CN114835796A - 一种促性腺激素纯化方法 - Google Patents
一种促性腺激素纯化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114835796A CN114835796A CN202210482540.2A CN202210482540A CN114835796A CN 114835796 A CN114835796 A CN 114835796A CN 202210482540 A CN202210482540 A CN 202210482540A CN 114835796 A CN114835796 A CN 114835796A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gonadotropin
- eluent
- solution
- sodium acetate
- ultrafiltration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 title claims abstract description 57
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 title claims abstract description 57
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 title claims abstract description 57
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 36
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims abstract description 24
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 claims abstract description 22
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims abstract description 19
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 18
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims abstract description 18
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims abstract description 18
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 16
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 claims abstract description 10
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 claims abstract description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 33
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 claims description 10
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 claims description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 abstract description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 16
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 16
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 13
- 239000012527 feed solution Substances 0.000 description 12
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 5
- 239000012475 sodium chloride buffer Substances 0.000 description 5
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- YKTSYUJCYHOUJP-UHFFFAOYSA-N [O--].[Al+3].[Al+3].[O-][Si]([O-])([O-])[O-] Chemical compound [O--].[Al+3].[Al+3].[O-][Si]([O-])([O-])[O-] YKTSYUJCYHOUJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 201000000736 Amenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010001928 Amenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical class C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 231100000540 amenorrhea Toxicity 0.000 description 1
- 230000002513 anti-ovulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000001136 chorion Anatomy 0.000 description 1
- 229940015047 chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 239000000745 gonadal hormone Substances 0.000 description 1
- 239000003163 gonadal steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000004271 weak anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g.hCG [human chorionic gonadotropin]; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供一种促性腺激素纯化方法,包括如下步骤:S1:将促性腺激素粗品溶于醋酸钠溶液中,然后经过亲和层析进行吸附,得到洗脱液A;S2:将洗脱液A过截留分子量为10000的超滤膜,得超滤浓缩液;S3:将超滤浓缩液过羧甲基阳离子交换层析柱,得到洗脱液B;S4:向洗脱液B中加入乙醇溶液进行沉淀、离心,取沉淀;S5:将沉淀真空干燥、粉碎、过筛得到纯化后的促性腺激素。本发明不需要进行强酸、强碱或高温的处理,最大限度保存了促性腺激素中的活性成分,而且本发明工艺条件容易控制、成本低、操作简单,纯化后的促性腺激素中卵泡刺激素和黄体生成激素生物效价高、活性回收率好,不破坏原料的生物活性。
Description
技术领域
本发明涉及一种促性腺激素纯化方法,属于激素纯化技术领域。
背景技术
促性腺激素是指能够促进雌雄两种性腺的发育,增加性激素分泌的一类激素,如脑垂体前叶分泌的黄体生成激素(LH)和卵泡刺激素(FSH),人胎盘绒毛膜分泌的绒毛膜促性腺激素(HCG)。其中,FSH和LH的主要作用是促进卵巢或睾丸生成和分泌甾体性激素,它们与HCG合用,可治疗性腺激素分泌不足所致的原发性或继发性闭经,无排卵性稀发月经所致的不孕症等。绝经期妇女由于雌性激素和孕激素缺乏,从而反馈调节垂体,分泌大量FSH和LH,由尿中排出。
HMG的纯化方法,主要有硅酸铝吸附层析、阴阳离子交换层析、疏水作用层析、多元作用层析、羟基磷灰石层析、染料/抗体亲和层析等。目前,国内外在临床上应用的HMG,普遍是采用3IU/mg以上的HMG粗品为原料,经过硅酸铝吸附层析、弱阴离子交换层析、除热原等工序得到精品HMG。但是采用上述方法得到的产品收率偏低(一般小于 50%),成品效价在100iu/mg左右。
发明内容
针对现有技术存在的不足,本发明的目的在于提供一种促性腺激素纯化方法。
为了实现第一目的,本发明是通过如下的技术方案来实现:一种促性腺激素纯化方法,包括如下步骤:
S1:将促性腺激素粗品溶于醋酸钠溶液中,然后经过亲和层析进行吸附,得到洗脱液 A;
S2:将洗脱液A过截留分子量为30000的超滤膜,得超滤浓缩液;
S3:将超滤浓缩液过羧甲基阳离子交换层析柱,得到洗脱液B;
S4:向洗脱液B中加入乙醇溶液进行沉淀、离心,取沉淀;
S5:将沉淀真空干燥、粉碎、过筛得到纯化后的促性腺激素。
采用上述技术方案,将促性腺激素粗品溶于醋酸钠中,然后通过亲和柱、超滤膜和阳离子交换层析柱除去杂质,从而得到有效成分,最后在经过乙醇进行沉淀,干燥,最终得到高纯度的促性腺激素固体。
优选的,步骤S1中的醋酸钠溶液的pH=4-5。
采用上述技术方案,采用亲和柱进行层析,通过亲和柱基质以选择性捕获期望的蛋白。
优选的,步骤S2中持续补充醋酸钠缓冲液和磷酸氢二钠缓冲液,维持浓缩液温度为 15-20℃。
优选的,步骤S2中的醋酸钠缓冲液和磷酸氢二钠缓冲液的pH=7。
采用上述技术特征,将洗脱液A进行超滤,去除大分子物质,经实验证明,经过超滤处理得到的产品可以消除不良反应。
优选的,步骤S3中以pH=5-6的0.05-0.1mol/L醋酸钠和0.2-0.5mol/L氯化钠的缓冲液洗脱,收集270-290nm处的洗脱液。
优选的,步骤S1-S3均在10-20℃下完成。
优选的,步骤S4中洗脱液B与乙醇的体积比为1:4-6。
优选的,步骤S4中,乙醇溶液的酒精度为80-85%,静置12-14h,离心取沉淀。
优选的,纯化后的促性腺激素中卵泡激素生物效价为700-1000IU/mg,黄体生成激素的生物效价100-200IU/mg。
本发明的有益效果:
本发明不需要进行强酸、强碱或高温的处理,最大限度保存了促性腺激素中的活性成分,而且本发明工艺条件容易控制、成本低、操作简单,纯化后的促性腺激素中卵泡刺激素和黄体生成激素生物效价高、活性回收率好,不破坏原料的生物活性。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解,下面结合具体实施方式,进一步阐述本发明。
实施例1
一种促性腺激素纯化方法,包括如下步骤:
S1:在10℃环境下,将促性腺激素粗品溶于pH=4的醋酸钠溶液中,然后经过亲和层析进行吸附,得到洗脱液A;
S2:在10℃环境下,将洗脱液A过截留分子量为30000的超滤膜,持续补充pH=7的醋酸钠缓冲液和磷酸氢二钠缓冲液,维持浓缩液温度为15℃,得超滤浓缩液;
S3:在10℃环境下,将超滤浓缩液过羧甲基阳离子交换层析柱,以pH=6的0.05mol/L 醋酸钠和0.2mol/L氯化钠的缓冲液洗脱,收集270nm处的洗脱液,得到洗脱液B;
S4:向洗脱液B中加入5倍体积的乙醇溶液,乙醇溶液的酒精度为80%,静置12h进行沉淀、离心,取沉淀;
S5:将沉淀真空干燥、粉碎、过筛得到纯化后的促性腺激素。
实施例2
一种促性腺激素纯化方法,包括如下步骤:
S1:在10℃环境下,将促性腺激素粗品溶于pH=5的醋酸钠溶液中,然后经过亲和层析进行吸附,得到洗脱液A;
S2:在10℃环境下,将洗脱液A过截留分子量为30000的超滤膜,持续补充pH=7的醋酸钠缓冲液和磷酸氢二钠缓冲液,维持浓缩液温度为20℃,得超滤浓缩液;
S3:在10℃环境下,将超滤浓缩液过羧甲基阳离子交换层析柱,以pH=5的0.05mol/L 醋酸钠和0.5mol/L氯化钠的缓冲液洗脱,收集290nm处的洗脱液,得到洗脱液B;
S4:向洗脱液B中加入5.5倍体积的乙醇溶液,乙醇溶液的酒精度为85%,静置12h进行沉淀、离心,取沉淀;
S5:将沉淀真空干燥、粉碎、过筛得到纯化后的促性腺激素。
实施例3
一种促性腺激素纯化方法,包括如下步骤:
S1:在15℃环境下,将促性腺激素粗品溶于pH=4.5的醋酸钠溶液中,然后经过亲和层析进行吸附,得到洗脱液A;
S2:在15℃环境下,将洗脱液A过截留分子量为30000的超滤膜,持续补充pH=7的醋酸钠缓冲液和磷酸氢二钠缓冲液,维持浓缩液温度为20℃,得超滤浓缩液;
S3:在15℃环境下,将超滤浓缩液过羧甲基阳离子交换层析柱,以pH=5.5的0.1mol/L 醋酸钠和0.2mol/L氯化钠的缓冲液洗脱,收集280nm处的洗脱液,得到洗脱液B;
S4:向洗脱液B中加入6倍体积的乙醇溶液,乙醇溶液的酒精度为80%,静置14h进行沉淀、离心,取沉淀;
S5:将沉淀真空干燥、粉碎、过筛得到纯化后的促性腺激素。
实施例4
一种促性腺激素纯化方法,包括如下步骤:
S1:在20℃环境下,将促性腺激素粗品溶于pH=4的醋酸钠溶液中,然后经过亲和层析进行吸附,得到洗脱液A;
S2:在20℃环境下,将洗脱液A过截留分子量为30000的超滤膜,持续补充pH=7的醋酸钠缓冲液和磷酸氢二钠缓冲液,维持浓缩液温度为15℃,得超滤浓缩液;
S3:在20℃环境下,将超滤浓缩液过羧甲基阳离子交换层析柱,以pH=6的0.08mol/L 醋酸钠和0.3mol/L氯化钠的缓冲液洗脱,收集290nm处的洗脱液,得到洗脱液B;
S4:向洗脱液B中加入5倍体积的乙醇溶液,乙醇溶液的酒精度为80%,静置14h进行沉淀、离心,取沉淀;
S5:将沉淀真空干燥、粉碎、过筛得到纯化后的促性腺激素。
实施例5
一种促性腺激素纯化方法,包括如下步骤:
S1:在20℃环境下,将促性腺激素粗品溶于pH=5的醋酸钠溶液中,然后经过亲和层析进行吸附,得到洗脱液A;
S2:在20℃环境下,将洗脱液A过截留分子量为30000的超滤膜,持续补充pH=7的醋酸钠缓冲液和磷酸氢二钠缓冲液,维持浓缩液温度为15℃,得超滤浓缩液;
S3:在20℃环境下,将超滤浓缩液过羧甲基阳离子交换层析柱,以pH=5.2的0.08mol/L 醋酸钠和0.5mol/L氯化钠的缓冲液洗脱,收集280nm处的洗脱液,得到洗脱液B;
S4:向洗脱液B中加入5.5倍体积的乙醇溶液,乙醇溶液的酒精度为80%,静置14h进行沉淀、离心,取沉淀;
S5:将沉淀真空干燥、粉碎、过筛得到纯化后的促性腺激素。
试验例1
试验组别:实施例1-实施例5;
试验方法:
卵泡激素生物效价测定:2010年版药典二部附录XIIM测定;
黄体生成激素生物效价测定:2010年版药典二部附录XIIN测定;
卵泡激素活性回收率测定:(纯化后的促性腺激素中卵泡激素的单位质量生物效价×纯化后的促性腺激素质量)/(原料液中卵泡激素的单位体积生物效价×原料液体积)×100%;
黄体生成激素活性回收率:(纯化后的促性腺激素中黄体生成激素的单位质量生物效价×纯化后的促性腺激素质量)/(原料液中黄体生成激素的单位体积生物效价×原料液体积) *100%。
试验结果:详见表1。
表1实施例1-实施例4产品效价和活性回收率
实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | |
卵泡激素生物效价(IU/mg) | 700 | 800 | 1000 | 750 | 900 |
卵泡激素活性回收率(%) | 90 | 92 | 95 | 93 | 92 |
黄体生成激素生物效价(IU/mg) | 120 | 200 | 150 | 130 | 150 |
黄体生成激素活性回收率(%) | 93 | 92 | 93 | 96 | 95 |
参考表1,本申请的纯化方法得到的促性腺激素中的卵泡刺激素和黄体生成激素生物效价高、活性回收率好,不破坏原料的生物活性。
试验例2
试验组别:对比例1-对比例3、实施例1,对比例1-对比例3依次采用截留分子量为10000、50000、70000的超滤膜,其他同实施例1;
试验方法:
卵泡激素活性回收率测定:(纯化后的促性腺激素中卵泡激素的单位质量生物效价×纯化后的促性腺激素质量)/(原料液中卵泡激素的单位体积生物效价×原料液体积)×100%;
黄体生成激素活性回收率:(纯化后的促性腺激素中黄体生成激素的单位质量生物效价×纯化后的促性腺激素质量)/(原料液中黄体生成激素的单位体积生物效价×原料液体积) *100%。
试验结果:详见表2。
表2对比例1-对比例3、实施例1产品的活性回收率
对比例1 | 实施例1 | 对比例2 | 对比例3 | |
超滤膜型号 | 10000 | 30000 | 50000 | 70000 |
卵泡激素活性回收率(%) | 63 | 90 | 96 | 98 |
黄体生成激素活性回收率(%) | 68 | 93 | 97 | 96 |
参考表2,10000分子量超滤膜超滤后的促性腺激素原料收率较低;50000-70000分子量超滤膜超滤后的促性腺激素原料收率高,但是,采用50000分子量超滤膜和70000分子量超滤膜超滤后得到的产品,其大分子物质没有得到非常有效的去除。综合考虑,本申请采用的是30000分子量的超滤膜。
试验例3
试验组别:对比例4-7、实施例1,对比例4-7采用的乙醇体积依次为1倍、3倍、6 倍、7倍,其他同实施例1。
试验方法:
卵泡激素生物效价测定:2010年版药典二部附录XIIM测定;
黄体生成激素生物效价测定:2010年版药典二部附录XIIN测定;
卵泡激素活性回收率测定:(纯化后的促性腺激素中卵泡激素的单位质量生物效价×纯化后的促性腺激素质量)/(原料液中卵泡激素的单位体积生物效价×原料液体积)×100%;
黄体生成激素活性回收率:(纯化后的促性腺激素中黄体生成激素的单位质量生物效价×纯化后的促性腺激素质量)/(原料液中黄体生成激素的单位体积生物效价×原料液体积) *100%。
试验结果:详见表3。
表3对比例4-7、实施例1产品效价和活性回收率
对比例4 | 对比例5 | 实施例1 | 对比例6 | 对比例7 | |
乙醇体积倍数 | 1 | 3 | 5 | 6 | 7 |
卵泡激素生物效价(IU/mg) | 620 | 630 | 700 | 750 | 650 |
卵泡激素活性回收率(%) | 71 | 73 | 90 | 92 | 80 |
黄体生成激素生物效价(IU/mg) | 80 | 80 | 120 | 140 | 90 |
黄体生成激素活性回收率(%) | 72 | 73 | 93 | 96 | 75 |
参考表3,随着乙醇体积倍数的增加,产品的生物效价和活性回收率均先增加后降低,本申请选取乙醇体积为5-6倍。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点,对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (9)
1.一种促性腺激素纯化方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1:将促性腺激素粗品溶于醋酸钠溶液中,然后经过亲和层析进行吸附,得到洗脱液A;
S2:将洗脱液A过截留分子量为30000的超滤膜,得超滤浓缩液;
S3:将超滤浓缩液过羧甲基阳离子交换层析柱,得到洗脱液B;
S4:向洗脱液B中加入乙醇溶液进行沉淀、离心,取沉淀;
S5:将沉淀真空干燥、粉碎、过筛得到纯化后的促性腺激素。
2.如权利要求1所述的一种促性腺激素纯化方法,其特征在于,步骤S1中的醋酸钠溶液的pH=4-5。
3.如权利要求2所述的一种促性腺激素纯化方法,其特征在于,步骤S2中持续补充醋酸钠缓冲液和磷酸氢二钠缓冲液,维持浓缩液温度为15-20℃。
4.如权利要求3所述的一种促性腺激素纯化方法,其特征在于,步骤S2中的醋酸钠缓冲液和磷酸氢二钠缓冲液的pH=7。
5.如权利要求4所述的一种促性腺激素纯化方法,其特征在于,步骤S3中以pH=5-6的0.05-0.1mol/L醋酸钠和0.2-0.5mol/L氯化钠的缓冲液洗脱,收集270-290nm处的洗脱液。
6.如权利要求5所述的一种促性腺激素纯化方法,其特征在于,步骤S1-S3均在10-20℃下完成。
7.如权利要求6所述的一种促性腺激素纯化方法,其特征在于,步骤S4中洗脱液B与乙醇的体积比为1:4-6。
8.如权利要求7所述的一种促性腺激素纯化方法,其特征在于,步骤S4中,乙醇溶液的酒精度为80-85%,静置12-14h,离心取沉淀。
9.如权利要求8所述的一种促性腺激素纯化方法,其特征在于,纯化后的促性腺激素中卵泡激素生物效价为700-1000IU/mg,黄体生成激素的生物效价100-200IU/mg,卵泡激素的收率为90%-95%,黄体生成激素的收率为92%-96%。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210482540.2A CN114835796A (zh) | 2022-05-05 | 2022-05-05 | 一种促性腺激素纯化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210482540.2A CN114835796A (zh) | 2022-05-05 | 2022-05-05 | 一种促性腺激素纯化方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114835796A true CN114835796A (zh) | 2022-08-02 |
Family
ID=82566920
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210482540.2A Pending CN114835796A (zh) | 2022-05-05 | 2022-05-05 | 一种促性腺激素纯化方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114835796A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116143901A (zh) * | 2022-11-28 | 2023-05-23 | 景泽生物医药(合肥)股份有限公司 | 一种促卵泡激素的纯化方法 |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101555279A (zh) * | 2009-05-19 | 2009-10-14 | 上海天伟生物制药有限公司 | 一种高纯度尿促卵泡刺激素及其制备方法 |
CN102485752A (zh) * | 2010-12-01 | 2012-06-06 | 上海丽珠制药有限公司 | 人绒毛膜促性腺激素的纯化方法 |
US20120252069A1 (en) * | 2009-11-24 | 2012-10-04 | Glycotope Gmbh | Process for the purification of glycoproteins |
CN103570820A (zh) * | 2012-08-06 | 2014-02-12 | 齐鲁制药有限公司 | 一种重组人促卵泡激素的纯化方法 |
CN105461799A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-04-06 | 哈药集团技术中心 | 一种重组人促卵泡生成素的纯化方法 |
CN105906704A (zh) * | 2016-05-04 | 2016-08-31 | 长春圣金诺生物制药有限公司 | 一种重组人促卵泡激素的纯化方法 |
CN210065609U (zh) * | 2019-06-14 | 2020-02-14 | 杭州赫尔伯生物科技有限公司 | 一种hcg高纯度纯化装置 |
CN112195194A (zh) * | 2020-10-30 | 2021-01-08 | 北京双鹭生物技术有限公司 | 重组人促卵泡激素及其制备方法 |
-
2022
- 2022-05-05 CN CN202210482540.2A patent/CN114835796A/zh active Pending
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101555279A (zh) * | 2009-05-19 | 2009-10-14 | 上海天伟生物制药有限公司 | 一种高纯度尿促卵泡刺激素及其制备方法 |
US20120252069A1 (en) * | 2009-11-24 | 2012-10-04 | Glycotope Gmbh | Process for the purification of glycoproteins |
CN102485752A (zh) * | 2010-12-01 | 2012-06-06 | 上海丽珠制药有限公司 | 人绒毛膜促性腺激素的纯化方法 |
CN103570820A (zh) * | 2012-08-06 | 2014-02-12 | 齐鲁制药有限公司 | 一种重组人促卵泡激素的纯化方法 |
CN105461799A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-04-06 | 哈药集团技术中心 | 一种重组人促卵泡生成素的纯化方法 |
CN105906704A (zh) * | 2016-05-04 | 2016-08-31 | 长春圣金诺生物制药有限公司 | 一种重组人促卵泡激素的纯化方法 |
CN210065609U (zh) * | 2019-06-14 | 2020-02-14 | 杭州赫尔伯生物科技有限公司 | 一种hcg高纯度纯化装置 |
CN112195194A (zh) * | 2020-10-30 | 2021-01-08 | 北京双鹭生物技术有限公司 | 重组人促卵泡激素及其制备方法 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116143901A (zh) * | 2022-11-28 | 2023-05-23 | 景泽生物医药(合肥)股份有限公司 | 一种促卵泡激素的纯化方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20060079460A1 (en) | Purified LH | |
US20070299001A1 (en) | PURIFIED hCG | |
CN114835796A (zh) | 一种促性腺激素纯化方法 | |
CN102485752A (zh) | 人绒毛膜促性腺激素的纯化方法 | |
CN109467591B (zh) | 一种西曲瑞克的纯化方法 | |
CN111233999A (zh) | 一种从人尿中提取人绒毛膜促性腺激素的方法 | |
CN1958603B (zh) | 一种人绒毛膜促性腺素的纯化方法 | |
CN102464713A (zh) | 一种卵泡刺激素的制备方法 | |
CN1246332C (zh) | 一种生产高纯度的绝经后尿促性腺素的方法 | |
WO2010111845A1 (zh) | 一种高比活绝经期促性腺素及其制备方法和用途 | |
CN110950948B (zh) | 一种高纯度孕马血清促性腺激素的制备工艺 | |
CN114805542A (zh) | 一种基于尿液中促性腺激素的纯化方法 | |
CN117362412A (zh) | 一种重组人绒促性素的纯化方法 | |
CN111303274B (zh) | 一种人绒毛膜促性腺激素纯化方法 | |
CN116217698A (zh) | 一种血促性素提取纯化方法 | |
CN101928342B (zh) | 一种高纯度绝经期促性腺素及其制备方法和用途 | |
CN117866073A (zh) | 一种rh-FSH的提纯方法 | |
US2799621A (en) | Preparation of adrenocorticotropin and gonadotropins from pituitary material | |
US3457346A (en) | Process for the manufacture of highly purified gonadotropins | |
CN114671944A (zh) | 一种人绒毛膜促性腺激素纯化方法 | |
CN118240054A (zh) | 一种纯化Sox2蛋白的方法 | |
CN109897096A (zh) | 一种制备高效价绒促性素的方法 | |
CN116333090A (zh) | 一种人绒毛膜促性腺激素的多步纯化工艺 | |
CN109879950A (zh) | 一种绒促性素中间品的提纯方法 | |
KR20140018970A (ko) | 저수준 잔류용매를 함유한 당단백질 조성물 및 그 제조방법과 용도 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |