CN111297936B - 一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法 - Google Patents

一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111297936B
CN111297936B CN202010111863.1A CN202010111863A CN111297936B CN 111297936 B CN111297936 B CN 111297936B CN 202010111863 A CN202010111863 A CN 202010111863A CN 111297936 B CN111297936 B CN 111297936B
Authority
CN
China
Prior art keywords
total
momordica grosvenori
resin column
exchange resin
macroporous
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010111863.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111297936A (zh
Inventor
李伟
宋谷良
黄华学
赵冠宇
刘永胜
黄�俊
贺进军
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hunan Huacheng Biotech Inc
Original Assignee
Hunan Huacheng Biotech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hunan Huacheng Biotech Inc filed Critical Hunan Huacheng Biotech Inc
Priority to CN202010111863.1A priority Critical patent/CN111297936B/zh
Publication of CN111297936A publication Critical patent/CN111297936A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111297936B publication Critical patent/CN111297936B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/42—Cucurbitaceae (Cucumber family)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

本发明提供了一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法，包括以下步骤：热水提取，聚酰胺吸附与洗脱，得罗汉果根总黄酮；脱色脱盐，大孔树脂吸附与洗脱：将脱色脱盐液通过大孔吸附树脂柱，大孔吸附树脂柱流出液浓缩、干燥，得罗汉果根总多糖；大孔吸附树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总三萜皂苷。本发明通过一种连续型的方法，得到了三种具有经济价值的产物，即罗汉果总黄酮、总三萜皂苷和总多糖。优选实施方案中，三种产物的含量和收率均在90％以上，经济价值高，是一种对罗汉果的综合利用方法。本发明提供的方法工艺连贯、简单，可操作性强，生产成本低，不使用有毒有害化工溶剂，安全环保，适合工业化生产。

Description

一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖 的方法
技术领域
本发明涉及一种从罗汉果根中提取并分离多种天然活性成分的方法，具体涉及一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法。
背景技术
罗汉果是桂林名贵的土特产，主产于永福县和龙胜县，也是国家首批批准的“药食两用”材料之一。罗汉果甜苷是罗汉果中特有的天然高倍甜味剂，其甜度为蔗糖的300倍，其热量为零，具有清热润肺镇咳、润肠通便之功效，对肥胖、便秘、糖尿病等具有防治作用。罗汉果甜苷作为食品是安全无毒的，在国家强制标准《GB2760食品添加剂使用标准》中规定，罗汉果甜苷可不限量用于各类食品。
但是目前的生产实际中，对罗汉果的工业化生产利用，主要集中在对罗汉果果实中甜苷的提取和分离，对罗汉果根、茎、叶等自然资源并未加以利用，而是当成废弃物处理。由于罗汉果种植和生产加工的规模日益增大，每年都有大量的罗汉果根被废弃。现代科学研究发现，罗汉果根中存在丰富的天然活性成分，包括黄酮类化合物、三萜皂苷和多糖等。这些天然化合物，有特殊的生理保健功效，如：增强免疫力、抗肿瘤、抗血栓、抗氧化、抗衰老、降血糖、降血压、降血脂等。
因此，研发出从罗汉果根中提取和分离各种天然活性成分的方法，变废为宝，对于环境保护，促进罗汉果整体产业的发展，以及促进种植地区农业经济的发展都具有重要的现实意义。
CN200810107427.6公开了从罗汉果根中提取的皂苷类化合物、其制备方法及其用途，是以罗汉果根为原料，经甲醇或乙醇加热回流提取、回收溶剂、溶解、大孔树脂柱吸附、洗脱等步骤，得到总皂苷提取物，再经硅胶柱层析和葡聚糖凝胶层析，得到皂苷单体。该方法使用了大量的有机溶剂，后续分离纯化步骤设备要求高，操作复杂，处理量极小，得率低，且只提取了罗汉果根中的一类活性成分——皂苷类化合物，未提取和分离其他活性成分，没有实现资源的综合利用，不适宜工业化生产。
颜小捷等公开了罗汉果根多糖的分离纯化、结构鉴定及抗肿瘤活性研究(《广西植物》，2012年1月)，是以罗汉果根为原料，经水煎煮、离心、减压浓缩、三氯甲烷/正丁醇萃取除杂、醇沉等步骤得到罗汉果根粗多糖。该方法过多的使用了有毒有害的化工溶剂，步骤繁琐，醇沉步骤使用的无水乙醇无法重复利用，且多糖在醇沉过程中的损耗不可避免。此外，该方法只提取了罗汉果根中的一类活性成分——多糖，未提取和分离其他活性成分，没有实现资源的综合利用，不适宜工业化生产。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种可同时提取多种活性成分，可将罗汉果根资源综合利用，工艺连贯、简单，可操作性强，生产成本低，不适用有毒有害化工溶剂，安全环保，且各种活性成分的含量高、收率高，适合工业化生产的从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法，包括以下步骤：
(1)热水提取：将罗汉果根破碎，加入热水搅拌分多次提取，提取液冷却至室温，陶瓷膜过滤，得提取滤液；
(2)聚酰胺吸附与洗脱：将提取滤液通过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂柱流出液收集待用；聚酰胺树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总黄酮；
(3)脱色脱盐：将步骤(2)聚酰胺树脂柱流出液通过两根串联的“阴-阳”离子交换树脂柱，得脱色脱盐液；
(4)大孔树脂吸附与洗脱：将脱色脱盐液通过大孔吸附树脂柱，大孔吸附树脂柱流出液收集待用；大孔吸附树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总三萜皂苷；
(5)总多糖的分离：将步骤(4)大孔吸附树脂柱流出液浓缩、干燥，得罗汉果根总多糖。
优选地，步骤(1)中，所述热水的温度为80～90℃，分多次提取是指分2-8次进行提取，优选分3-5次进行提取。所用热水的总量为罗汉果根重量的20-35倍，提取的总的时间9-15小时。每次提取所用热水的量和提取时间按照顺序依次递减。具体地，每次提取所用热水的量和提取时间比上一次递减1/6～1/3。比如如果分为三次提取，三次热水的重量分别为罗汉果根重量的8～15倍、6～10倍、6～8倍，三次提取的时间分别为4～5小时、3～4小时、2～3小时；如果分为四次提取，每次热水的重量分别为罗汉果根重量的8～12倍、6～10倍、5～8倍，4～6倍，四次提取的时间分别为3～4小时、2.5～3.5小时、2～3小时、1.5～2.5小时。
使用热水搅拌、分次提取的目的，是将罗汉果根中的三种水溶性有效成分——总黄酮、总三萜皂苷和总多糖——完全浸出。若热水的温度过低、用量过少或提取的时间过短，都无法充分的达到上述目的；若热水的温度过高、用量过多或提取的时间过长，都将造成能源或物料的浪费。
优选地，步骤(2)中，所述聚酰胺树脂的用量为罗汉果根重量的0.2～0.3倍(L/kg)，所述聚酰胺树脂柱的高径比为5～8:1，上柱的流速为0.5～1.0BV/小时。
优选地，步骤(3)中，所述阴离子交换树脂的种类为大孔型强碱性阴离子交换树脂，型号为D941、D945、LX-T5、LSD-762、LSA-700、LX-22；所述阳离子交换树脂的种类为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，型号为001×7、001×8、001×12、001×16。
优选地，步骤(3)中，所述阴离子交换树脂的用量为罗汉果根重量的0.1～0.2倍(L/kg)，所述阴离子交换树脂柱的高径比为5～8:1，物料通过阴离子交换树脂柱的流速为1～2BV/小时；所述阳离子交换树脂的体积用量为罗汉果根重量的0.1～0.2倍(L/kg)，阳离子交换树脂柱的高径比为5～8:1，物料通过阳离子交换树脂柱的流速为1～2BV/小时。
优选地，步骤(4)中，所述大孔吸附树脂的种类为非极性、中极性或极性大孔吸附树脂，具体型号为LX-11、LX-60、LX-28、LX-38、LSA-10、LSA-7、LX-8、LX-17、XDA-8。优选地，步骤(4)中，所述大孔吸附树脂的用量为罗汉果根重量的0.2～0.3倍(L/kg)，大孔吸附树脂柱的高径比为5～8:1，上柱的流速为0.5～1.0BV/h。
本发明方法中，1BV＝1个柱体积。
本发明采用热水多次提取将罗汉果根中总黄酮、总三萜皂苷和总多糖三种有效成分完全浸出。本发明预料不到地发现，在分别利用聚酰胺树脂，阴离子交换树脂，阳离子交换树脂和大孔吸附树脂对三种有效成分进行了分离和纯化，严格按照本申请中树脂柱的组合使用顺序，能够同时得到纯度和收率均超过了90％的总黄酮、总三萜皂苷和总多糖，本申请步骤(2)、(4)、(5)中所述的总黄酮、总三萜皂苷和总多糖也指的是质量纯度大于90％的相应产品。
本发明方法的有益效果如下：
(1)本发明通过一种连续型的方法，得到了三种具有经济价值的产物，即罗汉果总黄酮、总三萜皂苷和总多糖。三种产物的含量和收率均令人满意，优选实施例中三种产品的纯度和收率均超过了90％，经济价值高，是一种对罗汉果的综合利用方法。
(2)本发明方法提供了一种全新的可同时提取多种活性成分，可将罗汉果根资源综合利用，工艺连贯、简单，可操作性强，生产成本低，不使用有毒有害化工溶剂，安全环保，适合工业化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
本发明实施例所使用的罗汉果根(干燥)购于湖南华诚生物资源股份有限公司罗汉果种植基地，其中总黄酮的含量为2.27wt％，总三萜皂苷的含量为1.39wt％，总多糖的含量为5.65wt％。本发明实施例所使用的阴、阳离子交换树脂和大孔吸附树脂均购于西安蓝晓科技新材料股份有限公司；本发明实施例所使用的辅料或化学试剂，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。
本发明实施例中，采用紫外分光光度法测定罗汉果根总黄酮的含量，采用香草醛-高氯酸比色法测定罗汉果根总三萜皂苷的含量，采用苯酚-硫酸比色法测定罗汉果根总多糖的含量。
实施例1
(1)热水提取：取干燥罗汉果根20kg，破碎，依次加入温度为85℃的热水240kg、200kg、160kg，分别搅拌提取4小时、3小时、2小时，合并提取液，冷却至室温，陶瓷膜过滤，得提取滤液；
(2)聚酰胺吸附与洗脱：将提取滤液以0.8BV/小时的流速通过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂的用量为6L，聚酰胺树脂柱的高径比为6:1，聚酰胺树脂柱流出液收集待用；聚酰胺树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总黄酮0.47kg；
(3)脱色脱盐：将步骤(2)聚酰胺树脂柱流出液以1.5BV/小时的流速通过两根串联的“阴-阳”离子交换树脂柱，阴离子交换树脂的型号为D941，阴离子交换树脂的用量为3L，阴离子交换树脂柱的高径比为8:1；阳离子交换树脂的型号为001×7，阳离子交换树脂的用量为3L，阳离子交换树脂柱的高径比为8:1，得脱色脱盐液；
(4)大孔树脂吸附与洗脱：将脱色脱盐液以0.5BV/小时的流速通过大孔吸附树脂柱，大孔吸附树脂的型号为LX-11，大孔吸附树脂的用量为6L，大孔吸附树脂柱的高径比为6:1，大孔吸附树脂柱流出液收集待用；大孔吸附树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总三萜皂苷0.28kg；
(5)总多糖的分离：将步骤(4)大孔吸附树脂柱流出液浓缩、干燥，得罗汉果根总多糖1.17kg。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为92.53％，罗汉果根总黄酮的收率为95.79％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为93.78％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为94.45％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为92.53％，罗汉果根总多糖的收率为95.81％。
实施例2
(1)热水提取：取干燥罗汉果根50kg，破碎，依次加入温度为80℃的热水750kg、500kg、400kg，分别搅拌提取4小时、3小时、3小时，合并提取液，冷却至室温，陶瓷膜过滤，得提取滤液；
(2)聚酰胺吸附与洗脱：将提取滤液以1.0BV/小时的流速通过聚酰胺树脂柱(聚酰胺树脂的用量为15L，聚酰胺树脂柱的高径比为8:1)，聚酰胺树脂柱流出液收集待用；聚酰胺树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总黄酮1.12kg；
(3)脱色脱盐：将步骤(2)聚酰胺树脂柱流出液以1BV/小时的流速通过两根串联的“阴-阳”离子交换树脂柱，阴离子交换树脂的型号为D945，阴离子交换树脂的用量为10L，阴离子交换树脂柱的高径比为6:1；阳离子交换树脂的型号为001×8，阳离子交换树脂的用量为10L，阳离子交换树脂柱的高径比为6:1，得脱色脱盐液；
(4)大孔树脂吸附与洗脱：将脱色脱盐液以0.8BV/小时的流速通过大孔吸附树脂柱，大孔吸附树脂的型号为LX-38，大孔吸附树脂的用量为15L，大孔吸附树脂柱的高径比为5:1，大孔吸附树脂柱流出液收集待用；大孔吸附树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总三萜皂苷0.67kg；
(5)总多糖的分离：将步骤(4)大孔吸附树脂柱流出液浓缩、干燥，得罗汉果根总多糖2.9kg。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为93.83％，罗汉果根总黄酮的收率为92.59％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为95.12％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为91.70％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为94.34％，罗汉果根总多糖的收率为96.85％。
实施例3
(1)热水提取：取干燥罗汉果根30kg，破碎，依次加入温度为90℃的热水300kg、240kg、240kg，分别搅拌提取3小时、2小时、2小时，合并提取液，冷却至室温，陶瓷膜过滤，得提取滤液；
(2)聚酰胺吸附与洗脱：将提取滤液以0.6BV/小时的流速通过聚酰胺树脂柱(聚酰胺树脂的用量为6L，聚酰胺树脂柱的高径比为7:1)，聚酰胺树脂柱流出液收集待用；聚酰胺树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总黄酮0.66kg；
(3)脱色脱盐：将步骤(2)聚酰胺树脂柱流出液以1.2BV/小时的流速通过两根串联的“阴-阳”离子交换树脂柱(阴离子交换树脂的型号为LX-T5，阴离子交换树脂的用量为6L，阴离子交换树脂柱的高径比为7:1；阳离子交换树脂的型号为001×16，阳离子交换树脂的用量为6L，阳离子交换树脂柱的高径比为7:1)，得脱色脱盐液；
(4)大孔树脂吸附与洗脱：将脱色脱盐液以1.0BV/小时的流速通过大孔吸附树脂柱(大孔吸附树脂的型号为LSA-10，大孔吸附树脂的用量为6L，大孔吸附树脂柱的高径比为7:1)，大孔吸附树脂柱流出液收集待用；大孔吸附树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总三萜皂苷0.41kg；
(5)总多糖的分离：将步骤(4)大孔吸附树脂柱流出液浓缩、干燥，得罗汉果根总多糖1.68kg。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为94.16％，罗汉果根总黄酮的收率为91.26％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为92.97％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为91.41％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为93.71％，罗汉果根总多糖的收率为92.88％。
实施例4
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于步骤(1)中分为四次热水提取，依次加入温度为85℃的热水200kg、160kg、120kg，80kg分别搅拌提取3.5小时、3小时、2.5小时、2小时，合并四次热水提取的提取液。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为94.43％，罗汉果根总黄酮的收率为91.82％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为93.26％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为91.75％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为94.20％，罗汉果根总多糖的收率为93.17％。
实施例5
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于步骤(2)中聚酰胺树脂柱用量为2L。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为93.75％，罗汉果根总黄酮的收率为78.30％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为93.57％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为94.32％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为92.57％，罗汉果根总多糖的收率为95.93％。
实施例6
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于步骤(2)中聚酰胺树脂柱的高径比为4:1，流速1.3BV/小时。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为91.36％，罗汉果根总黄酮的收率为85.78％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为93.62％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为94.37％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为92.51％，罗汉果根总多糖的收率为95.85％。
实施例7
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于步骤(3)的脱色脱盐步骤中，聚酰胺树脂柱流出液以2.5BV/小时的流速通过两根串联的“阴-阳”离子交换树脂柱。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为92.57％，罗汉果根总黄酮的收率为95.67％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为93.26％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为90.18％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为92.27％，罗汉果根总多糖的收率为92.54％。
实施例8
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于步骤(4)的大孔树脂吸附与洗脱中，大孔吸附树脂的用量为2L。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为92.55％，罗汉果根总黄酮的收率为95.81％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为90.37％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为88.62％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为90.78％，罗汉果根总多糖的收率为91.86％。
实施例9
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于步骤(4)的大孔树脂吸附与洗脱中，将脱色脱盐液以1.0BV/小时的流速通过大孔吸附树脂柱。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为92.46％，罗汉果根总黄酮的收率为95.68％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为92.85％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为93.80％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为91.92％，罗汉果根总多糖的收率为93.64％。
实施例10
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于步骤(4)的大孔树脂吸附与洗脱中，将脱色脱盐液以1.5BV/小时的流速通过大孔吸附树脂柱。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为92.52％，罗汉果根总黄酮的收率为95.73％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为92.36％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为88.76％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为89.92％，罗汉果根总多糖的收率为95.63％。
实施例11
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于步骤(4)的大孔树脂吸附与洗脱中，大孔吸附树脂柱的高径比为4:1。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为92.56％，罗汉果根总黄酮的收率为95.65％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为91.41％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为90.27％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为91.86％，罗汉果根总多糖的收率为95.37％。
对比例1
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于罗汉果根热水提取后，先进行两根串联的“阴-阳”(阴离子交换树脂和阳离子交换树脂的型号，用量，流速和实施例1一致)脱色脱盐，再进行聚酰胺树脂的吸附和洗脱，和大孔吸附树脂的吸附和洗脱。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为93.47％，罗汉果根总黄酮的收率为83.79％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为92.85％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为91.24％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为94.17％，罗汉果根总多糖的收率为92.86％。
对比例2
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于步骤(1)中分为仅进行一次热水提取，热水温度为85℃。热水用量为600kg，搅拌提取10小时。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为92.37％，罗汉果根总黄酮的收率为79.74％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为90.21％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为82.57％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为91.74％，罗汉果根总多糖的收率为84.64％。
对比例3
其他条件和操作和实施例1相同，区别在于步骤(3)中聚酰胺树脂柱流出液以1BV/小时的流速，先通过型号为001×7的阳离子交换树脂，再通过型号为D941的阴离子交换树脂柱。即调换了“阴-阳”离子交换树脂的顺序为“阳-阴”。
经紫外分光光度法测定，本实施例所得罗汉果根总黄酮的含量为92.47％，罗汉果根总黄酮的收率为95.72％；经香草醛-高氯酸比色法测定，所得罗汉果根总三萜皂苷的含量为87.63％，罗汉果根总三萜皂苷的收率为86.87％；经苯酚-硫酸比色法测定，所得罗汉果根总多糖的含量为92.36％，罗汉果根总多糖的收率为91.48％。
对比例4
(1)热水提取：取干燥罗汉果根20kg，破碎，依次加入温度为85℃的热水240kg、200kg、160kg，分别搅拌提取4小时、3小时、2小时，合并提取液，冷却至室温，陶瓷膜过滤，得提取滤液；
(2)大孔树脂吸附与洗脱：将提取液以0.5BV/小时的流速通过大孔吸附树脂柱，大孔吸附树脂的型号为LX-11，大孔吸附树脂的用量为6L，大孔吸附树脂柱的高径比为6:1，大孔吸附树脂柱流出液收集待用；大孔吸附树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得提取物A0.95kg；
经检测，提取物A为罗汉果根总黄酮和罗汉果根总三萜皂苷的混合物，其中，罗汉果根总黄酮的含量为45.89％，罗汉果根总三萜皂苷的含量为28.26％。
(3)脱色脱盐：将步骤(2)大孔吸附树脂柱流出液以1.5BV/小时的流速通过两根串联的“阴-阳”离子交换树脂柱，阴离子交换树脂的型号为D941，阴离子交换树脂的用量为3L，阴离子交换树脂柱的高径比为8:1；阳离子交换树脂的型号为001×7，阳离子交换树脂的用量为3L，阳离子交换树脂柱的高径比为8:1，得脱色脱盐液；
(4)聚酰胺吸附与洗脱：将步骤(3)脱色脱盐液以0.8BV/小时的流速通过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂的用量为6L，聚酰胺树脂柱的高径比为6:1，聚酰胺树脂柱流出液收集待用；聚酰胺树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得提取物B 0.01kg；
经检测，提取物B中罗汉果根总黄酮、罗汉果根总三萜皂苷和罗汉果根总多糖均未检出。
(5)总多糖的分离：将步骤(4)聚酰胺树脂柱流出液浓缩、干燥，得提取物C1.15kg。
经检测，提取物C为罗汉果根总多糖，其中，罗汉果根总多糖的含量为91.25％。
本对比例调换了聚酰胺和大孔树脂的位置，结果是大孔树脂将黄酮和三萜皂苷全部吸附、无法分离；聚酰胺没有吸附任何目标成分。可见，本发明中，各树脂柱吸附和分离的顺序不可调换，否则无法达到本发明要达到的技术效果。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细制备方法，但本发明并不局限于上述详细制备方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细制备方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (9)

1.一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法，包括以下步骤：
（1）热水提取：将罗汉果根破碎，加入热水搅拌分多次提取，提取液冷却至室温，陶瓷膜过滤，得提取滤液；
（2）聚酰胺吸附与洗脱：将提取滤液通过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂柱流出液收集待用；聚酰胺树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总黄酮；所述聚酰胺树脂的用量为罗汉果根重量的0.2～0.3倍，单位L/kg，所述聚酰胺树脂柱的高径比为5～8:1，上柱的流速为0.5～1.0 BV/小时；
（3）脱色脱盐：将步骤（2）聚酰胺树脂柱流出液通过两根串联的“阴-阳”离子交换树脂柱，得脱色脱盐液；阴离子交换树脂的种类为大孔型强碱性阴离子交换树脂，阳离子交换树脂的种类为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂；所述阴离子交换树脂的用量为罗汉果根重量的0.1～0.2倍，单位L/kg，所述阴离子交换树脂柱的高径比为5～8:1，物料通过阴离子交换树脂柱的流速为1～2 BV/小时；所述阳离子交换树脂的体积用量为罗汉果根重量的0.1～0.2倍，单位L/kg，阳离子交换树脂柱的高径比为5～8:1，物料通过阳离子交换树脂柱的流速为1～2 BV/小时；
（4）大孔树脂吸附与洗脱：将脱色脱盐液通过大孔吸附树脂柱，大孔吸附树脂柱流出液收集待用；大孔吸附树脂柱用乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得罗汉果根总三萜皂苷；所述大孔吸附树脂的用量为罗汉果根重量的0.2～0.3倍，单位L/kg，大孔吸附树脂柱的高径比为5～8:1，上柱的流速为0.5～1.0 BV/h；
（5）总多糖的分离：将步骤（4）大孔吸附树脂柱流出液浓缩、干燥，得罗汉果根总多糖。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述热水的温度为80～90℃，分多次提取是指分2-8次进行提取。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，分多次提取是指分3-5次进行提取。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所用热水的总量为罗汉果根重量的20-35倍，提取的总的时间9-15小时。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，每次提取所用热水的量和提取时间按照顺序依次递减。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，每次提取所用热水的量和提取时间比上一次递减1/6~1/3。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述阴离子交换树脂为D941、D945、LX-T5、LSD-762、LSA-700或LX-22；所述阳离子交换树脂为001×7、001×8、001×12或001×16。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述大孔吸附树脂的种类为非极性、中极性或极性大孔吸附树脂。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂选自LX-11、LX-60、LX-28、LX-38、LSA-10、LSA-7、LX-8、LX-17或XDA-8。
CN202010111863.1A 2020-02-24 2020-02-24 一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法 Active CN111297936B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010111863.1A CN111297936B (zh) 2020-02-24 2020-02-24 一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010111863.1A CN111297936B (zh) 2020-02-24 2020-02-24 一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111297936A CN111297936A (zh) 2020-06-19
CN111297936B true CN111297936B (zh) 2021-08-10

Family

ID=71161822

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010111863.1A Active CN111297936B (zh) 2020-02-24 2020-02-24 一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111297936B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111956567A (zh) * 2020-09-30 2020-11-20 邓婕 一种头发生理调节剂及其制备和使用方法
CN113398157A (zh) * 2021-07-14 2021-09-17 湖南华诚生物资源股份有限公司 从罗汉果花中连续提取分离多种天然活性成分的方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1375499A (zh) * 2002-03-28 2002-10-23 何伟平 从罗汉果中提取分离多种成份的方法
CN101440118A (zh) * 2008-12-26 2009-05-27 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 从罗汉果根中提取的皂苷类化合物、其制备方法及其用途
CN204981707U (zh) * 2015-06-29 2016-01-20 吉首大学 一种从罗汉果中提取皂甙和多糖的装置
CN109053821A (zh) * 2018-09-30 2018-12-21 湖南华诚生物资源股份有限公司 从罗汉果叶中提取茶多酚、总氨基酸、黄酮化合物的方法
CN110041439A (zh) * 2019-03-29 2019-07-23 湖南华诚生物资源股份有限公司 一种从罗汉果块根中提取淀粉的方法
CN110776580A (zh) * 2019-11-19 2020-02-11 湖南华诚生物资源股份有限公司 一种从罗汉果上柱流出废液中回收高含量酸性多糖的方法
CN111848708A (zh) * 2020-07-27 2020-10-30 湖南华诚生物资源股份有限公司 从罗汉果提取渣中分离角鲨烯等多种活性成分的方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1375499A (zh) * 2002-03-28 2002-10-23 何伟平 从罗汉果中提取分离多种成份的方法
CN101440118A (zh) * 2008-12-26 2009-05-27 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 从罗汉果根中提取的皂苷类化合物、其制备方法及其用途
CN204981707U (zh) * 2015-06-29 2016-01-20 吉首大学 一种从罗汉果中提取皂甙和多糖的装置
CN109053821A (zh) * 2018-09-30 2018-12-21 湖南华诚生物资源股份有限公司 从罗汉果叶中提取茶多酚、总氨基酸、黄酮化合物的方法
CN110041439A (zh) * 2019-03-29 2019-07-23 湖南华诚生物资源股份有限公司 一种从罗汉果块根中提取淀粉的方法
CN110776580A (zh) * 2019-11-19 2020-02-11 湖南华诚生物资源股份有限公司 一种从罗汉果上柱流出废液中回收高含量酸性多糖的方法
CN111848708A (zh) * 2020-07-27 2020-10-30 湖南华诚生物资源股份有限公司 从罗汉果提取渣中分离角鲨烯等多种活性成分的方法

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Antioxidant Capacities of Hot Water Extracts and Endopolysaccharides of Selected Chinese Medicinal Fruits;Sang Chul Jeong，等;《Cancers》;20160309;第8卷(第33期);第1-13页 *
Identification of Flavone Aglycones in Momordica grosvenori Flower;CHEN Quan-bin，等;《Medicinal Plant》;20101130;第1卷(第11期);第59-61页 *
罗汉果化学成分及药理作用研究进展;王勤;《中药材》;20010331;第24卷(第0期);第215-217页 *
罗汉果块根中药用成份提取及其药理作用初探;陈全斌，等;《化学世界》;20030131(第1期);第21-15页 *
罗汉果块根粗提取物抗氧化及抑菌能力;蓝群，等;《北方园艺》;20181031(第10期);第144-149页 *
罗汉果根多糖的分离纯化、结构;颜小捷，等;《广西植物》;20120131;第32卷(第1期);第138-142页 *
罗汉果的药理作用和毒性研究进展;张宏，等;《中国农学通报》;20110531;第27卷(第5期);第430-433页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111297936A (zh) 2020-06-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1935820B (zh) 无患子总皂苷的制备方法
CN107033209A (zh) 一种同时提取无农残罗汉果甜苷和水溶性膳食纤维的方法
CN106279339B (zh) 一种高纯度罗汉果苷v的分离纯化方法
CN106967142B (zh) 一种同时提取罗汉果甜苷v、ⅵ和11-o基苷v的方法
CN111297936B (zh) 一种从罗汉果根中提取并分离总黄酮、总三萜皂苷和总多糖的方法
CN112209979B (zh) 自甘草酸单铵盐母液膏中联合分离高纯度甘草苷、去苦味甘草甜味素及甘草总黄酮生产工艺
WO2020063894A1 (zh) 一种甜叶菊的工业化利用方法及其甜菊糖苷和绿原酸
Zhang et al. Efficient extraction of flavonoids from Polygonatum sibiricum using a deep eutectic solvent as a green extraction solvent
CN109053821B (zh) 从罗汉果叶中提取茶多酚、总氨基酸、黄酮化合物的方法
CN105713061A (zh) 一种罗汉果苷v含量≥95％的罗汉果提取物的制备方法
CN112321450B (zh) 一种羟基-α-山椒素单体的制备方法
CN110981921B (zh) 一种从无花果同步提取多种有效成分的连续化方法
CN102267906B (zh) 一种绿原酸的提取方法
CN115197287A (zh) 综合提取甜茶中的甜茶苷、槲皮素和鞣花酸的方法及其应用
CN110917240B (zh) 一种从青钱柳中分离多种有效成分的连续化方法
CN109320576B (zh) 一种高含量罗汉果苷v的生产方法
CN110786443B (zh) 一种甜茶提取物脱苦脱涩的方法
CN108997359B (zh) 一种从甜菊糖生产废渣中提取叶绿素的方法
CN113616564B (zh) 一种从莲花中提取水溶性黄酮的方法
CN107213180B (zh) 一种三七黄酮的分离提取方法
CN114014828B (zh) 一种从甜菊糖提取渣中回收槲皮素的方法及其应用
CN111004247B (zh) 一种制备4-羟基芝麻素的植物源新原料及其方法
CN103980331B (zh) 以杜仲叶提取绿原酸后药渣制备桃叶珊瑚苷的方法
CN116270790B (zh) 一种罗汉果茎提取物的制备方法
CN107759456B (zh) 金银花中提取的二苯醚类化合物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant