氢钠、碳酸钠、尿素、盐酸胍和双蒸水。

(2)其他用液包含洗涤液、标本稀释液、封闭液、底物稀释液、酶底物液和抗人IgM酶联物，其中：

(a)洗涤液内含有氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、双蒸水和吐温-20；

(b)封闭液内含氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、吐温-20、羊血清和双蒸水；

(c)标本稀释液内含氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、吐温-20、羊血清、葡萄球菌A蛋白、甘氨酸和双蒸水；

(d)底物稀释液含有柠檬酸、柠檬酸三钠和双蒸水；

(e)酶底物液内含3，3′，5，5′-四甲基联苯胺、二甲亚砜、底物稀释液、过氧化脲；

(f)抗人IgM酶联物，辣根过氧化物酶与纯化的抗人IgM单克隆抗体相联。

包被液及用液成份含量分别为：

(1)1000ml包被液含量：

碳酸氢钠                       2.93g

碳酸钠                         1.59g

尿素                           0.06-0.60g

盐酸胍                       0.09-0.90g

双蒸水                       1000ml

TOX抗原、RV抗原、CMV抗原和HSV抗原各10-5000μg

(2)1000ml洗涤液的含量：

氯化钠                        8.7g

磷酸二氢钾                    0.2g

磷酸氢二钠                    2.33g

吐温-20                       1-10ml

双蒸水                        990-999ml

(3)1000ml封闭液的含量：

羊血清                        5-300ml

洗涤液                        700-995ml

(4)1000ml标本稀释液含量：

葡萄球菌A蛋白                 5-20mg

甘氨酸                        0.1-5g

封闭液                        1000ml

(5)1000ml底物稀释液配制如下：

柠檬酸                        9-13g

柠檬酸三钠                    10-15g

双蒸水                        1000ml

(6)酶底物液

3，3′，5，5′-四甲基联苯胺   200mg

二甲亚砜                         200ml

过氧化脲                         250ml

底物稀释液                       800ml

包被液包被板条的方法是：将上述用液各自经混合备用，用包被液稀释TORCH抗原，使终浓度分别为：弓形体抗原、风疹病毒抗原、巨细胞病毒抗原、单纯疱疹病毒-1型抗原各10-5000μg/1000ml，将TORCH抗原混悬液加入多孔反应板的孔内(100μl/孔)置于37℃温箱内2小时后，然后在4℃下6-12小时，甩掉包被液，用洗涤液清洗后，加封闭液，110μl/孔，再置于4℃条件下6-12小时，甩去封闭液，用洗涤液、双蒸水清洗，叩尽板条孔中的水，20～28℃晾干。

本发明的优点是：

1、采用这一技术可在同一孔里同时检出TOX、RV、CMV、HSV四种病原体的IgM，易于合检初筛，简化了操作，检测人员的工作量可减少3/4，节约了成本1/2，使用方便。

2、减少了非特异性。在稀释液中加入0.5～2mg％葡萄球菌A蛋白和0.01～0.5％甘氨酸37℃20分钟处理被检血清，较好地克服了背景技术的第一、二个缺点。在封闭液中加入浓度为0.5～30％的羊血清，进一步降低了试验的非特异反应。

3、增加了固相载体吸附性。①由于用尿素处理蛋白质，使蛋白质部分变性后再包被酶标板；②又由于用盐酸胍在包被前处理病毒颗粒抗原，能将较大颗粒裂解为较小的亚单位。所以增加了固相载体吸附量。

4、提高了酶免诊断方法敏感性。①由于使用高亲和力的酶标抗人IgM单克隆抗体取代酶标抗人IgM多克隆抗体。②又由于选择更理想的底物，3，3′，5，5′-四甲基联苯胺是酶免技术中过氧化物酶的一种新的生色底物，其优点是敏感性高，另外还有产生的有色产物稳定、本底反应低、无致癌性等。还由于临用前用过氧化脲—柠檬酸缓冲液稀释，不仅提高了酶免诊断方法敏感性，还提高了该缓冲液的稳定性。

具体实施方案

本发明包括盒体、设在盒体内的多孔板条和设在盒体内的用液，在多孔板条的每孔内，包被能引起胎儿先天性畸性的TORCH抗原，来检测孕妇血TORCH-IgM抗体，将包被液和其他用液配置混合备用，先用包被液(0.05mol/L，PH9.6碳酸缓冲液的基础上加0.003mol/L尿素和0.003mol/L盐酸胍)稀释TORCH抗原，使终浓度分别为：TOX抗原10μg/100ml、RV抗原170μg/100ml、CMV抗原110μg/100ml、HSV-1抗原110μg/100ml。将此TORCH抗原混悬液置37℃2小时后包被板条，100μl/孔，置入4℃冰箱6-12小时后甩掉包被液，用洗液洗1次后，用封闭液封闭，110μl/孔，置4℃冰箱6-12小时。甩去封闭液后，用洗液和双蒸水各洗1次，叩尽板条孔中的水，20-28℃晾干，装入塑料袋，并放入适量变色硅胶密封，置入-20℃冰箱备用。

Claims (2)

1、一种酶免疫试剂盒，它包括盒体、设在盒体内的多孔板条和设在盒体内的用液，其特征在于，在多孔板条的每孔内，由包被液包被能引起胎儿先天性畸形的TORCH抗原，来检测孕妇血TORCH-IgM抗体，包被液和其他用液所含成份分别为：

(1)包被液含有碳酸氢钠、碳酸钠、尿素、盐酸胍和双蒸水；

(2)其他用液包含洗涤液、标本稀释液、封闭液、底物稀释液、酶底物液和抗人IgM酶联物，其中：

(a)洗涤液内含有氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、双蒸水和吐温-20；

(b)封闭液内含氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、吐温-20、羊血清和双蒸水；

(c)标本稀释液内含氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、吐温-20、羊血清、葡萄球菌A蛋白、甘氨酸和双蒸水；

(d)底物稀释液含有柠檬酸、柠檬酸三钠和双蒸水；

(e)酶底物液内含3，3′，5，5′-四甲基联苯胺、二甲亚砜、底物稀释液、过氧化脲；

(f)抗人IgM酶联物，辣根过氧化物酶与纯化的抗人IgM单克隆抗体相联；

1000ml包被液及各用液的成份含量分别为：

(1)包被液含量：

碳酸氢钠                  2.93g

碳酸钠                    1.59g

尿素                      0.06-0.60g

盐酸胍                    0.09-0.90g

双蒸水                    1000ml

TOX抗原、RV抗原、CMV抗原和HSV抗原各10-5000μg

(2)洗涤液的含量如下：

氯化钠                    8.7g

磷酸二氢钾                0.2g

磷酸氢二钠                2.33g

吐温-20                   1-10ml

双蒸水                    990-999ml

(3)封闭液配制如下：

羊血清                    5-300ml

洗涤液                    700-995ml

(4)标本稀释液：

葡萄球菌A蛋白             5-20mg

甘氨酸                    1-5g

封闭液                    1000ml

(5)底物稀释液配制如下：

柠檬酸                    9-13g

柠檬酸三钠                10-15g

双蒸水                        1000ml

(6)酶底物液

3，3′，5，5′-四甲基联苯胺    200mg

二甲亚砜                      200ml

过氧化脲                      250ml

底物稀释液                    800ml

2、一种生产酶免疫试剂盒的生产工艺方法，其特征在于，包被液包被板条的方法是，将包被液和其他用液各自配制、混合后备用，用包被液稀释TORCH抗原，使终浓度分别为：弓形体抗原、风疹病毒抗原、巨细胞病毒抗原、单纯疱疹病毒-1型抗原各10-5000μg/1000ml，将TORCH抗原混悬液加入多孔板条的孔内100μl/孔置于37℃温箱内2小时后，然后在4℃下6-12小时，甩掉包被液，用洗涤液清洗后，用封闭液封闭，110μl/孔，再置于4℃条件下6-12小时，甩去封闭液用洗涤液、双蒸水清洗，叩尽板条孔中的水，20-28℃晾干，包被液和其他用液的配方如下：

(1)包被液含有碳酸氢钠、碳酸钠、尿素、盐酸胍和双蒸水。

(2)其他用液包含洗涤液、标本稀释液、封闭液、底物稀释液、酶底物液和抗人IgM酶联物，其中：

(a)洗涤液内含有氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、双蒸水和吐温-20；

(b)封闭液内含氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、吐温-20、羊血清和双蒸水；

(c)标本稀释液内含氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、吐温-20、羊血清、葡萄球菌A蛋白、甘氨酸和双蒸水；

(d)底物稀释液含有柠檬酸、柠檬酸三钠和双蒸水；

(e)酶底物液内含3，3′，5，5′-四甲基联苯胺、二甲亚砜、底物稀释液、过氧化脲；

(f)抗人IgM酶联物，辣根过氧化物酶与纯化的抗人IgM单克隆抗体相联；

包被液及用液成份含量分别为：

(1)1000ml包被液含量：

碳酸氢钠                   2.93g

碳酸钠                     1.59g

尿素                       0.06-0.60g

盐酸胍                     0.09-0.90g

双蒸水                     1000ml

TOX抗原、RV抗原、CMV抗原和HSV抗原各10-5000μg

(2)1000ml洗涤液的含量：

氯化钠                     8.7g

磷酸二氢钾                 0.2g

磷酸氢二钠                 2.33g

吐温-20                    1-10ml

双蒸水                     990-999ml

(3)1000ml封闭液的含量：

羊血清                     5-300ml

洗涤液                     700-995ml(4)1000ml标本稀释液含量：

葡萄球菌A蛋白              5-20mg

甘氨酸                     0.1-5g

封闭液                     1000ml

(5)1000ml底物稀释液配制如下：

柠檬酸                      9-13g

柠檬酸三钠                  10-15g

双蒸水                      1000ml

(6)酶底物液

3，3′，5，5′-四甲基联苯胺  200mg

二甲亚砜                    200ml

过氧化脲                    250ml

底物稀释液                  800ml