CN112708565A - 一种蝗虫微孢子虫株系以及制备和使用方法 - Google Patents

一种蝗虫微孢子虫株系以及制备和使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种蝗虫微孢子虫株系以及制备和使用方法，蝗虫微孢子虫(Paranosema locustae)，命名为PL‑GM1株系，是从海南的车蝗中分离筛选得到的，已于2020年4月3号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，菌种保藏号为CGMCC No.19390。蝗虫微孢子虫(Paranosema locustae)PL‑GM1株系CGMCC No.19390简称PL‑GM1株系。本发明属于蝗虫技术领域，具体是指一种筛选本土使用且对蝗虫等效果好、抗高温、耐储存等能力强的株系，显著提高货架期及防治蝗虫效果的蝗虫微孢子虫株系。

Description

一种蝗虫微孢子虫株系以及制备和使用方法
技术领域
本发明属于蝗虫技术领域，具体是指一种蝗虫微孢子虫株系以及制备和使用方法。
背景技术
蝗灾是世界性的自然灾害，对农业生产造成了很大的影响。多年来，蝗灾曾发生过大面积的频繁暴发，包括土蝗、飞蝗、稻蝗、棉蝗和竹蝗等。仅我国飞蝗和土蝗每年分别发生超过2500万亩次和7000万亩次，严重影响了农牧业生产。目前防治蝗虫的方法主要是采用化学农药防治，尽管化学防治可以迅速压低蝗虫的虫口密度，但是往往造成污染环境、杀伤大量有益动物、人畜中毒和害虫产生抗药性等不良后果等。
从20世纪70年代国外采用黑蝗等作为繁殖宿主来培养蝗虫微孢子虫，随后国内外都陆续开展了蝗虫微孢子虫的研究，已有关于利用绿僵菌防治蝗虫的技术，但是因其生产成本高、保存期短、使用的环境条件要求苛刻、对有些生物不安全等，而限制了使用范围，而且当前国内外已经报道的蝗虫微孢子虫株系，抵抗外界不良环境特别是抗高温能力相对比较低。
发明内容
为解决上述现有难题，本发明提供了一种筛选本土使用且对蝗虫效果好、抗高温、耐储存等能力强的株系，可显著提高货架期及防治蝗虫效果的蝗虫微孢子虫株系以及制备和使用方法。
本发明提供的蝗虫微孢子虫(Paranosema locustae)，命名为PL-GM1株系，是从热区土蝗中分离筛选得到的，已于2020年4月3号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，菌种保藏号为CGMCCNo.19390。蝗虫微孢子虫(Paranosema locustae)PL-GM1株系CGMCC No.19390简称PL-GM1株系。
本发明采用的技术方案如下：一种蝗虫微孢子虫株系制备方法，包括以下步骤：
1)野外采集蝗虫后进行检疫、复壮；
2)对步骤1)中复壮后的蝗虫进行保种；
3)对步骤2)中的保种蝗虫进行蝗虫卵孵化，健虫饲养；
4)健虫接种微孢子虫的孢子，将涂有所述蝗虫微孢子虫PL-GM1株系的孢子液的植物叶片饲喂蝗蝻；
5)病虫饲养，改用正常植物叶片饲喂直至死亡；
6)微孢子加工、检验；
7)产品包装质检并进行冷冻贮存。
本发明采用的技术方案如下：一种蝗虫微孢子虫株系使用方法，包括以下步骤：
1)施药地点：选择飞蝗虫口密度在5-10头/平方米、草原土蝗虫口密度在20-30头/平方米，蝗虫发生龄期接近或者处于蝗蝻期的地点；
2)施药时间：蝗虫为第3-4龄期为最佳施药时期，施药时间选择在上午10点之前或下午16点以后，风力小时进行作业；
3)施药对象：喷施对象必须为蝗虫喜食的禾本科、莎草科等植物，喷到蝗虫躯体上作用很小；
4)施药方式：根据施药地点的植被种类、植被覆盖率大小、植被的高低采用超低量水剂喷雾或使用麦麸饵剂喷洒；
5)施药过程：用干净的水将蝗虫微孢子虫制剂按照示范应用所需的药液浓度稀释相应的倍数；
6)施药浓度：草原土蝗每亩施用的蝗虫微孢子虫量为土蝗5-6×108、飞蝗每亩施用的蝗虫微孢子虫量为土蝗1.5-2×109，依据密度和用时蝗虫龄期的大小，施药时适当调整。
进一步地，所述步骤1)中植被种类以禾本科、沙草科等为主要优势种，植被覆盖率高于60％、植被高度适中的地区采用超低量水剂喷雾，其它情况采用麦麸饵剂(100-150g/亩)喷施。
采用上述方案本发明取得有益效果如下：本发明蝗虫微孢子虫株系以及制备和使用方法,具有较强的抗高温能力，而且致病力和致病性均较好，防治多种主要蝗虫的效果稳定，可显著提高货架期及防治蝗虫效果。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明采用的技术方案如下：一种蝗虫微孢子虫株系制备方法，包括以下步骤：
1)野外采集蝗虫后进行检疫、复壮；
2)对步骤1)中复壮后的蝗虫进行保种；
3)对步骤2)中的保种蝗虫进行蝗虫卵孵化，健虫饲养；
4)健虫接种微孢子虫的孢子，将涂有所述蝗虫微孢子虫PL-GM1株系的孢子液的植物叶片饲喂蝗蝻；
5)病虫饲养，改用正常植物叶片饲喂直至死亡；
6)微孢子加工、检验；
7)产品包装质检并进行冷冻贮存。
本发明采用的技术方案如下：一种蝗虫微孢子虫株系使用方法，包括以下步骤：
1)施药地点：选择飞蝗虫口密度在5-10头/平方米、草原土蝗虫口密度在20-30头/平方米，蝗虫发生龄期接近或者处于蝗蝻期的地点；
2)施药时间：蝗虫为第3-4龄期为最佳施药时期，施药时间选择在上午10点之前或下午16点以后，风力小时进行作业，
3)施药对象：喷施对象必须为蝗虫喜食的禾本科、莎草科等杂草，喷到蝗虫躯体上作用很小；
4)施药方式：根据施药地点的植被种类、植被覆盖率大小、植被的高低采用超低量水剂喷雾或使用麦麸饵剂喷洒；
5)施药过程：用干净的水将蝗虫微孢子虫制剂按照示范应用所需的药液浓度稀释相应的倍数；
6)施药浓度：草原土蝗每亩施用的蝗虫微孢子虫量为土蝗5-6×108、东亚飞蝗每亩施用的蝗虫微孢子虫量为土蝗1.5-2×109，依据密度和用时蝗虫龄期的大小，施药时适当调整。
进一步地，所述步骤1)中植被种类以禾本科、沙草科等为主要优势种，植被覆盖率高于60％、植被高度适中的地区采用超低量水剂喷雾，其它情况采用麦麸饵剂(100g/亩)喷施。
蝗虫微孢子虫PL-GM1株系基因系列
GCCTGACGTGTGCGCTAGTCTTGGGGACTTAGCCATGCAAGCCAGCGAAGCGGCGCGGAGCGGCGGACGGCTCAGTAGGACGGCGATAATCCACCCGCAGCAGAGACAAGGATAACCGCGGCAAGCTGCGGCTAAGACATGGACAGGCTGCGGCGCGGGGAGGCGCGGGCAGCGGACAGGGAGCGGCTGCGGCGGAGTTGCTGGCCCATCAGCTGGTAGGTAGGGTAAGGGCCTACCTAGGCGACGACGGGTGACGGGGGGTGAGAGCCCGGAACCGGAGAGGGAGCCTGAGAAACAGCTCCCACGTCCAAGGACGGCAGCAGGCGCGGAACTTGCCCAATCCCGGCGGGGGAGGCAGCCACAAGACGTGGGGGCCCGGAACGCACGGCAAAGGAGTGCGGGGCGACTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAGGAGCGCACATGAGTGTTGCTGCAGTTAAAACGTCCGTAGTCGGCCCGGGCGCGCTGTGAGGAAACCGCGGGGCCCAAGGCGGCGGGCAGCACGGGAGCGGGGGCGACAGGAACGGACAACGGCCGCGGGATCCGGGGGCGAGAGGTGAAAATCGGGGACCCCCGCGGGGACGGGCGGAAGCGAAGGCGGCGGCCGGGGACGTGTCCGTTGATCAAGGACGAAGGCCGGAGGATCAAAGATGATTAGATACCGTCGTAGTTCCGGCAGTAAACGATGCCGACGGGGCGAGGCCAGGGGGCTGTGTCCGGGAGAAATTGGAGTGTTTGGGCTCTGGGGATAGTACGGTCGCAAGACAGAAACTTAAAGAAATTGACGGAAGGACACCACAAGGAGTGGAGTGTGCGGCTTAATTTGACTCAACGCGGGGCAGCTTACCAGGGCCGGATGCGCGGGAGATTGGCGGCGGAGCGCCCCCGAGATTGCGCAGGGAGTGGTGCATGGCCGTTTGCAACACGTGGGGTGACCTGTCTGGTTGATTCCGACAACGCGTGAGGCCTGGGGTGCAGCAGGGGCTGTGCGACGGGCGGCGGCAAGCTGCAGGAGGGCAGGCGAAAACAGGTCAGTGATGCCCTCAGATGCTCTGGGCTGCACGCGCACTACAATGGCGCGGCGAGCGGGAGTGCCGGGAGGCGCGGGCGAGGCCGTGGCGCAGCAGGGATGGGGGCCTGGAAGGGTGCCCTGAACGAGGAATTCCTAGTAGCCGCGGGTCACCAAGCCGCGGCGAATGAGTCCCTGTTCTTTGTACACACCGCCCGTCACTACCTAAGATGGATGTGCAGGCGAGGAGGC
蝗虫微孢子虫PL-GM1株系生物学特点：
经过中国农业大学植物保护学院形态和分子鉴定，蝗虫微孢子虫Paranosemalocustae PL-GM1株系属于真核生物域Eukaryota，后鞭毛生物群Opisthokonta，真菌界Fungi；微孢子虫目Microsporidia；无多孢子芽膜亚目Apansporoblastina；微孢子虫科Nosematidae；准微孢子属Paranosema。该株系为细胞内寄生，孢子为繁殖体，分裂生殖，大小约为5.6×3.3μm-7.8×2.2μm，产孢快，抗逆性强。
实施例1，蝗虫微孢子虫PL-GM1株系的获得
因为热带温度较高，能在热带蝗群中流行的蝗虫微孢子虫株系均具有较强的抗高温能力，经过十多年的研究和试验，从热区土蝗体内分离到的一个蝗虫微孢子虫株系(全国农药标准化技术委员会命名为蝗虫微孢子虫PL-GM1，菌种已经保存与中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，注册编号19390)具有较强的抗高温能力，而且致病力和致病性均较好，防治多种主要蝗虫的效果稳定。
2020年4月3号将蝗虫微孢子虫(Paranosema locustae)PL-GM1株系保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.19390。蝗虫微孢子虫(Paranosema locustae)PL-GM1株系CGMCC No.19390简称PL-GM1株系。
实施例2，蝗虫微孢子虫PL-GM1株系的致病性鉴定
蝗虫微孢子虫PL-GM1株系可用于防治多种蝗虫，例如草原蝗虫、飞蝗、竹蝗、稻蝗等。致病性和致病力均较强，可以垂直传播到下一代，有利于蝗虫微孢子虫病在蝗群中长期流行，显示出较好的持续控制作用。
蝗虫微孢子虫PL-GM1株系对我国的优势种蝗虫飞蝗、亚洲小车蝗、意大利蝗、西北利亚蝗、宽须蚁蝗、鼓翅皱膝蝗、黄脊竹蝗、中华稻蝗等都具有特异性致死作用，接种3×106孢子3周后对以上蝗虫的死亡率分别达到95.3％、93.6％、89.7％、91.2％、96.7％、87.3％、91.2％和96.1％，而且存活蝗卵携带孢子的比例均在95％以上，垂直传播效果极好，有利于蝗虫微孢子虫对蝗虫的持续控制。
实施例3，蝗虫微孢子虫PL-GM1株系的抗高温能力
蝗虫微孢子虫PL-GM1株系喷洒到最高气温可达50℃以上的海南田间玉米植株上，一个月以后叶片上的蝗虫微孢子的存活率仍然可以达到80％以上，致病性显著，加快杀虫微生物制剂的研发推广，可以带来显著的经济、生态和社会效益，是植物保护的发展趋势。
经济效益：据农业部门报告，每年因病虫害造成的作物损失率高达30％左右，当前仍主要依靠化学农药防治，其中高毒性农药占了一半以上。生产高效无害有机农药来替代部分高毒化学农药，减少残留，提供绿色食品。加快杀虫生物制剂的开发应用进程，完善应用技术，开发出适于大面积推广应用的纯生物制剂并实现产业化生产，能产生巨大经济效益。
生态效益：杀虫微生物制剂属于纯天然生物制剂，害虫对其不易产生抗药性，对害虫天敌没有杀伤作用，对高等动物无害，不污染环境，能保护生态平衡，具有较好的生态效益。
社会效益：杀虫微生物制剂的开发应用对于促进草原植被恢复，促进地区畜牧业的发展和农牧民生活水平的提高，具有很大的社会效益。在贫瘠地区建立蝗虫微孢子虫防蝗示范区，可帮助农牧民脱贫致富，其社会效益十分显著。并解决一部分人员的就业问题，对维护社会的稳定和经济发展，提高当地人民生活水平，具有巨大的社会和经济效益。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (4)

1.一种蝗虫微孢子虫株系，其特征在于，蝗虫微孢子虫(Paranosema locustae)，其保藏编号为CGMCC No.19390，命名为PL-GM1株系，已于2020年4月3号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.一种蝗虫微孢子虫株系制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)野外采集蝗虫后进行检疫、复壮；
2)对步骤1)中复壮后的蝗虫进行保种；
3)对步骤2)中的保种蝗虫进行蝗虫卵孵化，健虫饲养；
4)健虫接种微孢子虫的孢子，将涂有所述蝗虫微孢子虫PL-GM1株系的孢子液的植物叶片饲喂蝗蝻；
5)病虫饲养，改用正常植物叶片饲喂直至死亡；
6)微孢子加工、检验；
7)产品包装质检并进行冷冻贮存。
3.一种蝗虫微孢子虫株系使用方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)施药地点：选择飞蝗虫口密度在5-10头/平方米、草原土蝗虫口密度在20-30头/平方米，蝗虫发生龄期接近或者处于蝗蝻期的地点；
2)施药时间：蝗虫为第3-4龄期为最佳施药时期，施药时间选择在上午10点之前或下午16点以后，风力小时进行作业；
3)施药对象：喷施对象必须为蝗虫喜食的禾本科等杂草，喷到蝗虫躯体上作用很小；
4)施药方式：根据施药地点的植被种类、植被覆盖率大小、植被的高低采用超低量水剂喷雾或使用麦麸饵剂喷洒；
5)施药过程：用干净的水将蝗虫微孢子虫制剂按照示范应用所需的药液浓度稀释相应的倍数；
6)施药浓度：草原土蝗每亩施用的蝗虫微孢子虫量为土蝗5-6×108、飞蝗每亩施用的蝗虫微孢子虫量为土蝗1.5-2×109，依据密度和用时蝗虫龄期的大小，施药时适当调整。
4.根据权利要求3所述的一种蝗虫微孢子虫株系使用方法，其特征在于，所述步骤1)中植被种类以禾本科、沙草科为主要优势种，植被覆盖率高于60％、植被高度适中的地区采用超低量水剂喷雾，其它情况采用麦麸饵剂喷施。
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