CN111065637B - 异喹啉磺酰衍生物及其应用 - Google Patents

Abstract

公开了一类作为RHO蛋白激酶抑制剂的异喹啉类化合物，及其在制备治疗与RHO蛋白激酶相关疾病的药物中的应用，具体公开了式(Ⅰ)所示化合物及其药学上可接受的盐。

Description

异喹啉磺酰衍生物及其应用

相关申请的引用

本申请主张如下优先权：

CN201710590957.X，申请日2017-07-19。

技术领域

本发明涉及一类作为RHO蛋白激酶抑制剂的异喹啉磺酰衍生物及其药物组合物。具体地，本发明涉及式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐。

背景技术

法舒地尔是一种具有广泛药理作用的新型药物，为RHO激酶抑制物，通过增加肌球蛋白轻链磷酸酶的活性扩张血管，降低内皮细胞的张力，改善脑组织微循环，不产生和加重脑的盗血，同时可拮抗炎性因子，保护神经抗凋亡，促进神经再生。本结果表明盐酸法舒地尔对促进神经功能的恢复，减轻临床症状，减少病残率有一定疗效。因此对于在基层由于受经济条件的制约以及对疾病认识程度，超早期溶栓治疗不能实现，但为减少疾病的进一步进展，在治疗时间窗内重建局部血循环显得至关重要，而盐酸法舒地尔具有对缺血性脑血管病的显著神经保护和治疗作用，值得在临床尤其是基层的使用，减少致残率，提高生活质量。临床用药尼达尼布以及吡非尼酮对肺纤维化都有较好的改善作用。

在已公开的专利WO2015/165341中，报道了化合物如下式所示(实施例38)。作为ROCK激酶抑制剂此化合物具有较好的酶活性，但是其药代动力学性质和hERG活性却不够理想。目前的专利报道了一类通过结构修饰的类似化合物，显著地改善了这方面的性质。

发明内容

本发明的目的在于提供式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或其互变异构体：

其中，

T₁、T₂分别独立地选自选自：NH或CH₂；

R₁、R₃分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂，或分别独立地选自任选被1、2或3个R取代的：C_1-3烷基；

R₂选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂；

R₄选自任选被1、2或3个R取代的：C_1-3烷基；

或者R₃和R₄连接在一起，形成一个任选被1、2或3个R取代的3～6元环；

R选自：F、Cl、Br、I、OH、NH₂。

本发明的一些方案中，上述R₁、R₃分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂或CH₃。

本发明的一些方案中，上述R₄选自：CH₃。

本发明的一些方案中，上述结构单元

选自：

R₃，R₄如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述结构单元

选自：

本发明的一些方案中，上述R₃和R₄连接在一起，形成一个任选被1、2或3个R取代的3元环，R如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述结构单元

选自：

本发明的一些方案中，上述R₁、R₃分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂或CH₃，其他变量如上述所定义。

本发明的一些方案中，上述R₄选自：CH₃，其他变量如上述所定义。

本发明的一些方案中，上述结构单元

选自：

其他变量如上述所定义。

本发明的一些方案中，上述结构单元

选自：

其他变量如上述所定义。

本发明的一些方案中，上述R₃和R₄连接在一起，形成一个任选被1、2或3个R取代的3元环，其他变量如上述所定义。

本发明的一些方案中，上述结构单元

选自：

其他变量如上述所定义。

本发明的一些方案中，上述化合物或其药学上可接受的盐及其异构体，其选自：

其中，R₁～R₄如上述所定义。

本发明还有一些方案是由上述各变量任意组合而来。

本发明还提供了下式所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其选自：

本发明还提供了一种药物组合物，包括治疗有效量的上述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐作为活性成分以及药学上可接受的载体。

本发明还提供了上述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐或者上述组合物在制备治疗血管收缩引起的相关病症的药物上的应用。

定义和说明

除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。

本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。

本发明的某些化合物可以具有不对称碳原子(光学中心)或双键。外消旋体、非对映异构体、几何异构体和单个的异构体都包括在本发明的范围之内。

除非另有说明，用楔形键和虚线键(

)表示一个立体中心的绝对构型，用波浪线

表示楔形键或虚线键(

或

)，用

表示立体中心的相对构型。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心，除非另有规定，它们包括E、Z几何异构体。同样地，所有的互变异构形式均包括在本发明的范围之内。

本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。

可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。

本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(³H)，碘-125(¹²⁵I)或C-14(¹⁴C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。

术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。

“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。

术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。酮取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。

当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。

当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR)₀-，表示该连接基团为单键。

当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。

当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。当一个取代基可以连接到一个环上的一个以上原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合，例如，结构单元

或

表示取代基R可在环己基或者环己二烯上的任意一个位置发生取代。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，

中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成

也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成

所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。

除非另有规定，“环”表示被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。所谓的环包括单环、联环、螺环、并环或桥环。环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5～7元环”是指环绕排列5～7个原子。除非另有规定，该环任选地包含1～3个杂原子。因此，“5～7元环”包括例如苯基、吡啶和哌啶基；另一方面，术语“5～7元杂环烷基环”包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。术语“环”还包括含有至少一个环的环系，其中的每一个“环”均独立地符合上述定义。

除非另有规定，术语“烃基”或者其下位概念(比如烷基、烯基、炔基、芳基等等)本身或者作为另一取代基的一部分表示直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，可以是完全饱和的(如烷基)、单元或多元不饱和的(如烯基、炔基、芳基)，可以是单取代或多取代的，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)，可以包括二价或多价原子团，具有指定数量的碳原子(如C₁-C₁₂表示1至12个碳，C_1-12选自C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁和C₁₂；C_3-12选自C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁和C₁₂。)。“烃基”包括但不限于脂肪烃基和芳香烃基，所述脂肪烃基包括链状和环状，具体包括但不限于烷基、烯基、炔基，所述芳香烃基包括但不限于6-12元的芳香烃基，例如苯、萘等。在一些实施例中，术语“烃基”表示直链的或支链的原子团或它们的组合，可以是完全饱和的、单元或多元不饱和的，可以包括二价和多价原子团。饱和烃原子团的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、异丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子团的同系物或异构体。不饱和烃基具有一个或多个双键或三键，其实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基，3-丁炔基，以及更高级的同系物和异构体。

除非另有规定，术语“环烃基”、“杂环烃基”或者其下位概念(比如芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基等等)本身或与其他术语联合分别表示环化的“烃基”、“杂烃基”。此外，就杂烃基或杂环烃基(比如杂烷基、杂环烷基)而言，杂原子可以占据该杂环附着于分子其余部分的位置。环烃基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环基的非限制性实例包括1-(1，2，5，6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基，3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃吲哚-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基，1-哌嗪基和2-哌嗪基。

除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基，可以是单取代(如-CH₂F)或多取代的(如-CF₃)，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。烷基的例子包括甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(如，n-丙基和异丙基)，丁基(如，n-丁基，异丁基，s-丁基，t-丁基)，戊基(如，n-戊基，异戊基，新戊基)等。

除非另有规定，环烷基包括任何稳定的环状或多环烃基，任何碳原子都是饱和的，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、降冰片烷基、[2.2.2]二环辛烷、[4.4.0]二环癸烷等。

除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，术语“卤代烷基”意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(C₁-C₄)烷基”意在包括但不仅限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。除非另有规定，卤代烷基的实例包括但不仅限于：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。

术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。

术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1，1-二-(4′-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。

本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词：aq代表水；HATU代表O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐；EDC代表N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐；m-CPBA代表3-氯过氧苯甲酸；eq代表当量、等量；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二异丙酯；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；CBz代表苄氧羰基，是一种胺保护基团；BOC代表叔丁基羰基是一种胺保护基团；HOAc代表乙酸；NaCNBH₃代表氰基硼氢化钠；r.t.代表室温；O/N代表过夜；THF代表四氢呋喃；Boc₂O代表二-叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二异丙基乙基胺；SOCl₂代表氯化亚砜；CS₂代表二硫化碳；TsOH代表对甲苯磺酸；NFSI代表N-氟-N-(苯磺酰基)苯磺酰胺；NCS代表1-氯吡咯烷-2，5-二酮；n-Bu₄NF代表氟化四丁基铵；iPrOH代表2-丙醇；mp代表熔点；LDA代表二异丙基胺基锂；DIBAL-H代表二异丁基氢化铝。

化合物经手工或者

软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。

本发明化合物具有显著甚至意料不到的蛋白酶抑制活性；PK方面，本发明化合物半衰期提高约3倍，清除率显著降低，证明本发明比现有技术有更优越的性质；同时，本发明化合物与现有技术相比，具有更低的hERG潜在风险。

附图说明

图1：肺纤维化评分

One-way ANOVA(单因素方差分析)：^###p＜0.001vs.假手术组；^*p＜0.05vs.模型组；^**p＜0.01vs.模型组；^***p＜0.001vs.模型组；T-test：^$p＜0.05vs.模型组。

图2：肺纤维化评分百分比

Two-way ANOVA(双因素方差分析)：^###p＜0.001vs.假手术组；^*p＜0.05vs.模型组；^**p＜0.01vs.模型组；^***p＜0.001vs.模型组。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。

实施例1

第一步

将1a(30.00g，173.24mmol)，三乙胺(43.83g，433.00mmol)的N，N二甲基甲酰胺(500mL)溶液冷却到0℃然后加入O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟膦盐(79.05g，208.00mmol)。所得反应液0℃下搅拌10分钟。然后加入N-甲氧基甲胺盐酸盐(18.59g，191.00mmol)并在20℃下搅拌16小时。将反应液倒入水(1.00L)中，并用乙酸乙酯(2.00L x2)萃取，合并有机相用无水硫酸钠干燥过滤蒸干，粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)，得到1b。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ4.13-4.07(m，2H)，3.74(s，3H)，3.37(s，1H)，3.21(s，3H)，1.37-1.35(m，2H)，1.26-1.22(m，3H)，1.03-1.00(m，2H)。

第二步

在0℃下向1b(34.00g，157.24mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(300mL)溶液中加入钠氢(7.55g，189.00mmol，60％)。所得反应液在0℃下搅拌10分钟，然后滴加烯丙基溴(28.53g，235.86mmol)。此反应液在20℃下搅拌5小时。将反应液倒入水(1.00L)中并用乙酸乙酯(300mLx3)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)。得到1c。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ5.85-5.77(m，1H)，5.06-5.03(m，2H)，4.17-4.08(m，2H)，3.98-3.94(m，2H)，3.63(s，3H)，3.15(s，3H)，1.53(brs，2H)，1.26-1.21(m，5H)。

第三步

在0℃向四氢铝锂(3.63g，95.71mmol)的四氢呋喃(440mL)溶液中加入1c(22.30g，87.01mmol)的四氢呋喃(220mL)溶液，并在0℃下搅拌一个小时。反应用饱和氯化铵水溶液(300mL)缓慢淬灭，并用乙酸乙酯(300mLx3)萃取，合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)，得到1d。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.15(brs，1H)，5.89-5.81(m，1H)，5.14-5.11(m，2H)，4.19-4.11(m，2H)，3.81(brs，2H)，1.53(brs，2H)，1.42(brs，2H)，1.24(brs，3H)。

第四步

向1d(4.50g，22.82mmol)的甲苯(45mL)溶液中加入1e(4.50g，25.10mmol)，并加热至130℃搅拌72小时。反应用1N稀盐酸(150mL)淬灭，并用乙酸乙酯(50mLx2)洗。剩余水相用氢氧化钠将PH值调至12，然后用二氯甲烷/甲烷＝10∶1的混合溶剂(100mLx3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)得到1f。

第五步

向1f(4.30g，13.68mmol)和BOC₂O(4.48g，20.52mmol)的甲醇(100mL)溶液中加入湿钯碳(1.20g，10％)。所得反应液在50℃和50psi的氢气氛围下搅拌20个小时后将反应液过滤，浓缩，粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)得到1g。

第六步

向1g(4.10g，13.21mmol)的乙醇(120mL)和水(30mL)溶液中加入氢氧化钾(22.24g，396.30mmol)，此反应液在95℃下搅拌40个小时。将反应液浓缩除掉乙醇，然后用二氯甲烷(150mL x5)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)，得到1h。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ4.13-4.08(m，1H)，3.75-3.58(m，1H)，3.34-3.29(m，1H)，3.11-3.06(m，2H)，2.73-2.69(m，1H)，2.00-1.95(m，2H)，1.70-1.67(m，1H)，1.49-1.44(m，10H)，0.66-0.59(m，2H)。

第七步

向化合物1h(200mg，0.84mmol)和化合物1i(287mg，1.26mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中滴加三乙胺(170mg，1.68mmol)。所得反应液在15℃反应5小时。反应结束后，直接将二氯甲烷除去，所得粗品用制备薄层板纯化(乙酸乙酯)得到化合物1j。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.36-9.34(m，1H)，8.71-8.69(m，1H)，8.48-8.47(m，2H)，8.25-8.20(m，1H)，7.74-7.70(m，1H)，4.15-3.96(m，2H)，3.73-3.25(m，4H)，1.84-1.62(m，1H)，1.60(brs，3H)，1.38(s，9H)，1.26-0.68(m，2H)。

第八步

在20℃时，向化合物1j(130mg，0.30mmol)的乙酸乙酯(1mL)溶液中加入HCl/EtOAc(4mL，4M)。所得反应液在该温度下继续搅拌2小时。反应结束后，过滤，干燥得到化合物1。

MS-ESI计算值[M+H]⁺330，实测值330。

¹HN MR(400MHz，D₂O)δ9.75(s，1H)，8.81-8.65(m，4H)，8.08(t，J＝8.0Hz，1H)，4.10-4.07(m，1H)，3.93-3.91(m，1H)，3.79-3.74(m，1H)，3.51-3.48(m，1H)，3.42-3.25(m，2H)，2.41-2.39(m，1H)，2.03-2.02(m，1H)，1.39-1.36(m，1H)，1.14-1.12(m，1H)，0.81-0.78(m，1H)，0.54-0.53(m，1H)。

实施例2

第一步

化合物1h和化合物2a按照化合物1的合成方法得到化合物2。

MS-ESI计算值[M+H]⁺364，实测值364。

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ9.30(s，1H)，8.67(s，1H)，8.62(d，J＝7.6Hz，1H)，8.46(d，J＝8.4Hz，1H)，7.86(t，J＝8.0Hz，1H)，4.05-3.94(m，2H)，3.82-3.77(m，1H)，3.57-3.55(m，1H)，3.38-3.22(m，2H)，2.42-2.39(m，1H)，2.08-2.04(m，1H)，1.06-0.79(m，4H)。

实施例3

第一步

化合物1h和化合物3a按照化合物1的合成方法得到化合物3。

MS-ESI计算值[M+H]⁺348，实测值348。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ9.25(s，1H)，8.67(d，J＝8.0Hz1H)，8.53(d，J＝8.0Hz，1H)，8.45(d，J＝8.0Hz，1H)，7.86(t，J＝8.0Hz，1H)，3.85-3.73(m，2H)，3.43(s，1H)，3.06-2.98(m，1H)，2.72-2.65(m，1H)，2.15-2.05(m，1H)，1.73-1.71(m，1H)，0.97-0.87(m，1H)，0.82-0.79(m，2H)，0.69-0.60(m，2H)。

实施例4

第一步

向200mL闷罐中加入苄基甘氨酸4a(7.06g，42.74mmol)，丙酮(6.21g，106.85mmol)，1-苄基-2，5-二氢吡咯-2，5二酮4b(4.00g，21.37mmol)和甲苯(40mL)。所得反应液在140℃下搅拌48小时。反应完毕后将反应混合物浓缩，粗品通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)，得到化合物4c。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.40-7.32(m，10H)，4.77-4.72(t，J＝5.2，2H)，3.96-3.74(m，3H)，2.90-2.66(m，3H)，2.31(s，3H)，1.60(s，3H)。

第二步

向1000mL氢化瓶中加入化合物4c(5.28g，15.15mmol)和350mL甲醇，然后氮气保护下加入湿的钯-碳(2.00g，纯度10％)和Boc2O(6.61g，30.30mmol)，将悬浮液用氢气置换3次。所得混合物在氢气(50psi)下50℃搅拌16小时。反应结束后将反应混合物过滤，浓缩，粗品通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)，得到化合物4d。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.23-7.20(m，5H)，4.57(s，2H)，2.93-2.83(m，4H)，1.41-1.36(m，15H)。

第三步

向50mL三颈圆底烧瓶中加入化合物4d(300mg，0.84mmol)和7mL四氢呋喃，然后氮气保护下于0℃时缓慢滴加硼烷-四氢呋喃(1M，3.4mL)，所得反应液升温至50℃搅拌2.5个小时。反应结束后降温至0℃，缓慢滴加甲醇(10mL)进行淬灭，进而将混合物浓缩。采用制备薄层色谱进行纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2_∶1)，得到化合物4e。

MS-ESI计算值[M+H]⁺331，实测值331。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.32-7.26(m，5H)，3.62(s，2H)，3.25(s，1H)，2.98-2.95(m，1H)，2.72-2.66(m，2H)，2.51-2.44(m，2H)，2.32-2.29(m，1H)，2.11(m，1H)，1.46-1.34(m，15H)。

第四步

向50mL氢化瓶中加入化合物4e(100mg，0.30mmol)和5mL甲醇，然后氮气保护下加入湿钯-碳(100mg，纯度10％)，将悬浮液依次用氮气和氢气置换3次。将混合溶液在氢气(50psi)下于50℃搅拌12小时。反应结束后将反应混合物过滤，浓缩，得到化合物4f，直接用于下一步。

MS-ESI计算值[M+H]⁺241，实测值241。

第五步

向50mL圆底烧瓶中加入化合物4f(72mg，上一步粗品)，N，N-二异丙基乙胺(77mg，0.60mmol)和1mL二氯甲烷，在0℃和氮气保护下缓慢滴加氯甲酸苄酯(77mg，0.45mmol)。将反应液升至25℃，并在此温度下搅拌3小时。在反应结束后将反应混合物用N，N，N-三甲基乙二胺(2mL，10％)洗涤，再用二氯甲烷(5mL x3)进行萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用制备薄层色谱进行纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2∶1)，得到化合物4g。

MS-ESI计算值[M-56+H]⁺319，实测值319。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.37-7.36(m，5H)，5.18-5.09(m，2H)，3.68-3.59(m，2H)，3.48-3.39(m，2H)，3.67-3.35(m，1H)，2.84-2.80(m，1H)，1.99-1.95(m，2H)，1.47-1.29(m，15H)。

第六步

向25mL圆底烧瓶中加入化合物4g(62mg，0.17mmol)和1mL二氯甲烷，然后在氮气保护下滴加三氟乙酸(190mg，1.67mmol)，并在25℃下搅拌1小时。反应结束后将反应混合物直接浓缩，得到化合物4h(46mg，粗品)。

MS-ESI计算值[M+H]⁺275，实测值275。

第七步

向25mL圆底烧瓶中加入化合物4h(46mg，0.17mmol)，N，N-二异丙基乙胺(65mg，0.5mmol)和1.5mL二氯甲烷，在0℃和氮气保护下缓慢滴加异喹啉磺酰氯1i(49mg，0.22mmol)，并在25℃下搅拌2小时。反应结束后将反应混合物直接浓缩，粗品用制备薄层色谱进行纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1∶1)，得到化合物4i。

MS-ESI计算值[M+H]⁺466，实测值466。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.34-9.33(m，1H)，8.68-8.66(m，1H)，8.49-8.39(m，2H)，8.21-8.19(m，1H)，7.71-7.66(m，1H)，7.34-7.28(m，5H)，5.09-5.05(m，2H)，3.64-3.49(m，2H)，3.33-3.28(m，1H)，3.08-2.97(m，3H)，2.81-2.80(m，1H)，2.54-2.52(m，1H)，1.32-1.27(m，6H)。

第八步

向5mL微波管中加入化合物4i(32mg，0.07mmol)和1mL三氟乙酸，密封，在100℃下微波反应器中搅拌1小时。反应结束后将反应混合物直接浓缩，粗品用制备液相色谱HPLC进行纯化，得到化合物4。

MS-ESI计算值[M+H]⁺332，实测值332。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.42(s，1H)，8.69-8.68(m，1H)，8.60-8.59(m，1H)，8.56-8.54(m，1H)，8.45(d，J＝8.0Hz，1H)，7.86(t，J＝8.0Hz，1H)，3.82-3.77(m，1H)，3.26-3.20(m，2H)，2.98(m，1H)，2.97(m，1H)，2.54-2.44(m，3H)，1.41(s，6H).

实施例5

第一步

将5a(4.00g，18.33mmol)溶于20mL N，N-二甲基甲酰胺中，钠氢(0.88g，21.99mmol，60％)在氮气保护下缓慢加入，温度控制在0℃。混合物在25℃下，搅拌10分钟后，将溴丙烯(4.43g，36.66mmol)加入到反应液中。混合物在25℃下继续搅拌反应3小时。反应结束后将反应液用饱和氯化铵水溶液20mL在0℃下淬灭，加入水(40mL)，乙酸乙酯(40mLx3)，合并有机相用饱和食盐水(50mL x1)洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)纯化得到5b。

第二步

将5b(2.50g，9.68mmol)溶于四氢呋喃(40mL)中，在-78℃和氮气保护下缓慢滴加二异丁基氢化铝(1M，17.4mL)。所得反应液在-78℃继续搅拌6小时。反应结束后反应液用饱和氯化铵水溶液(20mL)和HCl(1N，10mL)在25℃下淬灭，加入水(20mL)，乙酸乙酯(40mLx3)，合并有机相用饱和食盐水(40mL x1)洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)纯化得到5c。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.32(s，1H)，5.90-5.78(m，1H)，5.23-5.11(m，2H)，4.14(q，J＝8.0Hz，2H)，3.95(d，J＝4.0Hz，2H)，1.27(s，6H)，1.23(t，J＝8.0Hz，3H)。

第三步

将5c(1.50g，7.53mmol)和基甘氨酸4a(2.49g，15.06mmol)溶于20mL甲苯中。所得反应混合物在130℃下搅拌反应16小时。反应结束后向反应液中加入水(10mL)，乙酸乙酯(15mL x3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(20mL x1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)纯化得到5d。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.38-7.34(m，2H)，7.30(t，J＝8.0Hz，2H)，7.26-7.20(m，1H)，4.16(d，J＝8.0Hz，2H)，3.97(d，J＝4.0Hz，2H)，3.64-3.55(m，1H)，3.48-3.40(m，1H)，3.29(d，J＝4.0Hz，1H)，3.11-2.98(m，2H)，2.84-2.73(m，1H)，2.45-2.36(m，1H)，1.87-1.93(m，1H)，1.30(s，6H)，1.25(s，3H)。

第四步

将5d(400mg，1.32mmol)溶于20mL乙腈中，然后滴加三甲基碘硅烷(2.65g，13.23mmol)。所得反应液在25℃下继续搅拌6小时。反应结束后向反应液中加入20mL水淬灭反应，乙酸乙酯(20mL x3)，合并有机相用饱和食盐水(30mL x1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，得到粗产物5e。直接用于下一步。

第五步

将5e(250mg，1.09mmol)溶于10mL二氯甲烷中，然后依次滴加二碳酸二叔丁酯(474mg，2.17mmol)和二异丙基乙基胺(281mg，2.17mmol)。所得混合物在25℃下继续搅拌16小时。反应结束后向反应液中加入水(10mL)淬灭反应，二氯甲烷(20mL x2)，合并有机相用饱和食盐水(20mL x1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，所得粗品用制备薄层色谱板(乙酸乙酯/石油醚＝5/1)纯化得到5f。

第六步

将5f(300mg，0.91mmol)和乙酸酐(185mg，1.82mmol)溶于乙酸乙酯(30mL)中，然后在氮气保护下加入钯碳(60mg，10％)。所得反应液用氢气置换三次后在氢气氛(50PSI)和50℃下继续搅拌3小时。反应结束后将反应液过滤、浓缩，得到粗品5g。

MS-ESI计算值[M+H]⁺283，实测值283。

第七步

在25℃下将盐酸乙酸乙酯(20mL，4M)滴加到5g(250mg，0.89mmol)的5mL乙酸乙酯溶液中。所得反应液在此温度下继续搅拌0.5小时。反应结束后直接除去溶剂得到粗品5h。直接用于下一步。

第八步

将化合物1i(150mg，0.66mmol)和5h(200mg，盐酸盐)溶于5mL二氯甲烷中，然后滴加二异丙基乙基胺(142mg，1.10mmol)。所得反应液在25℃下继续搅拌16小时。反应结束后直接浓缩除去溶剂，加水(5mL)，乙酸乙酯(10mL x2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(15mLx1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，所得粗品用制备薄层色谱板(乙酸乙酯)纯化得到5i。

MS-ESI计算值[M+H]⁺374，实测值374。

第九步

将5i(100mg，0.66mmol)溶于乙醇(0.5mL)和水(1mL)的混合溶剂中，加入氢氧化钠(321mg，8.03mmol)。所得反应液在100℃下继续搅拌16小时。反应结束后用稀盐酸(1N)调节pH至中性，用高效液相色谱法纯化得到化合物5。

MS-ESI计算值[M+H]⁺332，实测值332。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ9.38(s，1H)，8.66-8.54(m，3H)，8.43-8.37(m，1H)，7.82(t，J＝8.0Hz，1H)，3.75-3.80(m，1H)，3.29-3.20(m，2H)，3.13-3.07(m，1H)，2.89-2.68(m，3H)，1.97-1.88(m，1H)，1.49(s，3H)，1.36(s，3H)。

实施例6

第一步

0℃向化合物6a(15.58g，82.34mmol)，HATU(32.87g，86.46mmol)和二异丙基乙基胺(22.35g，172.91mmol)的200mL二氯甲烷溶液中加入N-甲氧基甲胺盐酸盐(8.83g，90.57mmol)。所得反应液升至25℃并继续搅拌16小时。反应结束后向反应液中加入200mL水，用1N的氢氧化钠水溶液将pH调至14，二氯甲烷(200mL x2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)得到化合物6b。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ5.25(s，1H)，4.69(s，1H)，3.78(s，3H)，3.22(s，3H)，1.45(s，9H)，1.32(d，J＝8.0Hz，3H)。

第二步

在0℃和氮气保护下，向化合物6b(14.69g，63.24mmol)的200mLN，N-二甲基甲酰胺的溶液中分批加入钠氢(4.30g，107.51mmol，60％)，加完后继续搅拌10分钟然后在0℃继续滴加3-溴丙烯(19.13g，158.10mmol)。所得反应液在15℃反应22小时。反应结束后，向反应液中加入200mL饱和氯化铵水溶液，200mL水，乙酸乙酯(200mL x2)萃取。有机相用饱和食盐水(300mL x3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，所得粗品用硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)得到化合物6c。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ5.86-5.8l(m，1H)，5.30-5.25(m，1H)，5.14-5.04(m，2H)，3.95-3.83(m，2H)，3.74(s，3H)，3.16(s，3H)，1.44(s，9H)1.31(d，J＝8.0Hz，3H)。

第三步

在-78℃和氮气保护下，向化合物6c(13.33g，48.95mmol)的200mL四氢呋喃溶液中加入DIBAL-H(97.90mmol，97.9mL，1M)。所得反应液升温至20℃继续搅拌2小时。反应结束后向反应液中加入400mL饱和酒石酸钾钠，200mL水，300mL乙酸乙酯，乙酸乙酯(300mL x2)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩直接得到粗品化合物6d。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.56(s，1H)，5.87-5.81(m，1H)，5.30-5.10(m，3H)，3.85-3.76(m，1H)，3.56-3.49(m，1H)，1.46(s，9H)1.34(d，J＝8.0Hz，3H)。

第四步

将化合物6d(12.96g，60.77mmol)和化合物4a(25.10g，151.93mmol)的307mL甲苯溶液加热至135℃并反应24小时。反应结束后向反应体系中加入300mL水，乙酸乙酯(300mLx4)萃取，有机相用饱和食盐水(300mL x3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，所得粗品用硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)得到化合物6e。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.26-7.16(m，5H)，3.96-3.61(m，2H)，3.45-3.20(m，3H)，2.98-2.84(m，1H)，2.73-2.59(m，2H)，2.20-2.13(m，1H)1.97-1.84(m，1H)，1.58-1.46(m，1H)，1.38(s，9H)，1.01-0.85(m，3H)。

第五步

氮气保护下，向化合物6e(7.00g，22.12mmol)和Ac₂O(4.52g，4.1mL，44.24mmol)的100mL乙酸乙酯溶液中加入干钯碳(1.00g，10％)。反应液用氢气置换三次。所得反应液在氢气氛(50PSI)和50℃下继续搅拌反应10小时。反应结束后将反应液过滤、浓缩，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)纯化得到化合物6f。

MS-ESI计算值[M+H-100]⁺269，实测值269。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ4.03-4.01(m，2H)，3.59-3.50(m，2H)，3.48-3.35(m，2H)，2.94-2.93(m，1H)，2.09-2.02(m，4H)，1.80-1.70(m，1H)，1.45(s，9H)，1.28-1.12(m，3H)。

第六步

在0℃和氮气保护下，向化合物6f(4.34g，16.17mmol)的20mL二氯甲烷溶液中滴加三氟乙酸(36.87g，323.40mmol)。所得反应液在25℃下继续搅拌12小时。反应结束后直接浓缩，所得粗品在0℃时缓慢加入饱和碳酸钠水溶液20mL，乙酸乙酯(50mL x3)萃取，饱和食盐水(20mL x3)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品化合物6g。

MS-ESI计算值[M+H]⁺169，实测值169。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ4.00-3.91(m，2H)，3.69-3.52(m，2H)，3.41-3.04(m，3H)，2.71-2.61(m，3H)，2.09-2.02(m，4H)，1.83-1.76(m，1H)。

第七步

将6g(2.08g，12.37mmol)和化合物3a(3.04g，12.37mmol)按照实施例1第七步合成方法得到化合物6h。

MS-ESI计算值[M+H]⁺378，实测值378。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.17(s，1H)，8.62-8.55(m，2H)，8.23(d，J＝8.0Hz，1H)，7.73(t，J＝8.0Hz，1H)，4.33-4.22(m，1H)，4.12-4.02(m，1H)3.81-3.71(m，1H)，3.70-3.60(m，1H)，3.58-3.42(m，1H)，3.07-2.96(m，1H)，，2.05(s，3H)，1.95-1.83(m，1H)，1.55-1.45(m，1H)，1.44-1.35(m，1H)，1.07(d，J＝8.0Hz，3H)。

第八步

向化合物6h(2.26g，5.99mmol)的12.5mL乙醇和25mL水的混合溶液中加入浓盐酸25mL(12M)。所得反应液在100℃反应24小时。反应结束后浓缩出去乙醇，然后用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH到7，有固体析出，过滤得到的粗品用高效液相色谱纯化得到化合物6。

MS-ESI计算值[M+H]⁺336，实测值336。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.15(s，1H)，8.82(d，J＝8.0Hz，1H)，8.58(d，J＝8.0Hz，1H)，8.22(d，J＝8.0Hz，1H)，7.72(t，J＝8.0Hz，1H)，4.04-3.92(m，1H)，3.81-3.76(m，1H)，3.47(d，J＝8.0Hz，1H)，3.，34-3.30(m，1H)，3.15-3.05(m，1H)，2.95-2.85(m，2H)，2.03-1.96(m，1H)，1.60-1.54(m，1H)，1.20(d，J＝8.0Hz，3H)。

6-1和6-2

SFC分析条件：

柱子：Chiralpak AD-3100×4.6mm I.D.，3μm

流动相：A：CO₂ B：甲醇(0.05％DEA)

梯度：B在4.5分钟内从5％到40％并在40％保持2.5分钟，然后B在5％保持1min，流速：2.8mL/min

柱温：40℃

6-1保留时间t＝3.818分钟

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.13(s，1H)，8.81-8.80(m，1H)，8.56(brs，1H)，8.21-8.19(m，1H)，7.70(brs，1H)，4.01-4.00(m，1H)，3.77-3.75(m，1H)，3.46-3.45(m，1H)，3.31(brs，1H)，3.06(brs，1H)，2.86(brs，2H)，2.07(brs，1H)，1.57(brs，1H)，1.20-1.19(m，3H)。

MS-ESI计算值[M+H]⁺336，实测值336。

6-2保留时间t＝4.111分钟

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.13(s，1H)，8.81-8.80(m，1H)，8.55(brs，1H)，8.20-8.19(m，1H)，7.70(brs，1H)，4.01(brs，1H)，3.77(brs，1H)，3.46(brs，1H)，3.31(brs，1H)，3.06(brs，1H)，2.87(brs，2H)，2.07(brs，1H)，1.56(brs，1H)，1.19(brs，3H)。

MS-ESI计算值[M+H]⁺336，实测值336。

实施例7

第一步

按照实施例6的合成方法从化合物6g(1.00g，5.94mmol)和化合物1i(1.73g，6.53mmol)经过2步反应得到化合物7。

MS-ESI计算值[M+H]⁺360，实测值360。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.35(s，1H)，8.71-8.69(m，1H)，8.56-8.50(m，2H)，8.20(d，J＝8.4Hz，1H)，7.70(d，J＝8.0Hz，1H)，3.88-3.87(m，1H)，3.68-3.64(m，1H)，3.42-3.40(m，1H)，3.18-3.17(m，1H)，2.82-2.73(m，3H)，1.90-1.86(m，1H)，1.43-1.41(m，1H)，1.22-1.21(m，3H)。

7-1和7-2

SFC分析条件：

柱子：Chiralpak AD-3100×4.6mm I.D.，3um

流动相：A：CO₂ B：甲醇(0.05％DEA)

梯度：B在5分钟内从5％到40％并在40％保持2.5分钟，然后B在5％保持1min

流速：2.5mL/min

柱温：35℃

7-1保留时间t＝4.062分钟

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.27(s，1H)，8.63-8.61(m，1H)，8.49-8.42(m，2H)，8.13(d，J＝8.0Hz，1H)，7.62(t，J＝8.0Hz，1H)，3.78-3.77(m，1H)，3.61-3.56(m，1H)，3.32-3.31(m，1H)，3.10-3.06(m，1H)，2.67-2.64(m，3H)，1.81-1.76(m，1H)，1.33-1.32(m，1H)，1.15-1.14(m，3H)。

MS-ESI计算值[M+H]⁺318，实测值318。

7-2保留时间t＝4.303分钟

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.27(s，1H)，8.63-8.61(m，1H)，8.49-8.42(m，2H)，8.12(d，J＝8.4Hz，1H)，7.62(t，J＝8.0Hz，1H)，3.78-3.76(m，1H)，3.61-3.56(m，1H)，3.32-3.30(m，1H)，3.09-3.05(m，1H)，2.67-2.64(m，3H)，1.81-1.75(m，1H)，1.33-1.32(m，1H)，1.15-1.14(m，3H)。

MS-ESI计算值[M+H]⁺318，实测值318。

实施例8

第一步

在25℃下，向8a(50.00g，561.23mmol)和碳酸氢钠(141.45g，1.68mol)的250mL四氢呋喃和250mL水的混合溶液中滴加氯甲酸乙酯(84.9g，782.34mmol)。所得反应液在25℃下搅拌反应48h。反应结束后，过滤，浓缩除去四氢呋喃后加入水(50mL)，用甲基叔丁基醚(200mL x1)萃取。将水相pH调至1，用乙酸乙酯(200mL x2)萃取，合并有机相，，无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩，得到粗品化合物8b。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ5.19(s，1H)，4.43-4.38(m，1H)，4.16-4.12(m，2H)，1.47(d，J＝7.6Hz，3H)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H)。

第二步

在0℃和氮气保护下，向化合物8b(40.00g，248.20mmol)的500mL乙酸乙酯溶液中依次加入丙基磷酸酐(473.83g，744.6mmol，50％)和二异丙基乙基胺(128.31g，992.80mmol)。所得反应液在25℃下搅拌反应10分钟，再加入N-甲氧基甲胺盐酸盐(26.63g，273.02mmol)。反应液在25℃下继续搅拌反应16小时。反应结束后向反应液中加水(300mL)，乙酸乙酯(200mL x2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)纯化得到化合物8c。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ5.43-5.42(m，1H)，4.73-4.69(m，1H)，4.08(t，J＝6.8Hz，2H)，3.76(s，3H)，3.20(s，3H)，1.32(d，J＝6.8Hz，3H)，1.22(d，J＝7.2Hz，3H)。

第三步

在0℃和氮气保护下，向3-溴丙烯(31.99g，264.42mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(400mL)溶液中分批加入钠氢(8.46g，211.54mmol，60％)。反应液搅拌10分钟后再加入化合物8c(36.00g，176.28mmol)。所得反应液升温至20℃后继续搅拌反应5小时。反应液结束后向反应液中加入饱和氯化铵溶液(300mL)和水(200mL)，乙酸乙酯(400mL x3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(400mL x3)洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)纯化得到化合物8d。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ5.83-5.77(m，1H)，5.26-5.01(m，3H)，4.11-4.07(m，2H)，3.97-3.90(m，2H)，3.73-3.66(m，3H)，3.17-2.95(m，3H)，1.36-1.29(m，3H)，1.24-1.19(m，3H)。

第四步

在-78℃和氮气保护下，向化合物8d(10.00g，40.93mmol)的150mL四氢呋喃溶液中滴加二异丁基氢化铝(81.9mL，1M)。滴加完毕后将混合物缓慢升温至20℃并在此温度下搅拌反应3小时。反应结束后，向反应液中缓慢加入饱和酒石酸钾钠溶液(500mL)和水(200mL)，乙酸乙酯(300mL x3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)纯化得到化合物8e。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.51(s，1H)，5.81-5.74(m，1H)，5.18-5.09(m，2H)，4.12-4.04(m，3H)，3.95-3.74(m，2H)，1.34-1.28(m，3H)，1.22-1.13(m，3H)。

第五步

化合物8e(4.65g，25.11mmol)和化合物4a(8.29g，50.21mmol)按照实施例5第三步的合成方法得到化合物8f。

MS-ESI计算值[M+H]⁺289，实测值289。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.21-7.13(m，5H)，4.06-4.01(m，2H)，3.81(brs，2H)，3.49-3.46(m，1H)，3.44-3.38(m，2H)，2.88(s，1H)，2.69(brs，2H)，2.17-2.11(m，1H)，1.95-1.85(m，1H)，1.55-1.43(m，1H)，1.19-1.15(m，3H)，1.02-0.95(m，3H)。

第六步

在氮气保护下，向化合物8f(2.00g，6.94mmol)和二叔丁基二碳酸酯(3.03g，13.88mmol)的150mL甲醇溶液中加入湿钯碳(200mg，10％)。所得反应液用氢气置换三次后置于氢气氛(50PSI)和50℃下搅拌反应24小时。反应结束后过滤、浓缩，粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100-0％)纯化得到化合物8g。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ4.15-4.09(m，3H)，3.86-5.75(m，1H)，3.60-3.55(m，2H)，3.36-3.34(m，2H)，3.02-2.91(m，1H)，1.98-1.93(m，1H)，1.73(s，1H)，1.48(s，9H)，1.28-1.23(m，3H)。

第七步

将化合物8g(250mg，0.84mmol)溶于乙醇(4mL)和水(3mL)混合溶剂中，加入氢氧化钾(1.50g，26.81mmol)。所得反应液在120℃下搅拌反应40小时。反应结束后将反应液浓缩除去乙醇，加入水(5mL)，用二氯甲烷(5mL x2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩，粗品经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100-0％)纯化得到化合物8h。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ3.86-3.57(m，2H)，3.28-3.23(m，1H)，3.07-3.10(m，2H)，2.77(s，1H)，2.60-2.55(m，1H)，1.83-2.75(m，2H)，1.65-1.53(m，1H)，1.41(s，9H)，1.20-1.13(m，3H)。

第八步

化合物8h(81mg，0.36mmol)和化合物8i(200mg，0.72mmol)按照实施例1第七步的合成方法得到化合物8j。

MS-ESI计算值[M+H]⁺432，实测值432。

第九步

在20℃下，将三氟乙酸(2mL)滴加到化合物8j(109mg，0.25mmol)的6mL二氯甲烷溶液中，反应液继续搅拌2小时。反应结束后直接浓缩反应液，粗品用高效液相色谱纯化得到化合物8。

MS-ESI计算值[M+H]⁺332，实测值332。

¹H NMR(400 MHz，CD₃OD)δ9.20(s，1H)，8.80(d，J＝7.2Hz，1H)，8.48(s，1H)，8.37(d，J＝8.4Hz，1H)，7.77(t，J＝8.0Hz，1H)，4.12-4.10(m，1H)，3.82-3.78(m，1H)，3.62-3.60(m，1H)，3.41-3.37(m，1H)，3.62-3.60(m，1H)，3.18(brs，1H)，3.08-3.05(m，5H)，2.09-2.04(m，1H)，1.80-1.79(m，1H)，1.34-1.32(m，3H)。

实施例9

第一步

将化合物7a(80mg，0.22mmol)溶于1mL二氯甲烷中，间氯过氧苯甲酸(68mg，0.33mmol，85％)在0℃和氮气保护下加入反应液中。所得反应液在25℃下搅拌4小时。反应结束后在0℃下用饱和碳酸钠水溶液(20mL)和饱和硫代硫酸钠水溶液(20mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL x3)萃取，合并有机相后用饱和食盐水洗(20mL x3)，无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩后经制备薄层色谱纯化(甲醇/二氯甲烷＝1∶10)得到化合物9a。

MS-ESI计算值[M+H]⁺376，实测值376。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.82(s，1H)，8.61(d，J＝7.6Hz，1H)，8.25(d，J＝7.6Hz，2H)，7.91(d，J＝8.4Hz，1H)，7.71(t，J＝8.0Hz，1H)，4.31-4.29(m，1H)，3.97(d，J＝7.2Hz，1H)，3.71-3.66(m，1H)，3.35-3.33(m，1H)，3.30-3.26(m，1H)，3.04-3.03(m，2H)，2.04-1.93(m，1H)，1.86(s，3H)，1.76-1.70(m，1H)，1.21(d，J＝6.8Hz，3H)。

第二步

将化合物9a(66mg，0.18mmol)溶于1mL乙酸酐中，在氮气保护下反应混合物在120℃下搅拌4小时。反应结束后将反应液浓缩，0℃下用饱和碳酸钠水溶液(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mLx3)萃取，合并有机相后用饱和食盐水洗(20mLx3)，无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩。残余物用制备薄层色谱法纯化(甲醇/二氯甲烷＝1∶10)，得到化合物9b。

MS-ESI计算值[M+H]⁺376，实测值376。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.68(d，J＝7.2Hz，1H)，8.37(d，J＝7.6Hz，1H)，7.61-7.57(m，1H)，7.53-7.48(m，1H)，7.25-7.23(m，1H)，4.32-4.31(m，1H)，3.97-3.95(m，1H)，3.71-3.67(m，1H)，3.36-3.28(m，1H)，3.20-3.16(m，1H)，3.02-2.98(m，2H)，1.93-1.92(m，1H)，1.84(s，3H)，1.74-1.70(m，1H)，1.26(d，J＝6.8Hz，3H)。

第三步

化合物9b(53mg，0.14mmol)按照实施例6第八步的合成方法得到化合物9。

MS-ESI计算值[M+H]⁺334，实测值334。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.61(d，J＝8.0Hz，1H)，8.41(d，J＝6.4Hz，1H)，7.66(t，J＝8.0Hz，1H)，7.45(d，J＝7.6Hz，1H)，7.35(d，J＝7.2Hz，1H)，3.81-3.79(m，1H)，3.64-3.59(m，1H)，3.50-3.39(m，1H)，3.11-3.07(m，1H)，2.88-2.86(m，1H)，2.81-2.68(m，2H)，1.90-1.83(m，1H)，1.45(brs，1H)，1.22(d，J＝6.4Hz，3H)。

实施例10

第一步

化合物6h按照实施例9的合成方法经过三步反应得到化合物10。

MS-ESI计算值[M+H]⁺352，实测值352。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.66-8.63(m，2H)，7.74(t，J＝8.0Hz，1H)，7.45(d，J＝8.0Hz，1H)，4.08-4.06(m，1H)，3.72-3.64(m，2H)，3.37-3.34(m，1H)，3.18-3.10(m，1H)，3.04-3.02(m，2H)，2.09-2.04(m，1H)，1.75-1.72(m，1H)，1.21(d，J＝6.4Hz，3H)。

实施例11

第一步

化合物1j按照实施例9第一步的合成方法得到化合物11a。

第二步

向化合物11a(40mg，0.09mmol)，四丁基溴化铵(6mg，0.02mmol)和醋酸钠(22mg，0.27mmol)的3mL水和3mL二氯甲烷混合溶液中加入苯甲酰氯(25mg，0.18mmol)。所得反应液在20℃反应1小时。反应结束后，分液，水相用二氯甲烷(5mL x2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗产品用制备薄层色谱法纯化(乙酸乙酯)得到化合物11b。

第三步

化合物11b(15mg，0.03mmol)按照实施例1第八步的合成方法得到化合物11。

MS-ESI计算值[M+H]⁺346，实测值346。

¹H NMR(400MHz，D₂O)δ8.54(brd，J＝8.0Hz，1H)，8.38(brd，J＝7.6Hz，1H)，7.65(t，J＝8.0Hz，1H)，7.39(d，J＝7.6Hz，1H)，7.14(d，J＝7.6Hz，1H)，4.00-3.83(m，2H)，3.75-3.65(m，1H)，3.54-3.39(m，1H)，3.35-3.14(m，2H)，2.41-2.28(m，1H)，2.08-1.93(m，1H)，1.36-1.24(m，1H)，1.13-0.99(m，1H)，0.84-0.72(m，1H)，0.65-0.53(m，1H)。

体外评价ROCK蛋白激酶抑制活性

实验目的：检测化合物的ROCK蛋白激酶抑制IC₅₀值。

实验材料：

测定缓冲溶液：20mM Hepes(pH7.5)，10mM MgCl₂，1mM EGTA，0.02％Brij35，0.02mg/ml BSA，0.1mM Na₃VO₄，2mM DTT，1％DMSO

实验操作：

将新鲜制备的缓冲溶液中加入ROCK蛋白激酶底物Long S6Kinase substratepeptide，浓度20μM.然后加入1nMROCK蛋白激酶，均匀搅拌.使用Echo550加入含有待测化合物或阳性参照物的系列DMSO稀释液(始于10μM，按3倍系列稀释).室温下预温育20分钟，加入³³p-ATP(放射强度10μCi/μL)引发反应，室温反应两小时。然后使用P81离子交换纸(Whatman#3698-915)过滤，用0.75％磷酸洗涤。使用Filter-Binding方法检测放射强度。

化合物的蛋白激酶抑制活性表达为相对空白底物(单纯DMSO)残存的蛋白激酶活性。利用Prism软件包(GraphPad Software，San Diego California，USA)计算IC50值和曲线。结果见表1。

本实验以Fasudil(法舒地尔)为阳性参照物。

实验结果：

表1蛋白激酶抑制活性测试结果

供试品(各实施例所制得的化合物)	蛋白激酶抑制活性(nM)
		实施例1	20
实施例2	32
		实施例3	93
实施例6	12
		实施例6-1/6-2	65/8
实施例7	28
		实施例7-1/7-2	63/15
实施例8	18
		实施例10	783
Fasudil	116

结果表明：本发明化合物具有显著甚至意料不到的蛋白酶抑制活性。

大鼠体内药代动力学评价

实验目的

以雄性SD大鼠为受试动物，单次给药后测定化合物血药浓度并评估药代动力学行为。

实验操作

选择健康成年雄性SD大鼠6只(周龄7-10周，购自上海斯莱克实验动物有限公司)，随机分为2组，每组3只动物，一组静脉给予受试化合物2mg/kg，另一组灌胃给予受试化合物10mg/kg。静脉给药组和灌胃给药组溶媒均为10％DMSO+18％HP-β-CD+72％生理盐水。静脉组动物于给药后0.0833，0.25，0.5，1，2，4，8和24小时采集血液样品，灌胃给药组动物于给药后0.25，0.5，1，2，4，6，8，和24小时后收集血液样品。LCMSMS法测定血浆药物浓度，使用WinNonlin^TMversion6.3(Pharsight Mountain View，CA)药动学软件，以非房室模型对数梯形法计算相关药动学参数。

实验结果

测试结果见表2。

表2大鼠体内药代动力学评价

结果表明，本发明化合物半衰期提高约3倍，清除率显著降低，证明本发明比现有技术有更优越的性质。

大鼠体内药效学研究

实验目的

探讨受试化合物(实施例6)在SD大鼠左肺单侧肺纤维的疗效观察，以类似作用机制的法舒地尔和临床治疗用药吡非尼酮和尼达尼布为参照。

实验操作

雄性SD大鼠，根据体重随机分为十一组，即假手术组，模型组，尼达尼布100和30mg/kg/d-qd组，吡非尼酮50和15mg/kg/d-bid组，法舒地尔25mg/kg/d-qd组，受试化合物(实施例6)1，3，10mg/kg/d-bid组及受试化合物(实施例6)3mg/kg/d-qd组。各组动物于造模第8天开始灌胃给药，共计给药14天。末次给药后次日安乐死全部动物，取左肺，进行肺内等量福尔马林液灌注，进行称重及肺病理分析肺纤维化评分情况。

实验结果

采用Masson Trichrome染色对左肺肺纤维化病灶进行肺纤维化病灶面积、肺纤维化病理评分以及纤维化等级参数进行病理评价。肺纤维化ashcraft评分结果显示阳性药尼达尼布和吡非尼酮与模型组相比都具有显著性改善肺纤维化的程度(p＜0.05)(图1)；受试化合物(实施例6)三个不同剂量每天两次口服给药连续14天可见显著性抑制肺纤维化，与模型组比较具有显著性差异(p＜0.001)(图1)，但是未见明确的剂量依赖性疗效反应。受试化合物(实施例6)每天一次3mg/kg口服同样可见显著性抑制肺纤维化的疗效，并且与相同剂量的每日两次口服的疗效一致，未见显著性差异(图1)。受试化合物法舒地尔每天一次25mg/kg连续口服14天获得了与阳性药一致的抑制肺纤维化的疗效(p＜0.001)(图1)。以ashcraft评分3分为界计算3分以下(包含3分)或4分以上(包含4分)的肺纤维化程度的百分比，结果显示模型组接近65％以上的病灶区域评分在4分或4分以上，经过药物治疗后各药物治疗组动物的病灶区评分在3分以下区域的占70％以上。统计学结果显示阳性药尼达尼布和吡非尼酮与模型组相比具有显著性差异(p＜0.001)；各受试化合物(实施例6)不同剂量治疗组与模型组比较具显著性统计学差异，但无明显的剂量依赖性疗效。

(图2)。

实验结论：在博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型中，受试化合物(实施例6)连续给药治疗两周呈现剂量依赖性抑制肺纤维化的疗效，并且在低至1mg/kg BID即起效。受试化合物(实施例6)在更低剂量下可以达到与尼达尼布、吡非尼酮和法舒地尔相当的对肺纤维化的改善作用。

hERG实验

实验所用的稳定表达hERG钾离子通道的细胞来自于Aviva Biosciences的CHO-hERE，CHO-hERG培养于5％CO₂，37℃的环境下。hERGQPatch^HTX实验是在室温下进行的。在QPatch AssaySoftware 5.2(Sophion Bioscience)的软件上建立全细胞方案，电压刺激方案和化合物检测方案。首先进行30次重复设定电压刺激，该区段为后续分析的基线区域，随后加入5μl细胞外液，重复三次。依次加入各个化合物的作用浓度，仍旧以5μl加入体积重复三次。每一测试浓度孵育细胞至少不低于5mins。整个记录过程中，各项指标需达到数据分析接收标准，若未达到该标准，则该细胞不计入分析范围，化合物将重新进行测试，以上记录过程由均由Qpatch分析软件自动化操作。每一化合物测试浓度依次为0.24μM，1.20μM，6.00μM，30.00μM，每一浓度至少重复两个细胞。在每一个完整电流记录中，基于峰值电流在阴性对照中所占的百分比，可以计算出每一化合物作用浓度的抑制百分比。利用标准希式方程拟合得到量效关系曲线，具体方程如下：

I_(C)＝I_b+(I_fr-I_b)*cⁿ/(IC₅₀ ⁿ⁺cⁿ)

C为化合物测试浓度，n为斜率

曲线拟合和抑制率计算均由Qpatch分析软件分析完成，若最低浓度下抑制率超过半数抑制或最高浓度下抑制率未达到半数抑制，则该化合物相应的IC₅₀低于最低浓度或IC₅₀值大于最高浓度。

实验结果

实施例化合物hERG抑制活性结果见表3。

表3 hERG抑制活性评价

结果表明，本发明化合物与现有技术相比，具有更低的hERG的潜在风险。

Claims (4)

1.一种如下式所示的化合物、其药学上可接受的盐及其立体异构体，其选自：

2.一种药物组合物，包括治疗有效量的根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐及其立体异构体作为活性成分以及药学上可接受的载体。

3.根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐及其立体异构体在制备治疗血管收缩引起的相关病症的药物上的应用。

4.根据权利要求2所述的药物组合物在制备治疗血管收缩引起的相关病症的药物上的应用。

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