CN111307988B - 一种金蝉口服液的质量控制方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种金蝉口服液的质量控制方法，其包括采用超高效液相色谱分别对待测样品溶液和对照品溶液进行检测的步骤，其中对照品溶液必须包括含有绿原酸的第一对照品溶液、含有木樨草苷的第二对照品溶液和含有黄芩苷的第三对照品溶液；超高效液相色谱所采用的色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，采用的流动相为甲醇和酸水的混合物或者乙腈和酸水的混合物，酸水的溶质体积百分含量为0.02‑0.2%；该控制方法能够较为全面的反应金蝉口服液的质量，同时操作简单，易于工业化应用。

Description

一种金蝉口服液的质量控制方法
技术领域
本发明属于质量控制技术领域，尤其涉及一种医疗机构制剂的质量控制，具体涉及一种金蝉口服液的质量控制方法。
背景技术
金蝉口服液是苏州大学附属儿童医院的医疗机构制剂，是根据院名老中医吴保德临床经验方开发而来，临床应用二十余年。该制剂的功能主治为疏风透表，解肌清热，临床主要应用于风热及风寒入里之感冒、发热、恶寒、咽痛等，具有较好的疗效。前期的研究过程中发现，该制剂在治疗小儿手足口病、急性上呼吸道感染、合胞病毒肺炎、轻中度社区获得性呼吸道感染、流感病毒H1N1等均具有很好的效果。同时，有研究表明该制剂在体外亦有一定对儿科临床常见致病菌具有较好的抗菌活性。但是，至今其质量控制方法仍不够完善，不利于进一步金蝉口服液制剂进一步的发展。
现有的金蝉口服液质量控制方法一般选择的是黄芩苷作为金蝉口服液质量控制的方法，但是单一组分的含量测定并不能全面的金蝉口服液的质量。故有必要为该制剂建立一种更为完善的质量控制技术。指纹图谱技术是中药制剂质量控制的重要手段，可较全面地制剂工艺全过程及成品的质量，已成为现代中药制剂质控的重要方法。指纹图谱从定性的角度控制产品质量，多成分的含量测定从定量的角度控制质量，建立一种指纹图谱和含量测定的方法有助于进一步提升金蝉口服液的质量控制水平。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中的不足，提供一种改进的金蝉口服液的质量控制方法，此控制方法从定性和定量的两个角度(含量测定+指纹图谱)，能够较为全面的反映金蝉口服液的质量，同时操作简单，易于工业化应用。
为解决以上技术问题，本发明采取的技术方案如下：
一种金蝉口服液的质量控制方法，所述质量控制方法包括采用超高效液相色谱分别对待测样品溶液和对照品溶液进行检测的步骤，其中所述对照品溶液必须包括含有绿原酸的第一对照品溶液、含有木樨草苷的第二对照品溶液和含有黄芩苷的第三对照品溶液；所述超高效液相色谱所采用的色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，采用的流动相为甲醇和酸水的混合物或者乙腈和酸水的混合物，所述酸水的溶质体积百分含量为0.02-0.2％。
本发明中，所述金蝉口服液的质量控制方法从定性和定量的两个角度(含量测定+指纹图谱)开展质量控制。
根据本发明的一些优选且具体的方面，所述酸水为冰醋酸水溶液、甲酸水溶液或磷酸水溶液。
根据本发明，当所述流动相为甲醇和酸水的混合物时，所述流动相中，所述甲醇与所述酸水的组成体积比为10-35∶65-90；当所述流动相为乙腈和酸水的混合物时，所述流动相中，所述乙腈与所述酸水的组成体积比为5-30∶70-90。
根据本发明的一些优选方面，所述流动相为乙腈和酸水的混合物，其中所述酸水为溶质体积百分含量为0.08-0.12％的磷酸水溶液。
根据本发明，所述流动相中，所述乙腈为流动相A，所述磷酸水溶液为流动相B，检测过程中采用的梯度洗脱程序为：
0-4.5min，流动相A与流动相B的组成体积比为5-10∶90-95；
4.5min之后至10min，流动相A与流动相B的组成体积比为18-22∶78-82；
10min以后，流动相A与流动相B的组成体积比为25-35∶65-75。
根据本发明的一个优选方面，所述流动相中，所述乙腈为流动相A，所述磷酸水溶液为流动相B，检测过程中采用的梯度洗脱程序为：
0-4.5min，流动相A与流动相B的组成体积比为5∶95；
4.5min之后至10min，流动相A与流动相B的组成体积比为20∶80；
10min以后，流动相A与流动相B的组成体积比为30∶70。
本发明中，只有采用上述梯度洗脱程序才能够较好地实现色谱峰的有效分离，进而能够进行金蝉口服液的含量测定及指纹图谱的建立。
根据本发明的一些优选方面，所述超高效液相色谱所采用的检测波长为210-350nm。进一步优选地，所述超高效液相色谱所采用的检测波长为210-250nm。根据本发明的一个具体且优选的方面，所述超高效液相色谱所采用的检测波长为230nm。
根据本发明的一些优选方面，所述超高效液相色谱所采用的柱温为34-36℃。根据本发明的一个具体且优选的方面，所述超高效液相色谱所采用的柱温为35℃。
根据本发明的一些优选方面，所述超高效液相色谱所采用的流动相的流速为0.2-0.4mL/min。根据本发明的一个具体且优选的方面，所述超高效液相色谱所采用的流动相的流速为0.3mL/min。
根据本发明的一个具体且优选的方面，所述超高效液相色谱所采用的色谱柱为BEH C18色谱柱，内径为2.1mm，长度为50mm，填料粒径为1.7μm。
根据本发明的一些具体方面，所述对照品溶液采用甲醇作溶剂进行溶解，所述待测样品溶液采用水稀释金蝉口服液而得。
由于以上技术方案的采用，本发明与现有技术相比具有如下优点：
本发明创新地采用三种特定的成分(黄芩苷、木樨草苷、绿原酸)作为金蝉口服液的质量参照标准，避免了采用广为人知的黄芩苷作为单一评价标准而存在的局限性，使得质量控制体系更完善，质量控制更精确。其中采用超高效液相色谱(UPLC)进行色谱比对，获得了一整套重现性好且操作简单的质量控制方法，尤其是对超高效液相色谱检测条件的创造性设计以及选择，使得在检测过程中主要目的对照成分分离效果优异，获得了准确的色谱对照谱图，而且还能够制成指纹图谱进行检测对照，进而能够较全面地控制检测制剂工艺全过程及成品的质量，适于工业化应用。
附图说明
图1为对照品溶液绿原酸的UPLC色谱图；
图2为对照品溶液木樨草苷的UPLC色谱图；
图3为对照品溶液黄芩苷的UPLC色谱图；
图4为待测样品溶液的指纹图谱；
图5为10批待测样品溶液的指纹图谱水平叠加图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明；应理解，这些实施例是用于说明本发明的基本原理、主要特征和优点，而本发明不受以下实施例的范围限制；实施例中采用的实施条件可以根据具体要求做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。
下述中，如无特殊说明，所有的原料均来自于商购或者通过本领域的常规方法制备而得。以下如无特殊说明，“％”是指体积百分含量。UPLC是沃特世超高效液相色谱分析仪(Waters H-Class UPLC)。
实施例1
1.1金蝉口服液的含量测定：
色谱柱：BEH C18色谱柱(2.1×50mm,1.7um)；流动相：以A-乙腈；B-0.1％磷酸水溶液为流动相，按下表1进行梯度洗脱，流速为0.3mL·min-1，检测波长为230nm，柱温35℃。
表1梯度洗脱程序
Figure BDA0002423043630000041
待测样品溶液的制备：精密量取金蝉口服液1mL，置25mL容量瓶中，用水稀释至容量瓶的25ml刻度线处，离心备用。
对照品溶液制备：分别精密称取绿原酸、木樨草苷、黄芩苷对照品适量，用甲醇溶解，分别制成含绿原酸、木樨草苷、黄芩苷为0.05mg、0.05mg、0.05m g的溶液，作为定性对照品溶液。
分别吸取待测样品溶液和对照品溶液10uL，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，既得如图1、2、3和4所示的UPLC色谱图。
1.2金蝉口服液的指纹图谱：
色谱柱：BEH C18色谱柱(2.1×50mm,1.7um)；流动相：以A-乙腈；B-0.1％磷酸水溶液为流动相，按下表2进行梯度洗脱，流速为0.3mL·min-1，检测波长为230nm，柱温35℃。
表2梯度洗脱程序
Figure BDA0002423043630000042
待测样品溶液的制备：精密量取金蝉口服液1mL，置25mL容量瓶中，用水稀释至容量瓶的25ml刻度线处，离心备用。
对照品溶液制备：分别精密称取绿原酸、木樨草苷、黄芩苷对照品适量，用甲醇溶解，分别制成含绿原酸、木樨草苷、黄芩苷为0.05mg、0.05mg、0.05m g的溶液，作为定性对照溶液。
分别吸取待测样品溶液和对照品溶液10uL，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，将10批待测样品的色谱图叠加，见如图5所示的色谱图。
待测样品溶液的指纹图谱中应分别呈现与对照品溶液色谱峰保留时间相同的色谱峰。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统(版本号：2004A，国家药典委员会)计算，10批待测样品指纹图谱的相似度(见表3)，均不低于0.90。
表3金蝉口服液相似度评价结果
Figure BDA0002423043630000051
对比例
采用如下方法进行金蝉口服液的含量测定：
色谱柱：BEH C18色谱柱(2.1×50mm,1.7um)；流动相：以A-乙腈；B-0.1％磷酸水溶液(采用体积比为10:90的等梯度进行)为流动相，流速为0.3mL·min-1，分别在检测波长为230nm和350nm下检测，柱温35℃。
待测样品溶液的制备：精密量取金蝉口服液1mL，置25mL容量瓶中，用水稀释至容量瓶的25ml刻度线处，离心备用。
对照品溶液制备：分别精密称取绿原酸、木樨草苷、黄芩苷对照品适量，用甲醇溶解，分别制成含绿原酸、木樨草苷、黄芩苷为0.05mg、0.05mg、0.05m g的溶液，作为定性对照品溶液。
分别吸取待测样品溶液和对照品溶液10uL，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图。结果表明在两种波长下色谱峰均无法有效分离，即该方法无法用于金蝉口服液的含量测定及指纹图谱的建立。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种金蝉口服液的质量控制方法，其特征在于，所述质量控制方法包括采用超高效液相色谱分别对待测样品溶液和对照品溶液进行检测的步骤，其中所述对照品溶液必须包括含有绿原酸的第一对照品溶液、含有木樨草苷的第二对照品溶液和含有黄芩苷的第三对照品溶液，所述对照品溶液采用甲醇作溶剂进行溶解，所述待测样品溶液采用水稀释金蝉口服液而得；
所述超高效液相色谱所采用的色谱柱为BEH C18 色谱柱，内径为2.1 mm，长度为50mm，填料粒径为1.7μm，所述超高效液相色谱所采用的柱温为34-36℃，所述超高效液相色谱所采用的流动相的流速为0.2-0.4mL/min，采用的流动相为乙腈和酸水的混合物，其中所述酸水为溶质体积百分含量为0.08-0.12％的磷酸水溶液，所述超高效液相色谱所采用的检测波长为210-230nm；
所述流动相中，所述乙腈为流动相A，所述酸水溶液为流动相B，检测过程中采用的梯度洗脱程序为：
0-4.5min，流动相A与流动相B的组成体积比为5-10∶90-95；
4.5min之后至10min，流动相A与流动相B的组成体积比为18-22∶78-82；
10min以后，流动相A与流动相B的组成体积比为25-35∶65-75。
2.根据权利要求1所述的金蝉口服液的质量控制方法，其特征在于，检测过程中采用的梯度洗脱程序为：
0-4.5min，流动相A与流动相B的组成体积比为5∶95；
4.5min之后至10min，流动相A与流动相B的组成体积比为20∶80；
10min以后，流动相A与流动相B的组成体积比为30∶70。
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