CN111220762A - 一种乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法，所述检测方法包括采用色谱法检测所述乙醇梭菌蛋白中所述有机物的含量，其特征在于：采用色谱法检测有机物标准工作溶液，获得标准曲线；采用色谱法检测待测乙醇梭菌蛋白样品溶液，后根据所述标准曲线计算所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液中有机物的含量；根据所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液中有机物的含量，计算乙醇梭菌蛋白中有机物的含量；其中，所述有机物包括乳酸、乙酸、2,3‑丁二醇和乙醇。采用本发明所述检测方法准确度高，操作简便，能够更好的为乙醇梭菌蛋白生产工艺提供可靠的分析数据。
Description
技术领域
本发明属于化学检测技术领域，具体涉及一种乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法及应用。
背景技术
钢铁工业煤气发酵法制备燃料乙醇是目前国际上一种新型的绿色能源产业，其主要技术是以钢厂工业煤气(主要成分为CO)为原料，采用发酵法生产燃料乙醇，该方法得到的副产品为蛋白粉。制备燃料乙醇的原料气经预处理、发酵、蒸馏脱水等工艺；其中在蒸馏塔余馏水中的乙醇梭菌蛋白经离心浓缩、喷雾干燥等工艺从而制备得到蛋白饲料。然后该工艺在发酵过程中由于菌体代谢产生了乳酸、乙酸、2，3-丁二醇、乙醇等有机代谢产物，并溶于发酵液中，然后随着制备过程，这些有机代谢产物附着在蛋白饲料产品中，对蛋白饲料产品中其他物质含量产生很大影响，综上所述，在蛋白饲料的生产过程中需要控制分析乙醇梭菌蛋白中水溶性有机物的含量。
为了克服现有乙醇梭菌蛋白中水溶性有机物的测定方法中的不足，实现方便、准确的检测目标分析物的目的，对生产中有机物含量进行有效监控，有必要开发一种新的乙醇梭菌蛋白中水溶性有机物的方法。
发明内容
鉴于上述问题，本发明提供了一种乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法及应用，具体提供了一种乙醇梭菌蛋白中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量的检测方法及应用，从而计算得到待测乙醇梭菌蛋白样品溶液中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量。采用本发明所述检测方法准确度高，操作简便，能够更好的为乙醇梭菌蛋白生产工艺提供可靠的分析数据。
用于实现上述目的的技术方案如下：
本发明提供一种乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法，所述检测方法包括采用色谱法检测所述乙醇梭菌蛋白中所述有机物的含量，其特征在于：
采用色谱法检测有机物标准工作溶液，获得标准曲线；
采用色谱法检测待测乙醇梭菌蛋白样品溶液，后根据所述标准曲线计算所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液中有机物的含量；
根据所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液中有机物的含量，计算乙醇梭菌蛋白中有机物的含量；
其中，所述有机物包括乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇。
在一个实施方式中，本发明所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法中，所述色谱法采用高效液相色谱仪，所述高效液相色谱仪的条件包括：
色谱柱：包含阳离子交换树脂填料的有机酸色谱柱；
流动相：浓度为0.001～0.05mol/L的硫酸溶液；优选地，所述硫酸溶液经孔径为0.45μm滤膜的过滤，并经超声脱气；
流速：0.6-0.8mL/min；
柱温：50-60℃；
检测器：RID检测器；
色谱柱柱长：150mm；
色谱柱内径：6.5mm。
在一个实施方式中，本发明所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法中，所述有机物标准工作溶液为乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的混合标准工作溶液(购自于RESTEK，货号分别为574125、574124、574123和574122)。
在一个实施方式中，本发明所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法中，所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液的配制步骤为：
(1)将所述乙醇梭菌蛋白与水混合，搅拌均匀，静置，离心，取上清液；
(2)将所述步骤(1)得到的上清液与5-磺基水杨酸溶液混合均匀，离心，取上清液，即得到所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液。
在一个实施方式中，本发明所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法中，所述步骤(1)中，所述乙醇梭菌蛋白的质量和所述水的体积的比例为8-12g:90-110mL，优选10g:100mL；
优选地，所述水为纯水；
优选地，所述步骤(1)中，所述搅拌采用磁力搅拌器；
优选地，所述步骤(1)中，所述静置时间为1.9～2.1h。
在一个实施方式中，本发明所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法中，所述步骤(2)中，所述步骤(1)得到的上清液与所述5-磺基水杨酸溶液的体积比为(1～5):1，优选4:1。
在一个实施方式中，本发明所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法中，所述步骤(2)中，所述5-磺基水杨酸溶液包含5-磺基水杨酸、浓硫酸和去离子水；优选地，所述5-磺基水杨酸的质量、所述浓硫酸的体积和所述去离子水的体积的比例为(3～6)g:(12～14)mL:(140～260)mL；优选5g:13.89mL:250mL。
在一个实施方式中，本发明所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法中，所述步骤(1)和所述步骤(2)中，所述离心采用高速离心机；优选地，所述离心转速为14500～15500转/min；优选地，所述离心时间为2～5min；优选地，所述离心转速为15000转/min；所述离心时间为3min。
在一个实施方式中，本发明所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法中，所述乙醇梭菌蛋白中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量的检测方法包括以下步骤：
(a)采用高效液相色谱仪检测所述乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的混合标准工作溶液，获得标准曲线；
(b)制备所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液：
(b-1)将所述乙醇梭菌蛋白与纯水混合，后用磁力搅拌器搅拌均匀，静置1.9～2.1h，采用高速离心机以离心转速为15000转/min离心3min，取上清液；其中，所述乙醇梭菌蛋白的质量和所述纯水的体积的比例为10g:100mL；
(b-2)将步骤(b-1)得到的上清液与5-磺基水杨酸溶液混合均匀，离心，取上清液，即得到所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液；其中所述步骤(b-1)得到的上清液与所述5-磺基水杨酸溶液的体积比为4:1；所述5-磺基水杨酸溶液包含5-磺基水杨酸、浓硫酸和去离子水，所述5-磺基水杨酸的质量、所述浓硫酸的体积和所述去离子水的体积的比例为5g：13.89mL:250mL；
(c)计算所述乙醇梭菌蛋白样品溶液中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量：
取所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液上样测量，得到测量结果，根据该测量结果和步骤(a)得到的标准曲线，计算所述乙醇梭菌蛋白样品溶液中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量；
所述高效液相色谱仪的条件包括：
色谱柱：包含阳离子交换树脂填料的有机酸色谱柱；
流动相：浓度为0.001～0.05mol/L的硫酸溶液；所述硫酸溶液经孔径为0.45μm滤膜的过滤，并经超声脱气；
流速：0.7mL/min；
柱温：55℃；
检测器：RID检测器；
色谱柱柱长：150mm；
色谱柱内径：6.5mm；
(d)根据所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量，计算乙醇梭菌蛋白中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量。
本发明还提供根据本发明所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法在检测乙醇梭菌蛋白中有机物的含量中的应用。
具体而言，本发明提供的所述乙醇梭菌蛋白中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量的检测方法包括以下步骤：
1、液相色谱标准曲线的建立：
(1)从专业机构购买四种浓度梯度的包含乳酸、乙酸、2,3丁二醇和乙醇的混合标准溶液1、混合标准溶液2、混合标准溶液3、混合标准溶液4(购自于RESTEK，货号分别为574125、574124、574123和574122)；
其中，
混合标准溶液1：乳酸的浓度为0.1g/L、乙酸的浓度为0.4g/L、2,3丁二醇的浓度为0.4g/L、乙醇的浓度为1.2g/L；
混合标准溶液2：乳酸的浓度为0.5g/L、乙酸的浓度为2.0g/L、2,3丁二醇的浓度为2.0g/L、乙醇的浓度为6.0g/L；
混合标准溶液3：乳酸的浓度为0.1g/L、乙酸的浓度为7.5g/L、2,3丁二醇的浓度为7.0g/L、乙醇的浓度为12.0g/L；
混合标准溶液4：乳酸的浓度为2.0g/L、乙酸的浓度为15.0g/L、2,3丁二醇的浓度为15.1g/L、乙醇的浓度为60.2g/L。
(2)液相色谱检测条件：
色谱柱：包含阳离子交换树脂填料的有机酸色谱柱；
流动相：浓度为0.001～0.05mol/L的硫酸溶液，该硫酸溶液经孔径为0.45μm滤膜的过滤，并经超声脱气，其作用为除去流动相内杂质，防止液相运行过程中杂质和细小气泡进入系统后导致系统污染和压力波动；
流速：0.7mL/min；
柱温：55℃；
检测器：RID检测器；
色谱柱柱长：150mm；
色谱柱内径：6.5mm；
通过所得谱图(如附图5所示)及结果可知，该色谱条件下所得谱图峰形良好，能够满足乙醇梭菌蛋白中水溶性有机物的检测。
(3)利用自动进样器将混合标准溶液1、混合标准溶液2、混合标准溶液3、混合标准溶液4自动批量进样，进行检测。
(4)根据上述混合标准溶液1、混合标准溶液2、混合标准溶液3、混合标准溶液4的浓度含量及经步骤(3)检测所得的峰面积进行校正，分别得到乳酸、乙酸、2,3丁二醇和乙醇的标准曲线，如附图1至4所示。
2、制备所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液：
称取10g乙醇梭菌蛋白(精确至0.0001g)于250mL烧杯中，用量筒量取100mL纯水，将所述乙醇梭菌蛋白与纯水混合，用磁力搅拌器搅拌均匀，得到所述乙醇梭菌蛋白溶液，后静置2h，使可溶代谢产物(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)充分溶于水中，浸泡结束时再次称量，向所述乙醇梭菌蛋白溶液中补水，以补充浸泡过程中所挥发的水分，然后在磁力搅拌器(全程磁力搅拌器搅拌更加方便，效果更好，同时可以尽量避免待测样品的损耗，假如用玻璃棒搅拌可能在搅拌过程中样品附着在玻璃棒偏上方浸泡不到的位置)上搅拌均匀；将该得到的所述乙醇梭菌蛋白溶液1000μL置于1.5mL离心管中，盖好盖子，放入预先设定好转速15000转/min的离心机中离心3min，取上清液待用；用移液枪量取该上清液400μL置于1.5mL离心管中，然后添加100μL 5-磺基水杨酸溶液，盖好盖子，充分混合均匀后放入预先设定好转速15000转/min的离心机中离心3min，取上清液，即得到所述乙醇梭菌蛋白样品溶液；其中所述5-磺基水杨酸溶液包含5-磺基水杨酸、浓硫酸和去离子水，所述5-磺基水杨酸的质量、所述浓硫酸的体积和所述去离子水的体积的比例为5g:13.89mL:250mL；
3、确定所述待测乙醇梭菌蛋白中各组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量：
用移液枪量取150uL所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液，置于进样瓶玻璃管中，然后将该待测乙醇梭菌蛋白样品溶液进样，并进行色谱分析，并分别记录结果，并在所得混合标准溶液1-4的浓度-峰面积标准曲线的基础上，根据检测所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液所得的峰面积大小，对所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液中各组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量进行计算，然后根据以下公式计算乙醇梭菌蛋白中各组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量。
所述乙醇梭菌蛋白产品中有机物(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的质量分数按下式计算：
ωi：某一组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的质量分数，％；
ci：色谱检测所得的某一组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量，g/L；
m：待测乙醇梭菌蛋白样品，g。
本发明所述检测方法中，通过大量的研究分析和筛选试验，从而确定了制备所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液的各个参数条件，从而能够更加有效而准确的检测乙醇梭菌蛋白中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量；进一步而言，本发明所述检测方法的准确度高，操作简便，能够更好的为乙醇梭菌蛋白生产工艺提供可靠的分析数据。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1为本发明所述检测方法中的乳酸标准曲线；
图2为本发明所述检测方法中的乙酸标准曲线；
图3为本发明所述检测方法中的2,3-丁二醇标准曲线；
图4为本发明所述检测方法中的乙醇标准曲线；
图5为本发明所述检测方法中待测乙醇梭菌蛋白样品溶液的色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
本发明所述乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法包括采用色谱法检测有机物标准工作溶液，获得标准曲线；采用色谱法检测待测乙醇梭菌蛋白样品溶液，后根据所述标准曲线计算所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液中有机物的含量；根据所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液中有机物的含量，计算乙醇梭菌蛋白中有机物的含量；其中，所述有机物包括乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇。
实施例1：检测本发明所述乙醇梭菌蛋白中有机物的含量
1、液相色谱标准曲线的建立：
(1)购买四种浓度梯度的包含乳酸、乙酸、2,3丁二醇和乙醇的混合标准溶液1、混合标准溶液2、混合标准溶液3、混合标准溶液4；
其中，
混合标准溶液1：乳酸的浓度为0.1g/L、乙酸的浓度为0.4g/L、2,3丁二醇的浓度为0.4g/L、乙醇的浓度为1.2g/L；
混合标准溶液2：乳酸的浓度为0.5g/L、乙酸的浓度为2.0g/L、2,3丁二醇的浓度为2.0g/L、乙醇的浓度为6.0g/L；
混合标准溶液3：乳酸的浓度为0.1g/L、乙酸的浓度为7.5g/L、2,3丁二醇的浓度为7.0g/L、乙醇的浓度为12.0g/L；
混合标准溶液4：乳酸的浓度为2.0g/L、乙酸的浓度为15.0g/L、2,3丁二醇的浓度为15.1g/L、乙醇的浓度为60.2g/L。
(2)液相色谱检测条件：
色谱柱：包含阳离子交换树脂填料的有机酸色谱柱；
流动相：浓度为0.001～0.05mol/L的硫酸溶液；所述硫酸溶液经孔径为0.45μm滤膜的过滤，并经超声脱气，其作用为除去流动相内杂质，防止液相运行过程中杂质和细小气泡进入系统后导致系统污染和压力波动；
流速：0.7mL/min；
柱温：55℃；
检测器：RID检测器；
色谱柱柱长：150mm；
色谱柱内径：6.5mm；
通过所得谱图(如附图5所示)及结果可知，该色谱条件下所得谱图峰形良好，能够满足乙醇梭菌蛋白中有机物的检测。
(3)利用自动进样器将混合标准溶液1、混合标准溶液2、混合标准溶液3、混合标准溶液4自动批量进样，进行测量。
(4)根据上述混合标准溶液1、混合标准溶液2、混合标准溶液3、混合标准溶液4的浓度含量及步骤(3)检测所得的峰面积进行校正，分别得到乳酸、乙酸、2,3丁二醇和乙醇的标准曲线，如附图1至4所示.
2、制备所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液：
称取10.0001g乙醇梭菌蛋白(精确至0.0001g)于250mL烧杯中，用量筒量取100mL纯水，将所述乙醇梭菌蛋白与纯水混合，用磁力搅拌器搅拌均匀，得到乙醇梭菌蛋白溶液；称取所述乙醇梭菌蛋白溶液+烧杯+转子的质量为237.68g(精确至0.01g)；然后静置2h(静置浸泡过程中用封口膜封住烧杯口，防止有机物及水分的挥发)，使有机物(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)充分溶于水中，浸泡结束时再次称量，向所述乙醇梭菌蛋白溶液中补水至质量为237.68g，以补充浸泡过程中所挥发的水分，然后在磁力搅拌器(全程磁力搅拌器搅拌更加方便，效果更好，同时可以尽量避免待测样品的损耗，假如用玻璃棒搅拌可能在搅拌过程中样品附着在玻璃棒偏上方浸泡不到的位置)上搅拌均匀；将该得到的所述乙醇梭菌蛋白溶液1000μL置于1.5mL离心管中，盖好盖子，放入预先设定好转速15000转/min的离心机中离心3min，取上清液待用；用移液枪量取该上清液400μL置于1.5mL离心管中，然后添加100μL 5-磺基水杨酸溶液，盖好盖子，充分混合均匀后放入预先设定好转速15000转/min的离心机中离心3min，取上清液，即得到所述乙醇梭菌蛋白样品溶液；其中所述5-磺基水杨酸溶液包含5-磺基水杨酸、浓硫酸和去离子水；所述5-磺基水杨酸的质量、所述浓硫酸的体积和所述去离子水的体积的比例为3g:12mL:140mL；其中在一个实施方式中，所述5-磺基水杨酸的质量、所述浓硫酸的体积和所述去离子水的体积的比例为6g:14mL:260mL；其中在另一个实施方式中，所述5-磺基水杨酸的质量、所述浓硫酸的体积和所述去离子水的体积的比例为5g:13.89mL:250mL；
3、确定待测乙醇梭菌蛋白中各组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量：
用移液枪量取150uL所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液，置于进样瓶玻璃管中，然后将该待测乙醇梭菌蛋白样品溶液进样，并进行色谱分析，并分别记录结果，并在所得混合标准溶液1-4的浓度-峰面积标准曲线的基础上，根据检测所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液所得的峰面积大小，对所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液中各组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量进行计算，然后根据以下公式得到如表1所示的待测乙醇梭菌蛋白中各组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量。
所述乙醇梭菌蛋白产品中有机物(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的质量分数按下式计算：
ωi：某一组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的质量分数，％；
ci：色谱检测所得的某一组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量，g/L；
m：待测乙醇梭菌蛋白样品，g。
表1：所述待测乙醇梭菌蛋白中各组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量
实施例2：
称取同一批所述乙醇梭菌蛋白6份，如实施例1所述制备方法制备所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液；
如实施例1所述检测方法检测所述乙醇梭菌蛋白6份样品中各组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量，如表2所示。
表2：6份所述待测乙醇梭菌蛋白中各组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量
由表2可见，此方法检测得各含量结果重复性高，可信度高。
实施例3：
称取一批粗蛋白含量较低的乙醇梭菌蛋白，如实施例1所述方法制备所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液；其中，该乙醇梭菌蛋白中粗蛋白含量、灰分含量、水分含量等这些主要含量均以质量分数计算，若是某一项含量偏低，很有可能是其他含量高所影响，若是灰分、水分含量正常，可推测是样品中有机物含量过高所影响，因此对该乙醇梭菌蛋白样品进行可溶性有机物含量进行检测。
如实施例1所述方法检测本实施例中乙醇梭菌蛋白中各组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量，如表3所示。
表3：待测乙醇梭菌蛋白中各组分(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量
从表3可以看出，本实施例中乙醇梭菌蛋白中的四种有机物含量的加和明显高于表1和表2中的数值，说明本实施例中乙醇梭菌蛋白中的可溶性有机物含量较高，对乙醇梭菌蛋白中粗蛋白含量偏低有一定的影响。
综上所述，由实施例1、2、3检测结果可见，不同批次的乙醇梭菌蛋白的检测中，如果有机物(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量不同，则对乙醇梭菌蛋白产品中粗蛋白、灰分、水分的含量有一定影响。因此，准确检测所述乙醇梭菌蛋白中有机物(乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇)的含量有助于对产品质量的控制及分析。乙醇梭菌蛋白的粗蛋白、灰分、水分、可溶性有机物的含量均已质量分数进行计算，且在检测过程中没有包含与被包含的关系，在理论上上述项目的加和应接近于100％，因此有机物含量的高低会对其他组分的大小有影响。
此外，实施例1～3中所述的“制备所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液”步骤中，对样品(乙醇梭菌蛋白)稀释浸泡时如果选用容量瓶，因样品性质则浸泡于水中会上浮，因此选用容量瓶不利于该样品的浸泡与混匀；此外，在浸泡时纯水与样品(乙醇梭菌蛋白)的比例过小会使该样品浸泡不到位，不能产生清液或使有机物更好的溶出；而纯水与样品比例过大会使溶出有机物浓度变小，不利于高效液相色谱对含量的检出。
总之，以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
Claims (10)
1.一种乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法，所述检测方法包括采用色谱法检测所述乙醇梭菌蛋白中所述有机物的含量，其特征在于：
采用色谱法检测有机物标准工作溶液，获得标准曲线；
采用色谱法检测待测乙醇梭菌蛋白样品溶液，后根据所述标准曲线计算所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液中有机物的含量；
根据所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液中有机物的含量，计算乙醇梭菌蛋白中有机物的含量；
其中，所述有机物包括乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇。
2.根据权利要求1所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法，其特征在于，所述色谱法采用高效液相色谱仪，所述高效液相色谱仪的条件包括：
色谱柱：包含阳离子交换树脂填料的有机酸色谱柱；
流动相：浓度为0.001～0.05mol/L的硫酸溶液；优选地，所述硫酸溶液经孔径为0.45μm滤膜的过滤，并经超声脱气；
流速：0.6-0.8mL/min；
柱温：50-60℃；
检测器：RID检测器；
色谱柱柱长：150mm；
色谱柱内径：6.5mm。
3.根据权利要求1或2所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法，其特征在于，所述有机物标准工作溶液为乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的混合标准工作溶液。
4.根据权利要求1或2所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法，其特征在于，所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液的配制步骤为：
(1)将所述乙醇梭菌蛋白与水混合，搅拌均匀，静置，离心，取上清液；
(2)将所述步骤(1)得到的上清液与5-磺基水杨酸溶液混合均匀，离心，取上清液，即得到所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液。
5.根据权利要求4所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述乙醇梭菌蛋白的质量和所述水的体积的比例为8-12g:90-110mL，优选10g:100mL；
优选地，所述水为纯水；
优选地，所述步骤(1)中，所述搅拌采用磁力搅拌器；
优选地，所述步骤(1)中，所述静置时间为1.9～2.1h。
6.根据权利要求4所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述步骤(1)得到的上清液与所述5-磺基水杨酸溶液的体积比为(1～5):1，优选4:1。
7.根据权利要求4所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述5-磺基水杨酸溶液包含5-磺基水杨酸、浓硫酸和去离子水；优选地，所述5-磺基水杨酸的质量、所述浓硫酸的体积和所述去离子水的体积的比例为(3～6)g；(12～14)mL:(140～260)mL；优选5g:13.89mL:250mL。
8.根据权利要求4所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)和所述步骤(2)中，所述离心采用高速离心机；优选地，所述离心转速为14500～15500转/min；优选地，所述离心时间为2～5min；优选地，所述离心转速为15000转/min；所述离心时间为3min。
9.根据权利要求1或2所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法，其特征在于，所述乙醇梭菌蛋白中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量的检测方法包括以下步骤：
(a)采用高效液相色谱仪检测所述乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的混合标准工作溶液，获得标准曲线；
(b)制备所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液：
(b-1)将所述乙醇梭菌蛋白与纯水混合，后用磁力搅拌器搅拌均匀，静置1.9～2.1h，采用高速离心机以离心转速为15000转/min离心3min，取上清液；其中，所述乙醇梭菌蛋白的质量和所述纯水的体积的比例为10g:100mL；
(b-2)将步骤(b-1)得到的上清液与5-磺基水杨酸溶液混合均匀，离心，取上清液，即得到所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液；其中所述步骤(b-1)得到的上清液与所述5-磺基水杨酸溶液的体积比为4:1；所述5-磺基水杨酸溶液包含5-磺基水杨酸、浓硫酸和去离子水，所述5-磺基水杨酸的质量、所述浓硫酸的体积和所述去离子水的体积的比例为5g：13.89mL:250mL；
(c)计算所述乙醇梭菌蛋白样品溶液中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量：
取所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液上样测量，得到测量结果，根据该测量结果和步骤(a)得到的标准曲线，计算所述乙醇梭菌蛋白样品溶液中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量；
所述高效液相色谱仪的条件包括：
色谱柱：包含阳离子交换树脂填料的有机酸色谱柱；
流动相：浓度为0.001～0.05mol/L的硫酸溶液；所述硫酸溶液经孔径为0.45μm滤膜的过滤，并经超声脱气；
流速：0.7mL/min；
柱温：55℃；
检测器：RID检测器；
色谱柱柱长：150mm；
色谱柱内径：6.5mm；
(d)根据所述待测乙醇梭菌蛋白样品溶液中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量，计算乙醇梭菌蛋白中乳酸、乙酸、2,3-丁二醇和乙醇的含量。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的乙醇梭菌蛋白中有机物的含量的检测方法在检测乙醇梭菌蛋白中有机物的含量中的应用。
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