CN111378582A - 培养基、爪哇棒束孢以及包含该爪哇棒束孢的可湿性粉剂及其应用 - Google Patents

培养基、爪哇棒束孢以及包含该爪哇棒束孢的可湿性粉剂及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种培养基、爪哇棒束孢以及包含该爪哇棒束孢的可湿性粉剂及其应用，涉及微生物培养技术领域。该培养基包含培养基质和微量元素，其中所述微量元素包括锰元素。上述培养基中，培养基质为菌株培养提供必要的营养，同时经发明人研究发现，将锰元素作为微量元素加入培养基中，可以促进产孢。进而由上述原料制得的培养基可以有效提高爪哇棒束孢的培养水平，进而提高爪哇棒束孢的产孢量和孢子活性。

Description

培养基、爪哇棒束孢以及包含该爪哇棒束孢的可湿性粉剂及 其应用
技术领域
本发明涉及微生物培养技术领域，尤其是涉及一种培养基、爪哇棒束孢以及包含该爪哇棒束孢的可湿性粉剂及其应用。
背景技术
美国白蛾(Hyphantria cunea)，又称秋幕蛾，属鳞翅目(Lepidoptera)灯蛾科(Arctiidae)。美国白蛾适应能力很强，可以在各种不同的生存环境下生存，爆发时破坏力大，尤其对果树、行道树等阔叶树危害最为严重，给害虫爆发地带来极大经济损失，因此被列为国际性检疫害虫。我国北京、河北、辽宁、山东、陕西、江苏等省市已经出现了美国白蛾疫情，全国疫情形势十分严峻。
爪哇棒束孢(Isaria javanica)又称爪哇拟青霉，棒束孢属。由该属中的玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)真菌研制的杀虫剂产品最多，大约有10种，对小菜蛾、烟粉虱等有致死作用，特别是对美国白蛾具有较强的杀灭作用。
但现有针对爪哇棒束孢的培养研究几乎处于空白阶段，利用现有的培养基对爪哇棒束孢进行培养产孢率较低。因此，研究开发出一种适用于爪哇棒束孢培养的培养基，提高产孢效率，并对该爪哇棒束孢的应用进行探索，以缓解现有美国白蛾疫情形式严重的问题，变得十分必要和迫切。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种培养基，该培养基可以有效的提高爪哇棒束孢的培养水平，提高孢子的产孢量，同时对培养得到的爪哇棒束孢的应用进行探索，进而提高现有爪哇棒束孢的应用效果，为探索美国白蛾的生物防治方法提供有效的方案。
为实现上述目的，特提出如下技术方案：
本发明提供的一种培养基，所述培养基包含培养基质和微量元素，所述微量元素包括锰元素。
进一步的，所述培养基的初始水含量为20wt％。
进一步的，所述培养基质包括麦麸和/或稻壳；
优选地，所述培养基质包括麦麸和稻壳；
优选地，所述麦麸与稻壳的质量比为1：3；
优选地，所述锰元素以锰盐存在于所述培养基中；
优选地，所述锰盐包括硫酸锰；
优选地，所述锰盐在每g培养基中的含量为10μg；
更优选地，所述硫酸锰在每g培养基中的含量为10μg。
进一步的，所述培养基还包含豆粕；
优选地，基于培养基的质量，所述豆粕占培养基质量的2wt％；
优选地，所述培养基还包含溶剂，优选为水。
本发明提供的一种上述培养基的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将各原料混匀，制得培养基；
优选地，所述制备方法还包括将各原料混匀后，加入溶剂调节水含量的步骤。
本发明提供的一种爪哇棒束孢，所述爪哇棒束孢主要由保藏编号为CGMCCNo.13192，保藏日期为2016年11月28日的爪哇棒束孢菌株接种于上述培养基上培养得到；
优选地，菌株接种的接种量为60％；
优选地，所述培养的温度为25℃，培养的时间为11天。
本发明提供的一种包含上述爪哇棒束孢的可湿性粉剂；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述爪哇棒束孢占所述可湿性粉剂中的质量百分数为10wt％。
进一步的，所述可湿性粉剂还包含润湿剂；
优选地，所述润湿剂包括奥妙；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述润湿剂占所述可湿性粉剂中的质量百分数为1wt％；
优选地，所述可湿性粉剂还包含分散剂；
优选地，所述分散剂包括羧甲基纤维素钠；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述分散剂占所述可湿性粉剂中的质量百分数为4wt％；
优选地，所述可湿性粉剂还包含紫外线保护剂；
优选地，所述紫外线保护剂包括荧光素钠；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述紫外线保护剂占所述可湿性粉剂中的质量百分数为1wt％；
优选地，所述可湿性粉剂还包含载体；
优选地，所述载体包括凹凸棒土；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述载体占所述可湿性粉剂中的质量百分数为84wt％；
优选地，按质量百分数计，所述可湿性粉剂包含以下组分：上述爪哇棒束孢10％、奥妙1％、羧甲基纤维素钠4％、荧光素钠1％，余量为凹凸棒土；所述可湿性粉剂中各组分的质量百分数之和为100％。
本发明提供的一种上述可湿性粉剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将配方量的各原料混匀，制得可湿性粉剂。
本发明提供的上述爪哇棒束孢、上述可湿性粉剂在制备针对美国白蛾的杀虫剂产品中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本申请提供的培养基包含培养基质和微量元素，其中所述微量元素包括锰元素。上述培养基中，培养基质为菌株培养提供必要的营养，同时经发明人研究发现，将锰元素作为微量元素加入培养基中可以促进产孢，进而由上述原料制得的培养基可以有效提高爪哇棒束孢的培养水平，进而提高爪哇棒束孢的产孢量和孢子活性。
本申请提供的上述培养基的制备方法，该方法为将各原料混匀，制得培养基。上述制备方法具有制备工艺简单的优势。
本申请提供的爪哇棒束孢，由爪哇棒束孢(Isariajavanica)BE01接种于上述培养基上培养得到；所述爪哇棒束孢(Isariajavanica)BE01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13192，保藏日期为2016年11月28日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。上述培养过程中，爪哇棒束孢具有优异的产孢效果，同时培养获得的孢子可直接应用于杀虫剂的生产，而无需后处理步骤，具有很好的经济性。
本发明提供的一种可湿性粉剂，该可湿性粉剂包含上述爪哇棒束孢。
本发明提供的上述可湿性粉剂的制备方法，该制备方法将配方量的各原料混匀，制得可湿性粉剂。上述制备方法具有制备工艺简单的优势。
本发明提供的上述爪哇棒束孢或上述可湿性粉剂的应用，该爪哇棒束孢或可湿性粉剂可以广泛应用于针对美国白蛾的杀虫剂产品的制备中。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
根据本发明的一个方面，一种培养基，所述培养基包含培养基质和微量元素，所述微量元素包括锰元素。
本申请提供的培养基包含培养基质和微量元素，其中所述微量元素包括锰元素。上述培养基中，培养基质为菌株培养提供必要的营养，同时经发明人研究发现，将锰元素作为微量元素加入培养基中，可以促进产孢。进而由上述原料制得的培养基可以有效提高爪哇棒束孢的培养水平，进而提高爪哇棒束孢的产孢量和孢子活性。
本发明上述的“包括”，意指其除上述组分外，还可以包括其他组分，这些其他组分赋予上述培养基不同的特性。除此之外，本发明上述的“包括”，还可以替换为封闭式的“为”或“由……组成”。
在本发明的一种优选实施方式中，所述培养基的初始水含量为20wt％。
在本发明的一种优选实施方式中，所述培养基质包括麦麸和/或稻壳；
优选地，所述培养基质包括麦麸和稻壳；
在上述优选实施方式中，所述麦麸与稻壳的质量比为1：3；由上述质量比得到的培养基质，麦麸是产孢的营养来源，但自身孔隙度小，接种后培养基较实，不利于产孢，添加稻壳能增加麦麸之间的孔隙度，有利于产孢。
优选地，所述锰元素以锰盐存在于所述培养基中；
优选地，所述锰盐包括硫酸锰；
优选地，所述锰盐在每g培养基中的含量为10μg；
更优选地，所述硫酸锰在每g培养基中的含量为10μg。
在本发明的一种优选实施方式中，所述培养基还包含豆粕；
优选地，基于培养基的质量，所述豆粕占培养基质量的2wt％；
优选地，所述培养基还包含溶剂，优选为水。
根据本发明的一个方面，一种上述培养基的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将各原料混匀，制得培养基；
在本发明的一种优选实施方式中，所述制备方法还包括将各原料混匀后，加入溶剂调节水含量的步骤。
根据本发明的一个方面，一种爪哇棒束孢，所述爪哇棒束孢主要由保藏编号为CGMCCNo.13192，保藏日期为2016年11月28日的爪哇棒束孢菌株接种于上述培养基上培养得到；
本申请提供的爪哇棒束孢，由爪哇棒束孢(Isariajavanica)BE01接种于上述培养基上培养得到；所述爪哇棒束孢(Isariajavanica)BE01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13192，保藏日期为2016年11月28日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。上述培养过程中，爪哇棒束孢具有优异的产孢效果，同时培养获得的孢子可直接应用于杀虫剂的生产，而无需后处理步骤，具有很好的经济性。
优选地，菌株接种的接种量为60％；
优选地，所述培养的温度为25℃，培养的时间为11天。
根据本发明的一个方面，一种包含上述爪哇棒束孢的可湿性粉剂；
本发明提供的一种可湿性粉剂，该可湿性粉剂包含上述爪哇棒束孢。
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述爪哇棒束孢占所述可湿性粉剂中的质量百分数为10wt％。
在本发明的一种优选实施方式中，所述可湿性粉剂还包含润湿剂；
优选地，所述润湿剂包括奥妙；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述润湿剂占所述可湿性粉剂中的质量百分数为1wt％；
优选地，所述可湿性粉剂还包含分散剂；
优选地，所述分散剂包括羧甲基纤维素钠；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述分散剂占所述可湿性粉剂中的质量百分数为4wt％；
优选地，所述可湿性粉剂还包含紫外线保护剂；
优选地，所述紫外线保护剂包括荧光素钠；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述紫外线保护剂占所述可湿性粉剂中的质量百分数为1wt％；
优选地，所述可湿性粉剂还包含载体；
优选地，所述载体包括凹凸棒土；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述载体占所述可湿性粉剂中的质量百分数为84wt％；
优选地，按质量百分数计，所述可湿性粉剂包含以下组分：上述爪哇棒束孢10％、奥妙1％、羧甲基纤维素钠4％、荧光素钠1％，余量为凹凸棒土；所述可湿性粉剂中各组分的质量百分数之和为100％。
根据本发明的一个方面，一种上述可湿性粉剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
将配方量的各原料混匀，制得可湿性粉剂。
本发明提供的上述可湿性粉剂的制备方法，该制备方法将配方量的各原料混匀，制得可湿性粉剂。上述制备方法具有制备工艺简单的优势。
根据本发明的一个方面，上述爪哇棒束孢、上述可湿性粉剂在制备针对美国白蛾的杀虫剂产品中的应用。
本发明提供的上述爪哇棒束孢或上述可湿性粉剂的应用，该爪哇棒束孢或可湿性粉剂可以广泛应用于针对美国白蛾的杀虫剂产品的制备中。
下面将结合实施例和对比例对本发明的技术方案进行进一步地说明。
实施例1
一种培养基，所述培养基主要由麦麸、稻壳、豆粕、硫酸锰和水，所述培养基中的初始水含量为16wt％；
所述培养基的制备方法包括以下步骤：
将麦麸与稻壳以1：3的质量比混均，随后加入水调节培养基的初始含水量至16wt％，然后以3wt％的质量比加入豆粕混匀，得到培养料，最后在每g培养基加入10μg硫酸锰混匀，得到培养基。
实施例2
一种培养基，所述培养基主要由麦麸、稻壳、豆粕、硫酸锰和水，所述培养基中的初始水含量为18wt％；
所述培养基的制备方法包括以下步骤：
将麦麸与稻壳以2：3的质量比混均，随后加入水调节培养基的初始含水量至18wt％，然后以4wt％的质量比加入豆粕混匀，得到培养料，最后在每g培养基加入7μg硫酸锰混匀，得到培养基。
实施例3
一种培养基，所述培养基主要由麦麸、稻壳、豆粕、硫酸锰和水，所述培养基中的初始水含量为19wt％；
所述培养基的制备方法包括以下步骤：
将麦麸与稻壳以1：3的质量比混均，随后加入水调节培养基的初始含水量至19wt％，然后以3wt％的质量比加入豆粕混匀，得到培养料，最后在每g培养基加入9μg硫酸锰混匀，得到培养基。
实施例4
一种培养基，所述培养基主要由麦麸、稻壳、豆粕、硫酸锰和水，所述培养基中的初始水含量为17wt％；
所述培养基的制备方法包括以下步骤：
将麦麸与稻壳以3：2的质量比混均，随后加入水调节培养基的初始含水量至17wt％，然后以1wt％的质量比加入豆粕混匀，得到培养料，最后在每g培养基加入8μg硫酸锰混匀，得到培养基。
实施例5
一种培养基，所述培养基主要由麦麸、稻壳、豆粕、硫酸锰和水，所述培养基中的初始水含量为20wt％；
所述培养基的制备方法包括以下步骤：
将麦麸与稻壳以1：2的质量比混均，随后加入水调节培养基的初始含水量至20wt％，然后以2wt％的质量比加入豆粕混匀，得到培养料，最后在每g培养基加入10μg硫酸锰混匀，得到培养基。
效果例1
为表明本申请制备得到的培养基可以有效提高爪哇棒束孢的培养水平，进而提高爪哇棒束孢的产孢量和孢子活性。先将实施例1～5制备得到的培养基用于爪哇棒束孢的培养，并对培养的具体培养参数进行优化选择，其结果如下所示：
Figure BDA0002414763730000101
由上述效果例证明，本申请实施例5制得的培养基在初始含水量为20％、培养温度25℃、接菌量60％，培养11d时，对爪哇棒束孢的培养效果最佳，产孢量最大。
实施例6
一种可湿性粉剂，按质量百分数计，所述可湿性粉剂包含以下组分：
Figure BDA0002414763730000102
上述可湿性粉剂的制备方法包括以下步骤：将配方量的各原料混匀，制得可湿性粉剂。
效果例2
为表明本申请制备得到的爪哇棒束孢或可湿性粉剂对美国白蛾具有很强的杀灭作用。
现对美国白蛾3龄幼虫上喷洒实施例5培养基培养得到的纯孢子液或实施例6制备得到的可湿性粉剂，第7d左右时，幼虫的死亡率可达到100％；在美国白蛾3龄和4龄幼虫上喷洒实施例5培养基培养得到的纯孢子液或实施例6制备得到的可湿性粉剂，第12d左右时，幼虫的死亡率达到100％。少部分喷洒了配制的可湿性粉剂还没有死的幼虫，较同龄期幼虫相比，生长极慢，最后慢慢减少食量而死，无法正常产卵。
除了对3龄幼虫进行了试验，还对美国白蛾2龄的幼虫进行了预试验。喷洒106个孢子/mL浓度的实施例5培养基培养得到的纯孢子液或实施例6制备得到的可湿性粉剂。
结果显示，可湿性粉剂对于美国白蛾低龄幼虫的致死率要比高龄幼虫的致死率高的多，由此可见，该制剂对于美国白蛾低龄的幼虫(3龄以下)的致死效果较好，致死率会随着幼虫龄期增大而下降。实验过程中还发现，当制剂中孢子浓度越高，对美国白蛾的致死效果越明显。本试验研制的可湿性粉剂与其他剂型的杀虫剂相比，成本低且便于使用和贮存，使用时只要按比例加水稀释后均匀喷洒即可，高效快捷。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种培养基，所述培养基包含培养基质和微量元素，其特征在于，所述微量元素包括锰元素。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基的初始水含量为20wt％。
3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基质包括麦麸和/或稻壳；
优选地，所述培养基质包括麦麸和稻壳；
优选地，所述麦麸与稻壳的质量比为1：3；
优选地，所述锰元素以锰盐存在于所述培养基中；
优选地，所述锰盐包括硫酸锰；
优选地，所述锰盐在每g培养基中的含量为10μg；
更优选地，所述硫酸锰在每g培养基中的含量为10μg。
4.根据权利要求1～3任一项所述的培养基，其特征在于，所述培养基还包含豆粕；
优选地，基于培养基的质量，所述豆粕占培养基质量的2wt％；
优选地，所述培养基还包含溶剂，优选为水。
5.一种根据权利要求1～4任一项所述培养基的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
将各原料混匀，制得培养基；
优选地，所述制备方法还包括将各原料混匀后，加入溶剂调节水含量的步骤。
6.一种爪哇棒束孢，其特征在于，所述爪哇棒束孢主要由保藏编号为CGMCCNo.13192，保藏日期为2016年11月28日的爪哇棒束孢菌株接种于权利要求1～4任一项所述的培养基上培养得到；
优选地，菌株接种的接种量为60％；
优选地，所述培养的温度为25℃，培养的时间为11天。
7.一种包含权利要求6所述的爪哇棒束孢的可湿性粉剂；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述爪哇棒束孢占所述可湿性粉剂中的质量百分数为10wt％。
8.根据权利要求7所述的可湿性粉剂，其特征在于，所述可湿性粉剂还包含润湿剂；
优选地，所述润湿剂包括奥妙；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述润湿剂占所述可湿性粉剂中的质量百分数为1wt％；
优选地，所述可湿性粉剂还包含分散剂；
优选地，所述分散剂包括羧甲基纤维素钠；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述分散剂占所述可湿性粉剂中的质量百分数为4wt％；
优选地，所述可湿性粉剂还包含紫外线保护剂；
优选地，所述紫外线保护剂包括荧光素钠；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述紫外线保护剂占所述可湿性粉剂中的质量百分数为1wt％；
优选地，所述可湿性粉剂还包含载体；
优选地，所述载体包括凹凸棒土；
优选地，基于所述可湿性粉剂的质量，所述载体占所述可湿性粉剂中的质量百分数为84wt％；
优选地，按质量百分数计，所述可湿性粉剂包含以下组分：权利要求6所述的爪哇棒束孢10％、奥妙1％、羧甲基纤维素钠4％、荧光素钠1％，余量为凹凸棒土；所述可湿性粉剂中各组分的质量百分数之和为100％。
9.一种根据权利要求8所述可湿性粉剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
将配方量的各原料混匀，制得可湿性粉剂。
10.如权利要求6所述的爪哇棒束孢、如权利要求7或8所述的可湿性粉剂在制备针对美国白蛾的杀虫剂产品中的应用。
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KR20130063209A (ko) * 2011-12-06 2013-06-14 대한민국(농촌진흥청장) 담배가루이 Ｑ 타입에 대한 방제 효과를 갖는 신규 곤충병원성 곰팡이 이사리아 자바니카 Ｐｆ04 및 이를 포함하는 담배가루이 Ｑ 타입 방제용 미생물 살충제
CN106479943A (zh) * 2017-01-03 2017-03-08 南京林业大学 一株高效防治美国白蛾的爪哇棒束孢be01及其应用
CN107541474A (zh) * 2016-06-27 2018-01-05 中国农业大学 解淀粉芽孢杆菌的固态发酵物及其制备方法

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