CN110950948B - 一种高纯度孕马血清促性腺激素的制备工艺 - Google Patents
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Abstract
一种高纯度孕马血清促性腺激素的制备工艺，包括以下步骤：(1)调节孕马血浆的pH至3.0‑4.0，固液分离，滤液浓缩，加入醇类物质使得溶液体系的醇类物质浓度为30‑55％(v/v)，再固液分离后，滤液加入醇类物质使得溶液体系的醇类物质浓度为70‑90％(v/v)，获得的沉淀干燥，即为PMSG粗品；(2)往PMSG粗品中加入甲苯衍生物或乙苯衍生物溶液，固液分离后，沉淀物加醇类物质，获得的沉淀干燥，即为PMSG中间品；(3)PMSG中间品加入铵盐和/或钙盐和/或钾盐溶液和醇类物质，固液分离后，清液二次加入铵盐和/或钙盐和/或钾盐溶液和醇类物质，固液分离后，清液加入醇类物质，获得沉淀干燥，得PMSG精制品。
Description
技术领域
本发明属于孕马血清促性腺激素生产技术领域，具体涉及一种高纯度孕马血清促性腺激素的制备工艺。
背景技术
孕马血清促性腺激素(简称PMSG)是孕中母马尿囊绒毛膜细胞分泌的糖蛋白类促性腺激素。PMSG具有类似促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)的双重活性，但以FSH的作用为主，具有明显的促卵泡发育作用；同时，也有一定的促排卵和黄体形成的功能，对雄性动物具有促使精细管发育和性细胞分化的功能。实践上，PMSG可以调控母畜同期发情，实现可控同步批次化生产，并缩短配种时间、降低不孕概率、提高繁殖效率。目前，PMSG已经广泛应用于动物的诱导发情、同期发情，超数排卵或增加排卵率；同时对卵巢发育不全或雄性生精能力衰退等也有良好的疗效。
应用范围的扩大和规模化养殖的普及导致市场对PMSG的需求量大幅上升。尽管国际和国内市场需求很大，但我国的PMSG生产工艺还很落后，基本上沿用传统的蛋白质分离技术，如蒙马(天津)生物科技有限公司申请的专利《一种孕马血清促性腺激素的提取分离系统》(CN207294655U)公开的提取方法大致为：孕马血清偏磷酸沉淀-加入硫酸铵-低浓度乙醇沉淀-高浓度乙醇沉淀-获得PMSG粗品，以及中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所申请的专利《兽用血促性素生产工艺及产品》(CN1872088B)公开的提取方法为：孕马血清稀释-加硫酸铵并调pH6.0-7.0-过滤后加偏磷酸沉淀-上清中空纤维浓缩-低浓度乙醇沉淀-上清高浓度乙醇沉淀-获得PMSG粗品。上述传统方法获得的产物均为PMSG粗品，效价较低，不足300IU/mg，国家药典标准≥100IU/mg，而欧洲药典标准为≥1000IU/mg，PMSG粗品的效价与欧洲药典标准相差甚远。纯度低的PMSG制品对受用动物也会产生一定危害，除此之外，上述提取方法还要存在生产过程回收率低、质量稳定性差，规模化生产技术就更不尽人如意，无法满足要求，也严重影响到经济效益和社会效益的实现。
发明内容
本发明针对现有技术中PMSG制备过程中存在效价低、质量差的缺陷，提供一种PMSG的制备工艺，获得效价≥1500IU/mg的高纯度PMSG。
本发明的以上目的通过以下技术方案来实现：
一种高纯度孕马血清促性腺激素的制备工艺，其特征在于，所述制备工艺包括以下步骤：
(1)孕马血清促性腺激素粗品制备：调节孕马血浆的pH至3.0-4.0，固液分离，滤液浓缩后，加入醇类物质使得溶液体系的醇类物质浓度为30-55％(v/v)，再固液分离后，滤液加入醇类物质使得溶液体系的醇类物质浓度为70-90％(v/v)，固液分离后，沉淀干燥，即为孕马血清促性腺激素粗品；
(2)孕马血清促性腺激素中间品制备：往孕马血清促性腺激素粗品中加入甲苯衍生物或乙苯衍生物溶液，固液分离后，沉淀物加醇类物质，固液分离后，沉淀干燥，即为孕马血清促性腺激素中间品；
(3)孕马血清促性腺激素精制品制备：孕马血清促性腺激素中间品加入铵盐和/或钙盐和/或钾盐溶液和醇类物质，固液分离后，清液二次加入铵盐和/或钙盐和/或钾盐溶液和醇类物质，固液分离后，清液加入醇类物质，获得的沉淀干燥，得孕马血清促性腺激素精制品。
孕马血清中含有许多蛋白质，其种类繁多，而PMSG在孕马血清中的浓度很低，需要首先除去大量杂蛋白，进行浓缩富集PMSG。先调节孕马血清的pH至3.0-4.0，在此pH下杂蛋白沉淀，优选采用偏磷酸调节pH，偏磷酸溶液中存在大量电荷高、分子量大的多聚体，能有效地中和掉蛋白质胶粒表面的电荷，破坏胶粒表面的水化膜，使蛋白质胶粒凝聚而沉淀。然后加入低浓度醇类物质降低杂蛋白的溶解度从而产生沉淀，最后加入高浓度醇类物质使PMSG沉淀，得到PMSG粗品。
往PMSG粗品中加入甲苯衍生物或乙苯衍生物溶液，甲苯衍生物或乙苯衍生物吸附PMSG，而杂蛋白不被吸附，此时优选为调节pH为3.0-6.0，在此pH下有利于PMSG的吸附，加入甲苯衍生物或乙苯衍生物溶液后静置一段时间，使吸附物沉淀下来，固液分离后，加入醇类物质沉淀出PMSG固体产品，即为PMSG中间品。
步骤(2)中，甲苯衍生物或乙苯衍生物溶液的质量分数优选为1-30％(m/v)。孕马血清促性腺激素粗品与甲苯衍生物或乙苯衍生物的质量比优选为1：0.05-1。进一步优选，孕马血清促性腺激素粗品与甲苯衍生物或乙苯衍生物的质量比为1：0.05-0.5。
作为优选，甲苯衍生物为苯甲酸衍生物和/或苯甲酸盐类衍生物；乙苯衍生物为苯乙酸衍生物和/或苯乙酸盐类衍生物。苯甲酸衍生物选自以下一种或多种：苯甲酸、1,3-苯二甲酸、1,4-苯二甲酸、4-羟基苯甲酸、4-甲基苯甲酸、4-氯苯甲酸等；苯甲酸盐类衍生物选自苯甲酸衍生物对应的钠盐、镁盐或钾盐。苯乙酸衍生物选自以下一种或多种：苯乙酸、1,3-苯二乙酸、1,4-苯二乙酸、4-氯苯乙酸、2，4-二氯苯乙酸、3，4-二氯苯乙酸、4-溴苯乙酸、2，4-二溴苯乙酸、3，5-二溴苯乙酸、4-氟苯乙酸、2，4-二氟苯乙酸、3，4-二氟苯乙酸等，苯乙酸盐类衍生物选自苯乙酸衍生物对应的钠盐、镁盐或钾盐。
PMSG中间品中加入铵盐和/或钙盐和/或钾盐溶液和醇类物质，铵盐溶液、钙盐溶液、钾盐溶液的质量分数优选为5-40％(m/v)，孕马血清促性腺激素中间品、铵盐和/或钙盐和/或钾盐、醇类物质的质量比优选为1：(0.2-3)：(1-13)，使得溶液体系中醇类物质的浓度为30-60％(v/v)。此步骤可让部分杂蛋白溶解在醇类物质和盐溶液里，盐离子增加离子强度，促进杂蛋白析出。此步骤中，进一步优选，铵盐溶液、钙盐溶液、钾盐溶液的质量分数为8-30％(m/v)。进一步优选，孕马血清促性腺激素中间品、铵盐和/或钙盐和/或钾盐、乙醇的质量比为1：(0.5-2)：(2-10)。
再固液分离后，清液二次加入铵盐和/或钙盐和/或钾盐溶液和醇类物质，此时孕马血清促性腺激素中间品、铵盐和/或钙盐和/或钾盐的质量比优选为1：(4-20)，进一步优选为1：(4-10)，铵盐溶液、钙盐溶液、钾盐溶液的质量分数优选为10-30％(m/v)，醇类物质的加入量使得溶液体系中醇类物质的浓度为30-60％(v/v)。此步骤所采用的盐类物质与孕马血清促性腺激素中间品的比例高于首次加入盐类物质的量，通过逐渐增加盐类物质含量促进杂蛋白有序析出，进一步纯化PMSG。固液分离后，清液加入醇类物质，醇类物质加入量优选为使得溶液体系中醇类物质的浓度为70-90％(v/v)，在高浓度的醇类物质中纯化的PMSG沉淀；在清液加入醇类物质前，优选调节清液pH为3.0-6.0，在乙醇溶液中并于此pH下有利于PMSG沉淀；获得的沉淀干燥后即孕马血清促性腺激素精制品。
所述钙盐优选选自以下一种或多种：甲酸钙、硫酸钙、硝酸钙、氯化钙、乳酸钙、乙酸钙、碳酸氢钙；所述铵盐优选选自以下一种或多种：硫酸铵、氯化铵、乙酸铵、碳酸铵、硝酸铵、柠檬酸铵、碳酸氢铵、磷酸一铵；所述钾盐优选选自以下一种或多种：硫酸钾、氯化钾、乙酸钾、碳酸钾、甲酸钾、草酸钾。
本发明中所述的固液分离可以采用很多手段：如离心分离、静置层析、板框压滤机过滤等。在固液分离前，混悬液搅拌或静置一段时间，使沉淀量更稳定。
本发明中所采用的醇类物质选自以下一种或多种：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等。
本发明还提供一种高纯度孕马血清促性腺激素，所述孕马血清促性腺激素由以上制备工艺获得，其纯度≥1500IU/mg。
与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
1、本发明采用“粗品-中间品-精制品”三步法获得高纯度的PMSG，PMSG制品纯度高、效价高，单批产品效价≥1500IU/mg，达到了欧洲药典标准，填补了PMSG与国际药典标准接轨的空白。高纯度的PMSG对受用动物的危害风险更小。
2、本发明“粗品-中间品-精制品”三步法获得高纯度的PMSG原料药的工艺，是在先小试，后中式，最后大生产成功的基础上获得的工艺，目前完全可用于大生产，填补高纯度、高效价PMSG从原料(马血)到原料药的规模化大生产工艺的空白，带来经济效益。
具体实施方式
在下文中，将通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步描述说明。如果无特殊说明，本发明以下具体实施例中所采用的原料均为本领域常用的原料，实施例中所采用的方法，均为本领域的常规方法。
实施例1
本实施例的孕马血清促性腺激素制备工艺，包括以下步骤：
(1)PMSG粗品制备：加1.5％偏磷酸调节孕马血浆的pH至3.8，搅拌10min后，离心过滤，滤液浓缩至1/2体积，然后加入-20℃无水乙醇使得溶液体系的乙醇浓度为45％(v/v)，搅拌10min后，离心过滤，滤液加入-20℃无水乙醇使得溶液体系的醇类物质浓度为83％(v/v)，搅拌20min后，静置12h分层，虹吸弃去上层清液，收集下层沉淀物并真空干燥48h，获得PMSG粗品。
(2)PMSG中间品制备：往PMSG粗品中加入10％(m/v)4-羟基苯甲酸钠溶液，PMSG粗品与4-羟基苯甲酸钠的质量比为1：0.5，搅拌12h后，离心过滤，沉淀物中加入50倍无水乙醇，急剧搅拌2h，静置12h分层，弃去上层清液，收集下层沉淀物并真空干燥48h，获得PMSG中间品。
(3)PMSG精制品制备：PMSG中间品中加入20％(m/v)硝酸铵溶液和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、硝酸铵和无水乙醇的质量比为1:2:8，离心收集清液，清液中加入15％(m/v)硫酸铵溶液和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、硫酸铵的质量比为1:6，无水乙醇的加入量使得溶液体系中乙醇的浓度为45％(v/v)左右，离心后收集清液，然后加入无水乙醇，无水乙醇的加入量使得溶液体系中无水乙醇的浓度为75％(v/v)左右，搅拌20min后，静置12h分层，弃去上层清液，收集下层沉淀物并低温真空干燥48h，获得PMSG精制品。
实施例2
本实施例的孕马血清促性腺激素制备工艺，包括以下步骤：
(1)PMSG粗品制备：加1.5％偏磷酸调节孕马血浆的pH至3.8，搅拌10min后，离心过滤，滤液浓缩至1/2体积，然后加入-20℃无水乙醇使得溶液体系的乙醇浓度为45％(v/v)，搅拌10min后，离心过滤，滤液加入-20℃无水乙醇使得溶液体系的醇类物质浓度为83％(v/v)，搅拌20min后，静置12h分层，虹吸弃去上层清液，收集下层沉淀物并真空干燥48h，获得PMSG粗品。
(2)PMSG中间品制备：往PMSG粗品中加入10％(m/v)4-羟基苯甲酸钠溶液，PMSG粗品与4-羟基苯甲酸钠的质量比为1：0.5，并调溶液pH为4.5，搅拌12h后，离心过滤，沉淀物中加入50倍无水乙醇，急剧搅拌2h，静置12h分层，弃去上层清液，收集下层沉淀物并真空干燥48h，获得PMSG中间品。
(3)PMSG精制品制备：PMSG中间品中加入40％(m/v)硝酸铵溶液和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、硝酸铵和无水乙醇的质量比为1:6:12，离心收集清液，清液中加入15％(m/v)硫酸铵溶液和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、硫酸铵的质量比为1:2，无水乙醇的加入量使得溶液体系中乙醇的浓度为45％(v/v)左右，离心后收集清液，清液调pH为4.5，然后加入无水乙醇，无水乙醇的加入量使得溶液体系中无水乙醇的浓度为75％(v/v)左右，搅拌20min后，静置12h分层，弃去上层清液，收集下层沉淀物并低温真空干燥48h，获得PMSG精制品。
实施例3
本实施例的孕马血清促性腺激素制备工艺，包括以下步骤：
(1)PMSG粗品制备：加1％偏磷酸调节孕马血浆的pH至3.5，搅拌5min后，离心过滤，滤液浓缩至1/2体积，然后加入-20℃无水乙醇使得溶液体系的乙醇浓度为40％(v/v)，搅拌20min后，离心过滤，滤液加入-20℃无水乙醇使得溶液体系的醇类物质浓度为80％(v/v)，搅拌20min后，静置12h分层，虹吸弃去上层清液，收集下层沉淀物并真空干燥48h，获得PMSG粗品。
(2)PMSG中间品制备：往PMSG粗品中加入10％(m/v)苯甲酸钠溶液，PMSG粗品与苯甲酸钠的质量比为1：0.1，并调溶液pH为5.0，搅拌12h后，离心过滤，沉淀物中加入30倍无水乙醇，急剧搅拌1h，静置12h分层，弃去上层清液，收集下层沉淀物并真空干燥48h，获得PMSG中间品。
(3)PMSG精制品制备：PMSG中间品中加入10％(m/v)氯化铵溶液和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、氯化铵和无水乙醇的质量比为1:0.6:5，离心收集清液，清液中加入20％(m/v)硫酸钾溶液和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、硫酸钾的质量比为1：5，无水乙醇的加入量使得溶液体系中乙醇的浓度为50％(v/v)左右，离心后收集清液，清液调pH为5.0，然后加入无水乙醇，无水乙醇的加入量使得溶液体系中无水乙醇的浓度为80％(v/v)左右，搅拌20min后，静置12h分层，弃去上层清液，收集下层沉淀物并低温真空干燥48h，获得PMSG精制品。
实施例4
本实施例的孕马血清促性腺激素制备工艺，包括以下步骤：
(1)PMSG粗品制备：加1.5％偏磷酸调节孕马血浆的pH至3.8，搅拌10min后，离心过滤，滤液浓缩至1/2体积，然后加入-20℃无水乙醇使得溶液体系的乙醇浓度为45％(v/v)，搅拌10min后，离心过滤，滤液加入-20℃无水乙醇使得溶液体系的醇类物质浓度为83％(v/v)，搅拌20min后，静置12h分层，虹吸弃去上层清液，收集下层沉淀物并真空干燥48h，获得PMSG粗品。
(2)PMSG中间品制备：往PMSG粗品中加入10％(m/v)4-羟基苯甲酸钠溶液，PMSG粗品与4-羟基苯甲酸钠的质量比为1：0.5，并调溶液pH为4.5，搅拌12h后，离心过滤，沉淀物中加入50倍无水乙醇，急剧搅拌2h，静置12h分层，弃去上层清液，收集下层沉淀物并真空干燥48h，获得PMSG中间品。
(3)PMSG精制品制备：PMSG中间品中加入20％(m/v)硝酸铵溶液和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、硝酸铵和无水乙醇的质量比为1:2:8，离心收集清液，清液中加入15％(m/v)硫酸铵溶液和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、硫酸铵的质量比为1:6，无水乙醇的加入量使得溶液体系中乙醇的浓度为45％(v/v)左右，离心后收集清液，清液调pH为4.5，然后加入无水乙醇，无水乙醇的加入量使得溶液体系中无水乙醇的浓度为75％(v/v)左右，搅拌20min后，静置12h分层，弃去上层清液，收集下层沉淀物并低温真空干燥48h，获得PMSG精制品。
实施例5
本实施例的孕马血清促性腺激素制备工艺，包括以下步骤：
(1)PMSG粗品制备：加2％偏磷酸调节孕马血浆的pH至4.0，搅拌15min后，离心过滤，滤液浓缩至1/2体积，然后加入-20℃无水乙醇使得溶液体系的乙醇浓度为55％(v/v)，搅拌30min后，离心过滤，滤液加入-20℃无水乙醇使得溶液体系的醇类物质浓度为85％(v/v)，搅拌20min后，静置12h分层，虹吸弃去上层清液，收集下层沉淀物并真空干燥48h，获得PMSG粗品。
(2)PMSG中间品制备：往PMSG粗品中加入5％(m/v)4-氯苯甲酸溶液，PMSG粗品与4-氯苯甲酸的质量比为1：0.3，并调溶液pH为5.5，搅拌12h后，离心过滤，沉淀物中加入60倍无水乙醇，急剧搅拌3h，静置12h分层，弃去上层清液，收集下层沉淀物并真空干燥48h，获得PMSG中间品。
(3)PMSG精制品制备：PMSG中间品中加入15％(m/v)乙酸铵溶液和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、乙酸铵和无水乙醇的质量比为1:0.3:2.5，离心收集清液，清液中加入10％(m/v)甲酸钾溶液和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、甲酸钾的质量比为1:7，无水乙醇的加入量使得溶液体系中乙醇的浓度为52％(v/v)左右，离心后收集清液，清液调pH为5.5，然后加入无水乙醇，无水乙醇的加入量使得溶液体系中无水乙醇的浓度为75％(v/v)左右，搅拌20min后，静置12h分层，弃去上层清液，收集下层沉淀物并低温真空干燥48h，获得PMSG精制品。
实施例6
本实施例的PMSG制备工艺与实施例4相比，区别仅在于，本实施例步骤(2)中往PMSG粗品加入8％(m/v)4-氟苯乙酸，PMSG粗品与4-氟苯乙酸的质量比为1：0.4。其它与实施例4相同。
实施例7
本实施例的PMSG制备工艺与实施例4相比，区别仅在于，本实施例步骤(2)中往PMSG粗品加入10％(m/v)4-甲基苯甲酸，PMSG粗品与4-甲基苯甲酸的质量比为1：0.5。其它与实施例4相同。
实施例8
本实施例的PMSG制备工艺与实施例4相比，区别仅在于，本实施例步骤(3)中往PMSG中间品中加入8％(m/v)硝酸钙溶液和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、硝酸钙和无水乙醇的质量比为1:0.8:7。其它与实施例3相同。
实施例9
本实施例的PMSG制备工艺与实施例4相比，区别仅在于，本实施例步骤(3)中往PMSG中间品中加入15％(m/v)硫酸铵溶液和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、硫酸铵和无水乙醇的质量比为1:1:6。其它与实施例4相同。
实施例10
本实施例的PMSG制备工艺与实施例4相比，区别仅在于，本实施例步骤(3)中往16％(m/v)氯化钙和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、氯化钙和无水乙醇的质量比为1:0.32:2，离心收集清液，清液中加入16％(m/v)氯化钾溶液和-20℃无水乙醇，PMSG中间品、氯化钾的质量比为1:7，无水乙醇的加入量使得溶液体系中乙醇的浓度为45％(v/v)左右。其它与实施例4相同。
参照PMSG测定操作规程测定实施例1-10的PMSG精制品效价，具体效价测定过程包括以下步骤：
1.溶液的配制：
1.1标准品溶液的配制：试验当日，按血促性素标准品的标示效价，加生理盐水按高、中、低三个剂量配成三种浓度的稀释液(dS3、dS2、dS1)的稀释液，相邻两稀释液的效价比值(r)应相等，且不得大于1：0.5。
1.2供试品溶液的配制：按供试品标示量或估计效价计算浓度，照上述标准品溶液的配制方法配制。
1.3试验步骤：
取大白鼠出生21-23日，体重40-55g，同一来源的雌性大鼠，按体重分成6组，每组8-10只。分别自腹部皮下注射标准品或供试品各种浓度的溶液0.5ml，于注射后第6日将动物处死，称体重，解剖，取出卵巢，剥离附着的组织及输卵管，吸去表面液体，直接称重(精确至0.5mg)，并换算成每100g体重的卵巢重。
1.4计算方法
式中：dS为标准品的高剂量中所含的单位数；
dT为供试品有高剂量中按其标示量或估计效价计算所含的单位数；
S、T为标准品或供试品各组每100g体重卵巢重量的平均值，组序1、2、3是指由低剂量组到高剂量组；
I为相邻两剂量比值的对数。
将计算所得百分数乘以供试品的标示量或估计效价，即得供试品的实际效价。实施例1-10的效价测定结果如表1所示：
表1实施例1-10(以下简称1-10)的PMSG精制品生物效价
本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。
Claims (1)
1.一种高纯度孕马血清促性腺激素的制备工艺，其特征在于，所述制备工艺包括以下步骤：
（1）孕马血清促性腺激素粗品制备：采用偏磷酸调节孕马血清的pH至3.0-4.0，固液分离，滤液浓缩后，加入醇类物质使得溶液体系的醇类物质浓度为40-55%（v/v），固液分离后，滤液加入醇类物质使得溶液体系的醇类物质浓度为80-85%（v/v），固液分离后，沉淀干燥，即为孕马血清促性腺激素粗品；
（2）孕马血清促性腺激素中间品制备：往孕马血清促性腺激素粗品中加入质量分数为5-10%（m/v）的甲苯衍生物或乙苯衍生物溶液，孕马血清促性腺激素粗品与甲苯衍生物或乙苯衍生物的质量比为1：0.1-0.5，然后调节pH为4.5-5.5，固液分离后，沉淀物加醇类物质，固液分离后，沉淀干燥，即为孕马血清促性腺激素中间品；
（3）孕马血清促性腺激素精制品制备：孕马血清促性腺激素中间品加入质量分数为8-20%（m/v）的铵盐或钙盐或钾盐溶液和醇类物质，使得孕马血清促性腺激素中间品、铵盐和/或钙盐和/或钾盐、醇类物质的质量比为1：（0.2-3）：（1-13），醇类物质的加入量使得溶液体系中醇类物质的浓度为30-60%（v/v），固液分离后，清液二次加入质量分数为10-20%（m/v）的铵盐或钙盐或钾盐溶液和醇类物质，使得孕马血清促性腺激素中间品、铵盐或钙盐或钾盐的质量比为1：（5-10），醇类物质的加入量使得溶液体系中醇类物质的浓度为30-60%（v/v），固液分离后，清液调节pH为4.5-5.5，然后加入醇类物质，醇类物质的加入量使得溶液体系中醇类物质的浓度为75-80%（v/v），获得的沉淀干燥，得孕马血清促性腺激素精制品；
所述醇类物质为乙醇；
所述甲苯衍生物为4-羟基苯甲酸、4-甲基苯甲酸、4-氯苯甲酸、苯甲酸钠中的一种，所述乙苯衍生物为4-氟苯乙酸；
所述铵盐为硫酸铵、氯化铵、乙酸铵、硝酸铵中的一种，所述钙盐为硝酸钙、氯化钙中的一种，所述钾盐为硫酸钾、氯化钾、甲酸钾中的一种。
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| 孕马血清促性腺激素的提纯;陶正南等;《畜牧兽医杂志》;19881230(第4期);正文第9页左栏第4段 * |
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