CN111264826A - 一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法 - Google Patents

一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽‑硒螯合物的制备方法，包括以下步骤：(1)将核桃仁进行脱脂处理后，采用油脂降解菌进行第一次发酵，得到第一发酵物料；(2)第一发酵物料加入一定比例的蔗糖、芳香沙雷氏菌和运动单胞菌，进行第二次发酵得到含有益生元物质的第二发酵物料；(3)第二发酵物料经复合酶酶解得到蛋白肽；(4)得到的蛋白肽添加富硒酵母进行硒螯合处理；(5)将步骤(4)得到的硒螯合物料经预冻、真空冷冻干燥、包装、灭菌后即可。本发明可为人体提供硒元素，其在制备的过程中进一步降低油脂含量，从而相应提高了蛋白的提取率、纯度以及蛋白多肽的转化率，还具有调节肠道菌群的效果。

Description

一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法
【技术领域】
本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法。
【背景技术】
核桃为世界四大干果之一，核桃外形其貌不扬，但是其营养价值和药用价值却很高，《本草纲目》记载，核桃性温、味甘、无毒，有健胃、补血、润肺、养神等功效。现代科学分析表明，核桃仁富含蛋白质、多种氨基酸、微量元素、维生素等，是一种难得的强壮滋补品。核桃主要的深加工方式是核桃油生产，主要采用压榨法，此法会产生大量的副产物—核桃粕，目前主要做为饲料，大大降低了核桃蛋白的经济价值。为了有效利用核桃蛋白资源，企业和科研院所对核桃粕进行了深加工研究，目前市场上已有核桃蛋白粉和核桃肽产品。
硒(Se)是人体必需的一种重要矿质元素，具有重要的生理功能，已有的大量研究表明很多种疾病都与硒营养状况密切相关。人体主要是通过饮食获得硒，人工补硒的方法是口服含硒制剂。一般补硒的方法是用无机硒化合物(亚硒酸钠和硒酸钠)制成口服制剂。但是，无机硒强化剂吸收和利用的效果不理想，生物有效性低，而且具有较强的毒副作用，最低致死量相对较小，中毒量与需要量之间范围小，存在较大的安全隐患，因而被严格限制其使用。研究显示，无机硒经生物转化后的有机硒化合物毒性低，吸收率更高，生物利用率和生物活性也更高，在激发免疫反应上比无机硒显著。
利用生物技术对核桃进行蛋白质资源的深加工，然后利用无机硒进行螯合，制备多肽-硒螯合物，将无机硒转变成有机硒生物活性多肽-硒螯合物能显著提高硒元素的吸收率和利用率，目前现有技术中公开的该技术中，除了提高人体对硒元素的吸收率和利用率之外，核桃脂肪含量高的特点未得到改善，主要由于核桃粕采用传统的脱脂方法进行脱脂处理后，核桃粕中还含有较多油脂，过多的油脂将会导致后续进行蛋白提取时出现严重的乳化现象，极大的限制核桃粕中蛋白的溶出，导致蛋白提取率和蛋白纯度降低，从而相应的降低蛋白多肽的转化率；也较少发现有其他的效果。
【发明内容】
鉴于上述内容，有必要提供一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，该核桃蛋白肽-硒螯合物可为人体提供硒元素，其在制备的过程中进一步降低油脂含量，从而相应提高了蛋白的提取率、纯度以及蛋白多肽的转化率，还具有调节肠道菌群的效果。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将核桃仁采用液压冷榨法进行脱脂处理后，得到的核桃粕经粉粹、过筛处理，得到核桃粕粉，接着按料液比1:3-6的比例往核桃粕粉中添加蒸馏水，搅匀后，按重量百分比加入核桃粕重量3-7％的油脂降解菌，搅匀后进行第一次超声处理，第一次超声处理结束后置于28-38℃的条件下进行第一次发酵处理6-12h，得到第一发酵物料；其中，所述油脂降解菌为铜绿假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌和粗状假丝酵母组成的复合菌种，所述铜绿假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌和粗状假丝酵母的重量份比为1-2:1.5-3:2-3；
(2)按重量百分比取核桃粕重量12-18％的蔗糖、2-6％的芳香沙雷氏菌和5-9％的运动单胞菌，并添加入步骤(1)得到的第一发酵物料中，搅匀后进行第二次超声处理，第二次超声波处理结束后，置于28-38℃的条件下进行第二次发酵处理6-12h，得到第二发酵物料；
(3)将步骤(2)得到的第二发酵物料过胶体磨细化后，经高速剪切分散均匀，得到分散物料，接着，按重量百分比取分散物料0.1-1％的复合酶，并添加入所得到的分散物料中，所述复合酶由单宁酶、果胶酶、纤维素酶和淀粉酶按重量份比为0.8-1.2:1.5-2.5:4.5-5.5:9.5-10.5的比例构成，搅匀后置于45-55℃的条件下进行第一次酶解处理1-3h，得到第一酶解液；接着，调整第一酶解液pH至6.5-7.5后，往其中添加0.5-2％的中性蛋白酶，搅匀后置于50-60℃的条件下进行第二次酶解处理2-5h，得到第二酶解液；
(4)将步骤(3)得到的第二酶解液经高压均质处理后，往其中添加0.5-1％富硒酵母，搅匀后进行第三次超声处理，第三次超声波处理结束后置于28-32℃的条件下第三次发酵处理1-3d，得到硒螯合物料；
(5)将步骤(4)得到的硒螯合物料置于零下80℃的条件下预冻24h后，经真空冷冻干燥至含水量低于5％，接着包装后进行灭菌处理，即得到核桃蛋白肽-硒螯合物。
在本发明中，进一步的说明，步骤(1)中所述过筛处理中筛网的目数为60-80目。
在本发明中，进一步的说明,步骤(1)中所述第一次超声处理的条件为：频率为150-300W，温度为28-38℃，处理时间为50-60min。
在本发明中，进一步的说明，步骤(2)中所述第二次超声处理的条件为：频率为150-300W，温度为28-38℃，处理时间为50-60min。
在本发明中，进一步的说明，步骤(3)中酶解过程均在震荡水浴锅中进行，震荡速度为140-160r/min。
在本发明中，进一步的说明,步骤(4)中所述均质压力高压为20-40Mpa，均质压力低压为5-10Mpa，均质温度为常温。
在本发明中，进一步的说明，步骤(4)中所述第三次超声处理的条件为：频率为150-300W，温度为28-38℃，处理时间为50-60min。
在本发明中，进一步的说明,步骤(5)中所述灭菌采用巴氏灭菌法，时间为30-40min。
本发明中部分原材料的特点及作用如下：
核桃仁：核桃仁又称胡桃仁，味甘，辛温，含有大量具有特殊结构的脂肪油、蛋白质、磷脂、亚油酸、赖氨酸、亚麻酸等，对大脑组织及机体代谢，有很重要的作用。还含有胡萝卜素、维生素A、维生素B、维生素C、维生素E、磷、钙等。
油脂降解菌：可降解油脂的微生物，铜绿假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌和粗状假丝酵母均具有不同程度降解油脂的能力，以三者按一定比例混合为复合菌种，可使各自的油脂降解效果进一步提高。
蔗糖：蔗糖是食品中有营养的甜味剂，它不但以化学合成甜味剂所不具备的特性成为食品中重要的添加剂，而且由于蔗糖具有独特的功能，有利于食品的加工和品质的提高；蔗糖可以作为酵母的营养剂，为发酵过程提供能源；在α-葡萄糖基转移酶的作用下可转化为异麦芽酮糖。
芳香沙雷氏菌：可分泌α-葡萄糖基转移酶。
运动单胞菌：可产生山梨醇。
单宁酶：该酶可由霉菌，如黑曲霉、米曲霉生产。主要作用是使味涩的鞣质加水分解为鞣酸、葡萄糖和没食子酸，利于提高食品风味。
果胶酶：对分解果胶具有良好的作用。
纤维素酶：是酶的一种，在分解纤维素时起生物催化作用。是可以将纤维素分解成寡糖或单糖的蛋白质。
淀粉酶：全称是1，4-α-D-葡聚糖水解酶，催化淀粉及糖原水解，生成葡萄糖、麦芽糖及含有α1，6-糖苷键支链的糊精。
中性蛋白酶：能在中性条件下水解食品中蛋白质的肽键，释放更多的氨基酸或多肽。
富硒酵母：富硒酵母就是在培养酵母的过程中加入硒元素，酵母生长时吸收利用了硒，使硒与酵母体内的蛋白质和多糖有机结合转化为生物硒，从而消除了化学硒(如亚硒酸钠)对人体的毒副反应和肠胃刺激，使硒能够更高效、更安全地被人体吸收利用。富硒酵母也是迄今为止国内最高效、最安全、营养最均衡的补硒制剂。
值得注意的是，本发明在制备的过程中，先用传统方法进行脱脂处理后，加入油脂降解菌第一次发酵进一步降解油脂，而铜绿假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌和粗状假丝酵母均具有不同程度降解油脂的能力，本发明经过严格配比，使得三种油脂降解菌的降解能力得到进一步提高，从而进一步减少食品油脂含量，减少人体对油脂的摄入，保护消费者健康；且通过将油脂含量的降低，明显地改善了乳化现象，使核桃粕中的蛋白质更好地溶出，提高了蛋白的提取率和纯度，也提高了蛋白多肽的转化率。
另外值得注意的是，在第二次发酵中添加的蔗糖、芳香沙雷氏菌和运动单胞菌可使得产品具有益生元作用，具体为：在发酵的过程中，芳香沙雷氏菌和运动单胞菌大量繁殖，并分别产生α-葡萄糖基转移酶和山梨醇，其中，α-葡萄糖基转移酶原料中的蔗糖转化为异麦芽酮糖，异麦芽酮糖为功能性低聚糖，进入肠道内优先为双歧杆菌等有益菌所利用，是肠道有益菌的增殖因子，同时还抑制肠道中有害菌的生长；而山梨醇为功能性糖醇，亦属于功能糖的一种，同样具有促进双歧杆菌和乳酸杆菌等肠道有益菌的生长，抑制病原菌和腐败菌等有害菌生长的作用，因此本发明在发酵过程产生的功能性糖，通过促进肠道有益菌的生长同时抑制有害菌的生长繁殖，达到有效调节人体肠道菌群的作用。
本发明以核桃粕为主原料，因核桃粕含有两种人体必需脂肪酸、八种人体必需氨基酸以及多种维生素，可为人体补充一定的营养，同时蛋白肽经与螯合硒，通过肽的转运系统，螯合物完整透过肠黏膜层进人血液，大大提高了人体对硒元素的吸收利用。由于油脂降解菌使得油脂含量大大降低，改善了后续酶解中的乳化现象，使酶解能更好地进行，缩短了酶解反应的时间，在进行酶解的过程中，所加入的复合酶可促进细胞破裂有利于获得蛋白肽，其中，单宁酶可降解核桃仁中的鞣质，有利提高食品风味和口感，同时防止鞣质与蛋白质结合；果胶酶和纤维素酶将核桃仁细胞壁分解，以释放淀粉、蛋白质等细胞内溶物，淀粉再经淀粉酶进一步水解，而中性蛋白酶将蛋白质水解为多肽。
由于采用上述方案，本发明具有以下有益效果：
1.本发明营养丰富，同时获得的蛋白肽与硒的螯合物，通过肽的转运系统，螯合物完整透过肠黏膜层进人血液，提高了人体对硒元素的吸收利用。经检测显示，由本发明制成的成品硒螯合率达67.1％，证明本发明硒螯合方法的可行性，螯合成功的成品可为人体所吸收，从而有效为人体补充硒元素。
2.本发明在经传统脱脂后，再经油脂降解菌进一步将油脂分解，减少食品油脂含量，减少人体对油脂的摄入。经检测，经本发明方法制成的成品含油量降至4.6％。提高了蛋白的提取率和纯度，也提高了蛋白多肽的转化率。经检测，经本发明方法制备的成品，蛋白提取率达94％，蛋白纯度达92％和多肽转化率达84％，相比于不采用油脂降解菌发酵的试验组均有不同程度的提高。
3.本发明因在发酵的过程中添加蔗糖、芳香沙雷氏菌和运动单胞菌，产生异麦芽酮糖和山梨醇两种益生元，可选择性的刺激肠道有益菌的繁殖，同时抑制有害菌和致病菌的生长，达到调节肠道菌群的作用。经研究调查显示，受试者在连续试吃本发明制成的成品14天后，受试者粪便中的双歧杆菌和乳杆菌等肠道有益菌的数量均明显增多，而产气荚膜梭菌和肠杆菌等有害菌均有一定程度的减少，显示出较好的调节肠道菌群的效果。
【具体实施方式】
本发明提供了提供一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将核桃仁采用液压冷榨法进行脱脂处理后，得到的核桃粕经粉粹、过60目筛，得到核桃粕粉，接着按料液比1:3的比例往核桃粕粉中添加蒸馏水，搅匀后，按重量百分比加入核桃粕重量3％的油脂降解菌，搅匀后置于频率为150W、温度为28℃的条件下进行第一次超声处理50min，第一次超声处理结束后置于28℃的条件下进行第一次发酵处理6h，得到第一发酵物料；其中，所述油脂降解菌为铜绿假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌和粗状假丝酵母组成的复合菌种，所述铜绿假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌和粗状假丝酵母的重量份比为1:1.5:2。
(2)按重量百分比取核桃粕重量12％的蔗糖、2％的芳香沙雷氏菌和5％的运动单胞菌，并添加入步骤(1)得到的第一发酵物料中，搅匀后置于频率为150W、温度为28℃的条件下进行第一次超声处理50min，第二次超声波处理结束后，置于28℃的条件下进行第二次发酵处理6h，得到第二发酵物料。
(3)将步骤(2)得到的第二发酵物料过胶体磨细化后，经高速剪切分散均匀，得到分散物料，接着，按重量百分比取分散物料0.1％的复合酶，并添加入所得到的分散物料中，所述复合酶由单宁酶、果胶酶、纤维素酶和淀粉酶按重量份比为0.8:1.5:4.5:9.5的比例构成，搅匀后置于45℃的条件下进行第一次酶解处理1h，得到第一酶解液；接着，调整第一酶解液pH至6.5后，往其中添加0.5％的中性蛋白酶，搅匀后置于50℃的条件下进行第二次酶解处理2h，得到第二酶解液；其中，第一次酶解和所述第二次酶解过程均在震荡水浴锅中进行，震荡速度均为140r/min。
(4)将步骤(3)得到的第二酶解液经高压均质处理，所述均质压力高压为20Mpa，均质压力低压为5Mpa，均质温度为常温，高压均质处理后往其中添加0.5％富硒酵母，搅匀后置于频率为150W、温度为28℃的条件下进行第一次超声处理50min，第三次超声波处理结束后置于28℃的条件下第三次发酵处理1d，得到硒螯合物料；
(5)将步骤(4)得到的硒螯合物料置于零下80℃的条件下预冻24h后，经真空冷冻干燥至含水量低于5％，接着包装后采用巴氏灭菌法进行灭菌处理处理30min，即得到核桃蛋白肽-硒螯合物。
实施例2
一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将核桃仁采用液压冷榨法进行脱脂处理后，得到的核桃粕经粉粹、过60目筛，得到核桃粕粉，接着按料液比1:5的比例往核桃粕粉中添加蒸馏水，搅匀后，按重量百分比加入核桃粕重量4％的油脂降解菌，搅匀后置于频率为220W、温度为30℃的条件下进行第一次超声处理55min，第一次超声处理结束后置于30℃的条件下进行第一次发酵处理9h，得到第一发酵物料；其中，所述油脂降解菌为铜绿假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌和粗状假丝酵母组成的复合菌种，所述铜绿假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌和粗状假丝酵母的重量份比为1.5:2:2.5。
(2)按重量百分比取核桃粕重量15％的蔗糖、4％的芳香沙雷氏菌和7％的运动单胞菌，并添加入步骤(1)得到的第一发酵物料中，搅匀后置于频率为230W、温度为32℃的条件下进行第一次超声处理55min，第二次超声波处理结束后，置于32℃的条件下进行第二次发酵处理9h，得到第二发酵物料。
(3)将步骤(2)得到的第二发酵物料过胶体磨细化后，经高速剪切分散均匀，得到分散物料，接着，按重量百分比取分散物料0.6％的复合酶，并添加入所得到的分散物料中，所述复合酶由单宁酶、果胶酶、纤维素酶和淀粉酶按重量份比为1:2:5:10的比例构成，搅匀后置于50℃的条件下进行第一次酶解处理2h，得到第一酶解液；接着，调整第一酶解液pH至7.0后，往其中添加1.5％的中性蛋白酶，搅匀后置于55℃的条件下进行第二次酶解处理3.5h，得到第二酶解液；其中，第一次酶解和所述第二次酶解过程均在震荡水浴锅中进行，震荡速度均为150r/min。
(4)将步骤(3)得到的第二酶解液经高压均质处理，所述均质压力高压为30Mpa，均质压力低压为8Mpa，均质温度为常温，高压均质处理后往其中添加0.7％富硒酵母，搅匀后置于频率为230W、温度为30℃的条件下进行第一次超声处理55min，第三次超声波处理结束后置于30℃的条件下第三次发酵处理2d，得到硒螯合物料；
(5)将步骤(4)得到的硒螯合物料置于零下80℃的条件下预冻24h后，经真空冷冻干燥至含水量低于5％，接着包装后采用巴氏灭菌法进行灭菌处理处理35min，即得到核桃蛋白肽-硒螯合物。
实施例3
一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将核桃仁采用液压冷榨法进行脱脂处理后，得到的核桃粕经粉粹、过80目筛，得到核桃粕粉，接着按料液比1:6的比例往核桃粕粉中添加蒸馏水，搅匀后，按重量百分比加入核桃粕重量7％的油脂降解菌，搅匀后置于频率为300W、温度为38℃的条件下进行第一次超声处理60min，第一次超声处理结束后置于38℃的条件下进行第一次发酵处理12h，得到第一发酵物料；其中，所述油脂降解菌为铜绿假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌和粗状假丝酵母组成的复合菌种，所述铜绿假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌和粗状假丝酵母的重量份比为2:3:3。
(2)按重量百分比取核桃粕重量18％的蔗糖、6％的芳香沙雷氏菌和9％的运动单胞菌，并添加入步骤(1)得到的第一发酵物料中，搅匀后置于频率为300W、温度为38℃的条件下进行第一次超声处理60min，第二次超声波处理结束后，置于38℃的条件下进行第二次发酵处理12h，得到第二发酵物料。
(3)将步骤(2)得到的第二发酵物料过胶体磨细化后，经高速剪切分散均匀，得到分散物料，接着，按重量百分比取分散物料1％的复合酶，并添加入所得到的分散物料中，所述复合酶由单宁酶、果胶酶、纤维素酶和淀粉酶按重量份比为1.2:2.5:5.5:10.5的比例构成，搅匀后置于55℃的条件下进行第一次酶解处理3h，得到第一酶解液；接着，调整第一酶解液pH至7.5后，往其中添加2％的中性蛋白酶，搅匀后置于60℃的条件下进行第二次酶解处理5h，得到第二酶解液；其中，第一次酶解和所述第二次酶解过程均在震荡水浴锅中进行，震荡速度均为160r/min。
(4)将步骤(3)得到的第二酶解液经高压均质处理，所述均质压力高压为40Mpa，均质压力低压为10Mpa，均质温度为常温，高压均质处理后往其中添加1％富硒酵母，搅匀后置于频率为300W、温度为38℃的条件下进行第一次超声处理60min，第三次超声波处理结束后置于32℃的条件下第三次发酵处理3d，得到硒螯合物料；
(5)将步骤(4)得到的硒螯合物料置于零下80℃的条件下预冻24h后，经真空冷冻干燥至含水量低于5％，接着包装后采用巴氏灭菌法进行灭菌处理处理40min，即得到核桃蛋白肽-硒螯合物。
实施例4
一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其步骤(1)中不添加油脂降解菌，制备方法与实施例2相同。
实施例5
一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其步骤(2)中不添加蔗糖、香沙雷氏菌和运动单胞菌，制备方法与实施例2相同。
效果验证
为了进一步说明本发明核桃蛋白肽-硒螯合物的推广应用价值，按实施例1-5的方法制成成品后对各成品的各项指标进行评定。
(一)硒螯合率测定
测定方法：配制1μg/mL的硒标准溶液，精确量取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL的硒标准溶液，以去离子水加至10mL。加10mL混酸(硝酸：高氯酸＝4:1)电加热炉上消解至澄清淡黄色状态。添加5mL1:1盐酸(浓盐酸：蒸馏水)，电加热炉上继续消解至1mL。后加入10mL5％EDTA-2Na溶液，10mL盐酸羧胺溶液，混合后以1:1盐酸调节pH2-3之间。然后加入5‰DAB(3'3－二氨基联苯胺)，遮光静置30min，以40％NaOH调节溶液pH至6.8-7.0之间，以10mL甲苯萃取反应产物10min。取有机层溶液，在420nm处检测吸光值。
取实施例1-5制成的成品按以上步骤进行检测，计算硒的螯合率，螯合率的计算方法为：螯合率(％)＝(m1/m2)×100(m1为螯合物中硒元素的质量，m2为加入硒元素的质量)，并各实验组的螯合率将记录于下表1中,结果如下：
表1硒螯合情况表
实验组 实施例1成品 实施例2成品 实施例3成品 实施例4成品 实施例5成品
螯合率(％) 66.3 65.5 64.1 64.8 67.1
以上数据说明本发明硒螯合方法的可行性。螯合成功的成品可为人体所吸收，从而有效为人体补充硒元素。
(二)含油脂量测定
按照《食品安全国家标准食品中脂肪的测定》(GB 5009.6-2016)测定脂肪含量，每一组成品平行测定实验3次，取平均值，并分别记录于下表2中，结果如下：
表2油脂含量测定结果表
试验组 实施例1成品 实施例2成品 实施例3成品 实施例4成品 实施例5成品
脂肪含量(％) 4.9 4.6 5.1 9.5 4.8
以上可知，在发酵的过程中添加油脂降解菌的试验组，脂肪含量比不添加油脂降解菌的实验组低，说明本发明因在发酵过程中油脂降解菌的添加进一步降低了成品含油量，可减少人体脂肪的摄入量。
(三)蛋白提取率、蛋白纯度和多肽转化率测定
按实施例1-5的方法制成成品后，分别检测各个试验组的蛋白提取率、蛋白纯度和多肽转化率，并记录于下表3中，结果如下：
表3蛋白提取率、蛋白纯度和多肽转化率测定结果
实验组 蛋白提取率(％) 纯度(％) 多肽转化率(％)
实施例1 89 90 83
实施例2 94 92 84
实施例3 92 91 82
实施例4 67 64 72
实施例5 92 89 80
以上表3数据可知，实施例4由于在发酵的过程中不添加油脂降解菌，其蛋白提取率、蛋白纯度和多肽转化率均低于其他实验组，说明本发明因在发酵过程中油脂降解菌的添加进一步降低了成品含油量，从而改善了因油脂含量高导致蛋白提取率、蛋白纯度和多肽转化率降低的问题。
(四)调节肠道菌群效果验证
本试验旨在举例说明按本发明方法制备的成品对选自双歧杆菌、乳杆菌等人肠道益生菌的生长促进作用以及对产气荚膜梭菌和肠杆菌等人肠道有害菌的生长抑制作用。以实施例1-5制成的产品为试验样品，并选择志愿者作为受试者对产品进行试吃试验，具体如下：
(1)受试者的选择及分组
试验人员的选择标准：A.一个月内未患过胃肠疾病；B.一个月内未服用抗生素者；C.年龄在65岁以下各个年龄段的健康人士，女士不在妊娠或哺乳期；D.非过敏体质。
选择符合以上标准的志愿者100人，男女各半，将这些志愿者平均分为5个试验组，每组男女人数相同。
(2)试验样品的剂量和使用方法：每个试验组受试者每日服用试验样品一次，服用的量为300ml，连续服用14天，除此以外不改变平时的饮食习惯。
(3)检测指标：各试验组中双歧杆菌、乳杆菌、产气荚膜梭菌和肠杆菌的活菌数。
(4)试验方法
分别检测各试验组受试者试食前后双歧杆菌、乳杆菌、产气荚膜梭菌和肠杆菌等各肠道菌种的活菌变化，每个试验组各肠道活菌数以受试者的平均活菌数为参考，分别检测各试验组的试食前后各菌种的平均活菌数，并记录于表4中，结果如下：
表4各试验组的试食前后各菌种的平均活菌数(logcfu/g)
Figure BDA0002414394950000111
上表中，试验组1-5试验的样品分别对应实施例1-5制成的样品，由上表数据可知，由于试验组5试吃产品没有添加蔗糖、芳香沙雷氏菌和运动单胞菌，试食后双歧杆菌、乳杆菌、气荚膜梭菌和肠杆菌的数量无明显变化，而另外四个实验组中，受试者粪便中的双歧杆菌和乳杆菌的数量均明显增多，而产气荚膜梭菌和肠杆菌均有一定程度的减少，且以上各试验组在试验过程中未观察到对健康有不良反应，显示出发明具有较好的调节肠道菌群的效果。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (8)

1.一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将核桃仁采用液压冷榨法进行脱脂处理后，得到的核桃粕经粉粹、过筛处理，得到核桃粕粉，接着按料液比1:3-6的比例往核桃粕粉中添加蒸馏水，搅匀后，按重量百分比加入核桃粕重量3-7％的油脂降解菌，搅匀后进行第一次超声处理，第一次超声处理结束后置于28-38℃的条件下进行第一次发酵处理6-12h，得到第一发酵物料；其中，所述油脂降解菌为铜绿假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌和粗状假丝酵母组成的复合菌种，所述铜绿假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌和粗状假丝酵母的重量份比为1-2:1.5-3:2-3；
(2)按重量百分比取核桃粕重量12-18％的蔗糖、2-6％的芳香沙雷氏菌和5-9％的运动单胞菌，并添加入步骤(1)得到的第一发酵物料中，搅匀后进行第二次超声处理，第二次超声波处理结束后，置于28-38℃的条件下进行第二次发酵处理6-12h，得到第二发酵物料；
(3)将步骤(2)得到的第二发酵物料过胶体磨细化后，经高速剪切分散均匀，得到分散物料，接着，按重量百分比取分散物料0.1-1％的复合酶，并添加入所得到的分散物料中，所述复合酶由单宁酶、果胶酶、纤维素酶和淀粉酶按重量份比为0.8-1.2:1.5-2.5:4.5-5.5:9.5-10.5的比例构成，搅匀后置于45-55℃的条件下进行第一次酶解处理1-3h，得到第一酶解液；接着，调整第一酶解液pH至6.5-7.5后，往其中添加0.5-2％的中性蛋白酶，搅匀后置于50-60℃的条件下进行第二次酶解处理2-5h，得到第二酶解液；
(4)将步骤(3)得到的第二酶解液经高压均质处理后，往其中添加0.5-1％富硒酵母，搅匀后进行第三次超声处理，第三次超声波处理结束后置于28-32℃的条件下第三次发酵处理1-3d，得到硒螯合物料；
(5)将步骤(4)得到的硒螯合物料置于零下80℃的条件下预冻24h后，经真空冷冻干燥至含水量低于5％，接着包装后进行灭菌处理，即得到核桃蛋白肽-硒螯合物。
2.根据权利要求1所述的一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述过筛处理中筛网的目数为60-80目。
3.根据权利要求1所述的一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述第一次超声处理的条件为：频率为150-300W，温度为28-38℃，处理时间为50-60min。
4.根据权利要求1所述的一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述第二次超声处理的条件为：频率为150-300W，温度为28-38℃，处理时间为50-60min。
5.根据权利要求1所述的一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述第一次酶解和所述第二次酶解过程均在震荡水浴锅中进行，震荡速度均为140-160r/min。
6.根据权利要求1所述的一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于：步骤(4)中所述均质压力高压为20-40Mpa，均质压力低压为5-10Mpa，均质温度为常温。
7.根据权利要求1所述的一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述第三次超声处理的条件为：频率为150-300W，温度为28-38℃，处理时间为50-60min。
8.根据权利要求1所述的一种调节肠道菌群的核桃蛋白肽-硒螯合物的制备方法，其特征在于，步骤(5)中所述灭菌采用巴氏灭菌法，时间为30-40min。
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