CN110940745A

CN110940745A - S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法

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Publication number: CN110940745A
Application number: CN201911191325.1A
Authority: CN
Inventors: 李志伟; 乔玲; 毕海超; 张子实; 李响飞; 李伟娇; 刘亚平; 李彬
Original assignee: Hebei Geological Environment Monitoring Institute; Hebei University of Science and Technology
Current assignee: Hebei Geological Environment Monitoring Institute; Hebei University of Science and Technology
Priority date: 2019-11-28
Filing date: 2019-11-28
Publication date: 2020-03-31
Anticipated expiration: 2039-11-28
Also published as: CN110940745B

Abstract

本发明提供一种S‑2‑氨基‑2‑(2‑氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法。本发明采用高效液相色谱法进行检测，色谱条件为：色谱柱：十八烷基键合硅胶柱；检测波长200‑240nm，流动相A：0.1‑0.5wt％磷酸二氢钾水溶液，流动相B为乙腈。本发明提供的检测方法能够实现主成分与已知杂质、以及多个未知杂质之间的有效分离，且本发明提供的方法经专属性、灵敏度等方法学研究及验证，发现本发明的方法灵敏、准确、重现性较好，能够用更为简便的方法实现对S‑2‑氨基‑2‑(2‑氯苯基)乙酸甲酯或其盐中更多杂质的定性和定量，为提高和更好地控制硫酸氢氯吡格雷产品的质量提供了可靠保障。

Description

S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法

技术领域

本发明涉及化工原料检测技术领域，尤其涉及一种S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法。

背景技术

硫酸氢氯吡格雷(英文名：Clopidogerel Bisulfate)，分子式：C₁₆H₁₆ClNO₂S·H₂SO₄，分子量：419.90，是新型噻吩吡啶类药物，化学名为2-(2-氯苯基)-2-(6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5-基)乙酸甲酯硫酸氢盐，系新一代抗血小板药物，主要用于治疗动脉粥状硬化、急性冠脉综合症、预防冠脉内支架植入术后再狭窄和血栓性并发症等疾病。1998年，氯吡格雷首先在美国上市，随后进入欧洲以及加拿大、澳大利亚、新加坡等国家，在我国该药于2001年上市。大量临床实验表明，它具有药效显著、安全和耐受性强等优点，具有良好的市场前景。

有关物质是在药物合成生产过程中带入的起始物料、中间体、副反应产物和降解杂质等，对有关物质进行检测可以对药物的质量和安全性进行控制。S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯是合成硫酸氢氯吡格雷的主要原料，是直接影响硫酸氢氯吡格雷产品的最终质量的重要因素。研发一种能够检测S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯中有关物质的分析方法，从源头上对原料的质量进行控制，对于提高硫酸氢氯吡格雷产品的质量以及提高患者用药安全性具有十分重要的意义。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一种S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：

一种S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，色谱条件为：

色谱柱：十八烷基键合硅胶柱；

UV检测器，检测波长200-240nm；

流动相A：0.1-0.5wt％磷酸二氢钾水溶液，流动相B为乙腈；

洗脱方式为梯度洗脱。

相对于现有技术，本发明提供的S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯、及其盐中有关物质的检测方法，采用十八烷基键合硅胶色谱柱，以0.1-0.5wt％磷酸二氢钾水溶液和乙腈作为流动相，通过高效液相色谱法以梯度洗脱的方式，能够实现主成分与合成主成分的原料2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸、以及多个未知杂质和主成分之间的有效分离，准确定性及定量检测S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯、及其盐中杂质情况，且本发明提供的方法经专属性、灵敏度等方法学研究及验证，发现本发明的方法灵敏、准确、重现性较好，能够用更为简便的方法实现对S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯、及其盐中更多杂质的定性和定量，为提高和更好地控制硫酸氢氯吡格雷产品的质量提供了可靠保障。

本发明中有关物质是指在S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐的合成工艺中引入的或降解生成的杂质，包括2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸(CPG)。本发明中将S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐简称为SMA。

优选的，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：

0min，90-98％流动相A，10-2％流动相B；

8min，90-98％流动相A，10-2％流动相B；

8.1min，84％流动相A，16％流动相B；

27min，84％流动相A，16％流动相B；

27.1min，94％流动相A，6％流动相B；

40min，90-98％流动相A，10-2％流动相B。

更优选的，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：

0min，94％流动相A，6％流动相B；

8min，94％流动相A，6％流动相B；

8.1min，94％→84％流动相A，6％→16％流动相B；

27min，84％流动相A，16％流动相B；

27.1min，84％→94％流动相A，16％→6％流动相B；

40min，94％流动相A，6％流动相B。

优选的梯度洗脱顺序，可以提高主成分与杂质峰之间的分离度和检测的灵敏度，使检测结果定量准确，且精密度高。

优选的，流速为0.6-1.2mL/min，柱温为20-40℃，进样体积为10μL。

更优选的，检测波长为220nm，流速为0.9mL/min，柱温为30℃。

优选的检测条件可使S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中的主成分、未知杂质以及已知杂质之间达到更高的分离度，可以保证未知杂质的有效检出，从而达到有效准确控制制剂及原料中有关物质含量的目的。

优选的，所述磷酸二氢钾水溶液的pH为3-6。

更优选的，所述磷酸二氢钾水溶液的pH为3.5-4。

优选的流动相A的pH值，可以减少谱带拖尾，改善峰形，从而有利于提高各组分之间的分离度。

优选的，流动相A为0.136wt％磷酸二氢钾溶液。

优选的流动相在不产生基线干扰的前提下，能够更好地分离S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中的杂质，利于有关物质的检出，并且有效改善峰形，使检测结果的准确度及精密度更高。

优选的，所述色谱柱的规格为250*4.6mm，填料直径为5μm。

更优选的，所述色谱柱为CAPCELL PAK C18，4.6*250mm，5μm。

优选的色谱柱规格可以使各组分峰形、分离度及检测的灵敏度俱佳，且基线干扰较小，从而有利于S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐与杂质有效分离，且结果准确可靠，重复性好。

优选的，所述供试品溶液的浓度为0.2mg/mL。

优选的供试品浓度有利于使主成分及杂质的峰形更好，柱效高，积分更准确，从而有利于对供试品中杂质的含量进行更准确的计算。

附图说明

图1为实施例2中系统适用性项下系统适用性溶液的色谱图；

图2为实施例2中专属性项下供试品溶液的色谱图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

以下实施例中SMA是指(S)-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯(2R,3R)-二羟基琥珀酸盐。

材料与方法：

仪器：高效液相色谱仪，紫外检测器，量瓶，电子天平。

试剂：乙腈、磷酸二氢钾、2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸(CPG)。

空白溶剂：94％流动相A+6％流动相B

1.1溶液的配制

杂质一级储备液的配制：称取CPG对照品约10.00mg置10ml容量瓶中，用空白溶剂溶解，定容，最后稀释制成每1mL中约含有1mg杂质CGP的一级贮备液。

杂质二级储备液的配制：精密量取杂质CPG一级储备液1.0ml置100ml容量瓶中，用空白溶剂溶解，定容，最后稀释制成每1mL中约含有0.01mg的杂质CPG的二级储备液。

杂质定位溶液：精密量取杂质CPG二级储备液2.0mL至100mL容量瓶中，用空白溶剂溶解并稀释至刻度，最后稀释制成每1mL中约含有0.2μg的杂质CPG溶液摇匀，作为杂质定位溶液。

供试品溶液的制备：称取SMA供试品约10.00mg，置50mL的容量瓶内，用流空白溶剂溶解定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

对照品一级储备溶液：精密量取供试品溶液1.0ml，置10mL的容量瓶内，用空白溶剂溶解，稀释至刻度，摇匀，作为对照品一级储备溶液。

对照品溶液：精密量取对照品一级储备溶液2.0ml置100ml容量瓶中，用空白溶剂溶解，稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

混合溶液的制备：分别精密量取CPG二级储备液和对照品一级储备溶液各2.0mL，加入至同一100mL的容量瓶内，使用空白溶剂溶解，稀释至刻度，摇匀，作为混合溶液。

系统适用性溶液的制备：分别精密称取SMA供试品20.09mg、CPG对照品10.10mg，置50ml容量瓶中，用空白溶剂溶解，稀释定容至刻度，过滤，得初混液；取上述初混液1.0ml，置10ml容量瓶中用空白溶剂溶解，稀释定容至刻度，摇匀，得一次稀释液。取上述一次稀释液1.0ml，置100ml容量瓶中，用空白溶剂溶解，稀释定容至刻度，摇匀，得系统适用性溶液。

高效液相色谱的条件：

色谱柱：CAPCELL PAK C18(4.6×250mm)5μm；流速：0.9ml/min；检测波长：220nm；柱温，30℃；供试品溶液浓度：0.2mg/ml；进样量：10μl；流动相A相：0.136wt％磷酸二氢钾溶液(pH3.5)，流动相B相：乙腈。

按下列梯度程序进行洗脱：

实施例2

方法学验证：

2.1系统适用性

取空白溶液、上述系统适用性溶液进样检测，其中系统适用性溶液连续进样6针，按照上述高效液相色谱条件进样检测，进样量10μl，记录色谱图，结果如表1所示。

表1系统适用性试验结果

试验结果表明，基线平稳无干扰，空白溶剂对杂质及主成分检测无干扰；系统适用性溶液连续进样6针，CPG和SMA的峰面积与保留时间的RSD值<5％，均符合要求，且CPG与主峰SMA的分离度均符合规定，适合有关物质的检查，本方法的系统适用性良好。

2.2专属性

取空白溶液、上述杂质定位溶液、供试品溶液、混合溶液和对照品溶液分别进样检测，进样量10μl，记录色谱图，供试品溶液的结果如表2所示，混合溶液的试验结果如表3所示。

表2供试品溶液试验结果

名称	保留时间(min)	峰面积	分离度
				未知杂质1	6.120	1287	-
CPG	6.907	2244	3.655
				未知杂质2	7.586	484	2.884
未知杂质3	19.014	2362	4.329
				SMA	26.433	3666734	11.795

表3混合溶液的试验结果

混合	保留时间(min)	峰面积	分离度
				CPG	6.900	7439	—
SMA	25.772	6070	54.685

试验结果表明，各杂质峰之间、各杂质峰与SMA之间最小分离度均大于1.5，各杂质之间、各杂质与SMA之间无干扰。说明本方法专属性良好。

2.3检测限和定量限

取1.1项下配制的混合溶液，用稀释法分别测其定量限(S/N≥10)、检测限(S/N≥3)，结果见表4。

表4检测限和定量限试验结果

样品	定量限浓度(μg/mL)	检测限浓度(μg/mL)
			CPG	0.022	0.007
SMA	0.173	0.052

试验结果表明，CPG、SMA检测限浓度分别是0.007μg/mL、0.052μg/mL；定量限浓度分别是0.022μg/mL、0.173μg/mL，说明本方法灵敏度高。

2.4线性范围

精密称取SMA供试品适量，分别用空白溶剂溶解并稀释制成浓度为0.1728μg/mL、0.2150μg/mL、0.3216μg/mL、0.4140μg/mL、0.6036μg/mL、0.8020μg/mL、的SMA对照品溶液。

精密称取CPG对照品适量，分别用空白溶剂溶解并稀释制成浓度为0.0222μg/mL、0.1001μg/mL、0.1611μg/mL、0.2026μg/mL、0.3051μg/mL、0.4060μg/mL、的CPG对照品溶液。

精密量取上述对照品溶液各10μL分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积A为纵坐标、浓度C为横坐标作线性回归，结果见表5。

表5线性结果

样品	线性方程	R<sup>2</sup>	线性范围(μg/ml)
				CPG	y＝39095x+79.197	0.9993	0.022～0.406
SMA	y＝18762x-1550	0.9966	0.173～0.802

以上结果表明，CPG在浓度为0.022～0.406μg/ml范围内R²＝0.9993，SMA在浓度为0.173～0.802μg/ml范围内R²＝0.9966，浓度和峰面积之间线性关系良好。

2.5准确度

精密称取SMA供试品约20mg，用空白溶剂稀释50倍，得SMA储备液。

精密称取CPG对照品约10mg，用空白溶剂稀释50倍，得CPG储备液。

分别量取SMA储备液和CPG储备液各5.0mL置于同一50mL容量瓶中，稀释，定容，得混合一级储备液。

混合对照溶液：精密量取上述混合一级储备液1.0ml，置于100ml容量瓶中用空白溶剂溶解，稀释定容至刻度，摇匀，得混合对照溶液。

SMA供试品溶液：称取SMA供试品约10mg置50ml容量瓶中，空白溶剂溶解，稀释定容至刻度，摇匀，过滤，得SMA供试品溶液。

回收率50％溶液：精密称取SMA供试品约50mg，置25ml容量瓶中，空白溶剂溶解，稀释定容至刻度，摇匀，过滤，再分别量取10ml续滤液置于100ml容量瓶，加入混合一级储备液溶液0.5ml，流动相溶解，稀释定容至刻度，摇匀，得回收率50％溶液。

回收率100％溶液：精密称取SMA供试品约50mg，置25ml容量瓶中，空白溶剂溶解，稀释定容至刻度，摇匀，过滤，再分别量取10ml续滤液置于100ml容量瓶，加入混合一级储备液溶液1.0ml，空白溶剂溶解，稀释定容至刻度，摇匀，得回收率50％溶液。

回收率150％溶液：精密称取SMA供试品约50mg，置25ml容量瓶中，空白溶剂溶解，稀释定容至刻度，摇匀，过滤，再分别量取10ml续滤液置于100ml容量瓶，加入混合一级储备液溶液1.5ml，空白溶剂溶解，稀释定容至刻度，摇匀，得回收率50％溶液。

回收率50％溶液、回收率100％溶液和回收率150％溶液各平行配制3份。

精密量取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见下表6。

表6回收率试验结果

以上结果表明，各杂质在各浓度下的回收率均在97-110％范围内，平均回收率为101.32％，RSD值为3.73％，说明本法准确度较好。

实施例3

本实施例提供一种S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法，高效液相色谱的条件：

色谱柱：CAPCELL PAK C18(4.6×250mm)5μm；流速：1.2ml/min；检测波长：220nm；柱温，30℃；供试品溶液浓度：0.2mg/ml；进样量：10μl；流动相A相：0.1wt％磷酸二氢钾溶液(pH3.0)，流动相B相：乙腈。

按下列梯度程序进行洗脱：

时间(min)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	94	6
8	94	6
			8.1	84	16
27	84	16
			27.1	94	6
40	94	6

精密量取空白溶剂、混合溶液、供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，按上述高效液相色谱条件进样测定，记录各成分峰面积记录色谱图，结果见表7、表8。

表7混合溶液检测结果

混合溶液	保留时间min	分离度
			CPG	6.125	—
SMA	28.823	54.781

表8供试品溶液有关物质检测结果

供试品溶液	保留时间min	分离度
			未知杂质1	5.267	—
CPG	6.140	4.104
			未知杂质2	6.521	1.543
未知杂质3	16.676	49.379
			SMA	24.509	13.357

实施例4

色谱柱：CAPCELL PAK C18(4.6×250mm)5μm；流速：0.6ml/min；检测波长：220nm；柱温，30℃；供试品溶液浓度：0.2mg/ml；进样量：10μl；流动相A相：0.23wt％磷酸二氢钾溶液(pH4.0)，流动相B相：乙腈。

梯度洗脱条件与实施例3相同。

精密量取空白溶剂、混合溶液、供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，按上述高效液相色谱条件进样测定，记录各成分峰面积记录色谱图，结果见表9、表10。

表9混合溶液检测结果

混合溶液	保留时间min	分离度
			CPG	8.043	—
SMA	29.629	53.760

表10供试品溶液有关物质检测结果

实施例5

色谱柱：CAPCELL PAK C18(4.6×250mm)5μm；流速：0.9ml/min；检测波长：220nm；柱温，30℃；供试品溶液浓度：0.2mg/ml；进样量：10μl；流动相A相：0.45wt％磷酸二氢钾溶液(pH4.5)，流动相B相：乙腈。

按下列梯度程序进行洗脱：

时间(min)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	98	2
8	98	2
			8.1	84	16
27	84	16
			27.1	98	2
40	98	2

精密量取空白溶剂、混合溶液、供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，按上述高效液相色谱条件进样测定，记录各成分峰面积记录色谱图，结果见表11、表12。

表11混合溶液检测结果

混合溶液	保留时间min	分离度
			CPG	7.668	—
SMA	27.409	54.528

表12供试品溶液有关物质检测结果

实施例6

色谱柱：CAPCELL PAK C18(4.6×250mm)5μm；流速：0.9ml/min；检测波长：220nm；柱温，30℃；供试品溶液浓度：0.2mg/ml；进样量：10μl；流动相A相：0.5wt％磷酸二氢钾溶液(pH5.5)，流动相B相：乙腈。

按下列梯度程序进行洗脱：

时间(min)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	90	10
8	90	10
			8.1	84	16
27	84	16
			27.1	90	10
40	90	10

精密量取空白溶剂、混合溶液、供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，按上述高效液相色谱条件进样测定，记录各成分峰面积记录色谱图，结果见表13、表14。

表13混合溶液检测结果

混合溶液	保留时间min	分离度
			CPG	6.405	—
SMA	27.019	58.571

表14供试品溶液有关物质检测结果

供试品溶液	保留时间min	分离度
			未知杂质1	5.513	—
CPG	6.409	3.116
			未知杂质2	6.901	1.585
未知杂质3	17.709	35.281
			SMA	27.939	14.738

实施例7

色谱柱：CAPCELL PAK C18(4.6×250mm)5μm；流速：0.9ml/min；检测波长：240nm；柱温，30℃；供试品溶液浓度：0.2mg/ml；进样量：10μl；流动相A相：0.6wt％磷酸二氢钾溶液(pH6.0)，流动相B相：乙腈。

梯度洗脱条件与实施例3相同。

精密量取空白溶剂、混合溶液、供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，按上述高效液相色谱条件进样测定，记录各成分峰面积记录色谱图，结果见表15、表16。

表15混合溶液检测结果

混合溶液	保留时间min	分离度
			CPG	6.918	—
SMA	27.166	58.561

表16供试品溶液有关物质检测结果

实施例8

色谱柱：CAPCELL PAK C18(4.6×250mm)5μm；流速：0.9ml/min；检测波长：200nm；柱温，30℃；供试品溶液浓度：0.2mg/ml；进样量：10μl；流动相A相：0.139wt％磷酸二氢钾溶液(pH3.5)，流动相B相：乙腈。

梯度洗脱条件与实施例3相同。

精密量取空白溶剂、混合溶液、供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，按上述高效液相色谱条件进样测定，记录各成分峰面积记录色谱图，结果见表17、表18。

表17混合溶液检测结果

混合溶液	保留时间min	分离度
			CPG	6.920	—
SMA	27.171	58.570

表18供试品溶液有关物质检测结果

供试品溶液	保留时间min	分离度
			未知杂质1	5.123	—
CPG	6.915	3.652
			未知杂质2	7.588	2.882
未知杂质3	19.018	42.882
			SMA	26.451	11.905

实施例9

色谱柱：CAPCELL PAK C18(4.6×250mm)5μm；流速：0.8ml/min；检测波长：220nm；柱温，40℃；供试品溶液浓度：0.2mg/ml；进样量：10μl；流动相A相：0.139wt％磷酸二氢钾溶液(pH3.5)，流动相B相：乙腈。

梯度洗脱条件与实施例3相同。

精密量取空白溶剂、混合溶液、供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，按上述高效液相色谱条件进样测定，记录各成分峰面积记录色谱图，结果见表19、表20。

表19混合溶液检测结果

混合溶液	保留时间min	分离度
			CPG	6.512	—
SMA	26.667	58.232

表20供试品溶液有关物质检测结果

供试品溶液	保留时间min	分离度
			未知杂质1	5.011	—
CPG	6.508	3.644
			未知杂质2	7.323	2.799
未知杂质3	18.778	42.819
			SMA	26.233	11.672

实施例10

本实施例提供一种S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯、及其盐中有关物质的检测方法，高效液相色谱的条件：

色谱柱：CAPCELL PAK C18(4.6×250mm)5μm；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；柱温，20℃；供试品溶液浓度：0.2mg/ml；进样量：10μl；流动相A相：0.139wt％磷酸二氢钾溶液(pH3.5)，流动相B相：乙腈。

梯度洗脱条件与实施例3相同。

精密量取空白溶剂、混合溶液、供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，按上述高效液相色谱条件进样测定，记录各成分峰面积记录色谱图，结果见表21、表22。

表21混合溶液检测结果

混合溶液	保留时间min	分离度
			CPG	7.112	—
SMA	27.326	58.455

表22供试品溶液有关物质检测结果

供试品溶液	保留时间min	分离度
			未知杂质1	5.287	—
CPG	7.221	3.723
			未知杂质2	7.754	2.910
未知杂质3	19.214	43.021
			SMA	26.828	11.872

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检测，色谱条件为：

色谱柱：十八烷基键合硅胶柱；

UV检测器，检测波长200-240nm；

流动相A：0.1-0.5wt％磷酸二氢钾水溶液，流动相B为乙腈；

洗脱方式为梯度洗脱。

2.如权利要求1所述的S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：

0min，90-98％流动相A，10-2％流动相B；

8min，90-98％流动相A，10-2％流动相B；

8.1min，84％流动相A，16％流动相B；

27min，84％流动相A，16％流动相B；

27.1min，94％流动相A，6％流动相B；

40min，90-98％流动相A，10-2％流动相B。

3.如权利要求2所述的S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：

0min，94％流动相A，6％流动相B；

8min，94％流动相A，6％流动相B；

8.1min，84％流动相A，16％流动相B；

27min，84％流动相A，16％流动相B；

27.1min，94％流动相A，6％流动相B；

40min，94％流动相A，6％流动相B。

4.如权利要求1所述的S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法，其特征在于，流速为0.6-1.2mL/min，柱温为20-40℃，进样体积为10μL。

5.如权利要求3所述的S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法，其特征在于，检测波长为220nm，流速为0.9mL/min，柱温为30℃。

6.如权利要求1所述的S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢钾水溶液的pH为3-6。

7.如权利要求1或5所述的S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯、及其盐中有关物质的检测方法，其特征在于，流动相A为0.136wt％磷酸二氢钾水溶液。

8.如权利要求1所述的S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的规格为250*4.6mm，填料直径为5μm。

9.如权利要求1或8所述的S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为CAPCELL PAK C18，4.6*250mm，5μm。

10.如权利要求1所述的S-2-氨基-2-(2-氯苯基)乙酸甲酯或其盐中有关物质的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的浓度为0.2mg/mL。