CN101201318B - HAuCl4分光光度法检测痕量金纳米粒子 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了HAuCl4分光光度法检测痕量金纳米粒子的方法，它是在柠檬酸钠-盐酸缓冲溶液中，加入一定量的金纳米粒子，氯金酸溶液和NH2OH·HCl，水浴反应一定时间，取适量于石英比色池中，置于双光束紫外可见分光光度计上，测出296nm处的吸光度，根据工作曲线，求得纳米金的浓度。本方法的优点：(1)设备简单，仅需紫外可见分光光度计，操作简便快速、灵敏度高，检测限低，达到0.25nmol/L；(2)试剂易得，成本低廉，此法为定量分析痕量纳米金微粒提供了一个有价值的方法，该法与免疫反应结合，用于纳米免疫分析将有广泛的应用价值，将有较好的应用价值。

Description

HAuCl4分光光度法检测痕量金纳米粒子
技术领域：
本发明涉及金纳米粒子的检测，具体是用HAuCl4分光光度法检测痕量金纳米粒子。
背景技术：
由于纳米金容易制备、高电子密度、独特的光学和电学性质及生物相容性而被广泛应用于生物芯片、生物传感器和生物分子标记研究。近来，纳米金微粒可作为晶种形成大粒径的复合物引起了科学家的极大兴趣。Dansher建立了用银显影液增强光镜下金颗粒可见性的金银染色法(GSS)。银增强方法检测分枝杆菌抗原浓度可以达到100pg·mL-1。1999年Hainfeld建立了与银增强法相似反应模式的金增强法，大大地提高了检测信号并且克服了银增强法带来的问题。Ma使用混合的HAuCl4-NH2OH溶液增大固定在硝酸纤维素膜免疫金微粒，用人眼检测h-IgG，其检测限达10pg·mL-1。Jagotamoy D等利用纳米金标记鼠-IgG对硝基苯酚与硼氢化钠反应的催化作用，用电化学可检测1fg·mL-1鼠-IgG。这些增强法大多先将被分析物固定在载体上，然后标记纳米金与其反应，再催化增大标记纳米金粒径进而增强分析信号，其实质是通过检测纳米金颗粒浓度来间接检测分析物浓度，因此研究纳米金颗粒催化性能及其高灵敏检测纳米金的新方法具有重要意义。中国CN1234000C公开了一种溶液中纳米微粒含量的测定方法，它是通过确定纳米粉体溶液的吸光度较大处对应的波长值为测定波长，配置不同浓度的纳米粉体溶液，用紫外可见分光光度计测定上述波长的吸光度值，得到工作曲线图，之后，测定实际待测工作液的吸光度，将测得的吸光度值经上述工作曲线图计算查询，就能得到纳米粉体的浓度。这种方法不经过纳米粒子的催化增强作用，灵敏度不高，检测限不够低，从工作曲线可知，仅可测定约10微克/毫升，不适用于检测痕量金纳米粒子。CN1522816A公开了一种利用引晶生长法制备均匀球形金颗粒的方法，通过使用纳米金作为催化剂，使氯金酸与盐酸羟胺发生反应，生成金纳米，这种方法描述的是基于催化作用制备大粒径的金颗粒，该方法是制备纳米金粒子，其制备的所用试剂虽与本发明相同，但是不能直接用于金纳米的测定，如对于测定痕量的金纳米，该方法中各种试剂的浓度比例和反应条件还需进一步的探索。
发明内容：
本发明的目的是要提供一种设备简单、灵敏度高、操作简便、快速的测定痕量金纳米粒子的方法。
本发明的目的采用下述技术方案来实现：
本发明通过研究Au纳米粒子对NH2OH-HAuCl4微粒反应的催化效果，发现纳米金具有强的催化作用，根据金纳米粒子能催化HAuCl4和NH2OH·HCl反应，随着催化剂金纳米微粒浓度的增大，296nm(此为HAuCl4吸收峰)处的吸光强度减小，且催化剂金纳米微粒浓度与296nm处的吸光度呈线性关系。据此，建立了HAuCl4分光光度法测量痕量金纳米粒子的方法。
HAuCl4分光光度法检测痕量金纳米粒子的方法包括如下步骤：
①在0.2～0.4mL pH为2.27～2.97的柠檬酸钠-盐酸缓冲溶液中，加入一定量粒径为5～50nm的金纳米粒子，0.3～1.0mL 0.59mmol/L HAuCl4和0.2～0.8mL8.0mmol/L NH2OH·HCl于5.0mL刻度试管，然后定容到2.0mL；
②将上述试管溶液置于28～34℃恒温水浴4～8min；
③上述反应完成后，取适量溶液于石英池中，置于双光束紫外可见分光光度计上，测出296nm处的吸光度，绘制标准工作曲线，根据工作曲线，即可求得纳米金的浓度。
本发明的优点是：
(1)设备简单，仅需紫外可见分光光度计，操作简便快速、灵敏度高，检测限低，达到0.25nmol/L。
(2)试剂易得，成本低廉，此法为定量分析痕量纳米金微粒提供了一个有价值的方法，该法与免疫反应结合，对于提高纳米免疫标记的分析灵敏度有较好的应用价值。
附图说明：
图1为本发明实施例粒径为5nm的纳米金微粒催化氯金酸和盐酸羟胺反应的紫外可见吸收光谱图；
图2为本发明实施例纳米金催化原理图。
具体实施方式：
下面结合附图和实施例对本发明的实施方式作进一步的阐述：
图1为本发明实施例粒径为5nm的纳米金催化氯金酸和盐酸羟胺反应紫外可见吸收光谱图，其操作过程如下：依次移取0.20mL pH为2.62的柠檬酸钠-盐酸缓冲溶液，加入0(a)、10(b)、20(c)、30(d)μL 0.5μmol/L纳米金、60mL 0.59mmol/L HAuCl4和0.40mL 8.0m mol/L NH2OH·HCl于5.0mL刻度试管，然后定容到2.0mL置于34℃恒温水浴6min，反应完成后，取适量溶液于石英池中，置于双光束紫外可见分光光度计上扫描光谱。从图1中可见，金钠米粒子能催化HAuCl4和NH2OH·HCl反应，随着催化剂金纳米微粒浓度的增大，296nm(此为HAuCl4吸收峰)处的吸光强度减小，且催化剂金纳米微粒浓度与296nm处的吸光度呈线性关系，如5nm的为Aabs＝-0.017c(nmol/L)+0.22，线性范围为0.25～10.15nmol/L，根据工作曲线，可求得钠米金的浓度。
虽然以上通过实例对本发明实施方式进行了描述，但本领域的技术人员应该知道，上述仅为举例，可以对实施方式做出多种变更和修改，本发明的范围仅由所附权利要求书限制。

Claims (1)

1.HAuCl4分光光度法检测痕量金纳米粒子，其特征是：检测方法包括步骤如下：
①在0.2mL pH为2.62的柠檬酸钠-盐酸缓冲溶液中，加入0(a)、10(b)、20(c)、30(d)μL的0.5μmol/L纳米金，0.60mL浓度为0.59mmol/L的HAuCl4和0.4mL浓度为8.0mmol/L的NH2OH·HCl于刻度试管，然后定容至2.0mL；
②将试管置于34℃恒温水浴中反应6分钟；
③上述反应完成后，取适量所得溶液于石英池中，置于双光束紫外可见分光光度计上，测出296nm处的吸光度，绘制金纳米颗粒浓度以上述吸光度的线性关系标准工作曲线，根据上述标准工作曲线，求得纳米金的浓度。
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