CN111226798B - 一种以半夏叶片诱导珠芽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种以半夏叶片诱导珠芽的方法,以半夏无菌苗的叶片为外植体,接入珠芽诱导培养基中,应用植物生长调节剂ZT、TDZ和IAA不同浓度配制的培养基对外植体进行诱导,使半夏离体叶片产生珠芽。只需一步就能产生珠芽,珠芽数量多,需要时间约为40 d,用时短,成本低,而且不受时间季节制约,可在短时间内生产出大量的珠芽,省时省力,为半夏生产提供大量质优价廉的种苗,将取得巨大经济效益和社会效益。本发明方法具有操作简单、工序少、成本低、稳定性好、安全高效等优点。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体是一种以半夏叶片诱导珠芽的方法。
背景技术
中药半夏为天南星科植物半夏属半夏Pinelliaternata(Thunb.)Breit. 植物干燥的块茎,具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结等功效。半夏在化痰、燥湿健脾、降逆止呕等方面的中成药有200 余种。2020年新冠肺炎疫病在全世界爆发,中医药成为我国遏制和战胜疫情的法宝,半夏的炮制品法半夏为其中药方的主要成分之一。随着中医药在世界范围内推广应用,半夏的需求将会进一步加大。
由于半夏野生资源被掠夺性采集和生境被破坏,野生资源已无法满足市场需求,所以近年来半夏人工栽培规模在不断扩大,种苗需求量也在不断增加。目前半夏的种苗还是以块茎繁殖为主,珠芽繁殖为辅。块茎繁殖具有生长快、产量较高等优点,但成本高,每个块茎的成本为0.15~0.2元(以当前种茎价格60元/kg计算,重量约为3 g/个)。珠芽具有繁殖成本低(成本大概为0.05元/株)、生长快、可集中育苗等优点,但在种植过程中半夏植株的珠芽不多且收集困难,使得珠芽繁殖种苗难以规模化生产。
发明内容
本发明针对半夏珠芽繁殖中存在的问题,申请人应用植物组培快繁技术可在短时间内生产出大量半夏珠芽,只需一步即可,时间约为40 d。不仅有利于缓解半夏的种苗供应问题,降低种苗的成本,还可获得经提纯复壮的优质珠芽。
实现本发明目的的技术方案是:
一种以半夏叶片诱导珠芽的方法,包括以下步骤:
(1)在超净工作台上,将半夏无菌苗的叶片切下,叶柄和叶面分别切成0.3 cm长的小段,分别接入珠芽诱导培养基中,培养4~8 d切口处和叶面上出现黄白色的小突起,培养12~16 d时,小突起不断长大成小圆球状的珠芽,培养20~24 d时,长大成青色珠芽,培养30~35 d时,青色珠芽长成黑褐色的成熟珠芽,40 d统计珠芽诱导率为72.5%~100%;
所述半夏珠芽诱导培养基为:MS+ZT0.5~2.0 mg/L+ TDZ0.5~2.0 mg/L +IAA0.01~0.1 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5 g/L,pH值为6.0;
所述珠芽诱导培养条件是:培养温度为28±2℃,光照时间为12 h/d,培养时间为1~24 d时光照强度为1200 Lx,培养时间在24 d以后光照强度为2000 Lx。
(2)将步骤(1)得到珠芽取出,洗净培养基,撒播在整好基质的苗床上,盖上一层0.2 cm厚的基质,用喷雾状的水淋湿表层基质,做个小拱棚,盖好薄膜,拱棚内的湿度在80%以上,8~11 d就可以看到珠芽开始萌芽,15~20 d芽的基部开始长根,长成半夏小植株,珠芽的萌芽率为86.9%~100%;
所述移栽基质为泥炭、蛭石和珍珠岩混合基质,三者比例分别为1︰1︰1、2︰1︰2和2︰2︰1,湿度在80%以上;苗床基质需要提前两天铺好,用水淋透,备用。
步骤(1)所述半夏珠芽诱导培养基优选为:MS+ZT1.0 mg/L+ TDZ1.0 mg/L +IAA0.05 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5 g/L,pH值为6.0。
步骤(2)所述半夏珠芽移栽基质优选为:泥炭、蛭石和珍珠岩混合比例为2︰2︰1。
所述培养基中,MS为基本培养基,ZT为玉米素,TDZ为噻重氮苯基脲,IAA为3-吲哚乙酸,试剂均为分析纯,水为蒸馏水。
本发明以半夏无菌苗的叶片为外植体,应用植物组织培养技术,通过不同植物生长调节剂种类和浓度配比的培养基对外植体进行珠芽诱导,总结出一种以半夏叶片诱导珠芽的方法。本方法应用的植物生长调节剂为ZT、TDZ和IAA,诱导半夏离体叶片产生珠芽。ZT不仅具有促进细胞分裂和分化的作用,在叶片的剪口和在一些苔类中能促进芽苞的形成;TDZ能促进芽萌发和不定芽产生,在较短的时期内能有效的刺激植物组织的植株再生等作用;IAA具有促进细胞分裂和伸长生长作用。该方法具有操作工序少而简、重复性好、成本低、安全高效等优点。
植物组培快繁技术在我国水果、中药材等领域应用了几十年,解决了许多作物因无性繁殖引起的种性退化等问题,而且提供多种途径进行种苗繁育的可能性。因此,申请人应用植物组培技术,通过植物生长调节剂不同种类和浓度配比实验,从半夏无菌苗的叶片直接诱导出珠芽。半夏大田种植过程中,半夏叶片会产生珠芽,通常在叶柄的基部1/3处和顶部。半夏种苗培育方式不同(块茎和组培苗),产生珠芽数量会有很大差别:首先是半夏块茎种苗,有些叶柄上有珠芽,有些没有珠芽,珠芽数为0~2个/片叶不等,珠芽产生和发育成熟时间为半夏生产全过程(约为8个月),而且珠芽零星洒落地上,收集非常困难,需要花费大量的人工成本;其次是半夏组培苗,组培苗培育需要经过初代诱导、继代增殖、壮苗培养、生根诱导、炼苗以及移栽等环节,需要时间约为12个月,在组培苗移栽环节中,半夏块茎不断长大,叶柄上可以产生珠芽,数量为2个/片叶。本发明利用植物组培技术只需一步就能产生珠芽,珠芽数量多,需要时间约为40 d,用时短,成本低,而且不受时间季节制约,可在短时间内生产出大量的珠芽,省时省力,为半夏生产提供大量质优价廉的种苗,将取得巨大经济效益和社会效益。
不同方式生产珠芽的参数对比表:
具体实施方式
下面结合实施例对本发明内容作进一步的说明,但不是对本发明的限定。
实施例1
一种以半夏叶片诱导珠芽的方法,包括以下步骤:
(1)在超净工作台上,将半夏无菌苗的叶片切下,叶柄和叶面分别切成0.3 cm长的小段,分别接入珠芽诱导培养基中,培养8 d时,切口处和叶面上出现黄白色的小突起,培养16 d时,小突起不断长大成小圆球状的珠芽,培养24 d时,长成青色珠芽,培养35 d时,青色珠芽长成黑褐色的成熟珠芽,40 d统计珠芽诱导率为72.5%;
所述半夏珠芽诱导培养基为:MS+ZT0.5 mg/L+ TDZ0.5 mg/L +IAA0.01 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5 g/L,pH值为6.0;
所述珠芽诱导培养条件是:培养温度为28±2℃,光照时间为12 h/d,培养时间为1~24 d时光照强度为1200 Lx,培养时间在24 d以后光照强度为2000 Lx;
(2)将步骤(1)得到珠芽取出,洗净培养基,撒播在整好基质的苗床上,盖上一层0.2 cm厚的基质,喷雾状的水淋湿表层基质,做个小拱棚,盖好薄膜,拱棚内的湿度在80 %以上,11 d左右就可以看到珠芽开始萌芽,20 d左右芽的基部开始长根,长成半夏小植株,珠芽的萌芽率为86.9%;
所述移栽基质为泥炭、蛭石和珍珠岩混合基质,三者比例分别为1︰1︰1,湿度在80%以上;苗床基质需要提前两天铺好,用水淋透,备用。
实施例2
一种以半夏叶片诱导珠芽的方法,包括以下步骤:
(1)在超净工作台上,将无菌苗的叶片切下,叶柄和叶面分别切成0.3 cm长的小段,分别接入珠芽诱导培养基中,培养5 d切口处和叶面上出现黄白色的小突起,培养12 d时,小突起长大成小圆球状的珠芽,培养20 d时,长成青色珠芽,培养30 d时,青色珠芽长成黑褐色的成熟珠芽,40 d统计珠芽诱导率为96.8%;
所述半夏珠芽诱导培养基为:MS+ZT2.0 mg/L+ TDZ2.0 mg/L +IAA0.1 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5 g/L,pH值为6.0;
所述珠芽诱导培养条件是:培养温度为28±2℃,光照时间为12 h/d,培养时间为1~24 d时光照强度为1200 Lx,培养时间在24 d以后光照强度为2000 Lx;
(2)将步骤(1)得到珠芽取出,洗净培养基,撒播在整好基质的苗床上,盖上一层0.2 cm厚的基质,喷雾状的水淋湿表层基质,做个小拱棚,盖好薄膜,拱棚内的湿度在80 %以上,9 d左右就可以看到珠芽开始萌芽,15 d左右芽的基部开始长根,长成一半夏小植株,珠芽的萌芽率为90.4%;
所述移栽基质为泥炭、蛭石和珍珠岩混合基质,三者比例分别为2︰1︰2,湿度在80%以上;苗床基质需要提前两天铺好,用水淋透,备用。
实施例3
一种以半夏叶片诱导珠芽的方法,包括以下步骤:
(1)在超净工作台上,将无菌苗的叶片切下,叶柄和叶面分别切成0.3 cm长的小段,分别接入珠芽诱导培养基中,培养4 d时,切口处和叶面上出现黄白色的小突起,培养13d时,小突起长大成小圆球状的珠芽,培养21 d时,长成青色珠芽,培养31 d时,青色珠芽长成黑褐色的成熟珠芽,40 d统计珠芽诱导率为100%;
所述半夏珠芽诱导培养基为:MS+ZT1.0 mg/L+ TDZ1.0 mg/L +IAA0.05 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5 g/L,pH值为6.0;
所述珠芽诱导培养条件是:培养温度为28±2℃,光照时间为12 h/d,培养时间为1~24 d时光照强度为1200 Lx,培养时间在24 d以后光照强度为2000 Lx;
(2)将步骤(1)得到珠芽取出,洗净培养基,撒播在整好基质的苗床上,盖上一层0.2 cm厚的基质,喷雾状的水淋湿表层基质,做个小拱棚,盖好薄膜,拱棚内的湿度在80 %以上,8 d左右就可以看到珠芽开始萌芽,15 d左右芽的基部开始长根,长成一颗半夏小植株,珠芽的萌芽率为100%;
所述移栽基质为泥炭、蛭石和珍珠岩混合基质,三者比例分别为2︰2︰1,湿度在80%以上;苗床基质需要提前两天铺好,用水淋透,备用。
Claims (1)
1.一种以半夏叶片诱导珠芽的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)在超净工作台上,将半夏无菌苗的叶片切下,将叶片的叶柄和叶面分别切成小段,接入珠芽诱导培养基中,培养切口处和叶面上出现白色的小突起,小突起不断长大,长成白色圆球状的珠芽,之后长大成青色珠芽,最后长成黑褐色的成熟珠芽;
所述半夏珠芽诱导培养基为:MS+ZT1.0 mg/L+ TDZ1.0 mg/L +IAA0.05 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5 g/L,pH值为6.0;
所述珠芽诱导培养条件是:培养温度为28±2℃,光照时间为12 h/d,培养时间为1~24d时光照强度为1200 Lx,培养时间在24 d以后光照强度为2000 Lx;
(2)将步骤(1)得到珠芽取出,洗净培养基,撒播在整好基质的苗床上,盖上一层基质,喷雾状的水淋湿表层基质,做个小拱棚,盖好薄膜,拱棚内的湿度在80 %以上,8~11 d看到珠芽开始萌芽,15~20 d芽的基部开始长根,长成半夏小植株,珠芽的萌芽率为86.9%~100%;
移栽基质为泥炭、蛭石和珍珠岩混合基质,三者比例为2︰2︰1,湿度在80%以上;苗床基质需要提前两天铺好,用水淋透,备用。
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CN110278871A (zh) * | 2019-07-01 | 2019-09-27 | 长江大学 | 利用荆半夏组培丛生苗一步成种的组培方法 |
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2020
- 2020-04-15 CN CN202010293384.6A patent/CN111226798B/zh active Active
Patent Citations (3)
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Title |
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Also Published As
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Application publication date: 20200605 Assignee: Guangxi Nanning Nongxinda Agricultural Technology Co.,Ltd. Assignor: GUANGXI ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES Contract record no.: X2023980046041 Denomination of invention: A Method of Inducing Bulb Buds from Pinellia ternata Leaves Granted publication date: 20210716 License type: Common License Record date: 20231108 |
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