CN111334373A - 一种天然蜂胶致香组分的制备方法及在卷烟中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种天然蜂胶致香组分的制备方法，包括以下步骤：(1)以超声波‑微波协同辅助乙醇萃取蜂胶，将醇提液过滤浓缩得到蜂胶醇提浓缩物(2)将蜂胶醇提浓缩物进行冷冻醇沉，将醇沉后的离心上清液浓缩得到蜂胶精制物(3)将蜂胶精制物进行葡聚糖凝胶层析，定量收集层析流出液(4)通过感官评价结合成分分析，优选合并层析收集液进而浓缩，即得到所述的天然蜂胶致香组分。将本发明制备的天然蜂胶致香组分应用于卷烟中，可赋予卷烟丰富且有层次感的香气特征，并具有提升香气质和改善吃味等功能效果。

Description

一种天然蜂胶致香组分的制备方法及在卷烟中的应用

技术领域

本发明属于天然香料领域，具体涉及一种天然蜂胶致香组分的制备方法及在卷烟中的应用。

背景技术

近年来，中式卷烟加香加料技术发展迅速，各种新技术、新材料、新工艺及新原料都在为形成新的卷烟产品特色风格和提升产品品质服务，而天然香原料是其中不可或缺的重要组成部分，对于开发新型具有鲜明特色和优良应用功能的天然烟用香原料的需求也显得较为迫切。

天然蜂胶是蜜蜂工蜂采集植物树脂等分泌物与其上颚腺、蜡腺等分泌物混合而成的一种天然粘稠物质。蜂胶的应用历史十分悠久，可追溯到古埃及时期。近年来的研究表明蜂胶含有丰富的黄酮类、酚酸类及萜烯类等化合物，具有广泛的生物学活性和药理学活性，如抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤、保肝、免疫调节等，蜂胶已广泛用于医药、保健品、化妆品等领域。目前世界上主要产胶国是中国和巴西，两国蜂胶原料产量占全球年产量的95％以上，而我国则是世界上蜂胶生产量最多、出口量最大和消费量最大的国家，另外天然蜂胶本身也具有独特的芳香气味。鉴于以上，蜂胶原料的天然性和安全性、国内资源的丰富性以及香味特性，使蜂胶具备了在烟用香料方面开发和应用的潜质。

目前，针对蜂胶进行提取的方法较多，而乙醇提取法是最为经典和常用的提取方法，一般以醇提物含量和总黄酮含量作为乙醇提取蜂胶的的考量指标。而作为烟用香料而言，主要以在卷烟中的应用效果作为具体的开发目标。因此，以蜂胶为研究对象，筛选合适的工艺技术及优化工艺参数，对传统的乙醇提取方法进行整合和改良，以进一步富集天然蜂胶原料中的致香成分，并运用一定的分离技术手段，制备得到适用于卷烟的蜂胶致香组分，可以进一步拓展国产蜂胶资源的开发潜力和应用范围，也可为中式卷烟的加香加料技术提供一种新型的天然香原料。

发明内容

本发明的目的是提供一种天然蜂胶致香组分的制备方法，将国产蜂胶原料作为研究对象，设计适宜的提取、精制及分离工艺环节，并整合工艺，进而优化工艺参数，旨在制备一种新型的天然蜂胶致香组分的烟用香原料，并将其应用在卷烟中，以到达彰显卷烟香气风格和提升卷烟综合品质的目的。

本发明第一方面公开了一种天然蜂胶致香组分的制备方法，包括以下步骤：

(1)将冷冻条件储存的蜂胶原料通过冷冻粉碎机粉碎，加入到超声波-微波协同萃取设备萃取釜中，并加入95wt％乙醇，进行超声波-微波协同萃取，超声波频率固定为40KHz，共进行四次提取，过滤收集并合并四次提取液。将合并的醇提液在常温环境下静置24h后，再次过滤，收集过滤清液进行减压浓缩，当浓缩至比重为0.80-1.30时，停止浓缩，得到天然蜂胶醇提浓缩物。

(2)在天然蜂胶醇提浓缩物加入6倍质量比的无水乙醇，在常温下低速搅拌0.5h，将搅拌均匀后的混合溶液进行冷冻醇沉，然后进行离心，收集离心上清液，将上清液进行减压浓缩，当浓缩至比重为0.80-1.30时，停止浓缩，得到天然蜂胶精制物。

(3)将天然蜂胶精制物以1倍质量比的甲醇溶解，将该甲醇溶液在已预处理的葡聚糖凝胶层析柱上样，以甲醇作为展开剂，应用自动定量收集仪收集层析流出液共200瓶。

(4)针对收集的层析流出液，结合香气感官评价和GC/MS挥发性成分分析，优选和合并后进行减压浓缩，浓缩至无溶剂馏出时，暂停浓缩，在浓缩物中加入5倍质量比的无水乙醇进行溶解，继续浓缩，当浓缩至比重为0.80-1.30时，停止浓缩，即得到天然蜂胶致香组分。

优选地，步骤(1)中所述的冷冻粉碎的条件为：温度-100-0℃，粉碎目数50-600目，所述的蜂胶原料与95wt％乙醇的质量比例为1:5-1:15，所述的超声波-微波协同萃取条件为：微波功率100-800W，温度，20-100℃，萃取时间10-60min；

优选地，步骤(2)所述醇沉条件为：温度-50-0℃，时间为10-60h，所述的离心条件：转速1000-5000r/min，离心时间为20-60min；

优选地，步骤(3)所述的自动定量收集仪的收集间隔时间为：0.1-15min；

优选地，步骤(4)所述的优选合并的收集液的合并段为50-150号瓶；

优选地，步骤(1)、步骤(2)和步骤(4)所述的浓缩条件为：温度20～60℃，真空度0.03-0.1Mpa。

本发明第二方面公开了一种上述的制备方法制得的天然蜂胶致香组分在卷烟中的应用方法。

优选地，将天然蜂胶致香组分用50～95wt％的乙醇溶解形成乙醇溶液，然后将乙醇溶液按天然蜂胶致香组分占烟丝质量的0.001～1％喷加到烤烟烟丝中，卷成香烟成品。

本发明的优点在于：(1)采用药食同源的天然蜂胶作为原料，所制备的天然蜂胶致香组分是一种高安全性的天然烟用香原料。

(2)以95wt％乙醇作为提取溶剂，运用超声波-微波协同萃取工艺，非高温的萃取条件，避免了蜂胶中热敏性、易氧化的萜烯类、芳香性香气物质的变性、挥发、氧化等问题，而且超声波-微波协同萃取不仅可以提高效率、降低能耗，也能进一步增强蜂胶中有效香气成分的提取效力。

(3)通过葡聚糖凝胶层析实现对蜂胶醇提产物中成分的分离，进而通过感官评价结合挥发性成分分析，有目的地将有效的致香部位再次组合，进而形成天然蜂胶致香组分烟用香料产品。该新型产品功能效果突出，具有广泛的应用前景和市场潜力。

具体实施方式

下面通过实例对本发明的方法给予进一步的说明，但并不限止本发明。

实施例一

一种天然蜂胶致香组分按如下步骤制备：

(1)先把冷冻储存的不同产地的蜂胶原料混配，以河南：山东：陕西比例为5：3：2，然后进行冷冻粉碎，粉碎温度设定为-15℃，粉碎目数为200目，将粉碎后的蜂胶粉加入到超声波-微波协同萃取设备的萃取釜中，加入蜂胶投料量的10倍质量比的95wt％乙醇，打开设备开关，开启超声波开关，超声波频率固定为40KHz，调节微波功率为600W，提取温度40℃，提取时间为30min，共进行四次提取，过滤收集并合并四次醇提液，将合并的提取液在常温环境下静置24h后，再次过滤，收集过滤清液在温度50℃，真空度0.09Mpa的条件下减压浓缩，当浓缩至比重为1.15时，停止浓缩，得到天然蜂胶浓缩物。

(2)将天然蜂胶浓缩物加入6倍质量比的无水乙醇，在常温下低速搅拌0.5h，将搅拌均匀后的混合溶液在-18℃的条件下进行冷冻醇沉36h，然后进行离心，离心转速为5000r/min，离心时间为20min，收集离心上清液，将上清液在温度50℃，真空度0.09Mpa的条件下减压浓缩，当浓缩至比重为1.22时，停止浓缩，得到天然蜂胶精制物。

(3)将天然蜂胶精制物以精制物1倍质量比的甲醇溶解，将该甲醇溶液在已预处理的葡聚糖凝胶层析柱上样，以甲醇作为展开剂，应用自动定量收集仪收集层析流出液共200瓶，设定收集间隔时间为0.5min。

(4)针对收集的层析流出液，结合香气感官评价和GC/MS挥发性成分分析，合并第88-142瓶流出收集液，在温度40℃，真空度0.09Mpa的条件下进行减压浓缩，浓缩至无溶剂馏出时，在浓缩物中加入5倍质量比的无水乙醇进行溶解，继续浓缩，当浓缩至比重为1.05时，停止浓缩，即得到天然蜂胶致香组分。

将上述制得的天然蜂胶致香组分用90wt％的乙醇溶解，然后将乙醇溶液按天然蜂胶致香组分占烟丝质量的0.01wt％喷加到卷烟叶组烟丝中，将烟丝在相对湿度(60±2)％、温度(22±1)℃的环境下平衡48h制成卷烟在进行感官评价。

实施例二

一种天然蜂胶致香组分按如下步骤制备：

(1)先把冷冻储存的不同产地的蜂胶原料混配，以山东：陕西比例为6.5：3.5，然后进行冷冻粉碎，粉碎温度设定为-20℃，粉碎目数为300目，将粉碎后的蜂胶粉加入到超声波-微波协同萃取设备的萃取釜中，加入蜂胶投料量的8倍质量比的95wt％乙醇，打开设备开关，开启超声波开关，超声波频率固定为40KHz，设定微波功率为700W，提取温度40℃，提取时间为40min，共进行四次提取，过滤收集并合并四次醇提液，将合并的提取液在常温环境下静置24h后，再次过滤，收集过滤清液在温度50℃，真空度0.09Mpa的条件下减压浓缩，当浓缩至比重为1.18时，停止浓缩，得到天然蜂胶浓缩物。

(2)将天然蜂胶浓缩物加入6倍质量比的无水乙醇，在常温下低速搅拌0.5h，将搅拌均匀后的混合溶液在-15℃的条件下进行冷冻醇沉48h，然后进行离心，离心转速为4000r/min，离心时间为25min，收集离心上清液，将上清液在温度50℃，真空度0.09Mpa的条件下减压浓缩，当浓缩至比重为1.25时，停止浓缩，得到天然蜂胶精制物。

(3)在天然蜂胶精制物加入1倍质量比的甲醇溶解，将该甲醇溶液在已预处理的葡聚糖凝胶层析柱上样，以甲醇作为展开剂，应用自动定量收集仪收集层析流出液共200瓶，设定收集间隔时间为1min。

(4)针对收集的层析流出液，结合香气感官评价和GC/MS挥发性成分分析，合并第69-127瓶流出收集液，在温度40℃，真空度0.09Mpa的条件下进行减压浓缩，浓缩至无溶剂馏出时，在浓缩物中加入5倍质量比的无水乙醇进行溶解，继续浓缩，当浓缩至比重为1.11时，停止浓缩，即得到天然蜂胶致香组分。

将上述制得的天然蜂胶致香组分用90wt％的乙醇溶解，然后将乙醇溶液按天然蜂胶致香组分占烟丝质量的0.006wt％喷加到卷烟叶组烟丝中，将烟丝在相对湿度(60±2)％、温度(22±1)℃的环境下平衡48h制成卷烟在进行感官评价。

Claims (8)

1.一种天然蜂胶致香组分的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将蜂胶在低温冷冻机中粉碎，加入95wt％乙醇，进行超声波-微波协同萃取，超声波频率固定为40KHz，共进行四次提取，过滤收集并合并四次提取液。将合并的提取液在常温环境下静置24h后，再次过滤，收集过滤清液进行减压浓缩，当浓缩至比重为0.80-1.30时，停止浓缩，得到天然蜂胶浓缩物。

(2)在天然蜂胶浓缩物中加入6倍质量比的无水乙醇，在常温下低速搅拌0.5h，将搅拌均匀后的混合溶液进行冷冻醇沉，然后进行离心，收集离心上清液，将上清液进行减压浓缩，当浓缩至比重为0.80-1.30时，停止浓缩，得到天然蜂胶精制物。

(3)将天然蜂胶精制物以1倍质量比的甲醇溶解，将该甲醇溶液在已预处理的葡聚糖凝胶层析柱上样，以甲醇作为展开剂，应用自动定量收集仪收集层析流出液共200瓶。

(4)针对收集的层析流出液，结合香气感官评价和GC/MS挥发性成分分析，优选和合并收集液进行减压浓缩，浓缩至无溶剂馏出时，暂停浓缩，在浓缩物中加入5倍质量比的无水乙醇进行溶解，继续浓缩，当浓缩至比重为0.80-1.30时，停止浓缩，即得到天然蜂胶致香组分。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的冷冻粉碎的条件为：温度-100-0℃，粉碎目数50-600目；所述的蜂胶原料与95wt％乙醇的质量比例为1:5-1:15；所述的超声波-微波协同萃取条件：微波功率100-800W，温度20-100℃，萃取时间10-60min。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述醇沉条件为：温度-50-0℃，时间为10-60h；所述的离心条件：转速1000-5000r/min，离心时间为20-60min。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的自动定量收集仪的收集间隔时间为：0.1-15min。

5.根据权利要求1所述的制备方法，步骤(4)所述的收集液合并段为50-150号瓶。

6.根据权利要求1所述的制备方法，步骤(1)、步骤(2)和步骤(4)所述的浓缩条件为：温度20～60℃，真空度0.03-0.1Mpa。

7.根据权利要求1-6所述的的制备方法制得的天然蜂胶致香组分进行卷烟加香应用。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，将天然蜂胶致香组分用50～95wt％的乙醇溶解形成乙醇溶液，然后将乙醇溶液按天然蜂胶致香组分占烟丝质量的0.001～1％喷加到烤烟烟丝中，卷成香烟成品。