CN110972808B - 一种工业化瓶栽二孢拟奥德蘑的培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种工厂化瓶栽二孢拟奥德蘑的培育方法。本发明的培育方法包括以下步骤：栽培种培育：采用瓶栽方式，将接种的二孢拟奥德蘑避光培养，根据菌丝的吃料比调节温度，得到栽培种；菌丝扭结：搔菌，开启瓶口倒置于灭菌的湿布上，控制温度、湿度和二氧化碳浓度条件下避光培养，菌丝恢复后调整温度和湿度，继续黑暗培养至二孢拟奥德蘑的菌丝扭结形成原基；催蕾：控制温度、湿度、二氧化碳浓度条件下避光培育原基至长出的菇蕾至0.3～0.7cm；生育：控制温度、湿度、二氧化碳浓度及条件下光照培养菇蕾，以达到疏蕾和促进菇体生物量积累的作用，采收。本发明的培育方法生产周期短，生产的二孢拟奥德蘑品质好、质量稳定、发育一致。

Description

一种工业化瓶栽二孢拟奥德蘑的培育方法

技术领域

本发明涉及食用菌栽培技术领域，具体涉及一种工业化瓶栽二孢拟奥德蘑的培育方法。

背景技术

二孢拟奥德蘑(Hymenopellis raphanipes)属于一种新型食用菌，隶属于担子菌门(Basidiomycota)，伞菌目(Agaricales)，膨瑚菌科(pHysalacriceae)，小奥德蘑属(Oudemansiella)。目前对二孢拟奥德蘑报道及研究相对较少，在种植方面的研究更少。目前，二孢拟奥德蘑的栽培还停留在传统生产模式，而传统生产模式存在菌种污染率高、品质不一致、生物转化率和产量低的问题。因此，需要探索一种具有高产量、高品质、生长周期短等特点的新栽培模式。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种工业化瓶栽二孢拟奥德蘑的培育方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种工业化瓶栽二孢拟奥德蘑的培育方法，具体包括如下步骤：

(1)栽培种培育

采用瓶栽方式；取栽培瓶体积80％～85％的固体培养基装瓶，中间打孔至瓶底，密封瓶口，灭菌，冷却后每瓶接种固体培养基体积4/100～7/100。还是的二孢拟奥德蘑二级种或者接种3～5个二孢拟奥德蘑一级种液体菌球；接种后将栽培瓶水平放置，26～30℃下避光培养，4～6d定期翻转瓶身，当菌丝的吃料比占固体培养基总体积的90％～95％时，缓慢降低温度至18～22℃，继续培养，菌丝吃透菌料时将温度调整至24～26℃进行后熟阶段的培养，再将温度调整至28～32℃，继续培养，得到栽培种；

(2)菌丝扭结

将步骤(1)得到的栽培种搔菌，搔菌深度为瓶口往下到料面2.0～2.5cm，瓶肩以上到料面1cm左右，开启瓶口倒置于灭菌的湿布上，温度24～26℃、湿度85％～98％、二氧化碳浓度400～800ppm条件下黑暗培育，再将温度控制在26～30℃，湿度控制在85％～95％，使菌丝恢复并防止杂菌污染，菌丝完全恢复后再调整温度至30～32℃、湿度92％～98％，继续黑暗培养至二孢拟奥德蘑的菌丝扭结形成原基；

(3)催蕾

温度26～30℃、湿度90％～98％、二氧化碳浓度800～2000ppm条件下避光培育步骤(2)得到的原基，出现的菇蕾长至0.3～0.7cm时取走湿布，将栽培瓶正立放置；

(4)生育

温度26～32℃、湿度85％～98％、二氧化碳浓度300～1500ppm及光照强度120～600lx条件下培养步骤(3)得到的菇蕾，当菇体生长至12～23cm时，生育完毕，及时采收。

步骤(1)中所述的固体培养基为按照以下质量分数计的原料配制得到：发酵的棉子壳85.2％、麦麸10.2％、葡萄糖2.6％、硫酸镁0.3％、磷酸二氢钾1.2％、碳酸钙0.5％；按质量配比称取固体培养基，加水搅拌拌匀，将固体培养基含水量调节至58％～68％，pH 7.0～9.0。

所述的发酵的棉子壳是通过将其加水搅拌，加入石灰水调节pH值至8.0～9.0，建堆发酵7～10天后得到。

步骤(1)中所述的灭菌为121℃、1.034MPa高压蒸汽灭菌2.5h。

步骤(1)中所述的栽培种培育的过程中，翻转瓶身和根据菌丝的吃料比调整温度的情况具体如下：

1)培养1天，温度控制在26～28℃；优选为温度控制在26℃；

2)培养5～7天，温度控制在28～30℃，第5天瓶身水平翻转180°；优选为温度控制在30℃；

3)培养5～9天，温度控制在28～30℃，第5天瓶身水平翻转180°；优选为温度控制在30℃；

4)培养4～6天，菌丝吃料占固体培养基总体积的90％～95％时，将温度控制在18～22℃；优选为菌丝吃料占固体培养基总体积的92％时，将温度控制在22℃；

5)培养1天，菌丝吃透菌料时，瓶身水平翻转180°，温度控制在24～26℃，进行后熟阶段的培养；优选为温度控制在26℃；

6)培养10～15天，温度控制在28～32℃，培养至菌丝体表面产生“黄水”，得到栽培种；优选为温度控制在32℃；

7)培养1天，将温度控制在28～32℃，结束此阶段的培养；优选为温度控制在32℃。

步骤(2)中所述的菌丝扭结的过程中，温度、湿度及二氧化碳浓度的控制情况具体如下：

1)培养1天，温度控制在24～26℃，湿度控制在85％～98％，二氧化碳浓度控制在400～800ppm；优选为温度控制在24℃，湿度控制在90％，二氧化碳浓度控制在800ppm；

2)培养6～9天，温度控制在24～26℃，湿度控制在85％～98％，二氧化碳浓度控制在400～800ppm；优选为温度控制在24℃，湿度控制在90％，二氧化碳浓度控制在800ppm；

3)培养1天，温度控制在26～30℃，湿度控制在85％～95％，二氧化碳浓度控制在400～800ppm，使菌丝恢复并防止杂菌污染；优选为温度控制在30℃，湿度控制在90％，二氧化碳浓度控制在800ppm；

4)培养7～10天，菌丝完全恢复后将温度控制在30～32℃，湿度控制在92％～98％，二氧化碳浓度控制在400～800ppm，菌丝形成的菌膜表面产生乳黄色亮点时，原基形成，结束该阶段的培养；优选为温度控制在32℃，湿度控制在92％，二氧化碳浓度控制在800ppm。

步骤(3)中所述的催蕾的过程中，温度、湿度和二氧化碳浓度的控制情况具体如下：

1)培养1天，温度控制在26～30℃，湿度控制在90％～98％，二氧化碳浓度控制在800～2000ppm；优选为温度控制在30℃，湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在1500ppm；

2)培养3～4天，温度控制在26～30℃，湿度控制在90％～98％，二氧化碳浓度控制在800～2000ppm，菇蕾长至0.3～0.7cm时，取走湿布，将培养瓶正立放置；优选为温度控制在30℃，湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在1500ppm；

步骤(4)中所述的生育的过程中，温度、湿度、二氧化碳浓度和光照的控制情况具体如下：

1)培养3天，温度控制在26～30℃，湿度控制在90％～98％，二氧化碳浓度控制在300～700ppm，光照强度控制在120～600lx，光照时间为8h；优选为温度控制在30℃，湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在700ppm，光照强度控制在600lx；

2)培养1天，进行疏蕾，温度控制在30～32℃，湿度控制在85％～90％，二氧化碳浓度控制在700～1500ppm，光照强度控制在120～600lx，光照时间为8h；优选为温度控制在32℃，湿度控制在86％，二氧化碳浓度控制在1200ppm，光照强度控制在600lx；

3)培养5～6天，温度控制在28～32℃，湿度控制在90％～98％，二氧化碳浓度控制在700～1000ppm，光照强度控制在120～600lx，光照时间为8h，当二孢拟奥德蘑的菇体生长到15～23cm，生育完毕，及时采收；优选为温度控制在32℃，湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在800ppm，光照强度控制在600lx。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

1.本发明的培育方法能够使二孢拟奥德蘑实现周年生产和均衡供应。

2.本发明的培育方法中的第一步栽培种培育部分操作，因为模式本身瓶盖封闭不开启的特点，因此无需对环境湿度、二氧化碳浓度及光照等条件进行控制，方便管理和简化流程，大大节省生产成本。

3.本发明的培育方法通过结合二孢拟奥德蘑生长特点，催蕾及生育阶段，合理利用温度、湿度、光照和二氧化碳浓度，满足了二孢拟奥德蘑不同时期的生长需求，均衡控制整个生产过程，稳定品质，使培育得到的相同批次的二孢拟奥德蘑子实体品质好、质量稳定、发育一致，且二孢拟奥德蘑菌盖均匀适中。

4.本发明的培育方法简单，生产周期短，生产成本较低，流程简化，适合大规模生产。

具体实施例

下面将结合实施方式对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

二孢拟奥德蘑菌株，名称为二孢拟奥德蘑(Hymenopellis raphanipes)MesAdm 1，保藏编号为GDMCC No：60886，该菌株于2019年10月29日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼的广东省微生物菌种保藏中心。

实施例1

(1)发酵栽培料：称取栽培原材料棉子壳，加水拌匀，在加水过程中用搅拌机充分搅拌，使其充分吸收水份，再加入适量石灰水拌匀，使其pH值为8.0，建堆发酵8天，去除棉子壳中的棉酚，同时增加材料的持水性，使材料软化。

固体培养基配制：发酵后的棉子壳85.2％、麦麸10.2％、葡萄糖2.6％、硫酸镁0.3％、磷酸二氢钾1.2％、碳酸钙0.5％；含水量60％～75％，pH自然；按质量份配比称取固体培养基，加水拌匀，在加水过程中用搅拌机充分搅拌，使其充分吸收水份，将固体培养基含水量调节至68％，pH 8.5。

(2)栽培种培育：

选取干净无破损的工业化出菇瓶作为栽培瓶，将占工业出菇瓶体积84％的固体培养基装瓶，保持松紧度一致，瓶肩无空隙，中间打孔至瓶底，选取与瓶子配对的盖子密封瓶口。将栽培瓶采用高压蒸汽杀菌法(温度121℃、压力1.034MPa条件下灭菌2.5h)灭菌至无菌状态，栽培瓶搬进冷却室，使料温冷却至30℃左右。采用培育的优质二孢拟奥德蘑二级种接种，接种量为菌料体积的5/100，用橡胶塞封闭瓶口，为防止污染可以采用2～4层报纸包裹瓶塞；接种时将菌球均匀分散在固体培养基表面，避免集中在一起，造成发育缓慢；接种过程中防止发生污染情况，所有相关设备、作业工具、器具及手(或手套)消毒。接种后于30℃的菌种培养室内进行避光培养，培养至菌丝吃透菌料，转入菌丝后熟阶段，二孢拟奥德蘑菌丝体表面产生黄褐色液体，即食用菌菌种成熟度判断的指标“出黄水”；菌丝生长过程中会产生热量，加上栽培瓶堆放密度高，料内温度约高于室温2～3℃，需经常检查确保发菌料内温度低于32℃，湿度控制在60％～70％，二氧化碳浓度控制在3000ppm以下。

根据二孢拟奥德蘑菌丝的吃料比，上述避光培养的培养室内的温度和瓶身翻转情况控制如下：

1)培养1天，温度控制在26℃；

2)培养5天，温度控制在30℃，第5天瓶身水平翻转180°；

3)培养5天，温度控制在30℃，第5天瓶身水平翻转180°1～9天；

4)培养4天，菌丝吃料占总培养基体积的92％时，温度控制在22℃；

5)培养1天，菌丝吃透菌料时，瓶身水平翻转180°，温度控制在26℃，进行后熟阶段的培养；

6)培养11天，温度控制在32℃，培养至二孢拟奥德蘑菌丝体表面产生“黄水”，得到无杂菌、成熟的栽培种；

7)培养1天，将温度控制在32℃，结束该阶段的培养。

(3)菌丝扭结：

将步骤(2)得到的无杂菌、经过后熟的栽培种进行搔菌，搔菌深度为瓶口往下到料面2.0～2.5cm，瓶肩以上到料面1cm左右。搔去老菌后用高压纯净水冲洗瓶口，不再浇水，然后将栽培瓶倒置，放入育菇房，瓶子下垫一层吸水性强透气性好的湿布，保证瓶口环境处的空气湿度，同时需保持足够的通风量，使二氧化碳浓度控制在800ppm。保持黑暗培养，菌丝完全恢复后，通过控制温度和湿度，继续培育至二孢拟奥德蘑菌丝扭结形成原基。

菌丝扭结过程中，育菇房内的温度和空气湿度控制如下：

1)培养1天，温度控制在24℃，空气湿度控制在90％；

2)培养6天，温度控制在24℃，空气湿度控制在90％；

3)培养1天，温度控制在30℃，空气湿度控制在90％，使菌丝恢复并防止杂菌污染；

4)培养7天，菌丝完全恢复后将温度控制在32℃，空气湿度控制在92％，菌丝形成的菌膜表面产生乳黄色亮点时，原基形成，结束此阶段的培养。

(4)催蕾：

将步骤(3)得到的原基继续避光培育，直到出现菇蕾，当菇蕾长至0.3～0.7cm时，取走湿布，将栽培瓶正立放置。

催蕾过程中，育菇房内的温度、空气湿度及二氧化碳浓度控制如下：

1)培养1天，温度控制在30℃，空气湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在1500ppm；

2)培养4天，温度控制在30℃，空气湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在1500ppm，菇蕾长至0.3～0.7cm时，结束该阶段的培养，取走湿布，将培养瓶正立放置，转入下一阶段培养。

(5)生育：

将步骤(4)得到的菇蕾进行培养；当幼菇有一定数量时，进行疏蕾处理，减少弱菇蕾数量的产生，疏蕾后调整培育条件，促进二孢拟奥德蘑菇体菇体生物量积累，形成灰褐的特征色，当菇伞完全展开且菇帽变为深褐色时，及时采收。

生育过程中，育菇房内的温度、空气湿度、二氧化碳浓度、光照时间和强度和控制如下：

1)培养3天，温度控制在30℃，空气湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在700ppm，光照强度控制在600lx，光照时间为8h；

2)培养1天，进行疏蕾，温度控制在32℃，空气湿度控制在86％，二氧化碳浓度控制在1200ppm，光照强度控制在600lx，光照时间为8h；

3)培养6天，温度控制在32℃，空气湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在800ppm，光照强度控制在600lx，光照时间为8h，当二孢拟奥德蘑的菇体生长至15cm，生育完毕，及时采收。

本实施例中，统计每瓶总产量，结果如下：平均单瓶产量17～22朵菇体；子实体的形态：伞状；菌柄长度可达15～23cm，菌柄直径0.5～1.5cm；菌盖直径：4.0～12cm。

实施例2

(1)发酵栽培料：称取栽培原材料棉子壳，加水拌匀，在加水过程中用搅拌机充分搅拌，使其充分吸收水份，再加入适量石灰水拌匀，使其pH值为8.5，建堆发酵9天，去除棉子壳中的棉酚，同时增加材料的持水性，使材料软化。

固体培养基配制：发酵后的棉子壳85.2％、麦麸10.2％、葡萄糖2.6％、硫酸镁0.3％、磷酸二氢钾1.2％、碳酸钙0.5％；含水量60％～75％，pH自然；按质量份配比称取固体培养基，加水拌匀，在加水过程中用搅拌机充分搅拌，使其充分吸收水份，将固体培养基含水量调节至70％，pH 8.5。

(2)栽培种培育：

选取干净且无破损的工业化栽培瓶，将工业出菇瓶体积83％的固体培养基装瓶，保持松紧度一致，瓶肩无空隙，中间打孔至瓶底，选取与瓶子配对的盖子密封瓶口。将栽培瓶采用高压蒸汽杀菌法(温度121℃、压力1.034Mpa条件下灭菌2.5h)灭菌至无菌状态，栽培瓶搬进冷却室，使料温冷却至30℃左右。采用培育的优质二孢拟奥德蘑二级种接种，接种量为菌料体积的5/100，用橡胶塞封闭瓶口，为防止污染可以采用2～4层报纸包裹瓶塞；接种时采取均匀分散菌球栽培料表面的方式，避免集中在一起，造成发育缓慢；接种过程中防止发生污染情况，所有相关设备、作业工具、器具及手(或手套)消毒。接种后于28℃的菌种培养室内进行避光培养，培养至菌丝吃透菌料，转入菌丝后熟阶段，二孢拟奥德蘑菌丝体表面产生黄褐色液体，即食用菌菌种成熟度判断的指标“出黄水”；菌丝生长过程中会产生热量，加上栽培瓶堆放密度高，料内温度约高于室温2～3℃，需经常检查确保发菌料内温度低于32℃，湿度控制在60％～70％，二氧化碳浓度控制在3000ppm以下。

根据二孢拟奥德蘑菌丝的吃料比，上述避光培养的培养室内的温度和瓶身翻转情况控制如下：

1)培养1天，温度控制在26℃；

2)培养5天，培养温度控制在28℃，第5天瓶身水平翻转180°；

3)培养9天，温度控制在28℃，第5天瓶身水平翻转180°；

4)培养5天，菌丝吃料占总培养基体积的93％时，温度控制在20℃；

5)培养1天，菌丝吃透菌料时，瓶身水平翻转180°，温度控制在24℃，进入后熟阶段的培养；

6)培养10天，温度控制在28℃，培养至二孢拟奥德蘑菌丝体表面产生“黄水”，得到无杂菌、成熟的栽培种；

7)培养1天，结束该阶段的培养，将温度控制在28℃。

(3)菌丝扭结：

将步骤(2)得到的无杂菌、经过后熟的栽培种进行搔菌，搔菌深度为瓶口往下到料面2.0～2.5cm，瓶肩以上到料面1cm左右。搔去老菌后用高压纯净水冲洗瓶口，不再浇水，然后将栽培瓶倒置，放入育菇房，瓶子下垫一层吸水性强透气性好的湿布，保证瓶口环境处的空气湿度，同时需保持足够的通风量，使二氧化碳浓度控制在600ppm。保持黑暗培养，菌丝完全恢复后，通过控制温度和湿度，继续培育至二孢拟奥德蘑菌丝扭结形成原基。

菌丝扭结过程中，育菇房内的温度和空气湿度控制如下：

1)培养1天，温度控制在24℃，空气湿度控制在90％；

2)培养7天，温度控制在24℃，空气湿度控制在90％；

3)培养1天，温度控制在28℃，空气湿度控制在90％，使菌丝恢复并防止杂菌污染；

4)培养10天，菌丝完全恢复后将温度控制在30℃，空气湿度控制在93％，菌丝形成的菌膜表面产生乳黄色亮点时，原基形成，结束该阶段的培养，转入下一阶段的培育。

(4)催蕾：

将步骤(3)得到的原基继续避光培育，直到出现菇蕾，当菇蕾长至0.3～0.7cm时，取走湿布，将栽培瓶正立放置。

催蕾过程中，育菇房内的温度、空气湿度及二氧化碳浓度控制如下：

1)培养1天，温度控制在28℃，空气湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在1200ppm；

2)培养4天，温度控制在28℃，空气湿度控制在93％，二氧化碳浓度控制在1200ppm；菇蕾长至0.3～0.7cm时，结束该阶段的培养，取走湿布，将培养瓶正立放置，转入下一阶段培养。

(5)生育：

将步骤(4)得到的菇蕾进行培养；当幼菇有一定数量时，进行疏蕾处理，减少弱菇蕾数量的产生，疏蕾后调整培育条件，促进二孢拟奥德蘑菇体菇体生物量积累，形成灰褐的特征色，当菇伞完全展开且菇帽变为深褐色时，及时采收。

生育过程中，育菇房内的温度、空气湿度、二氧化碳浓度、光照时间和强度和控制如下：

1)培养3天，温度控制在28℃，空气湿度控制在93％，二氧化碳浓度控制在500ppm，光照强度控制在400lx，光照时间为8h；

2)培养1天，进行疏蕾，温度控制在30℃，空气湿度控制在87％，二氧化碳浓度控制在1000ppm，光照强度控制在400lx，光照时间为8h；

3)培养5天，温度控制在30℃，空气湿度控制在93％，二氧化碳浓度控制在1000ppm，光照强度控制在400lx，光照时间为8h，当二孢拟奥德蘑的菇体生长至15cm，生育完毕，及时采收。

本实施例中，统计每瓶总产量，结果如下：平均单瓶产量15～18朵菇体；子实体的形态：伞状；菌柄长度可达15～23cm，菌柄直径0.5～1.5cm；菌盖直径：4.0～12cm。

实施例3

(1)发酵栽培料：称取栽培原材料棉子壳，加水拌匀，在加水过程中用搅拌机充分搅拌，使其充分吸收水份，再加入适量石灰水拌匀，使其pH值为9.0，建堆发酵10天，去除棉子壳中的棉酚，同时增加材料的持水性，使材料软化。

固体培养基配制：发酵后的棉子壳85.2％、麦麸10.2％、葡萄糖2.6％、硫酸镁0.3％、磷酸二氢钾1.2％、碳酸钙0.5％；含水量60％～75％，pH自然；按质量份配比称取固体培养基，加水拌匀，在加水过程中用搅拌机充分搅拌，使其充分吸收水份，将固体培养基含水量调节至75％，pH 9.0。

(2)栽培种培育：

选取干净且无破损的工业化栽培瓶，将工业出菇瓶体积82％的固体培养基装瓶，保持松紧度一致，瓶肩无空隙，中间打孔至瓶底，选取与瓶子配对的盖子密封瓶口。将栽培瓶采用高压蒸汽杀菌法(温度121℃、压力1.034Mpa条件下灭菌2.5h)灭菌至无菌状态，栽培瓶搬进冷却室，使料温冷却至30℃左右。采用培育的优质二孢拟奥德蘑二级种接种，接种量为菌料体积的5/100，用橡胶塞封闭瓶口，为防止污染可以采用2～4层报纸包裹瓶塞；接种时采取均匀分散菌球栽培料表面的方式，避免集中在一起，造成发育缓慢；接种过程中防止发生污染情况，所有相关设备、作业工具、器具及手(或手套)消毒。接种后于26℃的菌种培养室内进行避光培养，培养至菌丝吃透菌料，转入菌丝后熟阶段，二孢拟奥德蘑菌丝体表面产生黄褐色液体，即食用菌菌种成熟度判断的指标“出黄水”；菌丝生长过程中会产生热量，加上栽培瓶堆放密度高，料内温度约高于室温2～3℃，需经常检查确保发菌料内温度低于32℃，湿度控制在60％～70％，二氧化碳浓度控制在3000ppm以下。

根据二孢拟奥德蘑菌丝的吃料比，上述避光培养的培养室内的温度和瓶身翻转情况控制如下：

1)培养1天，温度控制在26℃；

2)培养7天，温度控制在26℃，第5天瓶身水平翻转180°；

3)培养7天，温度控制在28℃，第5天瓶身水平翻转180°；

4)培养6天，菌丝吃料占总培养基体积的92％时，温度控制在20℃；

5)培养1天，菌丝吃透菌料时，瓶身水平翻转180°，温度控制在24℃，进入后熟阶段的培养；

6)培养15天，温度控制在28℃，培养至二孢拟奥德蘑菌丝体表面产生“黄水”，得到无杂菌、成熟的栽培种；

7)培养1天，将温度控制在28℃，结束该阶段的培养，转入下一阶段的培育。

(3)菌丝扭结：

将步骤(2)得到的无杂菌、经过后熟的栽培种进行搔菌，搔菌深度为瓶口往下到料面2.0～2.5cm，瓶肩以上到料面1cm左右。搔去老菌后用高压纯净水冲洗瓶口，不再浇水，然后将栽培瓶倒置，放入育菇房，瓶子下垫一层吸水性强透气性好的湿布，保证瓶口环境处的空气湿度，同时需保持足够的通风量，使二氧化碳浓度控制在500ppm。保持黑暗培养，菌丝完全恢复后，通过控制温度和湿度，继续培育至二孢拟奥德蘑菌丝扭结形成原基。

菌丝扭结过程中，育菇房内的温度和空气湿度控制如下：

1)培养1天，温度控制在24℃，空气湿度控制在90％；

2)培养9天，温度控制在24℃，空气湿度控制在90％；

3)培养1天，菌丝完全恢复，温度控制在26℃，空气湿度控制在90％，使菌丝恢复并防止杂菌污染；

4)培养9天，温度控制在30℃，空气湿度控制在95％，菌丝形成的菌膜表面产生乳黄色亮点时，原基形成，结束该阶段的培养，转入下一阶段的培育。

(4)催蕾：

将步骤(3)得到的原基继续避光培育，直到出现菇蕾，当菇蕾长至0.3～0.7cm时，取走湿布，将栽培瓶正立放置。

催蕾过程中，育菇房内的温度、空气湿度及二氧化碳浓度控制如下：

1)培养1天，温度控制在26℃，空气湿度控制在93％，二氧化碳浓度控制在1000ppm；

2)培养3天，温度控制在26℃，空气湿度控制在93％，二氧化碳浓度控制在1000ppm；菇蕾长至0.3～0.7cm时，结束该阶段的培养，取走湿布，将培养瓶正立放置，转入下一阶段培养。

(5)生育：

将步骤(4)得到的菇蕾进行培养；当幼菇有一定数量时，进行疏蕾处理，减少弱菇蕾数量的产生，疏蕾后调整培育条件，促进二孢拟奥德蘑菇体菇体生物量积累，形成灰褐的特征色，当菇伞完全展开且菇帽变为深褐色时，及时采收。

生育过程中，育菇房内的温度、空气湿度、二氧化碳浓度、光照时间和强度和控制如下：

1)培养3天，温度控制在28℃，空气湿度控制在93％，二氧化碳浓度控制在500ppm，光照强度控制在500lx，光照时间为8h；

2)培养1天，进行疏蕾，温度控制在30℃，空气湿度控制在87％，二氧化碳浓度控制在800ppm，光照强度控制在500lx，光照时间为8h；

3)培养5天，温度控制在30℃，空气湿度控制在93％，二氧化碳浓度控制在800ppm，光照强度控制在500lx，光照时间为8h，当二孢拟奥德蘑的菇体生长至15cm，生育完毕，及时采收。

本实施例中，统计每瓶总产量，结果如下：平均单瓶产量13～15朵菇体；子实体的形态：伞状；菌柄长度可达15～21cm，菌柄直径0.5～1.3cm；菌盖直径：4.0～12cm。

对比实施例1～3，可以明显看出，培养条件的变化对菌丝的生长速度有较大影响，同时也会对二孢拟奥德蘑的出菇周期和菇体品质造成影响。对二孢拟奥德蘑培育条件优化的实施例中，实施例1的二孢拟奥德蘑生长速度快、生长周期短、生物转化率高(表1)，而实施例2和实施例3的菌种在培育过程中需要的时间较长，相比实施例1，生长周期分别延迟8d和15d，生长周期相对较长，同时不利于单瓶生物量的转化和生产设备的高效利用。

表1实施例1～3的二孢拟奥德蘑产量对比

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种工业化瓶栽二孢拟奥德蘑的培育方法，其特征在于具体包括如下步骤：

(1)栽培种培育

采用瓶栽方式；取栽培瓶体积80％～85％的固体培养基装瓶，中间打孔至瓶底，密封瓶口，灭菌，冷却后每瓶接种固体培养基体积4/100～7/100的二孢拟奥德蘑二级种或者接种3～5个二孢拟奥德蘑一级种液体菌球；接种后将栽培瓶水平放置，26～30℃下避光培养，4～6d定期翻转瓶身，当菌丝的吃料比占固体培养基总体积的90％～95％时，缓慢降低温度至18～22℃，继续培养，菌丝吃透菌料时将温度调整至24～26℃进行后熟阶段的培养，再将温度调整至28～32℃，继续培养，得到栽培种；

(2)菌丝扭结

将步骤(1)得到的栽培种搔菌，搔菌深度为瓶口往下到料面2.0～2.5cm，瓶肩以上到料面1cm左右，开启瓶口倒置于灭菌的湿布上，温度24～26℃、湿度85％～98％、二氧化碳浓度400～800ppm条件下黑暗培育，再将温度控制在26～30℃，湿度控制在85％～95％，使菌丝恢复并防止杂菌污染，菌丝完全恢复后再调整温度至30～32℃、湿度92％～98％，继续黑暗培养至二孢拟奥德蘑的菌丝扭结形成原基；

(3)催蕾

温度26～30℃、湿度90％～98％、二氧化碳浓度800～2000ppm条件下避光培育步骤(2)得到的原基，出现的菇蕾长至0.3～0.7cm时取走湿布，将栽培瓶正立放置；

(4)生育

温度26～32℃、湿度85％～98％、二氧化碳浓度300～1500ppm及光照强度120～600lx条件下培养步骤(3)得到的菇蕾，当菇体生长至12～23cm时，生育完毕，及时采收；

步骤(1)中所述的栽培种培育的过程中，翻转瓶身和根据菌丝的吃料比调整温度的情况具体如下：

1)培养1天，温度控制在26～28℃；

2)培养5～7天，温度控制在28～30℃，第5天瓶身水平翻转180°；

3)培养5～9天，温度控制在28～30℃，第5天瓶身水平翻转180°；

4)培养4～6天，菌丝吃料占固体培养基总体积的90％～95％时，将温度控制在18～22℃；

5)培养1天，菌丝吃透菌料时，瓶身水平翻转180°，温度控制在24～26℃，进行后熟阶段的培养；

6)培养10～15天，温度控制在28～32℃，培养至孢拟奥德蘑菌丝体表面产生“黄水”，得到栽培种；

7)培养1天，将温度控制在28～32℃，结束此阶段的培养；

步骤(2)中所述的菌丝扭结的过程中，温度、湿度的控制情况具体如下：

1)培养1天，温度控制在24～26℃，湿度控制在85％～98％，二氧化碳浓度控制在400～800ppm；

2)培养6～9天，温度控制在24～26℃，湿度控制在85％～98％，二氧化碳浓度控制在400～800ppm；

3)培养1天，温度控制在26～30℃，湿度控制在85％～95％，二氧化碳浓度控制在400～800ppm，使菌丝恢复并防止杂菌污染；

4)培养7～10天，菌丝完全恢复后将温度控制在30～32℃，湿度控制在92％～98％，二氧化碳浓度控制在400～800ppm，菌丝形成的菌膜表面产生乳黄色亮点时，原基形成，结束该阶段的培养；

步骤(3)中所述的催蕾的过程中，温度、湿度和二氧化碳浓度的控制情况具体如下：

1)培养1天，温度控制在26～30℃，湿度控制在90％～98％，二氧化碳浓度控制在800～2000ppm；

2)培养3～4天，温度控制在26～30℃，湿度控制在90％～98％，二氧化碳浓度控制在800～2000ppm，菇蕾长至0.3～0.7cm时，取走湿布，将培养瓶正立放置；

步骤(4)中所述的生育的过程中，温度、湿度、二氧化碳浓度和光照的控制情况具体如下：

1)培养3天，温度控制在26～30℃，湿度控制在90％～98％，二氧化碳浓度控制在300～700ppm，光照强度控制在120～600lx，光照时间为8h；

2)培养1天，进行疏蕾，温度控制在30～32℃，湿度控制在85％～90％，二氧化碳浓度控制在700～1500ppm，光照强度控制在120～600lx，光照时间为8h；

3)培养5～6天，温度控制在28～32℃，湿度控制在90％～98％，二氧化碳浓度控制在700～1000ppm，光照强度控制在120～600lx，光照时间为8h，当二孢拟奥德蘑的菇体生长到15～23cm，生育完毕，及时采收。

2.根据权利要求1所述的工业化瓶栽二孢拟奥德蘑的培育方法，其特征在于：步骤(1)中所述的固体培养基为按照以下质量分数计的原料配制得到：发酵的棉子壳85.2％、麦麸10.2％、葡萄糖2.6％、硫酸镁0.3％、磷酸二氢钾1.2％、碳酸钙0.5％；按质量配比称取固体培养基，加水搅拌拌匀，将固体培养基含水量调节至58％～68％，pH 7.0～9.0；

所述的发酵的棉子壳是通过将其加水搅拌，加入石灰水调节pH值至8.0～9.0，建堆发酵7～10天后得到。

3.根据权利要求1所述的工业化瓶栽二孢拟奥德蘑的培育方法，其特征在于：步骤(1)中所述的栽培种培育的过程中，翻转瓶身和根据菌丝的吃料比调整温度的情况具体如下：

1)培养1天，温度控制在26℃；

2)培养5～7天，温度控制在30℃，第5天瓶身水平翻转180°；

3)培养5～9天，温度控制在30℃，第5天瓶身水平翻转180°；

4)培养4～6天，菌丝吃料占固体培养基总体积的92％时，将温度控制在22℃；

5)培养1天，菌丝吃透菌料时，瓶身水平翻转180°，温度控制在26℃；

6)培养10～15天，温度控制在32℃，培养至菌丝体表面产生“黄水”，得到栽培种；

7)培养1天，将温度控制在32℃，结束此阶段的培养。

4.根据权利要求1所述的工业化瓶栽二孢拟奥德蘑的培育方法，其特征在于：步骤(2)中所述的菌丝扭结的过程中，温度、湿度及二氧化碳浓度的控制情况具体如下：

1)培养1天，温度控制在24℃，湿度控制在90％，二氧化碳浓度控制在800ppm；

2)培养6～9天，温度控制在24℃，湿度控制在90％，二氧化碳浓度控制在800ppm；

3)培养1天，温度控制在30℃，湿度控制在90％，二氧化碳浓度控制在800ppm，使菌丝恢复并防止杂菌污染；

4)培养7～10天，菌丝完全恢复后将温度控制在32℃，湿度控制在92％，二氧化碳浓度控制在800ppm，菌丝形成的菌膜表面产生乳黄色亮点时，原基形成，结束该阶段的培养。

5.根据权利要求1所述的工业化瓶栽二孢拟奥德蘑的培育方法，其特征在于：步骤(3)中所述的催蕾的过程中，温度、湿度和二氧化碳浓度的控制情况具体如下：

1)培养1天，温度控制在30℃，湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在1500ppm；

2)培养3～4天，温度控制在30℃，湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在1500ppm，菇蕾长至0.3～0.7cm时，取走湿布，将培养瓶正立放置。

6.根据权利要求1所述的工业化瓶栽二孢拟奥德蘑的培育方法，其特征在于：步骤(4)中所述的生育的过程中，温度、湿度、二氧化碳浓度和光照的控制情况具体如下：

1)培养3天，温度控制在30℃，湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在700ppm，光照强度控制在600lx，光照时间为8h；

2)培养1天，进行疏蕾，温度控制在32℃，湿度控制在86％，二氧化碳浓度控制在1200ppm，光照强度控制在600lx，光照时间为8h；

3)培养5～6天，温度控制在32℃，湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在800ppm，光照强度控制在600lx，光照时间为8h，当二孢拟奥德蘑的菇体生长到15～23cm，生育完毕，及时采收。

7.根据权利要求1所述的工业化瓶栽二孢拟奥德蘑的培育方法，其特征在于：步骤(1)中所述的灭菌为温度121℃、压力1.034MPa条件下高压蒸汽灭菌2.5h。