CN116463256B - 复合微生物菌剂及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及农作物防病治病技术领域，具体公开了一种复合微生物菌剂及其制备方法与应用。所述复合微生物菌剂的活性成分包括卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉，其中，卡氏芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M 20221660，昆明假单胞菌的保藏编号为MCCC 1A16728，高地芽孢杆菌的保藏编号为CCTCCAB2015082，棘孢木霉的保藏编号为ACCC 32594。本发明提供的复配微生物菌剂对茄科作物和菊科作物，尤其是番茄、辣椒、烟草、油菜和油麦菜等作物的根结线虫病具有较好的防治效果，而且还能够促进作物生长，提高作物产量，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及农作物防病治病技术领域，具体涉及一种复合微生物菌剂及其制备方法与应用。
背景技术
随着农业产业结构调整和种植制度变革，蔬菜种植业发展迅猛，但随之而来的病害问题也日益突出，严重影响产业的持续健康发展。特别是由南方根结线虫引起的茄科、菊科作物根结线虫病等，这些病害在大棚中一旦发生，蔬菜将面临大面积绝收，给农户们造成无法挽回的损失。因此，研发有效的蔬菜根结线虫病防治措施对于我国和世界的蔬菜安全生产都有着重要意义。
现代农业种植体系中，由于过度依赖化肥和化学农药，以及采用单一作物连作的生产模式，长期高量施肥和不平衡施肥造成土壤污染和其他养分元素的不均衡，部分元素富营养化，土壤酸化加剧，致使土壤理化性质恶化，微生物群落结构失衡，最终土壤质量退化，植株抵抗力下降，从而导致根结线虫病爆发。然而，现有技术中，对于根结线虫病的防治方法比较单一，主要依赖于大面积使用化学药剂，虽然化学药剂能够高效的杀死根结线虫，但是过量使用会危害农作物、污染环境。生物防治成为未来的作物病害防治主要手段，已有研究表明，某些微生物在抑制土壤根结线虫中起到关键作用，但是单一微生物的防效有限，而且容易受到土壤中土著微生物和环境的影响，难以有效发挥防治效果。如何进一步提高微生物制剂的作物病害防效，开发新型的绿色、经济并且能够持续有效防控根结线虫的产品，实现蔬菜种植产业可持续发展成为本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的问题，提供一种复合微生物菌剂及其制备方法与应用，旨在提供具有较高防治效率，且绿色、安全、可持续发展的防治植物根结线虫病的产品和方法。
为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种复合微生物菌剂，所述复合微生物菌剂的活性成分包括卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉，其中，卡氏芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M 20221660，昆明假单胞菌的保藏编号为MCCC1A16728，高地芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC AB 2015082，棘孢木霉的保藏编号为ACCC 32594。
本发明第二方面提供制备第一方面所述的复合微生物制剂的方法，该方法包括：
(1)分别将卡氏芽孢杆菌CCTCC NO：M 20221660、昆明假单胞菌MCCC 1A16728、高地芽孢杆菌CCTCC AB 2015082和棘孢木霉ACCC 32594在培养基中进行培养，获得培养液；
(2)分别将获得的卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉的培养液进行包装，或者，将卡氏芽孢杆菌和昆明假单胞菌的培养液混合作为制剂A，将高地芽孢杆菌和棘孢木霉的培养液混合作为制剂B，并分别对制剂A和制剂B进行包装。
本发明第三方面提供第一方面所述的复合微生物菌剂在防治作物根结线虫病和/或促进作物生长中的应用。
本发明第四方面提供一种防治作物根结线虫病和/或促进作物生长的方法，该方法包括将第一方面所述的复合微生物菌剂施用于作物。
通过上述技术方案，本发明至少能够取得如下有益效果：
1)本发明采用多种微生物制成复合菌剂，相比现有技术中常使用的化学制剂更加绿色环保，且该复合菌剂对环境和人体无毒无害，提高了植物病害防控作业的安全性。
2)本发明提供的复合微生物菌剂利用卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉之间的协同配合，有效提高对作物根结线虫病的防治效果。尤其是对菊科和茄科作物根结线虫病的防治效果得到极大提高，最高接近80％。
3)本发明的复合微生物菌剂除能够防治根结线虫病外，还对作物的生长具有促进作用，可以减少肥料的使用，缓解了化肥过量施用带来的环境问题，促进农业产业的绿色健康发展。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
采用生防菌防治作物病害是近年来农业病害防治研究中的研究热点，其具有效果好、安全性高、绿色环保等优点。然而，发明人在研究中发现，单独使用一种生防菌时，对于作物的病害防治效果仍显不足，而且单一种类的微生物制剂很容易受到环境或作物植株的影响，功效难以得到充分发挥。为了提高采用微生物制剂防治作物病害的效果，发明人经过大量实验发现，若将多种微生物制成复合菌剂使用，利用微生物之间的协同作用，能够有效提高病害防治效果，而且更利于生防菌的定殖和防病能力的发挥。经过进一步研究，发明人还发现，对于作物根结线虫病的防治而言，在选择特定的几种微生物(例如卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌、棘孢木霉等)作为生防菌的情况下，若根据作物的生长阶段的不同，将其配制成不同组成的复合微生物制剂使用能够更好地发挥其防病效果。
基于上述发现，本发明第一方面提供一种复合微生物菌剂，所述复合微生物菌剂的活性成分包括卡氏芽孢杆菌(Bacillus cabrialesii)、昆明假单胞菌(Pseudomonaskunmingensis)、高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)和棘孢木霉(Trichodermaasperellum)，其中，卡氏芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M 20221660，昆明假单胞菌的保藏编号为MCCC 1A16728，高地芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC AB 2015082，棘孢木霉的保藏编号为ACCC 32594。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述复合微生物菌剂为液体制剂。
为了获得更好的根结线虫病防治效果，同时也为了使用方便，优选地，所述复合微生物菌剂中，可以将卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉分别独立包装；或者，也可以将所述复合微生物菌剂按照制剂A和制剂B的方式分别独立包装，其中，制剂A包括卡氏芽孢杆菌和昆明假单胞菌，制剂B包括高地芽孢杆菌和棘孢木霉。
本发明中，当将上述复合微生物菌剂中的卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉分别独立包装时，可以根据作物的生长阶段选择其中的一种或几种使用。当上述复合微生物菌剂按照上述制剂A和制剂B的方式进行包装，则可以根据作物的生长阶段不同直接选用制剂A和制剂B中的一种，或将其混合使用。本发明提供的复合微生物菌剂可以在使用前先将其中所包含的不同菌种混合，再施用获得的混合物于作物，也可以按照用量分别取用。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述复合微生物菌剂中，细菌以单位体积中的菌落数计，真菌以单位体积中的孢子数计，卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉的含量比为0.5×103-2×103∶1×103-2.5×103∶1.5×103-4.5×103∶1。优选为0.5×103-1.5×103∶1.2×103-2×103∶1.8×103-4×103∶1。
优选地，卡氏芽孢杆菌和昆明假单胞菌的含量比为1∶1-5。例如可以为1∶1、1∶1.5、1∶2、1∶2.5、1∶3、1∶3.5、1∶4、1∶4.5、1∶5，或者也可以为上述任意比例组成的比例范围之间的任意中间值。
优选地，高地芽孢杆菌和棘孢木霉的含量比为1×103-5×103∶1。优选为1.5×103-4×103∶1。例如可以为1.5×103∶1、1.8×103∶1、2×103∶1、2.2×103∶1、2.5×103∶1、2.8×103∶1、3×103∶1、3.2×103∶1、3.5×103∶1、3.8×103∶1、4×103∶1，或者也可以为上述任意比例组成的比例范围之间的任意中间值。
优选地，卡氏芽孢杆菌与高地芽孢杆菌的含量比为1∶1-5。优选为1∶2-4。例如可以为1∶2、1∶2.2、1∶2.5、1∶2.8、1∶3、1∶3.2、1∶3.5、1∶3.8、1∶4，或者也可以为上述任意比例组成的比例范围之间的任意中间值。
优选地，昆明假单胞菌与高地芽孢杆菌的含量比为1∶1-5。优选为1∶1-3。例如可以为1∶1、1∶1.2、1∶1.5、1∶1.8、1∶2、1∶2.2、1∶2.5、1∶2.8、1∶3，或者也可以为上述任意比例组成的比例范围之间的任意中间值。
根据本发明的一种特别优选的实施方式，其中，所述复合微生物菌剂中，细菌以单位体积中的菌落数计，真菌以单位体积中的孢子数计，卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉的含量比为0.65×103-1.2×103∶1.5×103-1.78×103∶2×103-3.5×103∶1。优选为0.7×103-1×103∶1.65×103-1.75×103∶2.2×103-2.8×103∶1。更优选为0.8×103-0.9×103∶1.7×103-1.75×103∶2.4×103-2.65×103∶1。
优选地，卡氏芽孢杆菌和昆明假单胞菌的含量比为1∶1.5-2.5。例如可以为1∶1.5、1∶1.6、1∶1.7、1∶1.8、1∶1.9、1∶2、1∶2.1、1∶2.2、1∶2.3、1∶2.4、1∶2.5，或者也可以为上述任意比例组成的比例范围之间的任意中间值。
优选地，高地芽孢杆菌和棘孢木霉的含量比为2×103-3.5×103∶1。优选为2.5×103-3.5×103∶1。例如可以为2.5×103∶1、2.7×103∶1、2.9×103∶1、3×103∶1、3.2×103∶1、3.4×103∶1、3.5×103∶1，或者也可以为上述任意比例组成的比例范围之间的任意中间值。
优选地，卡氏芽孢杆菌与高地芽孢杆菌的含量比为1∶2.5-3.1。例如可以为1∶2.5、1∶2.6、1∶2.7、1∶2.8、1∶2.9、1∶3、1∶3.1，或者也可以为上述任意比例组成的比例范围之间的任意中间值。
优选地，昆明假单胞菌与高地芽孢杆菌的含量比为1∶1.2-2.5。优选为1∶1.2-1.8。例如可以为1∶1.2、1∶1.3、1∶1.4、1∶1.5、1∶1.6、1∶1.7、1∶1.8，或者也可以为上述任意比例组成的比例范围之间的任意中间值。
本发明中，对于所述复合微生物菌剂中的各菌株用量的具体含量没有特别限制，只要其比例在前述比例范围内即可。为了提高施用效率，降低运输和包装成本，该复合微生物菌剂中可以采用较高的菌株含量，以减少每次的复合菌剂施用量。
根据本发明的优选实施方式，其中，以所述复合微生物菌剂的总体积计，所述复合微生物菌剂中，卡氏芽孢杆菌的含量不低于2×106CFU/mL。优选为1×107-1×108CFU/mL。更优选为1×107_5×107CFU/mL。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述复合微生物菌剂中，昆明假单胞菌的含量不低于2×106CFU/mL。优选为2×107-2×108CFU/mL。更优选为3×107-7×107CFU/mL。
根据本发明的优选实施方式，其中，以所述复合微生物菌剂的总体积计，所述复合微生物菌剂中，高地芽孢杆菌的含量不低于2×106CFU/mL。优选为3×107_5×108CFU/mL。更优选为4×107-1×108CFU/mL。
根据本发明的优选实施方式，其中，以所述复合微生物菌剂的总体积计，所述复合微生物菌剂中，棘孢木霉的含量不低于3×103个孢子/mL。优选为1×104-1×105个孢子/mL。更优选为1×104-5×104个孢子/mL。
为了满足运输和保存的需要，延长本发明提供的复合微生物菌剂的保质期，避免运输和保存过程中菌剂失活或活性下降量过大，根据本发明的优选实施方式，其中，所述复合微生物菌剂中还可以含有辅料。任意本领域中常用于(液体)菌剂中添加，能够实现上述目的的辅料均可适用于本发明。例如可以为保护剂、防腐剂、缓冲剂等。
本发明第二方面提供制备第一方面所述的复合微生物制剂的方法，该方法包括：
(1)分别将卡氏芽孢杆菌CCTCC NO：M 20221660、昆明假单胞菌MCCC 1A16728、高地芽孢杆菌CCTCC AB 2015082和棘孢木霉ACCC 32594在培养基中进行培养，获得培养液；
(2)分别将获得的卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉的培养液进行包装，或者，将卡氏芽孢杆菌和昆明假单胞菌的培养液混合作为制剂A，将高地芽孢杆菌和棘孢木霉的培养液混合作为制剂B，并分别对制剂A和制剂B进行包装。
本发明中，对于上述方法中用于培养菌株以获得培养液的培养基没有特别限制，任意适合本发明提供的复合微生物菌剂中包含的菌株培养的培养基均可适用于本发明。由于不同菌株对于培养基的需求不同，本发明优选步骤(1)中(根据各菌株自身的特点和需要)采用不同的培养基分别对各菌株进行培养，再按照步骤(2)中的方式对获得的培养液进行包装。使用时，可以按照用量比分别量取包装好的培养液后直接使用，也可以在量取后先混合再使用。
根据本发明的优选实施方式，其中，可以采用LB培养基(Luria-Bertani培养基)对卡氏芽孢杆菌和高地芽孢杆菌进行培养。可采用NA培养基(营养琼脂培养基)对昆明假单胞菌进行培养。可采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基对棘孢木霉进行培养。
根据本发明的优选实施方式，其中，步骤(1)中，获得的卡氏芽孢杆菌培养液中的菌落数不低于2×108CFU/mL。优选为3×108-5×108CFU/mL。更优选为3×108-4×108CFU/mL。
根据本发明的优选实施方式，其中，步骤(1)中，获得的昆明假单胞菌培养液中的菌落数不低于2×108CFU/mL。优选为3×108-5×108CFU/mL。更优选为3×108-4×108CFU/mL。
根据本发明的优选实施方式，其中，步骤(1)中，获得的高地芽孢杆菌培养液中的菌落数不低于2×108CFU/mL。优选为3×108-5×108CFU/mL。更优选为3×108-4×108CFU/mL。
根据本发明的优选实施方式，其中，步骤(1)中，获得的棘孢木霉培养液中的孢子数不低于3×104个/mL。优选为3×104-5×104个/mL。更优选为4×104-5×104个孢子/mL。
根据本发明的优选实施方式，其中，步骤(2)中，还包括在包装时调整卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉的培养液用量，或者制剂A和制剂B的用量的操作，以使得所述复合微生物菌剂中，卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉的含量比满足前述要求。步骤(2)中，按照各菌株在复合微生物菌剂中的含量比调整步骤(1)获得的各菌株培养液的用量并进行包装后，即可获得本发明提供的复合微生物菌剂，其中各菌株的含量比如前所述，在此不再赘述。
本发明提供的复合微生物菌剂对于作物根结线虫病具有良好的防治效果，并且能够有效促进作物生长(例如提高作物产量、生长速度等)。本发明第三方面提供第一方面所述的复合微生物菌剂在防治作物根结线虫病和/或促进作物生长中的应用。
本发明提供的复合微生物菌剂对于作物根结线虫病具有良好的防治效果，并且能够有效促进作物生长(例如提高作物产量、生长速度等)。经过进一步研究，发明人发现，该复合微生物菌剂对于菊科作物以及茄科作物具有更好的促生和防治根结线虫病的作用。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述作物选自茄科作物和/或菊科作物。任意本领域中常见的种植茄科和菊科作物均可使用本发明提供的复合微生物菌剂。
优选地，所述茄科作物包括番茄、烟草和辣椒中的至少一种。
优选地，所述菊科作物包括生菜和/或油麦菜。
本发明第四方面提供一种防治作物根结线虫病和/或促进作物生长的方法，该方法包括将第一方面所述的复合微生物菌剂施用于作物。
本发明的发明人经过大量研究发现，对于菊科和茄科作物而言，将本发明提供的复合微生物菌剂中的卡氏芽孢杆菌和昆明假单胞菌(即制剂A)以及高地芽孢杆菌和棘孢木霉(即制剂B)分别在不同的种植阶段施用于作物，可以获得更好的防病和/或促生效果。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述方法包括以下步骤：
1)作物育苗时，每4-6天施用所述制剂A，共施用1-3次。优选每次用量为20-50mL/株；
2)作物移栽时，每隔6-8天施用所述制剂B，共施用2-4次。优选每次用量为50-100mL/株。
优选地，步骤1)中，制剂A的施用量使得卡氏芽孢杆菌和昆明假单胞菌的总用量不低于4×108CFU/株/次。优选为1×109-1×1011CFU/株/次。更优选为5×109-5×1010CFU/株/次。
优选地，步骤2)中，制剂B的施用量使得高地芽孢杆菌和棘孢木霉的总用量(棘孢木霉的用量按照1个孢子＝1CFU计算)不低于2×108CFU/株/次。优选为3×108-5×1010CFU/株/次。更优选为3×109-3×1010CFU/株/次。
以下将通过具体实施例对本发明的内容进行说明。应当能够理解的是，以下实施例仅用于示例性地进一步解释和说明本发明的内容，而不用于限制本发明。
以下实施例中所用卡氏芽孢杆菌选自保藏号为CCTCC NO：M 20221660的菌株(获取方式可参考CN202211189532.5)，昆明假单胞菌选自保藏号为MCCC 1A16728的菌株(购自MCCC)，高地芽孢杆菌选自保藏号为CCTCC AB 2015082的菌株(购自CCTCC)，棘孢木霉选自保藏号为ACCC 32594的菌株(购自ACCC)。
实施例1
按照如下方式配制复合微生物菌剂：
(1)采用LB培养基培养卡氏芽孢杆菌，获得菌落数约为3.5×108CFU/mL的卡氏芽孢杆菌培养液；
采用NA培养基培养昆明假单胞菌，获得菌落数约为3.5×108CFU/mL的昆明假单胞菌培养液；
采用LB培养基培养高地芽孢杆菌，获得菌落数约为3.5×108CFU/mL的高地芽孢杆菌培养液；
采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基培养棘孢木霉，并用液体马铃薯葡萄糖培养基将培养后的棘孢木霉配制成孢子数约4.5×104个/mL的棘孢木霉培养液。
(2)将步骤(1)获得的卡氏芽孢杆菌培养液和昆明假单胞菌培养液按照表1中的体积比混合，配制成制剂A；
将步骤(1)获得的高地芽孢杆菌培养液和棘孢木霉培养液按照表1中的体积比混合，配制成制剂B。
表1复合微生物菌剂配方
测试例1
本测试例用于测试上述实施例中获得的复配微生物菌剂在番茄、烟草、辣椒、生菜和油麦菜种植中的应用效果。
试验材料&试验地点
供试番茄品种为“满田2185”，烟草品种为“云烟97”，辣椒品种为“湘椒一号”，生菜品种为“太湖695”，油麦菜品种为“四季香妃”。
试验设在云南省农业科学院农业环境资源研究所的科研大棚，根结线虫病发病严重，经鉴定为南方根结线虫引起的病害。
试验方法
于番茄、烟草、辣椒、生菜和油麦菜育苗时，每5天施用制剂A，共施用2次，每次用量为每株30mL；移栽时，每隔7天使用制剂B灌根，共施用3次，用量为每株80mL。移栽时划定小区面积5m2，每小区定植30株番茄、烟草、辣椒、生菜或油麦菜苗，试验设计为随机区组排列，重复3次。
收获期，调查每个小区中的作物根系发病情况，并在每小区取5个点，提取5-20cm土层样品，调查土壤中根结线虫二龄线虫的数量。同时对对照组(未施用复合微生物菌剂，也不施用其他任何防治根结线虫病害的制剂)和实验组(施用上述实施例中获得的复合微生物菌剂)的作物产量进行检测，具体包括：测量番茄和辣椒果实的单果鲜质量，烟草、生菜和油麦菜叶片的单叶鲜质量；收获时，每个小区单独收获测产，并计算各小区的单株产量。
病害严重度分级标准：
0级，根系上无根结；
1级，轻度感染，仅有少量的小根结，根结率在25％以下；
3级，根结较多，根结率为25％～50％；
5级，在根瘤上有再次根结，50％～75％根系有根结；
7级，根结相互连接成根结团块，75％以上根系有根结。
计算方法：
病情指数(％)＝∑(各级病株数×相对级数值)/(调查总株数×7)×100；
防治效果(％)＝(空白对照区病情指数-处理区病情指数)/(空白对照区病情指数)×100；
线虫减退率(％)＝(空白对照区二龄线虫数量-处理区二龄线虫数量)/(空白对照区二龄线虫数量)×100。
实验组：分别采用实施例1-6的复合微生物制剂按照如上方式施用于作物，记作处理1-6，其余培养条件均一致。
处理7：育苗期以清水替代制剂A，其余同处理1。
处理8：移栽后以清水替代制剂B，其余同处理1。
处理9：将实施例1中获得的高地芽孢杆菌培养液替代制剂A和制剂B按照上述方式施用于作物，并调整培养液的浓度使得单株菌用量与使用制剂A和制剂B时相同，其余同处理1。
CK(空白对照组)：制剂A和制剂B用等体积的清水代替。
不同处理的番茄、烟草、辣椒、生菜和油麦菜根结线虫的防治效果如表2所示，对番茄、烟草、辣椒、生菜和油麦菜生长的影响如表3所示。
表2不同处理对番茄、烟草、辣椒、生菜和油麦菜根结线虫的防效测定结果
表3不同处理对番茄、烟草、辣椒、生菜和油麦菜单果/叶和单株产量的影响
通过以上结果可以看出，通过在菊科和茄科作物种植不同阶段施用本发明提供的复合微生物菌剂中的制剂A和制剂B，利用其中不同微生物之间的协同配合，能够有效提高对根结线虫病害的防治效果，且对作物的生长具有促进作用。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。
Claims (14)
1.一种复合微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌剂的活性成分包括卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉，其中，卡氏芽孢杆菌的保藏编号为CCTCCNO：M 20221660，昆明假单胞菌的保藏编号为MCCC 1A16728，高地芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC AB 2015082，棘孢木霉的保藏编号为ACCC 32594；
所述复合微生物菌剂中，细菌以单位体积中的菌落数计，真菌以单位体积中的孢子数计，卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉的含量比为0.5×103-2×103:1×103-2.5×103:1.5×103-4.5×103:1。
2.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，其中，所述复合微生物菌剂为液体制剂。
3.根据权利要求1或2所述的复合微生物菌剂，其中，所述复合微生物菌剂中，卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉分别独立包装；
或者，将所述复合微生物菌剂按照制剂A和制剂B的方式分别独立包装，其中，制剂A包括卡氏芽孢杆菌和昆明假单胞菌，制剂B包括高地芽孢杆菌和棘孢木霉。
4.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，其中，卡氏芽孢杆菌和昆明假单胞菌的含量比为1:1-5；
和/或，高地芽孢杆菌和棘孢木霉的含量比为1×103-5×103:1；
和/或，卡氏芽孢杆菌与高地芽孢杆菌的含量比为1:1-5；
和/或，昆明假单胞菌与高地芽孢杆菌的含量比为1:1-5。
5.制备权利要求1-4中任意一项所述的复合微生物制剂的方法，其特征在于，该方法包括：
（1）分别将卡氏芽孢杆菌CCTCC NO：M 20221660、昆明假单胞菌MCCC 1A16728、高地芽孢杆菌CCTCC AB 2015082和棘孢木霉ACCC 32594在培养基中进行培养，获得培养液；
（2）分别将获得的卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉的培养液进行包装，或者，将卡氏芽孢杆菌和昆明假单胞菌的培养液混合作为制剂A，将高地芽孢杆菌和棘孢木霉的培养液混合作为制剂B，并分别对制剂A和制剂B进行包装，在包装时调整卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉的培养液用量，或者调整制剂A和制剂B的用量，以使得所述复合微生物菌剂中，细菌以单位体积中的菌落数计，真菌以单位体积中的孢子数计，卡氏芽孢杆菌、昆明假单胞菌、高地芽孢杆菌和棘孢木霉的含量比为0.5×103-2×103:1×103-2.5×103:1.5×103-4.5×103:1。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，步骤（1）中，获得的卡氏芽孢杆菌培养液中的菌落数不低于2×108CFU/mL；
和/或，获得的昆明假单胞菌培养液中的菌落数不低于2×108CFU/mL；
和/或，获得的高地芽孢杆菌培养液中的菌落数不低于2×108CFU/mL；
和/或，获得的棘孢木霉培养液中的孢子数不低于3×104个/mL。
7.根据权利要求5所述的方法，其中，步骤（2）中，调整卡氏芽孢杆菌和昆明假单胞菌的含量比为1:1-5；
和/或，调整高地芽孢杆菌和棘孢木霉的含量比为1×103-5×103:1；
和/或，调整卡氏芽孢杆菌与高地芽孢杆菌的含量比为1:1-5；
和/或，调整昆明假单胞菌与高地芽孢杆菌的含量比为1:1-5。
8.权利要求1-4中任意一项所述的复合微生物菌剂在防治作物根结线虫病和/或促进作物生长中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其中，所述作物选自茄科作物和/或菊科作物。
10.根据权利要求9所述的应用，其中，所述茄科作物包括番茄、烟草和辣椒中的至少一种；
和/或，所述菊科作物包括生菜和/或油麦菜。
11.一种防治作物根结线虫病和/或促进作物生长的方法，其特征在于，该方法包括将权利要求1、2和4中任意一项所述的复合微生物菌剂施用于作物。
12.一种防治作物根结线虫病和/或促进作物生长的方法，其特征在于，该方法包括将权利要求3所述的复合微生物菌剂施用于作物。
13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述方法包括以下步骤：
1）作物育苗时，每隔4-6天施用所述制剂A，共施用1-3次；
2）作物移栽时，每隔6-8天施用所述制剂B，共施用2-4次。
14.根据权利要求13所述的方法，其中，步骤1）中，每次用量为20-50mL/株；
步骤2）中，每次用量为50-100mL/株。
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