CN111518707A - 一种复合菌粉、其复合微生物菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种复合菌粉、其复合微生物菌剂及其制备方法和应用，该复合菌粉由哈茨木霉菌的孢子粉与玫烟色棒束孢菌的孢子粉复配组成。本发明将玫烟色棒束孢及哈茨木霉联合使用，可有效防治蚜虫、菜青虫、粉虱、番茄叶霉病、辣椒疫病和黄瓜枯萎病等病虫害，具有效果稳定、安全高效等优点。该农用复合微生物菌剂能有效降低农药的使用量，减少农药残留，延缓害虫抗药性，具有替代部分化学农药的潜能。

Description

一种复合菌粉、其复合微生物菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及农药技术领域，具体涉及一种复合菌粉、包含该菌粉的复合微生物菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
由于人为活动及种植模式的改变，病虫害发生越来越频繁。病虫害可以降低农作物的产量和品质，破坏林木，带来巨大的经济损失。发明人发现目前对农业病虫害的防治依然以化学药剂为主，但是重复、大量使用化学农药造成了农药残留、环境污染及昆虫抗药性等问题。而利用微生物或其代谢产物来防治农业病虫害具有选择性强，对农作物和自然环境安全，不伤害天敌，不易产生抗性等优点，已逐渐引起人们的重视。
玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)曾被称为玫烟色拟青霉(Paecilomycesfumosoroseus)，是一种较为常见的昆虫病原真菌。该菌地理分布广泛，昆虫寄主多样，能寄生同翅目、鳞翅目、双翅目、鞘翅目、膜翅目等8个目40多种昆虫。在适宜条件下，玫烟色棒束孢孢子萌发生长，可引起害虫流行病。
木霉(Trichodernxa)能拮抗多种病原菌，广泛存在于自然界中，是目前应用最为广泛的生防真菌之一。木霉具有生长速度快、易于分离、寄生广谱性和对环境影响小等特点。哈茨木霉(Trichoderma harzianum)是一种常见的木霉菌，研究表明该菌对灰葡萄孢、尖镰孢及辣椒疫霉等多种病原菌具有较好的抑制作用，能够防治多种蔬菜病害。
但是，发明人发现，利用单一的生防菌株防治病虫害具有效果不稳定，防治谱较窄等缺点，以及目前为了改善这种缺点，现有技术多采用微生物与化学药剂或者与中药进行组合的方式防治病虫害，但改善效果有限，并且化学药剂的使用仍然会带来农药残留、环境污染及昆虫抗药性等问题。
发明内容
因此，本发明的目的是在于针对现有技术的不足，提供一种复合菌粉、包含该菌粉的复合微生物菌剂及其制备方法和应用，本发明将玫烟色棒束孢菌及哈茨木霉菌联合使用，可有效防治蚜虫、菜青虫、粉虱、番茄叶霉病、辣椒疫病或黄瓜枯萎病等病虫害，尤其能够同时防止病害和虫害，特别是对于烟粉虱虫害和植物枯萎病(尤其黄瓜枯萎病)具有效果稳定、安全高效等优点；并且制备工艺简单、配比合理，能有效降低农药的使用量，减少农药残留，延缓害虫抗药性，具有替代化学农药的潜能。
具体地，本发明的技术方案如下所述：
在本发明的第一方面，本发明提供了一种复合菌粉，其由哈茨木霉菌的孢子粉与玫烟色棒束孢菌的孢子粉复配组成。该复合菌粉能够有效防治植物病害和虫害。
在本发明的实施方式中，所述哈茨木霉菌为哈茨木霉(Trichoderma harzianum)NBLZ-0001，该菌株于2020年3月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.19602。
所述玫烟色棒束孢菌为玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)NBLZ-0008，该菌株于2020年3月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.19603。
在一些实施方式中，所述玫烟色棒束孢菌的孢子粉与哈茨木霉菌的孢子粉的重量比为(2-8):(1-5)。
在进一步的实施方式中，所述玫烟色棒束孢菌的孢子粉与哈茨木霉菌的孢子粉的重量比为(3-4):(2.5-3)，尤其当该比例为3.2-4:3，优选为3.5-4:3，特别是4：3两株菌能够产生特别好的协同作用，比如在一些实施方式中，哈茨木霉菌能够显著促进玫烟色棒束孢菌的防治虫害的作用；再比如又一些实施方式中，烟色棒束孢菌能够显著促进哈茨木霉菌防治植物病害的作用；两株菌以特定比例复配能够同时实现对虫害和植物病害的防治作用，尤其对于烟粉虱虫害和植物枯萎病(尤其黄瓜枯萎病)具有效果稳定、安全高效等优点。
所述的玫烟色棒束孢与哈茨木霉中菌种含量均为100-120亿个孢子/ml。
在本发明的第二方面，本发明提供了一种复合微生物菌剂，其包含上述第一方面中所述的复合菌粉，或者还包括至少一种辅料和载体，所述辅料比如可以为润湿剂、分散剂、紫外保护剂等等。
在本发明的一些实施方式中，所述复合微生物菌剂包含或由以下质量百分比的成分组成：20-40％复合菌粉，1-10％润湿剂，3-10％分散剂，0.2-0.8％紫外保护剂，其余为载体；如无特殊说明，本发明所述复合菌粉均如上述第一方面中所定义。
在一些实施方式中，所述复合微生物菌剂包含或由以下质量百分比的成分组成：25-35％复合菌粉，3-8％润湿剂，3-6％分散剂，0.3-0.5％紫外保护剂，其余为载体。
在又一些实施方式中，所述复合微生物菌剂包含或由以下质量百分比的成分组成：25-30％复合菌粉，5-8％润湿剂，5-6％分散剂，0.3-0.5％紫外保护剂，其余为载体。
进一步地，在本发明的实施方式中，所述复合微生物菌剂由以下质量百分比的成分组成：30％复合菌粉，5％润湿剂，5％分散剂，0.3％紫外保护剂，其余为载体。
本发明所述润湿剂选自十二烷基硫酸钠、NP-10、木质素磺酸钙的一种或多种；所述分散剂选自羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯醇；所述紫外保护剂为Fe2O3和/或抗坏血酸；所述载体选自硅藻土、滑石粉、凹凸棒土的一种或多种。
在本发明的一些实施方式中，所述润湿剂可以为：NP-10；或者NP-10和十二烷基硫酸钠的组合，其中，NP-10和十二烷基硫酸钠的质量比为(3-5):(2-3)，比如可以为3:2或5:3；或者NP-10和木质素磺酸钙的组合，其中，NP-10和木质素磺酸钙的质量比为2:1。
本发明所述复合制剂的成分组成及用量会影响复合微生物菌剂产品的性能指标，包括孢子萌发率、润湿性、质量悬浮率、孢子的悬浮率、水分含量等等，会影响复合微生物菌剂性能的发挥。
在本发明的实施方式中，选用本发明的润湿剂、分散剂、紫外保护剂和载体，并以其特定比例的搭配，能够保证本发明所述的复合微生物菌剂产品性能指标优良，各菌株孢子萌发率≥85％；润湿性<1min；质量悬浮率不低于71％；孢子的悬浮率不低于82.7％，水分含量为适宜；细度(过200目标准筛)≥98％；pH值为5.7-6.4之间。所配制的可湿性粉剂的性能指标符合农药制剂商品要求。
在本发明的第三方面，本发明提供了一种制备上述第一方面中所述的复合菌粉的方法，其包括分别制备哈茨木霉菌的孢子粉和玫烟色棒束孢菌的孢子粉后，将两种菌的孢子粉按比例混合即得。
在本发明的一些实施方式中，本发明所述孢子粉的制备方法包括：将菌种分别经斜面培养、液体培养以及固体培养后，将固体培养基分装后灭菌冷却，再次接入液体培养时得到的液体菌种，继续培养后风干发酵产物，粉粹，过筛，即得孢子粉。
在一些具体地实施方式中，所述玫烟色棒束孢菌分生孢子的制备方法包括以下步骤：
步骤1、斜面菌种培养，将原菌种接种于PDA斜面中，接种后的斜面培养基放入28℃恒温箱内培养14d，得到第一批斜面菌种。
步骤2、二级液体培养，每1000ml液体培养基中包含：0.5g MgS04·7H20，0.5g KCl，1.0g KH2P04，0.1g FeS04·7H20，40-45g蔗糖、5g蛋白胨，和蒸馏水。将灭菌完成的液体培养基装入容量为3000ml的三角瓶内，每瓶装入700-800ml液体培养基，在无菌条件下每瓶接种一支步骤1制得的斜面菌种，接种后的液体培养基置于摇床上震荡培养24-48h，温度控制在25℃-28℃，转速为150-180rad/min，得到二级液体菌种。
步骤3、三级固体培养，每100g固体培养基中包含：50g玉米粉、50g麸皮，含水量为40％-45％，混合均匀制得三级固体培养基，后将培养基分装于浅盘，每个浅盘中装料厚度为0.2-0.4cm，用锡纸封口。灭菌40-50min后冷却接种，按20％的接种量加入步骤2得到的二级液体菌。将浅盘置于28℃下培养，在培养到3d时，将锡纸去除后继续培养，继续培养5d，于无菌室中，风干浅盘发酵产物，后将发酵产物放入低温粉碎仪中粉碎，过200目筛，收获玫烟色棒束孢菌的孢子粉。
在一些具体地实施方式中，所述哈茨木霉菌孢子粉的制备方法包括以下步骤：
步骤1、斜面菌种培养，将原菌种接种于PDA斜面中，接种后的斜面培养基放入28℃恒温箱内培养14d，得到第一批斜面菌种。
步骤2、二级液体培养，每1000ml液体培养基中包含：30g麦麸，30g玉米粉，10g葡萄糖，1g KH2P04和蒸馏水。将灭菌完成的液体培养基装入容量为3000ml的三角瓶内，每瓶装入700-800ml液体培养基，在无菌条件下每瓶接种一支步骤1制得的斜面菌种，接种后的液体培养基置于摇床上震荡培养48h，温度控制在30℃，转速为150-180rad/min，得到二级液体菌种。
步骤3、三级固体培养，每100g固体培养基中包含：70g玉米粉、30g麸皮，含水量为60％-65％，混合均匀制得三级固体培养基，后将培养基分装于浅盘，每个浅盘中装料厚度为0.2-0.4cm，用锡纸封口。灭菌40-50min后冷却接种，按20％的接种量加入步骤2得到的二级液体菌。将浅盘置于30℃下培养，在培养到3d时，将锡纸的去除后继续培养，继续培养5d，倒入无菌室中风干浅盘发酵产物，后将发酵产物放入低温粉碎仪中粉碎，过200目筛，收获哈茨木霉菌孢子粉。
在本发明的第四方面，本发明还提供了一种制备上述第二方面所述的复合微生物菌剂的方法，其包括将润湿剂、分散剂、紫外保护剂粉粹后混合加入载体中，搅拌均匀后加入上述第一方面中所述的复合菌粉，混合均匀，即得复合微生物菌剂。
具体地，在一些实施方式中，所述复合微生物菌剂的制备方法包括：准确称取玫烟色棒束孢菌孢子粉与哈茨木霉菌孢子粉按比例混合得到复合孢子粉；将各种助剂包括润湿剂、分散剂、紫外保护剂加入到低温气流粉碎机中，控制气流粉碎的温度在10℃以下，粉碎后备用；优选按照200目细度粉碎；按照比例将粉碎得到的各种助剂的混合物加入到载体中，搅拌均匀，然后加入称量好的复合孢子粉，混合均匀后即得混配的复合微生物菌剂。
在本发明的第五方面，本发明还提供了上述第一方面所述的复合菌粉或上述第二方面中所述的复合微生物菌剂在制备用于防治虫害的制剂中的应用；优选地，所述虫害包括蚜虫、菜青虫和/或粉虱所致的虫害，优选为粉虱所致的虫害。
在本发明的第五方面，本发明还提供了上述第一方面所述的复合菌粉或上述第二方面中所述的复合微生物菌剂在制备用于防治植物病害的制剂中的应用；优选地，所述植物病害包括番茄叶霉病、辣椒疫病和/或黄瓜枯萎病，优选为黄瓜枯萎病。
在本发明的实施方式中，本发明所述复合微生物菌剂为可湿性粉剂，可通过加水稀释的方式喷洒到作物表面，形成药膜，达到防治虫害病害的目的。
本发明具有以下有益效果：
将用于防治多种害虫的玫烟色棒束孢和防治土传病害的哈茨木霉菌搭配使用，用来防治蚜虫、菜青虫、烟粉虱、番茄叶霉病、辣椒疫病和黄瓜枯萎病等病虫害。不同生防菌的搭配使用，可以有效地提高防治效果，减少化学类农药的用药量，缓解害虫抗药性问题，延长药剂使用寿命，适应“绿色农业”的发展要求，对实现可持续发展战略具有重要的意义。本发明人经研究后，发现玫烟色棒束孢和哈茨木霉两种菌株具有很好的相容性，二者进行复配获得微生物复合微生物菌剂，能够起到杀虫防病的功效，效果也比菌株单用更好、更稳定，该农用复合微生物菌剂能有效降低农药的使用量，减少农药残留，延缓害虫抗药性，具有替代化学农药的潜能。
另外，本发明农用复合微生物菌剂生产工艺简单，原料易获取，适宜于进行规模化工业生产，具有良好的应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。本发明所使用的试剂或原料均可通过常规途径购买获得，如无特殊说明，本发明所使用的试剂或原料均按照本领域常规方式使用或者按照产品说明书使用或配制。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
本发明实施例所用的淡紫拟青霉、玫烟色棒束孢与哈茨木霉中菌种含量均为100-120亿个孢子/mL。
本发明的测定方法如下：含孢量测定按GB/T 25864-2010；润湿时间按GB/T 5451-2001测定；悬浮率按GB/T 14825-2006测定；水分按UB/T1600-2001，共沸法测定；细度测定按GB/T 16150-1995；pH按GB/T1601-1993测定。
实施例1孢子粉的制备如下：
所述的玫烟色棒束孢孢子粉的制备方法包括以下步骤:
步骤1：斜面菌种培养，将原菌种接种于PDA斜面中，接种后的斜面培养基放入28℃恒温箱内培养14d，得到第一批斜面菌种。
步骤2：二级液体培养，每1000ml液体培养基中包含：0.5g MgS04·7H2O，0.5g KCl，1.0g KH2P04，0.1g FeS04·7H2O，40-45g蔗糖、5g蛋白胨，和蒸馏水。将灭菌完成的液体培养基装入容量为3000ml的三角瓶内，每瓶装入700-800ml液体培养基，在无菌条件下每瓶接种一支步骤1制得的斜面菌种，接种后的液体培养基置于摇床上震荡培养24-48h，温度控制在25℃-28℃，转速为150-180rad/min，得到二级液体菌种。
步骤3：三级固体培养，每100g培养基中包含：50g玉米粉、50g麸皮，含水量为40％-45％，混合均匀制得三级固体培养基，后将培养基分装于浅盘，每个浅盘中装料厚度为0.2-0.4cm，用锡纸封口。灭菌40-50min后冷却接种，按20％的接种量加入步骤2得到的二级液体菌。将浅盘置于28℃下培养，在培养到3d时,将锡纸的去除后继续培养，继续培养5d，于无菌室中，风干浅盘发酵产物，后将发酵产物放入低温粉碎仪中粉碎，过200目筛，收获玫烟色棒束孢孢子粉。
哈茨木霉孢子粉的制备方法包括以下步骤：
步骤1、斜面菌种培养，将原菌种接种于PDA斜面中，接种后的斜面培养基放入28℃恒温箱内培养14d，得到第一批斜面菌种。
步骤2、二级液体培养，每1000ml液体培养基中包含：30g麦麸，30g玉米粉，10g葡萄糖，1g KH2P04和蒸馏水。将灭菌完成的液体培养基装入容量为3000ml的三角瓶内，每瓶装入700-800ml液体培养基，在无菌条件下每瓶接种一支步骤1制得的斜面菌种，接种后的液体培养基置于摇床上震荡培养48h，温度控制在30℃，转速为150-180rad/min，得到二级液体菌种。
步骤3、三级固体培养，每100g固体培养基中包含：70g玉米粉、30g麸皮，含水量为60％-65％，混合均匀制得三级固体培养基，后将培养基分装于浅盘，每个浅盘中装料厚度为0.2-0.4cm，用锡纸封口。灭菌40-50min后冷却接种，按20％的接种量加入步骤2得到的二级液体菌。将浅盘置于30℃下培养，在培养到3d时,将锡纸的去除后继续培养，继续培养5d，于无菌室中，风干浅盘发酵产物，后将发酵产物放入低温粉碎仪中粉碎，过200目筛，收获哈茨木霉孢子粉。
实施例2复合微生物菌剂的制备
1、孢子粉的制备同实施例1。
2、准确称取实施例1制备的玫烟色棒束孢孢子粉与哈茨木霉孢子粉，并按照重量份比为4：3的比例混合得到复合孢子粉。
3、将各种助剂加入到低温气流粉碎机中，控制气流粉碎的温度在10℃以下，粉碎后备用；优选按照200目细度粉碎。
4、按照比例将3粉碎得到的各种助剂混合物加入到载体中，搅拌均匀，然后加入2称量好的复合孢子粉，混合均匀后即得混配的农用复合微生物菌剂。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂包括以下重量百分比的组成成分：30％复合菌粉，3％NP-10，2％十二烷基硫酸钠，5％羧甲基纤维素钠，0.3％抗坏血酸，59.7％硅藻土。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂的性能指标测定：
检测结果表明，产品性能指标优良，各菌株孢子萌发率≥85％；润湿性<1min；质量悬浮率为73.7％；孢子的悬浮率为86.3％，水分含量为2.78％；细度(过200目标准筛)≥98％；pH值为6.1。所配制的可湿性粉剂的性能指标符合农药制剂商品要求。
实施例3玫烟色棒束孢菌剂的制备
1、玫烟色棒束孢孢子粉的制备同实施例1。
2、准确称取实施例1制备的玫烟色棒束孢孢子粉。
3、将各种助剂加入到低温气流粉碎机中，控制气流粉碎的温度在10℃以下，粉碎后备用；优选按照200目细度粉碎。
4、按照比例将3粉碎得到的各种助剂混合物加入到载体中，搅拌均匀，然后加入2称量好的孢子粉，混合均匀后即得混配的农用菌剂。
本实施例所制备的农用玫烟色棒束孢菌剂包括以下重量百分比的组成成分：30％玫烟色棒束孢孢子粉，3％NP-10，2％十二烷基硫酸钠，5％羧甲基纤维素钠，0.3％抗环血酸，59.7％硅藻土。
本实施例所制备的农用菌剂的性能指标测定：
检测结果表明，产品性能指标优良，菌株孢子萌发率≥85％；润湿性<1min；质量悬浮率为71.4％；孢子的悬浮率为83.1％，水分含量为2.83％；细度(过200目标准筛)≥98％；pH值为6.2。所配制的可湿性粉剂的性能指标符合农药制剂商品要求。
实施例4哈茨木霉菌剂的制备
1、哈茨木霉孢子粉的制备同实施例1。
2、准确称取实施例1制备的哈茨木霉孢子粉。
3、将各种助剂加入到低温气流粉碎机中，控制气流粉碎的温度在10℃以下，粉碎后备用；优选按照200目细度粉碎。
4、按照比例将3粉碎得到的各种助剂混合物加入到载体中，搅拌均匀，然后加入2称量好的孢子粉，混合均匀后即得混配的农用菌剂。
本实施例所制备的农用哈茨木霉菌剂包括以下重量百分比的组成成分：30％哈茨木霉孢子粉，3％NP-10，2％十二烷基硫酸钠，5％羧甲基纤维素钠，0.3％抗环血酸，59.7％硅藻土。
本实施例所制备的农用菌剂的性能指标测定：
检测结果表明，产品性能指标优良，菌株孢子萌发率≥85％；润湿性<1min；质量悬浮率为76.5％；孢子的悬浮率为84.6％，水分含量为2.66％；细度(过200目标准筛)≥98％；pH值为5.7。所配制的可湿性粉剂的性能指标符合农药制剂商品要求。
实施例5复合微生物菌剂的制备
1、孢子粉的制备同实施例1。
2、准确称取实施例1制备的玫烟色棒束孢孢子粉与哈茨木霉孢子粉，并按照重量份比为1：1的比例混合得到复合孢子粉。
3、将各种助剂加入到低温气流粉碎机中，控制气流粉碎的温度在10℃以下，粉碎后备用；优选按照200目细度粉碎。
4、按照比例将3粉碎得到的各种助剂混合物加入到载体中，搅拌均匀，然后加入2称量好的复合孢子粉，混合均匀后即得混配的农用复合微生物菌剂。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂包括以下重量百分比的组成成分：30％复合菌粉，3％NP-10，2％十二烷基硫酸钠，5％羧甲基纤维素钠，0.3％抗环血酸，59.7％硅藻土。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂的性能指标测定：
检测结果表明，产品性能指标优良，各菌株孢子萌发率≥85％；润湿性<1min；质量悬浮率为71.8％；孢子的悬浮率为85.1％，水分含量为2.82％；细度(过200目标准筛)≥98％；pH值为6.2。所配制的可湿性粉剂的性能指标符合农药制剂商品要求。
实施例6复合微生物菌剂的制备
1、孢子粉的制备同实施例1。
2、准确称取实施例1制备的玫烟色棒束孢孢子粉与哈茨木霉孢子粉，并按照重量份比为2：1的比例混合得到复合孢子粉。
3、将各种助剂加入到低温气流粉碎机中，控制气流粉碎的温度在10℃以下，粉碎后备用；优选按照200目细度粉碎。
4、按照比例将3粉碎得到的各种助剂混合物加入到载体中，搅拌均匀，然后加入2称量好的复合孢子粉，混合均匀后即得混配的农用复合微生物菌剂。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂包括以下重量百分比的组成成分：30％复合菌粉，3％NP-10，2％十二烷基硫酸钠，5％羧甲基纤维素钠，0.3％抗环血酸，59.7％硅藻土。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂的性能指标测定：
检测结果表明，产品性能指标优良，各菌株孢子萌发率≥85％；润湿性<1min；质量悬浮率为74.6％；孢子的悬浮率为87.1％，水分含量为3.04％；细度(过200目标准筛)≥98％；pH值为6.0。所配制的可湿性粉剂的性能指标符合农药制剂商品要求。
实施例7复合微生物菌剂的制备
1、孢子粉的制备同实施例1。
2、准确称取实施例1制备的玫烟色棒束孢孢子粉与哈茨木霉孢子粉，并按照重量份比为1：2的比例混合得到复合孢子粉。
3、将各种助剂加入到低温气流粉碎机中，控制气流粉碎的温度在10℃以下，粉碎后备用；优选按照200目细度粉碎。
4、按照比例将3粉碎得到的各种助剂混合物加入到载体中，搅拌均匀，然后加入2称量好的复合孢子粉，混合均匀后即得混配的农用复合微生物菌剂。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂包括以下重量百分比的组成成分：30％复合菌粉，3％NP-10，2％十二烷基硫酸钠，5％羧甲基纤维素钠，0.3％抗环血酸，59.7％硅藻土。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂的性能指标测定：
检测结果表明，产品性能指标优良，各菌株孢子萌发率≥85％；润湿性<1min；质量悬浮率为72.5％；孢子的悬浮率为85.4％，水分含量为2.90％；细度(过200目标准筛)≥98％；pH值为5.9。所配制的可湿性粉剂的性能指标符合农药制剂商品要求。
实施例8复合微生物菌剂的制备
1、孢子粉的制备同实施例1。
2、准确称取实施例1制备的玫烟色棒束孢孢子粉与哈茨木霉孢子粉，并按照重量份比为3.5：3的比例混合得到复合孢子粉。
3、将各种助剂加入到低温气流粉碎机中，控制气流粉碎的温度在10℃以下，粉碎后备用；优选按照200目细度粉碎。
4、按照比例将3粉碎得到的各种助剂混合物加入到载体中，搅拌均匀，然后加入2称量好的复合孢子粉，混合均匀后即得混配的农用复合微生物菌剂。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂包括以下重量百分比的组成成分：30％复合菌粉，3％NP-10，2％十二烷基硫酸钠，5％羧甲基纤维素钠，0.3％抗坏血酸，59.7％硅藻土。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂的性能指标测定：
检测结果表明，产品性能指标优良，各菌株孢子萌发率≥85％；润湿性<1min；质量悬浮率为73.2％；孢子的悬浮率为85.9％，水分含量为2.82％；细度(过200目标准筛)≥98％；pH值为6.0。所配制的可湿性粉剂的性能指标符合农药制剂商品要求。
实施例9复合微生物菌剂的制备
1、孢子粉的制备同实施例1。
2、准确称取实施例1制备的玫烟色棒束孢孢子粉与哈茨木霉孢子粉，并按照重量份比为4：3的比例混合得到复合孢子粉。
3、将各种助剂加入到低温气流粉碎机中，控制气流粉碎的温度在10℃以下，粉碎后备用；优选按照200目细度粉碎。
4、按照比例将3粉碎得到的各种助剂混合物加入到载体中，搅拌均匀，然后加入2称量好的复合孢子粉，混合均匀后即得混配的农用复合微生物菌剂。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂包括以下重量百分比的组成成分：25％复合菌粉，3％NP-10，2％十二烷基硫酸钠，5％羧甲基纤维素钠，0.3％抗坏血酸，59.7％硅藻土。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂的性能指标测定：
检测结果表明，产品性能指标优良，各菌株孢子萌发率≥85％；润湿性<1min；质量悬浮率为72.0％；孢子的悬浮率为85.6％，水分含量为2.79％；细度(过200目标准筛)≥98％；pH值为6.0。所配制的可湿性粉剂的性能指标符合农药制剂商品要求。
实施例10复合微生物菌剂的制备
1、孢子粉的制备同实施例1。
2、准确称取实施例1制备的玫烟色棒束孢孢子粉与哈茨木霉孢子粉，并按照重量份比为4：3的比例混合得到复合孢子粉。
3、将各种助剂加入到低温气流粉碎机中，控制气流粉碎的温度在10℃以下，粉碎后备用；优选按照200目细度粉碎。
4、按照比例将3粉碎得到的各种助剂混合物加入到载体中，搅拌均匀，然后加入2称量好的复合孢子粉，混合均匀后即得混配的农用复合微生物菌剂。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂包括以下重量百分比的组成成分：30％复合菌粉，3％NP-10，2％十二烷基硫酸钠，6％羧甲基纤维素钠，0.3％抗坏血酸，59.7％硅藻土。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂的性能指标测定：
检测结果表明，产品性能指标优良，各菌株孢子萌发率≥85％；润湿性<1min；质量悬浮率为72.2％；孢子的悬浮率为86.1％，水分含量为2.76％；细度(过200目标准筛)≥98％；pH值为6.0。所配制的可湿性粉剂的性能指标符合农药制剂商品要求。
实施例11复合微生物菌剂的制备
1、孢子粉的制备同实施例1。
2、准确称取实施例1制备的玫烟色棒束孢孢子粉与哈茨木霉孢子粉，并按照重量份比为4：3的比例混合得到复合孢子粉。
3、将各种助剂加入到低温气流粉碎机中，控制气流粉碎的温度在10℃以下，粉碎后备用；优选按照200目细度粉碎。
4、按照比例将3粉碎得到的各种助剂混合物加入到载体中，搅拌均匀，然后加入2称量好的复合孢子粉，混合均匀后即得混配的农用复合微生物菌剂。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂包括以下重量百分比的组成成分：30％复合菌粉，5％NP-10，3％十二烷基硫酸钠，5％羧甲基纤维素钠，0.3％抗坏血酸，59.7％硅藻土。
本实施例所制备的农用复合微生物菌剂的性能指标测定：
检测结果表明，产品性能指标优良，各菌株孢子萌发率≥85％；润湿性<1min；质量悬浮率为73.6％；孢子的悬浮率为86.4％，水分含量为2.81％；细度(过200目标准筛)≥98％；pH值为6.0。所配制的可湿性粉剂的性能指标符合农药制剂商品要求。
实施例12菌剂的药效评价
1、菌剂防治烟粉虱的大田实验
(1)试验方法
本实施例实验于山东泰安房村温室大棚进行，防治烟粉虱，所选黄瓜种植区烟粉虱危害较重。本次实验采用实施例2-11中配制的菌剂，用清水稀释后，设12个处理：处理1至10分别为实施例2、3、4、5、6、7、8、9、10、11中配制的菌剂的500倍液、处理11为10％吡虫.噻嗪酮可湿性粉剂500倍液及处理12为清水对照(CK)；每处理4次重复，共20个小区(每小区面积20m2)，随机区组排列。药液用手动背负式喷雾器进行一次性常规喷雾。喷雾时，以喷湿叶片正背面为止。
施药前每小区5点取样，每点随机标记2株，共10株，每株调查黄瓜上5片叶片正反面烟粉虱的活虫数，药后第1，3，5，7d分别调查各处理烟粉虱活虫数，计算校正防效，计算公式如下：
防治效果(％)＝(处理区虫口减退率-对照区虫口减退率)/(100-对照区虫口减退率)×100％
(2)实验结果：如表1所示。
表1菌剂对烟粉虱的防治效果
Figure BDA0002484291990000151
如表1所示，使用复合微生物菌剂(处理1)后第1d、3d和7d对烟粉虱的防效分别为32.12％、56.29％和80.09％，均优于玫烟色棒束孢单用、哈茨木霉单用及一定浓度噻嗪酮的杀虫效果，噻嗪酮为防治烟粉虱效果较好的药剂，说明该复合微生物菌剂可以有效替代化学农药，尤其随着时间的延长尤其在处理5d之后，处理1所用复合微生物菌剂的优势更为明显相较于噻嗪酮防治效果显著更好。
此外，在上述实验的基础上继续调查处理后第15d、20d后的效果，结果发现处理后第15d，处理1、7、8、9、10的防治效果仍有进一步提升，尤其处理1的防治效果依然在80％以上，其他处理的防治效果无进一步提升；且在处理后第20d，处理1、7、8、9、10仍然维持较好的防治效果，而其他处理出现不同程度的下降。在第一次施药第20d后进行第2次施药(处理1-12与第1次施药处理方式相同)，第2次施药后第3d，处理11的防治效果无明显改善，而处理1-10的防治效果得到了进一步的提升，尤其处理1、7、8、9、10、特别是处理1提升效果最为显著，且处理1、7、8、9、10依然在二次施药后的很长时间内具有较好的防治效果。在第二次施药20d后进行第3次施药(处理1-12与第1次施药处理方式相同)，第3次施药后第3d，处理11的防治效果反而降低，而处理1-10依然具有良好的防治效果，尤其处理1、7、8、9、10的防治效果依然能够维持第1次施药的防治效果，特别是处理1，防治效果显著。
2、菌剂防治黄瓜枯萎病的大田实验
(1)试验方法
本实施例实验于山东泰安省庄，防治黄瓜枯萎病，所选黄瓜种植区枯萎病发病较重。本次实验采用实施例2-7中配制的菌剂，用清水稀释后，设12个处理：处理1至10分别为实施例2、3、4、5、6、7、8、9、10、11中配制的菌剂的600倍液、处理11为36％抗萎灵可湿性粉剂的600倍液及处理12为清水对照(CK)。每处理4次重复，每处理约20株黄瓜。药液用手动背负式喷雾器均匀喷施于黄瓜叶面，每隔3d喷雾一次，连续喷雾3次。施药后15d，调查病情指数，及防治效果。
黄瓜枯萎病病株分级标准为：0级，植株无病或者几乎没病；1级，植株萎蔫部分占整个植株的25％以下；2级，植株萎蔫部分占整个植株的26％～50％；3级，植株萎蔫部分占整个植株的51％～75％；4级，植株萎蔫部分占整个植株的75％以上。
病情指数＝[∑(各级病株数×相应级别)/(调查总株数×5)]×100；
防治效果(％)＝[(对照区病情指数-处理区病情指数)/对照区病情指数]×100。
(2)实验结果：如表2所示
表2菌剂对黄瓜枯萎病的防治效果
Figure BDA0002484291990000171
如表2所示，复合微生物菌剂(处理1)对黄瓜枯萎病的防效为78.3％均好于玫烟色棒束孢单用、哈茨木霉单用及一定浓度的抗萎灵的效果。实验证明，复合微生物菌剂对黄瓜枯萎病具有非常好的防治效果。
由表1、表2可以看出，复合微生物菌剂不仅对烟粉虱具有良好的防治效果，还能够同时有效防治黄瓜枯萎病。而且该菌剂防治病虫害的效果好于其他处理，说明并不是菌粉的量越多防治效果就越好，只有将菌粉合理配比，才能够达到既降低生产成本又能高效防治病虫害的效果，该复合微生物菌剂具备替代化学药剂的潜能。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种复合菌粉，其由哈茨木霉菌的孢子粉与玫烟色棒束孢菌的孢子粉复配组成，其中，哈茨木霉菌的孢子粉与玫烟色棒束孢菌的孢子粉的重量比为(3-4)：(2.5-3)。
2.根据权利要求1所述的复合菌，其特征在于，所述哈茨木霉菌为哈茨木霉(Trichoderma harzianum)NBLZ-0001，该菌株于2020年3月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.19602；
优选地，所述玫烟色棒束孢菌为玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)NBLZ-0008，该菌株于2020年3月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.19603；
优选地，所述玫烟色棒束孢菌的孢子粉与哈茨木霉菌的孢子粉的重量比3.2-4:3，优选为3.5-4:3。
3.一种复合微生物菌剂，其包含权利要求1或2中所述的复合菌粉；
优选地，所述复合微生物菌剂包含或由以下质量百分比的成分组成：20-40％复合菌粉，1-10％润湿剂，3-10％分散剂，0.2-0.8％紫外保护剂，其余为载体；其中，所述复合菌粉如权利要求1或2中所述。
4.根据权利要求3所述的复合微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌剂包含或由以下质量百分比的成分组成：25-35％复合菌粉，3-8％润湿剂，3-6％分散剂，0.3-0.5％紫外保护剂，其余为载体；
优选地，所述复合微生物菌剂包含或由以下质量百分比的成分组成：25-30％复合菌粉，5-8％润湿剂，5-6％分散剂，0.3-0.5％紫外保护剂，其余为载体；
优选地，所述复合微生物菌剂由以下质量百分比的成分组成：30％复合菌粉，5％润湿剂，5％分散剂，0.3％紫外保护剂，其余为载体。
5.根据权利要求3或4所述的复合微生物菌剂，其特征在于，所述润湿剂选自十二烷基硫酸钠、NP-10、木质素磺酸钙的一种或多种；
优选地，所述分散剂选自羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯醇；
优选地，所述紫外保护剂为Fe2O3和/或抗坏血酸；
优选地，所述载体选自硅藻土、滑石粉、凹凸棒土的一种或多种。
6.一种制备权利要求1或2所述的复合菌粉的方法，其包括分别制备哈茨木霉菌的孢子粉和玫烟色棒束孢菌的孢子粉后，将两种菌的孢子粉按比例混合即得。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述孢子粉的制备方法包括：将菌种分别经斜面培养、液体培养以及固体培养后，将固体培养基分装后灭菌冷却，再次接入液体培养时得到的液体菌种，继续培养后风干发酵产物，粉粹，过筛，即得孢子粉。
8.一种制备权利要求3至5中任一项所述的复合微生物菌剂的方法，其包括将润湿剂、分散剂、紫外保护剂分别粉粹后混合加入载体中，搅拌均匀后加入权利要求1或2中所述的复合菌粉，混合均匀，即得复合微生物菌剂。
9.权利要求1或2中所述的复合菌粉或权利要求3或5中所述的复合微生物菌剂在制备用于防治虫害的制剂中的应用；
优选地，所述虫害包括蚜虫、菜青虫和/或粉虱所致的虫害。
10.权利要求1或2中所述的复合菌粉或权利要求3或5中所述的复合微生物菌剂在制备用于防治植物病害的制剂中的应用；
优选地，所述植物病害包括番茄叶霉病、辣椒疫病和/或黄瓜枯萎病。
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