CN110988168A - 一种同时测定2-甲基咪唑中乙醛和乙二醛含量的方法及其应用 - Google Patents
一种同时测定2-甲基咪唑中乙醛和乙二醛含量的方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种同时测定2‑甲基咪唑中乙醛和乙二醛含量的方法，该检测方法采用柱前衍生化液相色谱法。本发明提供的检测方法采用高效液相色谱法实现了同时对乙醛和乙二醛进行快速准确测定，具有较高的灵敏度和专属性，操作简捷，分离度符合标准，并为以2‑甲基咪唑为起始物料或者中间体的药物进行乙醛和乙二醛检测奠定了基础，具有现实意义。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种同时测定2-甲基咪唑中乙醛和乙二醛含量的液相方法及其应用。
背景技术
2-甲基咪唑(英文名：2-Methylimidazole)化学名成为2-甲基-1,3-氮杂茂；2-甲基甘恶啉,2-甲基-1H-咪唑，分子式为C4H6N2，分子量为82.10，CAS登录号:693-98-1。其结构如式I所示。
2-甲基咪唑是用于生产甲硝唑、二甲硝咪唑等药物的中间体，是合成咪达那新的起始物料，还可以用于合成肾素抑制剂、抗溃疡药、血清素拮抗物及血清素受体拮抗物、抗心律失常药物、抗惊厥药物、抗血栓形成药物、血小板活化因子拮抗药物、局部缺血治疗药物、治疗关节炎及骨质疏松药物等多种药物。
通常以乙醛和氨水在20℃条件下进行反应，然后加入乙二醛，在40℃进行反应。从合成路径可以看出，2-甲基咪唑会含有乙醛和乙二醛，2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，与酒精饮料摄入有关的乙醛在一类致癌物清单中、乙醛在2类致癌物清单中。乙二醛具有致突变性和致癌性，与活性氧的产生有关，还能与氨基酸作用。作为合成众多药物的主要起始原料或中间体，建立检测2-甲基咪唑中乙醛和乙二醛含量的方法，对其进行控制是十分必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效液相色谱法同时检测2-甲基咪唑中乙醛和乙二醛的含量，该方法可用于多种以2-甲基咪唑为起始物料或者中间体的药物的制备过程和最终产品的质量控制。
样品处理方法如下：
衍生化试剂和醛基按一定物质量比溶于稀释剂中，加入磷酸、盐酸、醋酸或两种的混合酸在一定温度反应一段时间；
所述稀释剂是纯水或其与甲醇、乙腈、乙醇任一种或两种的混合溶液；
所述的衍生化试剂为2,4-二硝基苯肼、4-硝基邻苯二胺、盐酸羟胺中的一种；
色谱条件如下：
色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，选自Kromasil C18、ODS-C18、ThermoSyncronis C18、Thermo Hypersil GOLD C18、Waters symmetry C18、Waters RP C18、Agilent XDB C18、Agilent Eclipse Plus C18
流动相A是纯水或盐溶液，流动相B是乙腈、甲醇、乙醇任一种或者两种的混合液；
检测器为紫外检测器，示差检测器，蒸发光散射检测器，二极管阵列检测器中的一种；
检测器的检测波长为330-440nm。
以一定量的样品浓度进样分析。
优选地，所述的稀释剂为纯水与乙腈的混合溶液。
进一步，所述的纯水与乙腈的混合溶液为93％～95％乙腈水溶液。所述百分比为体积百分比。
优选地，所述色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18。
进一步，所述色谱柱的流速为0.8-1.2ml/min，柱温为30～40℃。
优选地，所述衍生化试剂为2,4-二硝基苯肼。
优选地，所述衍生化试剂和醛基按一定物质量比为4:1～20:1。
优选地，所述的样品处理中加入磷酸。
进一步，所述的入磷酸的量为0.45～0.65ml/ml。
优选地，所述的反应温度为40～65℃。
优选地，所述的反应时间为60～120min。
优选地，所述的流动相A为纯水，所述的流动相B为乙腈。
进一步，所述的流动相A：流动相B＝35:65～45:55。
优选地，所述检测器为二极管阵列检测器。
优选地，所述的检测器的检测波长为420～440nm。
优选地，所述的样品浓度为1.5～2.0mg/ml。
本发明提供一种上述检测方法在2-甲基咪唑类药物中乙醛和乙二醛的含量检测中的应用，其中，所述2-甲基咪唑类药物为以2-甲基咪唑为起始物料或者中间体合成的药物。
本发明还对乙二醛的多种衍生物进行抑制，使乙二醛仅产生一种(包含顺反结构)衍生物。
本发明提供的2-甲基咪唑中乙醛和乙二醛的检测方法采用高效液相色谱法实现了同时对乙醛和乙二醛进行快速准确测定，具有较高的灵敏度和专属性，操作简捷，分离度符合标准(即，乙醛衍生物的最小分离度、乙二醛衍生物的最小分离度均大于1.50)因此可用于2-甲基咪唑中乙醛和乙二醛含量的质量控制，并为以2-甲基咪唑为起始物料或者中间体的药物进行乙醛和乙二醛检测奠定了基础，具有现实意义。
附图说明
图1为稀释剂定位溶液液相色谱图；
图2为空白溶剂(衍生化试剂)定位溶液液相色谱图；
图3为2-甲基咪唑定位溶液液相色谱图；
图4为乙醛定位溶液液相色谱图；
图5为乙二醛定位溶液液相色谱图；
图6为乙醛衍生化定位溶液液相色谱图；
图7为乙二醛衍生化定位溶液液相色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述。
实施例1
实验条件：
样品浓度：2mg/ml；
n(醛基)：n(DNPH)＝1:4；
磷酸量：0.45ml/ml；
反应温度：40℃；
反应时间：60min。
所述的稀释剂按体积百分数计分别为93％～95％的乙腈水溶液。按上述实验条件分别反应。均不会产生析出物，溶液澄清。满足测定需求。
实施例2
实验条件：
Agilent1260-DAD高效液相色谱仪；
色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18 4.6×150mm 5μm；
流速：1.0mL/min；
检测波长：440nm；
柱温：30℃；
进样量：10μL；
样品浓度：2mg/ml；
稀释剂：体积分数为95％乙腈水溶液；
n(醛基)：n(DNPH)＝1:4；
磷酸量：0.45ml/ml；
反应温度：40℃；
反应时间：60min。
所述的流动相A与流动相B的比分别为35:65、40:60、45:55。结果见表1。
表1不同流动相比例-分离效果结果
从上表可以看出，各衍生物之间均可达到基线分离。
实施例3
实验条件：
Agilent1260-DAD高效液相色谱仪；
色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18 4.6×150mm 5μm；
流动相：水：乙腈＝40:60；
流速：1.0mL/min；
检测波长：440nm；
柱温：30℃；
进样量：10μL；
样品浓度：2mg/ml；
稀释剂：体积分数为95％乙腈水溶液；
n(醛基)：n(DNPH)＝1:4；
磷酸量：0.45ml/ml；
反应温度：40℃；
所述的反应时间分别60min、70min、80min、90min、100min、110min、120min，结果见表2。
表2不同反应时间-衍生物测定结果
从上表可以看出，各衍生物峰面积均达到稳定数值。
实施例4
实验条件：
Agilent1260-DAD高效液相色谱仪；
色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18 4.6×150mm 5μm；
流动相：水：乙腈＝40:60；
流速：1.0mL/min；
检测波长：440nm；
柱温：30℃；
进样量：10μL；
样品浓度：2mg/ml；
稀释剂：体积分数为95％乙腈水溶液；
n(醛基)：n(DNPH)＝1:4；
磷酸量：0.45ml/ml；
反应时间：60min。
所述的反应温度为40～65℃。结果见表3。
表3不同反应温度-衍生物测定结果
从上表可以看出，各衍生物峰面积均达到稳定数值。
实施例5
实验条件：
Agilent1260-DAD高效液相色谱仪；
色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18 4.6×150mm 5μm；
流动相：水：乙腈＝40:60；
流速：1.0mL/min；
检测波长：440nm；
柱温：30℃；
进样量：10μL；
样品浓度：2mg/ml；
稀释剂：体积分数为95％乙腈水溶液；
磷酸量：0.45ml/ml；
反应温度：40℃；
反应时间：60min。
所述衍生化试剂的物质量与醛基的物质量比为4:1～20:1。结果见表4。
表4不同衍生化试剂的物质量与醛基的物质量比-衍生物测定结果
从上表可以看出，各衍生物峰面积均达到稳定数值。
实施例6
实验条件：
Agilent1260-DAD高效液相色谱仪；
色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18 4.6×150mm 5μm；
流动相：水：乙腈＝40:60；
流速：1.0mL/min；
检测波长：440nm；
柱温：30℃；
进样量：10μL；
样品浓度：2mg/ml；
稀释剂：体积分数为95％乙腈水溶液；
n(醛基)：n(DNPH)＝1:4；
反应条件：40℃；
反应时间：60min。
所述的反应中加入磷酸的量为0.45～0.65ml/ml。结果见表5。
表5不同磷酸加入量-衍生物测定数据
从上表可以看出，各衍生物峰面积均达到稳定数值。
实施例7
一、仪器与条件
Agilent1260-DAD高效液相色谱仪、Milli-Q超纯水机、梅特勒XS205DU电子天平、超声波清洗器、真空过滤装置、色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18 4.6×150mm 5μm、流动相：水：乙腈＝40:60、流速：1.0mL/min、检测波长：440nm柱温：30℃、进样量：10μL、样品浓度：2mg/ml、稀释剂：体积分数为95％乙腈水溶液、n(醛基)：n(DNPH)＝1:4、磷酸量：0.45ml/ml、反应温度：40℃、反应时间：60min。
二、实验步骤
1.溶液的配制：
衍生试剂溶液1：取2,4-二硝基苯肼适量，精密称定，溶于200ml乙腈，制备成每1ml含2,4，-二硝基苯肼2.28mg的溶液，作为衍生试剂溶液1。
衍生试剂溶液2：取2,4-二硝基苯肼适量，精密称定，溶于200ml乙腈，制备成每1ml含2,4，-二硝基苯肼0.45mg的溶液，作为衍生试剂溶液2。
空白溶剂溶液：取0.1ml衍生试剂溶液2、0.45ml磷酸，置于10ml容量中，加入稀释剂定容，密封，置于40℃环境反应60min，作为空白溶剂溶液。
系统适应性溶液：取0.1ml衍生试剂溶液1、0.45ml磷酸，置于10ml容量中，分别加入精密称定的乙二醛、乙醛，用稀释剂定量稀释成每1ml含乙二醛和乙醛各0.50μg的溶液，密封，置于40℃环境反应60min，作为系统适应性溶液。
对照品溶液：取0.1ml衍生试剂溶液2、0.45ml磷酸溶液、置于10ml容量中，分别加入精密称定的乙二醛、乙醛，用稀释剂定量稀释成每1ml含乙二醛和乙醛各0.10μg的溶液，密封，置于40℃环境反应60min，作为对照品溶液。
供试品溶液：取0.1ml衍生试剂溶液2、0.45ml磷酸溶液、置于10ml容量中，加入精密称定的2-甲基咪唑，用稀释剂定量稀释成每1ml含2-甲基咪唑2.0mg的溶液，密封，置于40℃环境反应60min，平行制备两份，作为供试品溶液。
2.方法学验证
2.1专属性试验
取稀释剂定位溶液、空白溶剂定位溶液、乙醛定位溶液、乙二醛定位溶液、乙醛衍生化定位溶液、乙二醛衍生化定位溶液、样品定位溶液测定。要求稀释剂定位溶液、空白溶剂定位溶液不得干扰乙醛衍生物和乙二醛衍生物的测定，乙醛衍生物和乙二醛衍生物的最小分离度应符合要求。结果见表6和附图1～7。
表6专属性试验结果
2.2线性范围，检出限和定量限
表7线性范围、检出限和定量限试验结果
| 名称 | 线性方程 | 相关系数 | 检出限ppm | 定量限ppm |
| 乙醛衍生物 | Y＝510.74X+0.1522 | 0.9998 | 2.1 | 6.3 |
| 乙二醛衍生物 | Y＝458.13X-0.0148 | 0.9999 | 1.8 | 5.5 |
2.3溶液稳定性
表8溶液稳定性试验结果
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (14)
1.一种同时检测2-甲基咪唑中乙醛和乙二醛的含量的方法，其特征在于：所述检测方法为柱前衍生化高效液相色谱法，
样品处理方法如下：
衍生化试剂和醛基按一定物质量比溶于稀释剂中，加入磷酸、盐酸、醋酸或两种的混合酸在一定温度反应一段时间；
色谱条件如下：
色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
流动相A是纯水或盐溶液，流动相B是乙腈、甲醇、乙醇任一种或者两种的混合液；
检测器为紫外检测器，示差检测器，蒸发光散射检测器，二极管阵列检测器中的一种；
以一定量的样品浓度进样分析。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的稀释剂为纯水或其与甲醇、乙腈、乙醇任一种或两种的混合溶液；优选纯水与乙腈的混合溶液。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述的稀释剂纯水与乙腈的混合溶液为93％～95％乙腈水溶液，所述百分比为体积百分比。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的衍生化试剂为2,4-二硝基苯肼、4-硝基邻苯二胺、盐酸羟胺中的一种；优选2,4-二硝基苯肼。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的衍生化试剂和醛基按一定物质量比为4:1～20:1。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的样品处理加入的酸优选加入磷酸。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述的加入磷酸的量为0.45～0.65ml/ml。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的反应温度为40～65℃；所述反应时间为60～120min。。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的流动相A为纯水，流动相B为乙腈。
10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的流动相A：流动相B＝35:65～45:55。
11.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述色谱柱选自：Kromasil C18、ODS-C18、Thermo Syncronis C18、Thermo Hypersil GOLD C18、Waters symmetry C18、Waters RP C18、Agilent XDB C18、Agilent Eclipse Plus C18；优选为Agilent EclipsePlus C18；所述流动相流速为0.8-1.2ml/min；所述柱温为30～40℃。
12.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述检测器为二极管阵列检测器；所述检测器的检测波长为330～440nm；优选为420～440nm。
13.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的样品浓度为1.5～2.0mg/ml。
14.根据权利要求1～13任一项所述的检测方法在2-甲基咪唑类药物中乙醛和乙二醛的含量检测中的应用。
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