CN112379012B - 4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的高效液相色谱测定方法 - Google Patents

4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的高效液相色谱测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种4‑乙基‑2,3‑双氧哌嗪酰氯的高效液相色谱测定方法，属于药物分析技术领域。所述方法包括以下步骤：(1)高效液相色谱条件为：色谱柱：C18色谱柱；流动相：甲醇水溶液；流速：0.8‑1.2ml/min；柱温：室温；检测器波长：198‑210nm；进样体积：20uL；洗脱方式：等度洗脱；样品衍生化处理条件：有机胺类作为衍生化试剂；碱作为催化剂；无水乙醇为溶剂；反应条件为室温，反应时间为15‑25min；(2)分别配制4‑乙基‑2,3‑双氧哌嗪酰氯的对照样品溶液和供试品溶液；(3)制作标准曲线；(4)计算供试品的含量。本发明操作简单便捷，色谱峰形好，数据准确可靠，重现性好。

Description

4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的高效液相色谱测定方法
技术领域
本发明涉及一种4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的高效液相色谱测定方法，属于药物分析技术领域。
背景技术
4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯为淡黄色或白色针状结晶，极易吸潮分解，太阳光直接照射软化，易溶于水，可溶于二氯甲烷、氯仿及甲醇，不溶于石油醚及正己烷，在丙酮及水中分解。其分子式是C7H9ClN2O3，分子量为204.611，该物质是一种重要的医药中间体。其结构式为
Figure BDA0002744907700000011
4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯是合成哌拉西林、头孢哌酮等抗生素药物的一个重要前体，广泛应用于抗菌素药物的生产。毒性低微，较为安全，在国内市场销售上呈不断上升趋势。
目前报道的关于4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的测定方法主要有容量分析方法的银量法和气相色谱分析法。银量法测定4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯，滴定终点的判断以颜色变化为依据，存在很大的观察误差。气相色谱法的分离度高，灵敏度好，样品用量少，重复性好，直接气相法时，需要很高的汽化温度，在此温度下4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯很容易分解。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的高效液相色谱测定方法，操作简便快捷，色谱峰形好，数据准确可靠，重现性好，能够准确的测定4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的含量，对下游客户的使用起指导作用。
本发明所述的4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的高效液相色谱测定方法，包括以下步骤：
(1)高效液相色谱条件为：
色谱柱：C18色谱柱(规格为250×4.6mm，5μm)；
流动相：甲醇水溶液，甲醇与水的体积比为70-80:30-20，体积比优选70:30；
流速：0.8-1.2ml/min，优选1.0ml/min；
柱温：室温；
检测器波长：198-210nm，优选205nm；
进样体积：20uL；
洗脱方式：等度洗脱；
样品衍生化处理条件：有机胺类作为衍生化试剂，优选甲胺；碱作为催化剂，优选三乙胺；无水乙醇为溶剂；反应条件为室温，反应时间为15-25min，优选20min；
(2)分别配制4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的对照样品溶液和供试品溶液；
(3)制作标准曲线；
(4)计算供试品的含量。
通过试验，在最佳液相色谱条件下，4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的含量在0.2～1.0mg/ml的浓度范围内具有良好的线性关系，相关系数在0.999以上，采用空白基质匹配标准溶液的方法进行标准校正，显示4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯平均回收率在90％以上，相对标准偏差小于1.5％。该方法适用于测定4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的含量。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1、本发明采用衍生化法，先将4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯与胺反应生成稳定的酞胺，再进行高效液相色谱分析，就能避免直接气相法的缺点。
2、操作简单便捷，色谱峰形好，数据准确可靠，重现性好。
3、能够准确的测定4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的含量，对下游客户的使用起指导作用。
附图说明
图1为本发明所述的供试品的高效液相色谱图；
图2为本发明4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的浓度-峰面积的标准曲线图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步说明，但其并不限制本发明的实施。
实施例1
1、检测：
(1)液相色谱条件：
色谱柱为C18(250×4.6mm，5μm)；柱温为室温；检测波长为205nm；流动相为甲醇水溶液(体积比＝70:30)；流速为1.0ml/min；进样量为20μl；洗脱时间为15min。
(2)溶液配制：
对照品溶液的配制：精密称取4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯对照品25.0mg置于25ml容量瓶中，加入5ml无水乙醇，0.5ml甲胺和0.25ml三乙胺，振荡，放置20min，再用乙醇定容，摇匀，静置，作为对照品溶液。
供试品溶液的配制：精密称取供试品25.0mg，置于25ml容量瓶中，加入5ml无水乙醇，0.5ml甲胺和0.25ml三乙胺，振荡，放置20min，再用乙醇定容，摇匀，静置，作为供试品溶液。
(3)色谱条件优化：
流动相配比的选择：
考察甲醇与水以不同的比例存在时，对待测物质分离效果的影响。结果表明，甲醇比例从90％-40％的变化过程中，随着浓度的降低，保留时间逐渐延长(表1)。但当甲醇浓度低于70％时，分离条件没有达到最佳状态，杂质和4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯没有完全分开。因此甲醇-水最佳体积比为70:30。
表1
甲醇和水的体积比 4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯保留时间(min)
90:10 2.707
80:20 3.398
70:30 5.307
60:40 6.025
50:50 6.893
检测波长的选择：
考察了4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯在不同波长下的紫外吸收强度。结果表明，当紫外吸收波长在198-210nm时4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的紫外吸收强度较强，因此优选205nm作为4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯检测波长。
流速的选择：
考察了不同流速对待测物分离效果的影响。结果表明，流速从0.2-2.0ml/min的变化过程中，流速低于0.8ml/min时保留时间会很长，而流速高于1.2ml/min时会影响待测物的分离效果，杂质和4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯没有完全分开。因此优选流速为1.0ml/min。
2、方法学的验证：
(1)系统适用性：
精密称取4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯标准品50.0mg，置于50ml容量瓶中，加入10ml无水乙醇，1ml甲胺和0.5ml三乙胺，振荡，放置20min，再用乙醇定容，摇匀，作为系统适用性溶液，取系统适用性溶液20μl注入液相色谱仪，进行测试，记录色谱图，由图1可以看出，峰型良好，溶剂对主峰和其他杂质峰没有影响，4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯标准品在优选的色谱条件下的保留时间和4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯供试品的保留时间基本一致，因此优选的色谱条件适用于4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的检测。
(2)标准曲线与检测限：
精密称取4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯标准品50.0mg，置于50ml容量瓶中，加入10ml无水乙醇，1ml甲胺和0.5ml三乙胺，振荡，放置20min，再用乙醇定容，摇匀，配成浓度为1mg/ml的标准液；分别精密称取上述标准液2ml、4ml、6ml、8ml和10ml置于10ml容量瓶中，用流动相定容至10ml，配成浓度为0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml和1.0mg/ml的4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯标准溶液。在优选的色谱条件下进样测定。每个浓度平行测定5次，按所得峰面积平均值对4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯浓度做标准曲线，得到归方程与相关系数图，由图2看出线性条件良好。
(3)回收率与精密度：
采用空白加标的方法进行回收率和精密度测定。将0.2、0.6、1.0mg/ml 3个浓度的标准品添加到空白样品中，每个浓度样品测定5次，记录峰面积，分别带入回归方程，并依据公式分别计算回收率和RSD。结果如表2。
表2
标准加入量(mg/ml) 样品测定值(mg/ml) 回收率(％) RSD(％)
0.2 0.185 92.5 1.217
0.6 0.566 94.3 0.957
1.0 0.972 97.2 1.078
由表可以看出，该方法回收率在90％以上，4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯峰面积的RSD均小于2.0％，可见该方法的回收率和系统精密度良好。
(4)样品测定：
按照优选的高效液相色谱条件对4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯样品进行测定。4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的含量为92.983％。

Claims (4)

1.一种4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的高效液相色谱测定方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）高效液相色谱条件为：
色谱柱：C18色谱柱，规格为250×4.6mm，5μm；
流动相：甲醇水溶液，甲醇与水的体积比为70:30；
流速：0.8-1.2ml/min；
柱温：室温；
检测器波长：198-210nm；
进样体积：20uL；
洗脱方式：等度洗脱；
样品衍生化处理条件：甲胺作为衍生化试剂；三乙胺作为催化剂；无水乙醇为溶剂；反应条件为室温；
（2）分别配制4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的对照品溶液和供试品溶液；
对照品溶液的配制：精密称取4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯对照品25.0mg置于25ml容量瓶中，加入5ml无水乙醇，0.5ml甲胺和0.25ml三乙胺，振荡，放置20min，再用乙醇定容，摇匀，静置，作为对照品溶液；
供试品溶液的配制：精密称取供试品25.0mg，置于25ml容量瓶中，加入5ml无水乙醇，0.5ml甲胺和0.25ml三乙胺，振荡，放置20min，再用乙醇定容，摇匀，静置，作为供试品溶液；
（3）制作标准曲线；
（4）计算供试品的含量。
2.根据权利要求1所述的4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的高效液相色谱测定方法，其特征在于：检测器波长为205nm。
3.根据权利要求1所述的4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的高效液相色谱测定方法，其特征在于：流速为1.0ml/min。
4.根据权利要求1所述的4-乙基-2,3-双氧哌嗪酰氯的高效液相色谱测定方法，其特征在于：样品衍生化处理条件中，反应时间为20min。
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