CN1313006C - 含有酵母细胞提取物的植物抗病诱导剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含有酵母细胞提取物的植物抗病诱导剂，其主要成分为β-1，3葡聚糖，它含有酵母细胞提取物、湿润剂、分散剂等。该诱导剂可以诱导植物提高潜在的抗病性，经试验，该诱导剂对植物病原菌没有直接杀伤作用，却可以诱导黄瓜植株体内的苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶等防御酶，以及β-1，3葡聚糖酶、几丁质酶等致病相关蛋白活性的提高，并能提高木质素的含量；可以提高植株对黄瓜白粉病、霜霉病、灰霉病和番茄叶霉病等病害的抗性，是一种抗病谱广、持效期长、安全无污染，颇具应用潜力的植物抗病诱导剂。

Description

含有酵母细胞提取物的植物抗病诱导剂

技术领域

本发明涉及一种酵母细胞提取物，更确切地说是一种含有真菌多糖的植物抗病诱导剂以及它的制备和应用。

背景技术

各种病害的发生可使农作物减产30～40％。目前植物病害主要防治方法是利用化学农药和抗病品种，化学农药虽然能快速有效地杀死病原物，但却存在着如环境污染、农药残留、病原物产生抗性以及破坏生态平衡等一系列问题。抗病品种是防治病害的有效措施，尤其是随着基因工程的迅速发展，增加了抗病品种培育的手段，但该方法周期长、费用高，而且很多病害还不能通过抗病品种来解决，因此生物农药的开发日趋受到重视。植物病害的生物防治主要包括两个方面：1.利用拮抗微生物；2.诱导植物自身抗病性的表达。近代植物病理学认为，无论植物的抗病品种还是感病品种都存在大量的抗病基因，这些抗病基因在自然状态下有的可以直接表达出来，有的则需要通过适当的方式诱导才能表达，从而使植物获得对病原物的抗性，即诱导抗性。诱导抗性的现象早在二十世纪初就已经发现了，最初人们把这种现象称为获得抗性或获得性免疫。诱导抗病性被定义为“利用物理的化学的或生物的方法，预先处理植物，从而改变病害反应，使原来的感病反应产生局部的或系统的抗性”。由于诱导抗病性是植物通过对外源刺激发生反应，调动自身体内免疫系统的功能，阻止病原菌侵入危害，而诱导剂本身对病原菌没有直接杀伤作用，所以对动植物无害，不会导致生理小种发生变异，病原菌也不易产生抗性，不会破坏生态平衡等。因此，诱导抗病性已成为植物病害众多抗性类型中倍受青睐及植物病害控制中最具有应用潜力的一种方法。

植物在长期进化过程中由于需要不断地抵抗微生物的侵害，因此逐渐形成了一系列复杂而行之有效的防御系统，当植物受到侵染时，诱导出各种各样的生理生化反应，控制甚至清除病原菌而达到保护自身的目的。能够诱导植物产生抗病性的因子称为诱导子或激发子，分为生物因子和非生物因子两类，生物因子包括真菌、细菌和病毒的无毒病原菌、病原菌培养滤液以及源自病原菌的某些生物因子，如Stenzel用芽孢杆菌一个菌株的培养液处理小麦、大麦苗，能诱导小麦和大麦抗白粉病菌侵染，但不影响白粉菌分生孢子萌发和附着胞形成，主要是抑制吸器和菌落的形成。非生物因子包括草酸盐、苯硫脲、亚硒酸钠、二氯环丙烷、水杨酸、2，6-二氯异烟酸(INA)、苯并噻唑硫代乙酸甲酯(BTH)等。尤其是BTH，叶面喷施后，可以诱导烟草和拟南芥对各种病毒、细菌和真菌引起的病害产生抗性，苗期处理可使水稻整个生长季节对稻瘟病具有抗病作用，处理小麦后能诱导对锈病、白粉病和叶斑病的抗性。BTH研制的成功和注册使用，是多年来应用诱导抗性保护植物从研究到实践的一个重要突破。

诱导抗性的机制十分复杂，它涉及到植物和病原菌及其相互作用等诸方面。1、寄主的木质化反应是诱导植物产生抗性的主要机制之一。木质素是植物细胞壁的主要成分，而木质化反应是植物抵抗病原菌侵染的有效手段之一。研究表明，用非致病性的灰葡萄孢对麦叶进行带伤接种，接种点附近迅速木质化，可使麦叶免受病菌侵染。2、植保素增加。植保素的沉积能够抑制病原菌的生长和侵染，从而达到抗病的目的。3、酚类物质的积累。酚类物质可被氧化成对病原菌有毒害作用的醌，同时又是木质素形成的前体。4、致病相关蛋白(Pathogenesis-related proteins，PRs)的积累。致病相关蛋白在健康植株中不存在或表现较弱，当被诱导子诱导时迅速产生积累，如用电泳方法分析经过诱导对霜霉病产生抗性的烟草植株，发现产生致病相关蛋白的数量在接种2天或4天后增加。现己发现几十种植物可被诱导出致病相关蛋白。在PR蛋白家族中，PR-3目前被鉴定为几丁质酶，PR-2被鉴定为β-1，3-葡聚糖酶。高等植物中普遍存在几丁质酶和β-1.3葡聚糖酶，但至今未发现有几丁质存在，β-1，3葡聚糖也仅在植物体部分细胞中少量存在。由于很多植物病原真菌细胞壁的主要成分为几丁质和β-1，3葡聚糖，因此植物中的几丁质酶和β-1，3葡聚糖酶可以消解病原菌的细胞壁。正常情况下，植物体内几丁质酶和β-1，3葡聚糖酶只有低水平组成性表达，但用激发子处理以后可使其产生高水平的几丁质酶和β-1，3-葡聚糖酶。5、防御酶系的变化。主要包括苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)等。PAL是莽草酸代谢的关键酶和限速酶，是酚类物质、植保素和木质素合成的关键酶，POD及其同工酶在上述抗菌物质合成过程中起主要作用并影响酚类的代谢，PPO的主要功能是将酚类物质氧化成对病原物毒性更强的醌类物质。

发明内容

本发明的目的是提供一种提取酵母细胞提取物的方法，它的主要成分是酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖。

本发明的另一个目的是提供一种制备含有酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖的植物抗病诱导剂的方法，诱导植物自身增强抗病性能。

本发明的最后一个目的是提供该植物抗病诱导剂在植物抗病方面的应用。

本发明的技术方案如下：

这种含有酵母细胞提取物的植物抗病诱导剂，是一种活性成分为酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖的水悬浮剂，所用酵母为啤酒酵母，诱导剂含有酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖、湿润剂农乳0204、分散剂木质素磺酸钠或木质素磺酸钙、增稠剂黄原胶、防沉降剂白土、消泡剂异戊醇和防冻剂丙三醇，它们在其中的重量百分比如下：

酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖                               40-60％

农乳0204                                                  2.0-4.0％

木质素磺酸钠或木质素磺酸钙                                1.0-3.5％

黄原胶                                                    0.05-0.15％

白土                                                      1.0-4.0％

异戊醇                                                    0.2-1.0％

丙三醇                                                    1.0-4.0％

水                                                        23.35-54.75％

其酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖的制备方法如下：

(1)啤酒酵母细胞溶于1mol/L的NaOH(W∶V＝1∶2)，75℃反应6小时，重复一次，水洗至中性，得到褐色粘稠的提取物；

(2)将该提取物溶于1mol/L的HCl(W∶V＝1∶1)，30℃反应2小时，水洗至中性，得到浅褐色粗提物，乙醇脱色脱脂、乙醚脱水干燥得到白色粉末，为制备含有酵母细胞提取物的植物抗病诱导剂所需要的酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖。

优化重量百分比如下：

酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖                               50％

农乳0204                                                  3％

木质素磺酸钠或木质素磺酸钙                                2.5％

黄原胶                                                    0.10％

白土                                                      2-3％

异戊醇                                                    0.5％

丙三醇                                                    2-3％

水                                                        37.90-39.90％

这种含有酵母细胞提取物的植物抗病诱导剂对黄瓜灰霉病、黄瓜霜霉病和番茄叶霉病有防治作用。

经诱导剂处理后3天，黄瓜植株体内几丁质酶活性开始提高，7天时达到最大值，之后开始下降，25天时，其酶活仍然高于对照。

经诱导剂处理后，黄瓜植株体内木质素含量开始缓慢提高，15天时达到最大值，之后开始缓慢下降，30天时仍略高于对照。

该诱导剂的诱导作用具有传导性，当黄瓜苗长至2片子叶、2片真叶期时，用含有酵母细胞提取物的植物抗病诱导剂处理黄瓜苗的下部3片叶片，并于7天时测定第4片叶片及新生叶片的苯丙氨酸解氨酶活性，发现第四片叶酶活提高约2.6倍，新长出的叶片酶活也有轻微提高，表明诱导剂的诱导作用具有传导性，并且可以传导至新生叶片。

经诱导剂处理后，黄瓜和番茄植株病叶率和病情指数均明显下降。

温室内经500mg/L和1000mg/L诱导剂处理后，黄瓜植株对灰霉病的抗性提高，植株在14天内病叶率分别比对照下降了37.9～57.9和38.4～59.0，最佳相对免疫效果达到90.9％和92.1％，且二者在各时期相对免疫效果相似。

经诱导剂处理后，植株对番茄叶霉病的抗性明显提高，病叶率明显低于空白对照，相对免疫效果达到了76.8％。

经诱导剂处理后，黄瓜霜霉病病叶率和病情指数比对照均有明显下降，相对免疫效果达61.4％。

经诱导剂处理后，黄瓜白粉病病叶率和病情指数比对照均有明显下降，相对免疫效果达77.1％。

下面通过实施例来进一步阐明本发明抗病诱导剂的制备方法。

[实施例1]

1.酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖的分离提取

(1)啤酒酵母细胞溶于1mol/L的NaOH(W∶V＝1∶2)，75℃反应6小时，重复一次，水洗至中性，得到褐色粘稠的提取物；

(2)将该提取物溶于1mol/L的HCl(W∶V＝1∶1)，30℃反应2小时，水洗至中性，得到浅褐色粗提物，乙醇脱色脱脂、乙醚脱水干燥，得到白色粉末，为制备含有酵母细胞提取物的植物抗病诱导剂所需要的酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖。

2.将所制得的酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖按如下比例制备成含40％酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖的水悬浮剂—植物抗病诱导剂：

酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖                                  40％

农乳0204                                                     3.6％

木质素磺酸钠(或木质素磺酸钙)                                 3％

黄原胶                                                       0.15％

白土                                                         2.4-3.6％

异戊醇                                                       0.6％

丙三醇                                                       2.4-3.6％

水                                                           45.45-47.85％

[实施例2]

1.酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖的分离提取同[实施例1]

2.将所制得的酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖按如下比例制备成含50％酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖的水悬浮剂—植物抗病诱导剂：

酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖                               50％

农乳0204                                                  3％

木质素磺酸钠(或木质素磺酸钙)                              2.5％

黄原胶                                                    0.10％

白土                                                      2-3％

异戊醇                                                    0.5％

丙三醇                                                    2-3％

水                                                        37.90-39.90％

[实施例3]

1.酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖的分离提取同[实施例1]

2.将所制得的酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖按如下比例制备成含60％酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖的水悬浮剂—植物抗病诱导剂：

酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖                               60％

农乳0204                                                  2.4％

木质素磺酸钠(或木质素磺酸钙)                              2％

黄原胶                                                    0.05％

白土                                                      1.6-2.4％

异戊醇                                                    0.4％

丙三醇                                                    1.6-2.4％

水                                                        30.35-31.95％

下面通过试验实施例来进一步阐述本发明。

[试验实施例1]该抗病诱导剂对病原真菌孢子萌发的影响

对孢子萌发的影响：用2％的葡萄糖配制B.cinerea，F.oxysporum f.sp.Cucumerinum和F.fulva的孢子悬浮液，与不同浓度的酵母细胞提取物水悬浮剂等体积混合，制成含100mg/L、500mg/L和1000mg/L酵母细胞提取物水悬浮剂的分生孢子浓度为10×10倍镜下20-30个孢子/视野的药液孢子悬浮液，分别取0.1mL滴加到载玻片上，设相应的溶剂为对照。分别于22℃和25℃黑暗保湿培养24小时，检查孢子萌发情况，结果表明，黄瓜灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌和番茄叶霉病菌的孢子在100、500和1000(去掉)mg/L的酵母细胞提取物水悬浮剂溶液中均能正常萌发并生长，即酵母细胞提取物水悬浮剂对黄瓜灰霉病菌、枯萎病菌和番茄叶霉病菌的孢子萌发均没有影响。

[试验实施例2]该抗病诱导剂对病原菌菌丝生长的影响

采用对峙培养测定法，在PDA培养基平板中心接种供试病原菌，置于25℃恒温箱内培养48h后，将灭菌的直径为6mm的圆形滤纸片置于培养皿边缘，并滴加10mL不同浓度的该水悬浮剂溶液，使滤纸片完全湿润，设相应的溶剂及清水为对照，继续在25℃培养箱中培养48h，测量抑菌距离，即滤纸片边缘到真菌菌落边缘的距离。每处理六个平皿，三次重复，结果表明，黄瓜灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌和番茄叶霉病菌在100、500和1000mg/L酵母细胞提取物水悬浮剂的PDA平板上均能正常生长，未发现任何异常现象，因此该水悬浮剂对黄瓜灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌和番茄叶霉病菌的菌丝生长没有影响。

[试验实施例3]该抗病诱导剂抗病机制的研究

将该抗病诱导剂用水配制成按有效成分计算浓度为500mg/L的溶液，黄瓜出苗3天后，用500mg/L该抗病诱导剂喷雾处理，于喷雾后不同时间测定防御酶PAL和PPO活、致病相关蛋白几丁质酶和β-1，3葡聚糖酶活性以及木质素含量。

PAL的提取和测定：经诱导处理的黄瓜植株5g，加10mL含5mM巯基乙醇的硼酸缓冲液(0.025M，PH8.8)，0.5g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，冰浴中研磨，10000g离心15min，上清液为PAL粗提液。1ml酶液，1mL 0.02M L-苯丙氨酸，2mL蒸馏水，总体积4mL。对照以1mL蒸馏水代替底物；反应液置于30℃恒温水浴中保温，30min后用紫外分光光度计在290nm波长下测定吸光值(OD值)，OD值变化0.01为一个酶活单位。结果表明，经500mg/L酵母胞壁多糖喷雾处理后，植株体内PAL酶活性开始提高，14天时，酶活性达到最大值，比对照高出3倍之多，之后开始下降，28天时经处理的植株酶活仍然高于对照。

PPO的提取和测定：经诱导处理的黄瓜植株5g，加10mL磷酸缓冲液(0.05M，pH7.0)，冰浴中研磨，10000g离心5min，上清液为PPO粗提液。1.5mL0.02M的邻苯二酚溶液，加入1.4mL 0.05M磷酸缓冲液，0.1mL酶液，对照以0.1mL蒸馏水代替酶液，30℃反应2min，398nm波长下测定吸光值，OD值变化0.01为一个酶活单位。结果表明，500mg/L酵母胞壁多糖喷雾处理后，黄瓜植株体内PPO活性有一定提高，7天时活性达到高峰，之后缓慢下降，并维持在一定酶活水平相对较长时间。

β-1，3葡聚糖酶的提取和测定：经诱导处理的黄瓜植株新鲜组织2g，加入8mL0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲液(pH4.8)，冰浴中研磨，10000g离心15min，上清液为β-1，3葡聚糖酶粗酶液。参照Abeles等人(1970)方法^[7]，酶提取液1mL，0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲液(pH4.8)2.5mL，1％(w/v)昆布糖0.5mL，30℃保温1小时，蒽酮法测定糖生成量，以每小时形成1mg葡萄糖为～个活力单位。结果表明，500mg/L酵母胞壁多糖诱导处理后3天，黄瓜植株体内β-1，3-葡聚糖酶活性开始提高，15天时达到最大值，酶活比对照提高1倍以上；20天时开始下降，25天时仍维持在较高酶活水平。

几丁质酶的提取和测定：经诱导处理的黄瓜植株5g，加入7.5mL 0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液(pH5.0)，10000g离心15min，上清液为几丁质酶粗提液。酶粗提液200μL，10m mol/L磷酸钠缓冲液(pH6.4)，10mg/mL胶状几丁质。混匀，37℃恒温水浴2h后，置于100℃恒温水浴煮沸3min，6000g离心10min。取上清液400μL，加入20μL 1mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.1)，80μL 1％(w/v)蜗牛酶，37℃恒温水浴30min后，按Reissiget al.的比色法，测定N-乙酰氨基葡萄糖。取0.5mL样品，加入0.1mL 0.8mol/L硼酸钾(pH9.1)，沸水浴3min，冷却，加入3mL DMAB，立即混合，置于36-38℃20min，冷却，585nm测定OD值。结果表明，该抗病诱导剂处理后，植株体内几丁质酶活性开始提高，7天时达到最大值，之后开始下降，25天时，其酶活仍然高于对照。

木质素的提取与测定：经诱导处理的黄瓜植株5g，迅速干燥，取干材料0.1g，先用1％的醋酸处理分离出糖，有机酸和其他可溶性化合物；用丙酮处理，分离出叶绿素，脂肪和其他脂溶性化合物；加入72％的浓硫酸分离出纤维素和半纤维素；6000g离心5min，蒸馏水洗涤沉淀，硫酸存在下，用重铬酸钾氧化水解产物中的木质素，碘量法测定过量的重铬酸钾，终点前加1mL淀粉指示剂，滴定到绿色。结果表明，该抗病诱导剂处理后，植株体内木质素含量开始缓慢提高，15天时达到最大值，之后开始缓慢下降，30天时仍略微高于对照。

[试验实施例4]抗病诱导剂的系统性试验

当黄瓜苗长至2片子叶、2片真叶期时，用有效成分浓度为500mg/L抗病诱导剂处理黄瓜苗的下部3张叶片，分别于7天时取第4张叶片及新生叶片，测定PAL酶活性。结果表明，在该抗病诱导剂处理黄瓜植株第3张叶片后的7天时，分别取第4片叶及新生叶片测定PAL活性，结果表明：喷雾处理7天以后，处理植株的第4片叶酶活比对照提高约2.6倍，处理植株的新生叶片酶活比对照也有轻微提高，即抗病诱导剂对酶活性的诱导作用具有传导性，并且可以传导至新生叶片(表1)。

表1  黄瓜植株不同叶片的PAL活性  单位：U/g.min

第4片叶		新生叶片
				对照	处理	对照	处理
0.046	0.166	0.051	0.056

[试验实施例5]抗病诱导剂对灰霉病的防治作用

将黄瓜种子分别浸于不同浓度的抗病诱导剂溶液中，4小时后进行催芽，种子发芽时播种子蛭石中，置于25±1℃温室，使其自然发病，每次处理20株，3次重复，于播种后7、14和30天时调查发病情况。结果表明，经抗病诱导剂处理的植株病叶率均低于对照，但不同使用剂量的诱导效果差异极为显著(表2)。经100mg/L抗病诱导剂处理的植株病叶率和对照差别不明显，表明抗病诱导剂剂量过小，诱导植株产生抗病性的作用不明显。而经500mg/L和1000mg/L抗病诱导剂处理的植株抗病性有较大的提高，在诱导14天后，病叶率分别比对照下降了37.9～57.9和38.4～59.0个百分点，但随着时间的延长，到处理一个月以后，经诱导处理的植株和对照植株的病叶率均达到了100％。500mg/L和1000mg/L处理的植株病叶率在各时期均相差不大，说明该抗病诱导剂使用剂量达到一定浓度后，诱导抗病效果不再随剂量加大而成比例地提高；经100mg/L抗病诱导剂处理的植株，相对免疫效果较差，而经500mg/L和1000mg/L处理的植株，最佳相对免疫效果达到90.9％和92.1％，且二者在各时期相对免疫效果相似。并且，各处理均随着诱导时间的延长，相对免疫效果下降，但较高剂量抗病诱导剂处理的免疫效果仍明显优于对照(表3)。

        表2    抗病诱导剂诱导后黄瓜灰霉病的病叶率(％)

诱导后时间(天数)	100mg/L	500mg/L	1000mg/L	对照
					71421	38.551.3100	3.811.1100	3.310.0100	41.769.0100

                     表3    抗病诱导剂对黄瓜灰霉病的相对免疫效果

诱导后时间(天数)	调查项目	100mg/L	500mg/L	1000mg/L	对照
						71421	病情指数相对免疫效果(％)病情指数相对免疫效果(％)病情指数相对免疫效果(％)	38.57.934.622.181.91.4	3.890.98.980.051.937.5	3.392.18.880.251.338.3	41.744.483.1

[试验实施例6]抗病诱导剂对番茄叶霉病的防治作用

2001年春天，在辛口镇蔬菜大棚喷施该水悬浮剂后22天，发生番茄叶霉病，于发病初期喷施有效成分浓度为500mg/L的诱导剂和农药福星乳油，施药后7天调查发病情况，结果表明：经诱导剂处理后，明显提高了植株对番茄叶霉病的抗性，病叶率明显低于空白对照，却高于农药福星乳油，但病情指数与福星乳油相差不大，但远远低于空白对照，相对免疫效果达到了76.8％(表4)。

       表4    抗病诱导剂水悬浮剂对番茄叶霉病的防治作用

处理方式	病叶率(％)	病情指数	相对免疫效果(％)
				诱导剂福星乳油空白对照	13.14.527.1	2.61.211.2	76.889.3

[试验实施例7]抗病诱导剂对黄瓜霜霉病的防治作用

2002年秋天，在杨柳青镇蔬菜大棚喷施该水悬浮剂后42天发生霜霉病，于发病后7天喷施有效成分浓度为500mg/L的诱导剂和农药克露，施药后7天调查发病情况，结果表明：经诱导剂处理后，植株病叶率和病情指数均比对照明显下降。但由于该病害发生时阴雨连绵，对病害防治不利，而且防治时间过晚，因此诱导剂的防效仅为61.4％，而农药克露的防效也只达到了74.2％(表5)。

            表5    抗病诱导剂对黄瓜霜霉病的防治作用

处理方式	病叶率(％)	病情指数	相对免疫效果(％)
				诱导剂克露空白对照	21.415.648.9	9.16.123.6	61.474.2

Claims (6)

1、一种含有酵母细胞提取物的植物抗病诱导剂，是一种活性成分为β-1，3葡聚糖的水悬浮剂，其特征在于，所用酵母为啤酒酵母，诱导剂含有酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖、湿润剂农乳0204、分散剂木质素磺酸钠或木质素磺酸钙、增稠剂黄原胶、防沉降剂白土、消泡剂异戊醇和防冻剂丙三醇，它们在其中的重量百分比如下：

酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖                          40-60％

农乳0204                                             2.0-4.0％

木质素磺酸钠或木质素磺酸钙                           1.0-3.5％

黄原胶                                               0.05-0.15％

白土                                                 1.0-4.0％

异戊醇                                               0.2-1.0％

丙三醇                                               1.0-4.0％

水                                                   23.35-54.75％

其酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖的制备方法如下：

(1)啤酒酵母细胞溶于1mol/L的NaOH(W∶V＝1∶2)，75℃反应6小时，重复一次，水洗至中性，得到褐色粘稠的提取物；

(2)将该提取物溶于1mol/L的HCl(W∶V＝1∶1)，30℃反应2小时，水洗至中性，得到浅褐色粗提物，乙醇脱色脱脂、乙醚脱水干燥得到白色粉末，为制备含有酵母细胞提取物的植物抗病诱导剂所需要的酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖。

2.根据权利要求1所述的含有酵母细胞提取物的植物抗病诱导剂，其特征在于，各种成分的优化重量百分比如下：

酵母细胞提取物β-1，3葡聚糖                        50％

农乳0204                                           3％

木质素磺酸钠或木质素磺酸钙                         2.5％

黄原胶                                             0.10％

白土                                               2-3％

异戊醇                                             0.5％

丙三醇                                             2-3％

水                                                 37.90-39.90％

3.如权利要求1所述的植物抗病诱导剂的应用，其特征在于，它对黄瓜灰霉病、黄瓜霜霉病和番茄叶霉病有防治作用。

4.根据权利要求3所述的植物抗病诱导剂的应用，其特征在于，经500mg/L和1000mg/L含有酵母细胞提取物的植物抗病诱导剂浸泡黄瓜种子4小时，可对黄瓜灰霉病有防治作用。

5.根据权利要求3所述的植物抗病诱导剂的应用，其特征在于，经500mg/L的诱导剂喷施黄瓜霜霉病病株，对黄瓜霜霉病有防治作用。

6.根据权利要求3所述的植物抗病诱导剂的应用，其特征在于，经500mg/L的诱导剂喷施番茄叶霉病病株，对番茄叶霉病有防治作用。