CN117004508B - 一种芽孢杆菌复合菌剂及其在柑橘病害防控中的应用 - Google Patents

一种芽孢杆菌复合菌剂及其在柑橘病害防控中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN117004508B
CN117004508B CN202310577099.0A CN202310577099A CN117004508B CN 117004508 B CN117004508 B CN 117004508B CN 202310577099 A CN202310577099 A CN 202310577099A CN 117004508 B CN117004508 B CN 117004508B
Authority
CN
China
Prior art keywords
citrus
bacillus
composite microbial
control
hbtg859
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202310577099.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN117004508A (zh
Inventor
陈重光
屈海波
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hubei Tongguang Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Hubei Tongguang Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hubei Tongguang Biotechnology Co ltd filed Critical Hubei Tongguang Biotechnology Co ltd
Priority to CN202310577099.0A priority Critical patent/CN117004508B/zh
Publication of CN117004508A publication Critical patent/CN117004508A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN117004508B publication Critical patent/CN117004508B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22Bacillus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01PBIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P1/00Disinfectants; Antimicrobial compounds or mixtures thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01PBIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P3/00Fungicides
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01PBIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P5/00Nematocides
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07Bacillus
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07Bacillus
    • C12R2001/125Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明属于农业微生物领域,公开了一种芽孢杆菌复合菌剂及其在柑橘病害防控中的应用,所述的复合菌剂包括胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)HBTG859和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HBTG1702,所述的芽孢杆菌为胶质芽孢杆菌保藏编号为:CCTCC NO:M20221745,所述的枯草芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO:M 2023220。与单一菌株相比,该复合菌株对柑橘青霉病、柑橘溃疡病、柑橘黄龙病和柑橘根结线虫等病害具有增效作用,在柑橘病害防控具有一定的应用前景。

Description

一种芽孢杆菌复合菌剂及其在柑橘病害防控中的应用
技术领域
本发明属于微生物农药领域,具体涉及一种芽孢杆菌复合菌剂及其在柑橘病害防控中的应用。
背景技术
植物根际微生物被认为是植物的第二基因组,在宿主的营养吸收和协助植物应对各类生物和非生物胁迫等方面起到关键作用,应用植物根际促生菌提高作物产量和品质,是现代绿色农业发展的重要趋势之一。目前,限制生物肥料产业发展的主要瓶颈是田间应用效果的不稳定性,肥料中的功能微生物施入土壤后面临土著微生物的排斥和竞争,微生物肥料生物功能的稳定发挥难以保障。科学研究表明,提高功能微生物的物种多样性即施用复合微生物菌剂可以增强微生物肥料各类生物功能的发挥和稳定性。能够有效提高农作物品质和产量以及抗病能力,从而达到减肥减药的效果,有助于实现农业集约化生产和可持续发展。
柑橘(Citrus)属芸香科植物,是柑、橙、柚、橘、枳、金柑等的总称。由于主要栽培地区品种、气候条件、栽培管理习惯及生产水平不同采后青霉病、溃疡病和线虫病等发生严重。生产上柑橘病害的防控主要以化学杀菌剂为主,然而,化学农药的频繁使用造成了病害的抗药性,环境污染和农药残留,严重危害食品和环境安全。微生物菌剂不易产生抗药性,无农药残留和环境污染,对土壤微生物群落结构具有调控作用,抑制病害发生。基于上述特点,微生物菌剂已经广泛用于作物病害的防控。
目前,关于胶质芽孢杆菌在农业的应用报道,以促生增产为主。抑菌和防控病害的报道较少。王雯报道了胶质芽孢杆菌CX-7对棉花黄萎病菌、棉花枯萎病菌、棉花立枯病菌、小麦根腐病菌、小麦赤霉病菌和小孢拟盘多毛孢菌具有良好的抑菌活性。胡亮亮等报道胶质芽孢杆菌PS04对水稻纹枯病具有良好的抑菌活性。李文鹏等报道胶质芽孢杆菌D4B1和XDB1对烟草灰霉病具有良好的抑菌活性。
柑橘种植主要位于南方酸性土壤,芽孢杆菌作为一种微生物,酸性土壤不利于其生存和繁殖,所以,用于柑橘病害防控的芽孢杆菌还需对酸具有一定的耐受性。因此筛选出对柑橘病害具有良好防控效果,且对酸性具有一定的耐受性的芽孢杆菌具有重要意义。张晓波等报道胶质芽孢杆菌hn1、hn2,hn3、hn4和hn5在PH5条件下均不能生长,但具有一定的耐盐性,在2%NaCl条件下均能生长,但在10℃低温下均无法生长。
本发明提供的胶质芽孢杆菌HBTG859是从柑橘根际土壤分离的一株对柑橘病害具有良好防治效果的芽孢杆菌,其在防治防治柑橘青霉病、溃疡病和根结线虫具有良好的效果,在柑橘根部具有良好的定殖能力,并具有一定的耐酸性,具备广泛的应用前景。
枯草芽孢杆菌HGTB1702和胶质芽孢杆菌均从柑橘根际分离获得,该复合芽孢杆菌首次被报道应用在柑橘青霉病、柑橘溃疡病、柑橘黄龙病和柑橘根结线虫等病害,复合菌剂与现有杀菌剂无交互抗药性。由于其来自于自然环境,具有高效、低毒、不污染环境和不易产生抗药性等优点,具有广阔的应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种芽孢杆菌复合菌剂,所述芽孢杆菌复合菌剂包含胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)HBTG859和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis HBTG1702,保藏编号分别为CCTCC NO:M20221745和CCTCC NO:M 2023220。
本发明的另一个目的在于提供了上述复合芽孢杆菌在柑橘病害的防治中的应用。
为了达到上述目的,本发明采取以下技术方案来实现:
胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)HBTG859的获得:
申请人自柑橘线虫重病田块的健康柑橘植株根际土壤中分离一株芽孢杆菌菌株,经鉴定为胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus),已于2022年11月09日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏,分类命名:Bacillus mucilaginosus HBTG859;保藏编号为CCTCCNO:M20221745;地点:中国,武汉,武汉大学。
胶质芽孢杆菌HBTG859在LA培养基菌落生长良好,菌落透明果冻状(图1)。
枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis HBTG 1702的获得:
申请人自柑橘线虫重病田块的健康柑橘植株根际土壤中分离一株芽孢杆菌菌株,经全基因组测序结合生理生化鉴定后属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(图2,表2,3),已于2023年3月1日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏,分类命名:Bacillussubtilis HBTG 1702;保藏编号为CCTCC NO:M2023220;地址:中国,武汉,武汉大学。
一种芽孢杆菌复合菌剂,包括:胶质芽孢杆菌Bacillus mucilaginosus HBTG859和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis HBTG 1702,所述的胶质芽孢杆菌的保藏编号为CCTCCNO:M20221745,所述的枯草芽孢杆菌的保藏编号为:CCTCC NO:M 2023220。
以上所述的复合菌剂,优选的,所述的胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的有效菌浓度的比值为100:1。
本发明的保护范围还包括:
上述复合菌剂或上述复合菌剂的发酵液在柑橘病害防治中的应用;
上述复合菌剂或上述复合菌剂的发酵液在制备防治柑橘病害微生物制剂中的应用;以上所述的柑橘病害,包括:柑橘青霉病、柑橘溃疡病和/或柑橘黄龙病。
上述复合菌剂或上述复合菌剂的发酵液在防治柑橘线虫病中的应用;
上述复合菌剂或上述复合菌剂的发酵液在制备防治柑橘线虫病微生物制剂中的应用。以上所述的复合菌剂,优选的,所述的剂型为含有胶质芽孢杆菌Bacillusmucilaginosus HBTG859和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis HBTG 1702的粉剂或液体制剂。
与现有技术相比,本发明具有以下优点:
(1)本发明提供了一种复合微生物菌剂,该菌剂首次被报道可用于柑橘青霉病、柑橘溃疡病、柑橘黄龙病和柑橘根结线虫的防治,与现有杀菌无交互抗药性。
(2)与目前使用化学合成农药防治相比,由于其来自于自然环境,具有高效、低毒、不污染环境和不易产生抗药性等优点。
(3)本发明获得的复合芽孢杆菌与单一菌株相比,具有增效作用,特别适用于柑橘病害防控中使用。
附图说明
图1为胶质芽孢杆菌HBTG859菌株菌落形态。
图2为枯草芽孢杆菌HBTG1702菌株菌落形态。
图3为胶质芽孢杆菌HBTG859抑菌活性示意图。
图4为枯草芽孢杆菌HBTG1702抑菌活性示意图。
图5为胶质芽孢杆菌HBTG859防控柑橘青霉病示意图。
图6为枯草芽孢杆菌HBTG1702防控柑橘青霉病示意图。
具体实施方式
为了更好地解释本发明,以下结合具体实施例进一步阐明本发明的主要内容,但本发明的内容不仅仅局限于以下实施例。本发明所述技术方案,如未特别说明,均为本领域的常规技术,所述试剂或材料,如未特别说明,均来源于商业渠道。
实施例1:
胶质芽孢杆菌HBTG859的获得:
申请人自柑橘线虫重病田块的健康柑橘植株根际土壤中分离一株芽孢杆菌菌株,经全基因组测序结合生理生化鉴定后属于胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)(图1,表1),已于2022年11月09日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏,分类命名:胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)HBTG859;保藏编号为CCTCC NO:M20221745;地址:中国,武汉,武汉大学。
在本发明中,胶质芽孢杆菌称为HBTG859。
形态特征:乳白色、脓状、粘稠、菌落圆形。
菌株生理生化特性:如表1
表1:菌株HBTG859生理生化特征
实施例2:
枯草芽孢杆菌HBTG1702的获得:
申请人自柑橘线虫重病田块的健康柑橘植株根际土壤中分离一株芽孢杆菌菌株,经全基因组测序结合生理生化鉴定后属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(图2,表2,3),已于2023年3月1日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏,分类命名:Bacillussubtilis HBTG 1702;保藏编号为CCTCC NO:M2023220;地址:中国,武汉,武汉大学。
在本发明中,枯草芽孢杆菌称为HBTG 1702。
形态特征:乳白色,圆形。
菌株生理生化特性:如表2
表2HBTG1702生理生化特性–酶活、碳源氧化
+:阳性反应;-:阴性反应;
表3菌株2号菌生理生化特性–利用碳源产酸
+:阳性反应;-:阴性反应;w:弱阳性反应
实施例3:
胶质芽孢杆菌HBTG859的发酵(以下培养基配方中的百分数均为质量分数):
种子液制备:从斜面中活化HBTG859菌株,单菌落接种于NB液体培养基中,装液量为1L/3L,30℃,200r/min摇床震荡培养18h后备用。
20000L罐发酵:培养基为甘露糖2%,玉米浆1%,MgSO4·7H2O,0.15%,CaCO30.1%,装样量10000L,起始PH 7.5,培养温度36℃,接入5L种子液,通气量200m3/h,发酵时间36h,测得发酵液中的芽孢数为5.0×108cfu/ml。
实施例4:
枯草芽孢杆菌HBTG1702的发酵(以下培养基配方中的百分数均为质量分数):
种子液制备:甘油管菌株单菌分离,500ml三角瓶中装有150ml一级种子培养基,在35℃,2200rpm摇床振荡培养12h;:甘露糖0.8%,酵母膏0.4%%,玉米粉2%,氯化钠1.0%,培养基pH为7;
菌剂发酵:500L发酵罐中装有1L种子培液,发酵液的装罐量是250L,在37℃培养26h;控制罐压0.06Mpa,搅拌转速200rpm,通气比1:1,所用培养基的原料及用量为:甘露糖01%,酵母膏1.5%,蛋白胨1.2%,磷酸二氢钾0.002%,氯化钠0.02%,培养基pH 7;发酵时间36h,放罐,获得的发酵液中有效菌浓度为100亿cfu/mL。
实施例5:
胶质芽孢杆菌HBTG859的对柑橘青霉病原菌的抑菌活性及对柑橘青霉病的防控效果:
将包括柑橘青霉病原菌(Penicillium italicum)在内的草莓灰霉病(Botrytiscinerea)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、辣椒疫病(Phytophthora capici)、水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)和茄子黄萎病菌(Verticillium dahliae)从斜面活化至PDA平板备用。采用对峙培养法进行离体抑菌试验,将灭菌滤纸片置于PDA平板两端,随后滴入实施例3制备HBTG859发酵液10μL。24h后用4mm打孔器接入上述病原菌菌碟,以接无菌水作为空白对照,病原菌和滤纸片距离为25mm。5d后观察生防菌和柑橘青霉病原菌之间抑菌带,确定抑菌活性。其他病原菌待对照长满平板后统计各处理和对照菌落直径,并计算抑菌率。
抑菌率=[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-菌饼直径)]×100%
将柑橘青霉病原菌(Penicillium italicum)在28℃培养10d产孢后用无菌水调至1×106孢子/毫升备用,取新鲜柑橘,用解剖刀于果实腰部刺3mm×3mm伤口,在伤口处滴加20μL稀释20倍的HBTG859发酵液,对照为清水处理,自然风干后滴入20μL孢子悬浮液。每个处理3次重复,每个重复15个果实。25℃保湿培养,接种7d后统计对照和处理病斑直径,并计算防效。
防效=(对照病斑直径-处理病斑直径/对照病斑直径)×100;
离体抑菌试验表明,HBTG859菌株对柑橘青霉病菌等具有良好的抑菌活性(图3),生防菌和病原菌之间有明显的抑菌带。
另外,HBTG859菌株对草莓灰霉病(Botrytis cinerea)、西瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum)和和茄子黄萎病菌(Verticillium dahliae)具有良好的抑菌活性,对辣椒疫病(Phytophthora capici)和水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)抑菌活性较差(表4)。
HBTG859发酵液对柑橘青霉病具有良好的防效,防控效果80.21%(图5)。
表4HBTG859菌株离体抑菌活性
实施例6:
枯草芽孢杆菌HBTG1702的对柑橘青霉病原菌的抑菌活性及对柑橘青霉病的防控效果:
将包括柑橘青霉病原菌(Penicillium italicum)在内的草莓灰霉病(Botrytiscinerea)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、辣椒疫病(Phytophthora capici)、水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)和茄子黄萎病菌(Verticillium dahliae)从斜面活化至PDA平板备用。采用对峙培养法进行离体抑菌试验,将灭菌滤纸片置于PDA平板两端,随后滴入实施例4制备HBTG1702发酵液10μL。24h后用4mm打孔器接入上述病原菌菌碟,以接无菌水作为空白对照,病原菌和滤纸片距离为25mm。5d后观察生防菌和柑橘青霉病原菌之间抑菌带,确定抑菌活性。其他病原菌待对照长满平板后统计各处理和对照菌落直径,并计算抑菌率。
抑菌率=[(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-菌饼直径)]×100%
将柑橘青霉病原菌(Penicillium italicum)在28℃培养10d产孢后用无菌水调至1×106孢子/毫升备用,取新鲜柑橘,用解剖刀于果实腰部刺3mm×3mm伤口,在伤口处滴加20μL稀释20倍的HBTG1702发酵液,对照为清水处理,自然风干后滴入20μL孢子悬浮液。每个处理3次重复,每个重复15个果实。25℃保湿培养,接种7d后统计对照和处理病斑直径,并计算防效。
防效=(对照病斑直径-处理病斑直径/对照病斑直径)×100;
离体抑菌试验表明,HBTG1702菌株对柑橘青霉病菌等具有良好的抑菌活性,有效抑制了青霉菌的生长(图4)。
另外,HBTG859菌株对草莓灰霉病(Botrytis cinerea)、西瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、茄子黄萎病菌(Verticillium dahliae)、辣椒疫病(Phytophthora capici)和水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)均均有良好的抑菌活性,对灰葡萄孢抑菌效果达到90%以上(表5)。HBTG1702发酵液对柑橘青霉病具有良好的防效,防控效果82.73%(图6)。
表5HBTG1702菌株离体抑菌活性
实施例7:
复合菌剂防控柑橘根结线虫效果:
离体试验:取南方根结线虫卵块用2%次氯酸钠表面消毒后用无菌水孵育出二龄线虫备用.用96孔板进行毒力测定,每孔吸取试验用二龄南方根结线虫30头;加入实施例3和实施例4制备的HBTG859和HGTB1702发酵液,芽孢数调至1×108cfu/mL,并用清水作为空白对照,以50亿cfu/g胶质芽孢杆菌(北海强兴生物科技有限公司)产品菌株作为菌株对照,进行单菌分离后进行发酵,芽孢数调至1×108cfu/mL;20℃温育,分别于24h、48h和72h在倒置显微镜下观察线虫存活情况;线虫死活判断以针触之不动判定为死亡.死亡率按以下公式统计:
线虫死亡率=(线虫死亡数/供试线虫数)×100%;
线虫校正死亡率=[(处理线虫死亡率-对照死亡率)/1-对照死亡率]×100%;
离体试验结果表明,72h后,HBTG859和HBTG1702对根结线虫离体校正死亡率分别为84.33%和79.55%,具有明显的抗虫作用,而北海强兴生物科技有限公司胶质芽孢杆菌处理后线虫死亡率为0。
田间试验位于江西省赣州市信丰县,供试柑橘品种为沙糖桔,树龄5年。
处理1:按照实施例2制备的HBTG859发酵液200倍灌根,每株灌根15L,间隔15d再灌根一次。
处理2:按照实施例7制备的HBTG1702发酵液稀释到5.0×108cfu/ml,200倍灌根,每株灌根15L,间隔15d再灌根一次。
处理3:上述发酵液(均为5.0×108cfu/ml)以1:1混合,200倍灌根,每株灌根15L,间隔15d再灌根一次。
处理4:清水对照
每个处理3次重复,每个重复5棵树。3个月统计各处理根结指数并计算防效。
按照病害分级标准统计病害发生情况:0级,无根结;1级,根结占全根系1%~10%;2级,根结占全根系11%~25%;3级,根结占全根系26%~50%;4级,根结占全根系51%~75%;5级,根结占全根系69%~90%,6级:根结占全根系91%~100%。
根结指数=∑(各级植株数×级别)/(调查总株数×最高代表级别)×100。
防治效果=(对照根结指数-处理根结指数)/对照根结指数×100%
试验结果表明,HBTG859、HGTB1702和复合菌剂对柑橘根结线虫均具有一定的防控效果,复合菌剂防效好于单一菌剂,防效达到67.77%(表6)。
表6HBTG859菌剂对柑橘根结线虫田间防效
处理 根结指数 防效(%)
HBTG859 19.78 60.08
HBTG 1702 20.34 58.95
复合菌剂 15.97 67.77
对照 49.55 -
实施例8:
复合菌剂防控柑橘溃疡病
田间试验位于江西省赣州市信丰县,供试柑橘品种为沙糖桔,树龄5年,
处理1:按照实施例3制备的HBTG859发酵液200倍喷雾,间隔15d再施用一次。
处理2:按照实施例4制备的HBTG1702发酵液稀释到5.0×108cfu/ml,200倍喷雾,间隔15d再施用一次。
处理3:上述发酵液(均为5.0×108cfu/ml)以1:1混合,200倍喷雾,间隔15d再喷雾一次。
处理4:清水对照
叶面和果实喷雾(喷施至页面滴水),间隔7d喷雾第2次,共施药3次,喷施清水作为对照。田间小区按随机区组排列,每个处理小区面积为2株,重复3次。每小区调查2株树,每株按东、西、南、北、中五点取样,每点随机调查2个夏梢,记载夏梢上的各级叶片数。
叶(果)分级方法如下:0级:无病;1级:每叶(果)有1-5个病斑;3级:每叶(果)有6-10个病斑;5级:每叶(果)有11-15个病斑;7级:每叶(果)有16-20个病斑;9级:每叶(果)有21个病斑及以上。
病情指数(%)=∑(各级病叶(果)数×级别)/(调查总叶(果)数×最高代表级别)×100。
防治效果=(对照病情指数-处理病情指数)/对照根结指数×100%
试验结果表明,喷施菌剂柑橘溃疡病情指数明显降低,HBTG859防效62.38%,HBTG1702防效为66.01%,复合菌剂防效为73.57%,效果高于单一菌剂(表7)。
表7HBTG859菌剂防控柑橘溃疡病
处理 病情指数 防效(%)
HBTG859 15.13 62.38
HBTG1702 13.67 66.01
复合菌剂 10.63 73.57
清水对照 40.22 -
实施例9:
HBTG859菌株和HBTG1702在柑橘根系的定殖能力:
将HBTG859和HBTG1702在含不同梯度浓度利福平LA平板进行抗性突变体筛选,获得抗性突变菌株,以实施例7中的胶质芽孢杆菌(北海强兴生物科技有限公司)产品菌株作为对照菌株,并制备抗性突变体,分别按照实施例3和实施例4发酵。将2个胶质芽孢杆菌菌株和枯草芽孢杆菌发酵液浓度均调整至1亿cfu/mL对柑橘苗根部进行灌根,10L/棵,14d后挖出柑橘根,用无菌水反复冲洗根部3次,将根部剪下并称取1g,研磨并稀释后,涂布于含300μg·mL-1的利福平的LB平板,37℃培养24h后计数,测定HBTG859、HBTG1702和对照胶质芽孢杆菌在柑橘根系的定殖能力。
试验结果表明,HBTG859和HG1702在柑橘根系定殖量为9.8×106cfu/g和5.3×106cfu/g,而对照胶质芽孢杆菌柑橘根系定殖量为0,HBTG859和HBTG1702在柑橘这种定殖能力有助于柑橘线虫病的防控。
实施例10:
HBTG859菌株的耐酸性、耐盐碱性和耐低温测定
按照实施例3对HBTG859菌株,并将发酵液浓度调整至1亿cfu/mL,以胶质芽孢杆菌(北海强兴生物科技有限公司)产品菌株作为菌株对照,按照相同发酵方法发酵并将发酵液浓度调整至1亿cfu/mL备用。
上述2种发酵液作为种子液,接入PH为4的LB培养基的三角瓶中,培养基体积为100mL,接种量为100μL,试验设置3次重复。30℃,200r/min摇床震荡培养18h后测定菌落数。
上述2种发酵液作为种子液,接入含NaCl为0.1%、0.25%、0.5%和1%的LB培养基的三角瓶中,培养基体积为100mL,接种量为100μL,试验设置3次重复。30℃,200r/min摇床震荡培养18h后测定菌落数。
用实施例3发酵液在LB平板划线,以胶质芽孢杆菌(北海强兴生物科技有限公司)产品菌株作为菌株对照,然后分别分别置于0℃、2℃、4℃、6℃、8℃和10℃,以30℃作为对照,48h后观察是否生长。
试验结果表明,在酸性培养基条件下,HBTG859培养后芽孢数为3.4×107cfu/mL,而对照胶质芽孢杆菌芽孢数为7.7×105cfu/mL,HBTG859这种耐酸性更有利于其在柑橘种植的酸性土壤中定殖和繁殖。在0.5% NaCl存在条件下,2个菌株的生长受到了抑制(表8),停止生长,对盐较为敏感。
HBTG具有良好的耐低温性,在4℃低温生长,而对照菌株则无法生长(表9),这种耐低温性有助于在气温较低环境下在土壤中繁殖,更好发挥其性能。
表8HBTG859菌株耐盐性
/>
表9HBTG859菌株耐低温性
/>

Claims (7)

1. 一种芽孢杆菌复合菌剂,包括:胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)HBTG859和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HBTG 1702,所述的胶质芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO: M20221745,所述的枯草芽孢杆菌的保藏编号为:CCTCC NO: M 2023220。
2.根据权利要求1所述的复合菌剂,其特征在于:所述的胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的有效菌浓度的比值为100:1。
3.权利要求1所述的复合菌剂或复合菌剂的发酵液在柑橘病害防治中的应用,所述的柑橘病害为柑橘青霉病和/或柑橘溃疡病。
4.权利要求1所述的复合菌剂或复合菌剂的发酵液在制备防治柑橘病害微生物制剂中的应用,所述的柑橘病害为柑橘青霉病和/或柑橘溃疡病。
5.权利要求1所述的复合菌剂或上述复合菌剂的发酵液在防治柑橘根结线虫病中的应用。
6.权利要求1所述的复合菌剂或上述复合菌剂的发酵液在制备防治柑橘根结线虫病微生物制剂中的应用。
7.根据权利要求1所述的复合菌剂,所述的复合菌剂的剂型为粉剂或液体制剂。
CN202310577099.0A 2023-05-22 2023-05-22 一种芽孢杆菌复合菌剂及其在柑橘病害防控中的应用 Active CN117004508B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310577099.0A CN117004508B (zh) 2023-05-22 2023-05-22 一种芽孢杆菌复合菌剂及其在柑橘病害防控中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310577099.0A CN117004508B (zh) 2023-05-22 2023-05-22 一种芽孢杆菌复合菌剂及其在柑橘病害防控中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN117004508A CN117004508A (zh) 2023-11-07
CN117004508B true CN117004508B (zh) 2024-02-09

Family

ID=88566275

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310577099.0A Active CN117004508B (zh) 2023-05-22 2023-05-22 一种芽孢杆菌复合菌剂及其在柑橘病害防控中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117004508B (zh)

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013110594A1 (en) * 2012-01-25 2013-08-01 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent
CA2898583A1 (en) * 2013-03-20 2014-09-25 Basf Corporation Synergistic compositions comprising a bacillus subtilis strain and a biopesticide
CN107667737A (zh) * 2017-09-27 2018-02-09 唐志敏 一种无农药立体综合防控果蔬病虫害的方法
CA3099285A1 (en) * 2018-05-08 2019-11-14 Locus Agriculture Ip Company, Llc Microbe-based products for enhancing plant root and immune health
CN110483111A (zh) * 2019-09-12 2019-11-22 广西垂青生物科技有限公司 一种防治土传病害的生物有机肥及制备方法及应用
CN111499470A (zh) * 2020-04-13 2020-08-07 江苏小瓢虫生物科技有限公司 一种快速促进柑橘生根的纯植物源生物有机肥
CN113151065A (zh) * 2021-03-30 2021-07-23 山东蔚蓝生物科技有限公司 一种用于防治线虫病害的枯草芽孢杆菌及其应用
CN113755381A (zh) * 2021-09-26 2021-12-07 青岛力力惠生物科技股份有限公司 一种防治植物病害的地衣芽孢杆菌及其应用
CN113980877A (zh) * 2021-12-28 2022-01-28 慕恩(广州)生物科技有限公司 一种复配微生物菌剂及其制备方法
CN116162577A (zh) * 2023-03-22 2023-05-26 湖北同光生物科技有限公司 一株胶质芽孢杆菌及其应用

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013110594A1 (en) * 2012-01-25 2013-08-01 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent
EP2806739A1 (en) * 2012-01-25 2014-12-03 Bayer Intellectual Property GmbH Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent
CA2898583A1 (en) * 2013-03-20 2014-09-25 Basf Corporation Synergistic compositions comprising a bacillus subtilis strain and a biopesticide
CN107667737A (zh) * 2017-09-27 2018-02-09 唐志敏 一种无农药立体综合防控果蔬病虫害的方法
CA3099285A1 (en) * 2018-05-08 2019-11-14 Locus Agriculture Ip Company, Llc Microbe-based products for enhancing plant root and immune health
CN110483111A (zh) * 2019-09-12 2019-11-22 广西垂青生物科技有限公司 一种防治土传病害的生物有机肥及制备方法及应用
CN111499470A (zh) * 2020-04-13 2020-08-07 江苏小瓢虫生物科技有限公司 一种快速促进柑橘生根的纯植物源生物有机肥
CN113151065A (zh) * 2021-03-30 2021-07-23 山东蔚蓝生物科技有限公司 一种用于防治线虫病害的枯草芽孢杆菌及其应用
CN113755381A (zh) * 2021-09-26 2021-12-07 青岛力力惠生物科技股份有限公司 一种防治植物病害的地衣芽孢杆菌及其应用
CN113980877A (zh) * 2021-12-28 2022-01-28 慕恩(广州)生物科技有限公司 一种复配微生物菌剂及其制备方法
CN116162577A (zh) * 2023-03-22 2023-05-26 湖北同光生物科技有限公司 一株胶质芽孢杆菌及其应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Epiphytic Yeasts and Bacteria as Candidate Biocontrol Agents of Green and Blue Molds of Citrus Fruits;Rania Hammami等;J Fungi (Basel);第8卷(第8期);全文 *
Inhibition of postharvest fungal pathogens by Bacillus subtilis strains isolated from citrus fruit;Arras, G.;Advances in Horticultural Science;第7卷(第3期);123-127 *
微生物菌剂对露地生姜增产和根结线虫病防控的影响;宋银行等;安徽农学通报;第29卷(第06期);103-105、118 *
沃柑溃疡病病原菌分离鉴定及防治药剂筛选;赵洪涛等;南方农业学报;第50卷(第12期);2703-2712 *
芽胞杆菌生物防治作用机理与应用研究进展;马佳等;中国生物防治学报;第34卷(第4期);639-648 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN117004508A (zh) 2023-11-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103045515B (zh) 一种甲基营养型芽孢杆菌的生物菌剂及其制备方法和应用
CN107254427A (zh) 一种贝莱斯芽孢杆菌菌株jn5及其应用
CN109182199B (zh) 一株具有植物促生作用的油菜假单胞菌
CN111647518B (zh) 一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂及制备方法
CN112725218B (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌及其培养方法和应用
CN108277177B (zh) 细黄链霉菌固体发酵培养基、制备方法及其发酵方法、发酵产物、生防产品和应用
CN105132312A (zh) 一种枯草芽孢杆菌和应用、含有该枯草芽孢杆菌的微生物杀菌剂及其制备方法
CN114437982B (zh) 一种提高土壤肥效的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN106676049A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN112358997A (zh) 具有生防烟草赤星病的菌株及其发酵方法、烟草赤星病防治复配剂
CN116162577B (zh) 一株胶质芽孢杆菌及其应用
CN106967635A (zh) 一种防治苹果树真菌性病害的生防菌剂的制备方法
CN113667620A (zh) 枯草芽孢杆菌Bs1218m及其应用
CN116218720B (zh) 一株绿针假单胞菌pck02及其获取方法与应用
CN114350552B (zh) 一株深褐芽孢杆菌及在枸杞病害防控中的应用
CN114456973B (zh) 一株烟草内生娄彻链霉菌及在烟草病害防控中的应用
CN102925394A (zh) 一种防病促生长植物内生枯草芽孢杆菌
CN114149935B (zh) 一种产酶溶杆菌及其应用
CN114085797B (zh) 一种芽孢杆菌复合菌剂及其在水稻上的应用
CN117004508B (zh) 一种芽孢杆菌复合菌剂及其在柑橘病害防控中的应用
CN107058183B (zh) 一种甲基营养型芽孢杆菌及其生防菌剂和应用
CN105733984B (zh) 枯草芽孢杆菌及其在防治玉米小斑病方面的应用
CN111471627B (zh) 一株粘质沙雷氏菌bsz及应用
CN114634878A (zh) 一种复合微生物制剂及其在防治根结线虫中的应用
CN116042461B (zh) 一株娄彻链霉菌及在枸杞病害防控中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant