CN111337449A - 用于检测atz的核酸适配体红外光谱传感器及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器及检测方法，传感器的制备方法为：在Si棱柱表面沉积Au NPs以提供增强的红外吸收信号，再通过Au‑S键自组装法将阿特拉津适配体结合到红外检测基底表面，最后利用MCH阻断剩余位点，制得MCH/Aptamer/Au NPs/Si核酸适配体红外光谱传感器。与现有技术相比，本发明采用核酸适配体作为识别元件，大大提高了传感器的选择性，采用衰减全反射红外吸收光谱作为定量检测依据，不仅能提供分子的结构信息，而且其近场效应和表面增强效应，能够有效增强传感器检测的灵敏度，实现在分子水平上的检测，检测限低至30pM，检测方法快速简便，可用于痕量有机污染物的检测分析。
Description
技术领域
本发明属于环境污染物分析与光谱分析技术领域，涉及一种用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器及检测方法。
背景技术
三嗪类除草剂作为农药类内分泌干扰物中占比最大的一类，该化合物及其降解产物在水体中的大量残留给生物体健康和生态环境造成了巨大的威胁和破坏。其中，阿特拉津(ATZ)因使用量大、稳定性强、在水体中残留时间较长，被认为是一种最具污染力的三嗪类除草剂，ATZ在体内的大量积累会严重影响中枢神经系统、内分泌系统和免疫系统的作用，具有潜在的致癌性，世界各国都已对作物、土壤及地表水中ATZ的残留量作出了明确的限量标准，我国《地表水环境质量标准》明确规定在地表水中ATZ的最高允许浓度为3μg/L。因此，实现对水体中ATZ的快速、灵敏及高效分析检测具有重要的现实意义。
目前，ATZ的分析检测方法主要包括仪器分析方法(HPLC、GC-MS、HPLC-MS等)、电化学传感分析、光电分析方法等，但传统的仪器分析方法往往存在着样品前处理比较繁琐、分析周期较长、操作过程复杂、检测灵敏度较低等不足，而电化学和光电化学分析在一定程度上解决了仪器分析中检测灵敏度较低、操作复杂等问题，但仍很难实现在分子水平上对目标物的实时定量分析检测。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种对ATZ具有高灵敏度、高选择性、操作简单、能在分子水平上实现对ATZ定量分析检测的用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器及检测方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器的制备方法，该方法包括以下步骤：
1)采用Si棱柱作为红外光窗，并在预处理后的Si棱柱表面沉积Au纳米粒子，制得Au NPs/Si红外信号增强基底；
2)通过Au-S键自组装法将阿特拉津适配体结合到Au NPs/Si红外信号增强基底表面，并利用MCH阻断Au表面剩余的活性位点，制得MCH/Aptamer/Au NPs/Si核酸适配体红外光谱传感器。
进一步地，步骤1)中，Si棱柱的预处理过程为：先依次用粒径为1.0μm、0.3μm、0.05μm的Al2O3抛光粉对Si棱柱进行物理抛光，并依次置于水、丙酮、水中超声清洗，后将Si棱柱置于食人鱼溶液中浸泡，再用高纯水超声清洗，在N2气氛下吹干，得到表面亲水的Si棱柱；将表面亲水的Si棱柱置于NH4F水溶液中浸泡90-100s，用高纯水冲洗后在N2气氛下吹干，得到预处理后的Si棱柱。
进一步地，所述的Si棱柱为(1.8-2.2)cm×(2.3-2.7)cm反射面的半圆柱棱镜，所述的NH4F水溶液中，NH4F的质量分数为35-45％。
进一步地，步骤1)具体为：
1-1)向Au化学镀液中加入HF(40wt％)并混合均匀，之后将预处理后的Si棱柱浸入Au化学镀液中，并在55-58℃下浸没反射平面，反应3-5min；
1-2)用王水将Si棱柱表面的Au膜溶解，并用高纯水对Si棱柱进行清洗后，再次将Si棱柱浸入Au化学镀液中进行二次施镀，得到Au NPs/Si棱柱；
1-3)将Au NPs/Si棱柱与光谱电解池组装，在H2SO4溶液(0.5mol/L)中，采用循环伏安扫描方法进行清洗，即得到所述的Au NPs/Si红外信号增强基底。
进一步地，步骤1-1)中，所述的Au化学镀液的配制方法为：向HAuCl4溶液中加入NaOH，超声分散溶解后，继续加入Na2SO3、Na2S2O3·5H2O及NH4Cl固体，并使HAuCl4、NaOH、Na2SO3、Na2S2O3及NH4Cl的浓度分别为0.025-0.035mol/L、0.05-0.15mol/L、0.25-0.35mol/L、0.08-0.12mol/L及0.08-0.12mol/L；之后调节pH值为9-10，混合均匀后即得到所述的Au化学镀液。Au化学镀液使用时，将所配制的Au化学镀液与高纯水以1:3的体积比进行稀释后取用。
进一步地，步骤2)具体为：
2-1)向5μmol/L阿特拉津核酸适配体溶液中加入TCEP还原二硫键，得到还原后的核酸适配体溶液；
2-2)将Au NPs/Si红外信号增强基底与光谱电解池组装，并在光谱电解池中加入的还原后的核酸适配体溶液，孵育12-48h后，制得Aptamer/Au NPs/Si红外传感界面；
2-3)加入MCH溶液(0.3mmol/L)并静置25-35min，使MCH占据Au NPs表面剩余的吸附位点，避免ATZ的非特异性吸附，之后再利用PBS缓冲溶液进行清洗，即得到所述的MCH/Aptamer/Au NPs/Si核酸适配体红外光谱传感器。
用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器，该传感器采用所述的方法制备而成。
进一步地，所述的传感器用于检测水环境中的ATZ浓度。
采用核酸适配体红外光谱传感器对水环境中的ATZ进行检测的方法，该方法为：在N2氛围下，向MCH/Aptamer/Au NPs/Si核酸适配体红外光谱传感器表面加入PBS缓冲液并静置20-30min，待收集背景后，将一系列不同浓度的ATZ标准缓冲液(含有ATZ标准溶液及PBS缓冲液)加入至MCH/Aptamer/Au NPs/Si核酸适配体红外光谱传感器表面并作用55-65min，待饱和吸附后再进行红外光谱测定，根据ATZ红外特征吸收峰的强度与ATZ标准缓冲液中ATZ浓度的对数关系绘制工作曲线，之后根据绘制的工作曲线，在相同条件下，对水环境中的ATZ进行检测。
对该核酸适配体红外光谱传感器进行选择性测定，方法为：将其他含干扰物质的溶液加入到PBS缓冲溶液中，并对该传感器作用60min，采用上述同样方法、在相同条件下进行红外光谱测定，研究在ATZ特征吸收峰位置的强度变化，考察核酸适配体红外光谱传感器的选择性能。所述的干扰物质为草甘膦、啶虫脒。
衰减全反射表面增强红外光谱技术(ATR-SEIRAS)通过在红外光窗表面修饰贵金属纳米粒子，可以明显增强红外光谱信号，即获得表面增强红外吸收效应(SEIRAS)。与传统红外光谱相比，其具有更高的检测灵敏度，可以检测到pM浓度下的红外信号变化，在进行定量分析检测的同时还可以获得分子的结构信息。在衰减全反射模式下，倏逝波只存在于低折射率空间中，并且随着与增强界面间距离的增加而呈指数衰减，即只能检测到吸附在增强界面上的分子的红外吸收信号，从而避免了本体溶液的信号干扰，为目标物的实时检测提供了有效的平台。
核酸适配体(aptamer)又称“人工抗体”，是一类通过指数富集配体系统进化技术(SELEX)在体外筛选得到的单链DNA或RNA片段，长度一般为20-100个核苷酸，能与相应配体专一而紧密地结合，从而实现对目标分子的特异性检测。将适配体作为识别单元，具有尺寸小、亲和性好、易于人工合成和修饰、稳定性强、在基底上固定操作简单、用于检测小分子时检测限低等优点。因此，本发明将衰减全反射表面增强红外光谱技术与具有特异性识别功能的阿特拉津核酸适配体结合，构筑用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器，以获得良好的检测灵敏度和选择性。
具体而言，本发明在Si棱柱表面沉积Au NPs以提供增强的红外吸收信号，再通过Au-S键自组装法将阿特拉津适配体结合到红外检测基底表面，最后利用MCH阻断剩余位点，得到MCH/Aptamer/Au NPs/Si红外传感界面。其中，采用核酸适配体作为识别元件，大大提高了传感器的选择性，采用衰减全反射红外吸收光谱作为定量检测依据，不仅能提供分子的结构信息，而且其近场效应和表面增强效应，能够有效增强传感器检测的灵敏度，实现在分子水平上的检测，检测限低至30pM，检测方法快速简便，可用于痕量有机污染物的检测分析。
本发明利用化学沉积方法在Si棱柱光学基底表面修饰Au纳米粒子，粒子尺寸为90-110nm，以Au纳米粒子为增强基底，极大地提高了红外信号增强效应，可以检测到pM浓度下的红外信号变化，同时也为巯基适配体的修饰提供了直接的负载位点。
本发明针对现有ATZ检测技术难以在分子水平上实现对ATZ定量分析检测的现状，将衰减全反射表面增强红外光谱技术与具有特异性识别功能的阿特拉津核酸适配体结合，构筑用于检测阿特拉津的核酸适配体红外光谱传感器。由于存在表面近场效应，有效避免了检测过程中本体溶液的干扰，Si棱柱光学基底表面Au纳米粒子的沉积极大地增强了红外检测信号，提高了ATZ检测的灵敏度，实现了分子水平上的分析检测；核酸适配体的修饰能够特异性识别并结合ATZ分子，实现高选择性检测，该传感器的检测过程简单快捷，重现性较好，线性检测范围为500pM-500nM，检测限达到30pM，对于其他同类型农药干扰物仍能保持优异的选择性识别性能。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)引入衰减全反射表面增强红外光谱技术，通过在红外光窗基底表面修饰贵金属纳米粒子Au NPs，可以明显增强红外光谱信号，即获得表面增强红外吸收效应(SEIRAS)，与传统红外光谱相比，具有更高的检测灵敏度，可以检测到pM浓度下的红外信号变化；同时在衰减全反射模式下，红外检测过程中可以只检测到吸附在增强界面上的分子的红外吸收信号，从而避免了本体溶液的信号干扰。
(2)本发明利用核酸适配体作为识别元件，通过Au-S键自组装膜法直接结合到AuNPs/Si红外增强基底表面，具有步骤简单、易于实现、不需要再对基底进行其他复杂修饰处理等优点，在检测过程中能够实现对目标分子ATZ的特异性结合，有效提高了传感器的选择性。
(3)本发明构筑用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器，不仅提供了ATZ的分子结构信息，同时也在分子水平上实现了对水样中ATZ的高灵敏度、高选择性分析检测，检测限低至30pM，线性检测范围为500pM-500nM，方法简便易行，可望用于环境中水样的实时分析及定性定量检测。
附图说明
图1为实施例1制备的Au NPs/Si棱柱红外信号增强基底的扫描电镜图谱；
图2为是实施例2进行ATZ的红外测定图谱，其中，A为ATZ的N-H红外特征吸收峰的强度随ATZ浓度的变化情况，B为根据ATZ红外特征吸收峰的强度与ATZ浓度的对数关系所绘制的工作曲线。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。本实施例以本发明技术方案为前提进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1：
用于检测阿特拉津的核酸适配体红外光谱传感器的制备方法如下：
(1)Si棱柱的预处理。2cm×2.5cm反射面的半圆柱棱镜在用作红外光窗之前，需要进行预处理以保证表面洁净。在金相抛光机上依次用粒径为1.0μm、0.3μm、0.05μm的Al2O3抛光粉对Si棱柱进行物理抛光(650转)，直至表面光亮且完全疏水。将抛光后的Si棱柱依次置于水、丙酮、水中超声清洗，随后置于新鲜配置的食人鱼溶液(体积比为7:3的H2SO4和H2O2混合溶液)中浸泡，待其冷却到室温后，倒出洗液，再用高纯水超声清洗，在N2气氛下吹干。将表面亲水的Si棱柱置于质量分数为40％的NH4F水溶液中浸泡100s以去除表面的氧化层，用水冲洗后在N2气氛下吹干。
(2)配制Au化学镀液。用高纯水将1g的HAuCl4·4H2O溶解于10mL容量瓶中，溶液颜色为橙黄色，取3mL上述溶液，加入约0.105g的NaOH固体，超声分散直至NaOH固体完全溶解，此时溶液颜色变为橙红色，然后将此溶液转移至25mL容量瓶中。称取0.945g Na2SO3、0.620gNa2S2O3·5H2O和0.133g NH4Cl，再加入10mL高纯水，超声分散至固体完全溶解，同样将其转移至上述25mL容量瓶中，混合均匀。加水至近刻度线后测试pH值是否为9.5左右，若有偏差，加入HCl或NaOH进行调节，最后加水定容。此时溶液颜色为浅黄色，室温下避光保存，静置过夜后溶液由络合完全转为无色澄清状态，作为Au化学镀液使用。
(3)Si棱柱表面镀金。将Au化学镀液与高纯水1:3的体积比进行稀释，取4mL稀释液，向其中加入80μL的HF(40％)，混合均匀，在55℃下浸没反射平面进行化学镀3min左右。为提高Au膜在Si柱表面附着力进行二次镀金，即用王水将第一次化学沉积的Au膜溶解，并用高纯水将Si表面残余的王水清洗后，再次用相同的流程施镀。一些与Si表面结合牢固的Au晶种不能被王水去除，因此，在第二次沉积时会以这些位点作为晶种进行Au膜的生长，从而提高了Au膜与Si表面的附着力，Si棱柱表面沉积较牢固的Au膜后，将Au NPs/Si棱柱组装到光谱电解池上，采用循环伏安扫描方法在0.5M H2SO4中对Au NPs/Si表面进行电化学清洗，扫速50mV·s-1，扫描范围为0-2V，从而制得Au NPs/Si红外增强基底。
(4)MCH/Aptamer/Au NPs/Si棱柱红外光谱传感器的构筑。采用100mM Tris-HCl配制5.0μM的阿特拉津核酸适配体溶液，并混合相同体积的0.25mM TCEP，静置培养1h后，吸取150μL混合液加入光谱电解池中，过夜放置，孵育12h，制得Aptamer/Au NPs/Si红外传感界面。然后将剩余溶液吸出，加入150μL0.3mM MCH溶液静置30min，从而阻断Au NPs表面剩余的结合位点，避免Au NPs膜上的物理吸附，最后利用50mM PBS缓冲溶液(pH＝7.4)进行清洗，制得MCH/Aptamer/Au NPs/Si棱柱红外光谱传感界面。
Au NPs/Si棱柱红外增强基底的形貌通过扫描电子显微镜(SEM)进行表征，结果如图1所示，可以看出，Au NPs呈颗粒状沉积在Si棱柱表面上，粒径大小约为90-110nm。
MCH/Aptamer/Au NPs/Si棱柱红外光谱传感器的电化学性质使用CHI660c工作站进行表征。以制备的MCH/Aptamer/Au NPs/Si棱柱为工作电极，铂丝电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，在5mmol/L的[Fe(CN)6]4-/[Fe(CN)6]3-(含0.1mol/L KCl)混合液中进行电化学阻抗EIS测定，结果显示沉积Au NPs后，交流阻抗值显著下降，Au NPs/Si棱柱的电化学性能较裸Si棱柱得到了极大的提高。随着Aptamer和MCH的进一步修饰，由于其产生的空间位阻效应使得交流阻抗逐步增大。
实施例2：
采用实施例1制备的MCH/Aptamer/Au NPs/Si棱柱红外光谱传感器进行ATZ的红外光谱检测。
采用液氮制冷MCT检测器，设定Au纳米薄膜/溶液界面的入射角θ＝70°以保证红外辐射被完全反射，在通N2的氛围下，向传感器表面加入PBS缓冲液(50mM)缓冲30min，采集红外光谱曲线，光谱范围为600-4000cm-1，待收集背景后再将一系列不同浓度的ATZ标准溶液加入PBS溶液中作用60min，使ATZ在传感器表面饱和吸附，随后再进行红外光谱测定。通过分析结果发现(图2中A所示)，在一定的ATZ浓度范围内，随着ATZ浓度的增加，ATZ红外特征峰的强度也相应增加，这是由于溶液中的ATZ分子被传感器界面上的核酸适配体特异性识别并捕获，从而结合在Au纳米粒子表面，由于存在表面近场效应而获得红外光谱信号，随着浓度的增加，ATZ分子的结合量增大，因此红外吸收峰强度逐渐增大。根据ATZ红外特征吸收峰的强度与PBS溶液中ATZ浓度的对数关系绘制工作曲线(图2中B所示)，即可对ATZ定量检测。MCH/Aptamer/Au NPs/Si棱柱红外光谱传感器对ATZ的检测限低至30pM，线性检测范围为500pM-500nM。
实施例3：
采用实施例1制备的MCH/Aptamer/Au NPs/Si棱柱红外光谱传感器进行选择性能检测。
采用液氮制冷MCT检测器，设定Au纳米薄膜/溶液界面的入射角θ＝70°以保证红外辐射被完全反射，在通N2的氛围下，向传感器表面加入PBS缓冲液(50mM)缓冲30min，采集红外光谱曲线，光谱范围为600-4000cm-1。再将其他干扰物质(草甘膦、啶虫脒)加入到PBS缓冲溶液中作用60min，并在相同条件下进行红外光谱测定，研究在ATZ特征吸收峰位置的强度变化，考察核酸适配体红外光谱传感器的选择性能。结果表明，利用其他干扰物代替ATZ进行红外光谱测定时，在ATZ的特征吸收峰位置没有明显的出峰，干扰因子均小于10％，体现了MCH/Aptamer/Au NPs/Si棱柱红外光谱传感器良好的选择性。
实施例4：
用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器，其制备方法包括以下步骤：
1)Si棱柱的预处理：先用Al2O3抛光粉对Si棱柱进行物理抛光，超声清洗后将Si棱柱置于食人鱼溶液中浸泡，后经清洗、干燥，得到表面亲水的Si棱柱；将表面亲水的Si棱柱置于NH4F水溶液中浸泡，后经清洗、干燥，得到预处理后的Si棱柱。Si棱柱为(1.8-2.2)cm×(2.3-2.7)cm反射面的半圆柱棱镜，NH4F水溶液中，NH4F的质量分数为35-45％。
采用Si棱柱作为红外光窗，并在预处理后的Si棱柱表面沉积Au纳米粒子，制得AuNPs/Si红外信号增强基底，具体过程为：
1-1)向Au化学镀液中加入HF并混合均匀，之后将预处理后的Si棱柱浸入Au化学镀液中，并在55-58℃下浸没反射平面，反应3-5min；
1-2)用王水将Si棱柱表面的Au膜溶解，并对Si棱柱进行清洗后，再次将Si棱柱浸入Au化学镀液中进行二次施镀(同上一步骤)，得到Au NPs/Si棱柱；
1-3)将Au NPs/Si棱柱与光谱电解池组装，在H2SO4溶液中，采用循环伏安扫描方法进行清洗，即得到Au NPs/Si红外信号增强基底。
其中，Au化学镀液的配制方法为：向HAuCl4溶液中加入NaOH，超声分散溶解后，继续加入Na2SO3、Na2S2O3·5H2O及NH4Cl，并使HAuCl4、NaOH、Na2SO3、Na2S2O3及NH4Cl的浓度分别为0.025-0.035mol/L、0.05-0.15mol/L、0.25-0.35mol/L、0.08-0.12mol/L和0.08-0.12mol/L；之后调节pH值为9-10，即得到所述的Au化学镀液。
2)通过Au-S键自组装法将阿特拉津适配体结合到Au NPs/Si红外信号增强基底表面，并利用MCH阻断Au表面剩余的活性位点，制得MCH/Aptamer/Au NPs/Si核酸适配体红外光谱传感器，具体过程为：
2-1)向阿特拉津核酸适配体溶液中加入TCEP还原二硫键，得到还原后的核酸适配体溶液；
2-2)将Au NPs/Si红外信号增强基底与光谱电解池组装，并在光谱电解池中加入的还原后的核酸适配体溶液，孵育12-48h后，制得Aptamer/Au NPs/Si红外传感界面；
2-3)加入MCH溶液并静置，使MCH占据Au NPs表面剩余的吸附位点，之后进行清洗，即得到所述的MCH/Aptamer/Au NPs/Si核酸适配体红外光谱传感器。
该核酸适配体红外光谱传感器用于检测水环境中的ATZ浓度，检测方法为：在N2氛围下，向MCH/Aptamer/Au NPs/Si核酸适配体红外光谱传感器表面加入PBS缓冲液并静置20-30min，待收集背景后，将一系列不同浓度的ATZ标准缓冲液加入至MCH/Aptamer/AuNPs/Si核酸适配体红外光谱传感器表面并作用55-65min，待饱和吸附后再进行红外光谱测定，根据ATZ红外特征吸收峰的强度与ATZ标准缓冲液中ATZ浓度的对数关系绘制工作曲线，之后根据绘制的工作曲线，对水环境中的ATZ进行检测。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1)采用Si棱柱作为红外光窗，并在预处理后的Si棱柱表面沉积Au纳米粒子，制得AuNPs/Si红外信号增强基底；
2)通过Au-S键自组装法将阿特拉津适配体结合到Au NPs/Si红外信号增强基底表面，并利用MCH阻断Au表面剩余的活性位点，制得MCH/Aptamer/Au NPs/Si核酸适配体红外光谱传感器。
2.根据权利要求1所述的用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器的制备方法，其特征在于，步骤1)中，Si棱柱的预处理过程为：先用Al2O3抛光粉对Si棱柱进行物理抛光，超声清洗后将Si棱柱置于食人鱼溶液中浸泡，后经清洗、干燥，得到表面亲水的Si棱柱；将表面亲水的Si棱柱置于NH4F水溶液中浸泡，后经清洗、干燥，得到预处理后的Si棱柱。
3.根据权利要求2所述的用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器的制备方法，其特征在于，所述的Si棱柱为(1.8-2.2)cm×(2.3-2.7)cm反射面的半圆柱棱镜，所述的NH4F水溶液中，NH4F的质量分数为35-45％。
4.根据权利要求1所述的用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器的制备方法，其特征在于，步骤1)具体为：
1-1)向Au化学镀液中加入HF并混合均匀，之后将预处理后的Si棱柱浸入Au化学镀液中，并在55-58℃下浸没反射平面，反应3-5min；
1-2)用王水将Si棱柱表面的Au膜溶解，并对Si棱柱进行清洗后，再次将Si棱柱浸入Au化学镀液中进行二次施镀，得到Au NPs/Si棱柱；
1-3)将Au NPs/Si棱柱与光谱电解池组装，在H2SO4溶液中，采用循环伏安扫描方法进行清洗，即得到所述的Au NPs/Si红外信号增强基底。
5.根据权利要求4所述的用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器的制备方法，其特征在于，步骤1-1)中，所述的Au化学镀液的配制方法为：向HAuCl4溶液中加入NaOH，超声分散溶解后，继续加入Na2SO3、Na2S2O3·5H2O及NH4Cl，并使HAuCl4、NaOH、Na2SO3、Na2S2O3及NH4Cl的浓度分别为0.025-0.035mol/L、0.05-0.15mol/L、0.25-0.35mol/L、0.08-0.12mol/L及0.08-0.12mol/L；之后调节pH值为9-10，即得到所述的Au化学镀液。
6.根据权利要求1所述的用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器的制备方法，其特征在于，步骤2)具体为：
2-1)向阿特拉津核酸适配体溶液中加入TCEP还原二硫键，得到还原后的核酸适配体溶液；
2-2)将Au NPs/Si红外信号增强基底与光谱电解池组装，并在光谱电解池中加入的还原后的核酸适配体溶液，孵育12-48h后，制得Aptamer/Au NPs/Si红外传感界面；
2-3)加入MCH溶液并静置，使MCH占据Au NPs表面剩余的吸附位点，之后进行清洗，即得到所述的MCH/Aptamer/Au NPs/Si核酸适配体红外光谱传感器。
7.用于检测ATZ的核酸适配体红外光谱传感器，其特征在于，该传感器采用如权利要求1至6任一项所述的方法制备而成。
8.如权利要求7所述的核酸适配体红外光谱传感器的应用，其特征在于，所述的传感器用于检测水环境中的ATZ浓度。
9.采用如权利要求7所述的核酸适配体红外光谱传感器对水环境中的ATZ进行检测的方法，其特征在于，该方法为：在N2氛围下，向MCH/Aptamer/Au NPs/Si核酸适配体红外光谱传感器表面加入PBS缓冲液并静置20-30min，待收集背景后，将一系列不同浓度的ATZ标准缓冲液加入至MCH/Aptamer/Au NPs/Si核酸适配体红外光谱传感器表面并作用55-65min，待饱和吸附后再进行红外光谱测定，根据ATZ红外特征吸收峰的强度与ATZ标准缓冲液中ATZ浓度的对数关系绘制工作曲线，之后根据绘制的工作曲线，对水环境中的ATZ进行检测。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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