CN110923204A - 一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基，该培养基由以下原料制成：蛋白胨10%‑15%、碳酸钙8%‑15%、氯化钠3%‑8%、葡萄糖15%‑25%、亚油酸1%‑3%、氨基酸3%‑5%、维生素2%‑6%、蛋白水解物20%‑30%、植物多糖10%‑25%和蒸馏水20%‑30%，本发明提供的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基采用合理配比的原料制作，保证营养成分的多样性，同时在配置时调节酸碱度，保证培养环境的适应性，有利于提高干细胞的培养效率，同时通过调节浓稠度，并且进行冷热转换，可以进行灭菌消毒，保证安全性，有助于高效生产，便于细胞培养，利于使用和疾病治疗。

Description

一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基
技术领域
本发明涉及干细胞培养技术领域，尤其涉及一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基。
背景技术
在现在的科技发展和医疗环境下，针对骨关节炎的治疗方式越来越多，其中采用人源脂肪干细胞进行诱导分化的方式，得到了较大的应用，采用人源脂肪组织来培养干细胞，原料足，取材容易，利于进行治疗。
而通过脂肪组织培养干细胞时，需要使用到培养基，而现有的脂肪干细胞培养基采用的材料配置不合理，不容易控制其粘稠度和酸碱度环境，也就不利于干细胞培养生长，而且培养基的营养成分比较单一，细胞培养活性不足，效率不高，有待提出一种新的培养基。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基，该培养基由以下原料制成：蛋白胨10%-15%、碳酸钙8%-15%、氯化钠3%-8%、葡萄糖15%-25%、亚油酸1%-3%、氨基酸3%-5%、维生素2%-6%、蛋白水解物20%-30%、植物多糖10%-25%和蒸馏水20%-30%。
优选的，所述培养基的制备方法包括如下步骤：
S1、按照质量百分比称量各原料，备用；
S2、将氯化钠、葡萄糖、亚油酸、氨基酸、维生素、蛋白水解物和植物多糖加入到蒸馏水中，在20转每分钟至30转每分钟速率下，均匀搅拌15分钟至25分钟，充分溶解，得到混合溶液；
S3、将碳酸钙加入到混合溶液中，均匀搅拌，调节pH值至7.2-7.6，得到碱性溶液；
S4、将碱性溶液加热至95摄氏度至98摄氏度，持续保温20分钟至30分钟，进行杀菌处理，得到净化溶液；
S5、将净化溶液冷却至室温状态，加入蛋白胨，调节浓度至含水量为75%-80%，得到粘稠原料；
S6、将粘稠原料至于冷冻环境下，冷冻2小时至4小时，得到胶冻状态原料；
S7、将胶东状态原料分割到培养皿中，覆盖保鲜膜保存，即可得到所述培养基。
优选的，所述S3步骤投入碳酸钙为间歇投放方式，即为投放溶解-检测-投放-检测。
优选的，所述S5步骤的冷却方式为自然冷却或通风冷却的一种。
优选的，所述植物多糖包括黄芪多糖、柴胡多糖、艾叶多糖、茯苓多糖、香菇多糖、红枣多糖、银耳多糖的一种或多种混合物。
优选的，所述蛋白水解物的制备方法包括如下步骤：
P1、称量蛋白粉溶解到蒸馏水中，配置含量为25%-30%的蛋白粉溶液；
P2、将蛋白粉溶液中加入碳酸钙，调节pH至8-8.5；
P3、在蛋白粉溶液中加入蛋白酶，混合均匀，进行酶解处理；
P4、将酶解处理后的溶液采用离心机进行离心处理，收集上清液；
P5、将上清液进行过滤，得到蛋白粉水解液；
P6、将蛋白粉水解进行真空冷冻干燥，即可得到蛋白水解物。
优选的，所述P3步骤的蛋白酶包括碱性蛋白酶和中性蛋白酶，且比例为1:2-3。
优选的，所述P4步骤的离心力为800克至900克，持续时间为25分钟至30分钟。
本发明提供的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基采用合理配比的原料制作，保证营养成分的多样性，同时在配置时调节酸碱度，保证培养环境的适应性，有利于提高干细胞的培养效率，同时通过调节浓稠度，并且进行冷热转换，可以进行灭菌消毒，保证安全性，有助于高效生产，便于细胞培养，利于使用和疾病治疗。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基，该培养基由以下原料制成：蛋白胨10%-15%、碳酸钙8%-15%、氯化钠3%-8%、葡萄糖15%-25%、亚油酸1%-3%、氨基酸3%-5%、维生素2%-6%、蛋白水解物20%-30%、植物多糖10%-25%和蒸馏水20%-30%。
作为优选的，所述培养基的制备方法包括如下步骤：
S1、按照质量百分比称量各原料，备用；
S2、将氯化钠、葡萄糖、亚油酸、氨基酸、维生素、蛋白水解物和植物多糖加入到蒸馏水中，在20转每分钟至30转每分钟速率下，均匀搅拌15分钟至25分钟，充分溶解，得到混合溶液；
S3、将碳酸钙加入到混合溶液中，均匀搅拌，调节pH值至7.2-7.6，得到碱性溶液；
S4、将碱性溶液加热至95摄氏度至98摄氏度，持续保温20分钟至30分钟，进行杀菌处理，得到净化溶液；
S5、将净化溶液冷却至室温状态，加入蛋白胨，调节浓度至含水量为75%-80%，得到粘稠原料；
S6、将粘稠原料至于冷冻环境下，冷冻2小时至4小时，得到胶冻状态原料；
S7、将胶东状态原料分割到培养皿中，覆盖保鲜膜保存，即可得到所述培养基。
作为优选的，所述S3步骤投入碳酸钙为间歇投放方式，即为投放溶解-检测-投放-检测。
作为优选的，所述S5步骤的冷却方式为自然冷却或通风冷却的一种。
作为优选的，所述植物多糖包括黄芪多糖、柴胡多糖、艾叶多糖、茯苓多糖、香菇多糖、红枣多糖、银耳多糖的一种或多种混合物。
作为优选的，所述蛋白水解物的制备方法包括如下步骤：
P1、称量蛋白粉溶解到蒸馏水中，配置含量为25%-30%的蛋白粉溶液；
P2、将蛋白粉溶液中加入碳酸钙，调节pH至8-8.5；
P3、在蛋白粉溶液中加入蛋白酶，混合均匀，进行酶解处理；
P4、将酶解处理后的溶液采用离心机进行离心处理，收集上清液；
P5、将上清液进行过滤，得到蛋白粉水解液；
P6、将蛋白粉水解进行真空冷冻干燥，即可得到蛋白水解物。
作为优选的，所述P3步骤的蛋白酶包括碱性蛋白酶和中性蛋白酶，且比例为1:2-3。
作为优选的，所述P4步骤的离心力为800克至900克，持续时间为25分钟至30分钟。
本发明提供的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基采用合理配比的原料制作，保证营养成分的多样性，同时在配置时调节酸碱度，保证培养环境的适应性，有利于提高干细胞的培养效率，同时通过调节浓稠度，并且进行冷热转换，可以进行灭菌消毒，保证安全性，有助于高效生产，便于细胞培养，利于使用和疾病治疗。
实施例1
一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基，该培养基由以下原料制成：蛋白胨10%、碳酸钙6、氯化钠3%、葡萄糖15%、亚油酸3%、氨基酸5%、维生素4%、蛋白水解物20%、植物多糖10%和蒸馏水22%。
作为优选的，所述培养基的制备方法包括如下步骤：
S1、按照质量百分比称量各原料，备用；
S2、将氯化钠、葡萄糖、亚油酸、氨基酸、维生素、蛋白水解物和植物多糖加入到蒸馏水中，在20转每分钟至30转每分钟速率下，均匀搅拌15分钟至25分钟，充分溶解，得到混合溶液；
S3、将碳酸钙加入到混合溶液中，均匀搅拌，调节pH值至7.2-7.6，得到碱性溶液；
S4、将碱性溶液加热至95摄氏度至98摄氏度，持续保温20分钟至30分钟，进行杀菌处理，得到净化溶液；
S5、将净化溶液冷却至室温状态，加入蛋白胨，调节浓度至含水量为75%-80%，得到粘稠原料；
S6、将粘稠原料至于冷冻环境下，冷冻2小时至4小时，得到胶冻状态原料；
S7、将胶东状态原料分割到培养皿中，覆盖保鲜膜保存，即可得到所述培养基。
作为优选的，所述S3步骤投入碳酸钙为间歇投放方式，即为投放溶解-检测-投放-检测。
作为优选的，所述S5步骤的冷却方式为自然冷却或通风冷却的一种。
作为优选的，所述植物多糖包括黄芪多糖、柴胡多糖、艾叶多糖、茯苓多糖、香菇多糖、红枣多糖、银耳多糖的一种或多种混合物。
作为优选的，所述蛋白水解物的制备方法包括如下步骤：
P1、称量蛋白粉溶解到蒸馏水中，配置含量为25%的蛋白粉溶液；
P2、将蛋白粉溶液中加入碳酸钙，调节pH至8.5；
P3、在蛋白粉溶液中加入蛋白酶，混合均匀，进行酶解处理；
P4、将酶解处理后的溶液采用离心机进行离心处理，收集上清液；
P5、将上清液进行过滤，得到蛋白粉水解液；
P6、将蛋白粉水解进行真空冷冻干燥，即可得到蛋白水解物。
作为优选的，所述P3步骤的蛋白酶包括碱性蛋白酶和中性蛋白酶，且比例为1:3。
作为优选的，所述P4步骤的离心力为800克至900克，持续时间为25分钟至30分钟。
实施例2
一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基，该培养基由以下原料制成：蛋白胨12%、碳酸钙8、氯化钠3%、葡萄糖15%、亚油酸1%、氨基酸5%、维生素4%、蛋白水解物20%、植物多糖12%和蒸馏水20%。
作为优选的，所述培养基的制备方法包括如下步骤：
S1、按照质量百分比称量各原料，备用；
S2、将氯化钠、葡萄糖、亚油酸、氨基酸、维生素、蛋白水解物和植物多糖加入到蒸馏水中，在20转每分钟至30转每分钟速率下，均匀搅拌15分钟至25分钟，充分溶解，得到混合溶液；
S3、将碳酸钙加入到混合溶液中，均匀搅拌，调节pH值至7.4，得到碱性溶液；
S4、将碱性溶液加热至95摄氏度至98摄氏度，持续保温20分钟至30分钟，进行杀菌处理，得到净化溶液；
S5、将净化溶液冷却至室温状态，加入蛋白胨，调节浓度至含水量为75%-80%，得到粘稠原料；
S6、将粘稠原料至于冷冻环境下，冷冻2小时至4小时，得到胶冻状态原料；
S7、将胶东状态原料分割到培养皿中，覆盖保鲜膜保存，即可得到所述培养基。
作为优选的，所述S3步骤投入碳酸钙为间歇投放方式，即为投放溶解-检测-投放-检测。
作为优选的，所述S5步骤的冷却方式为自然冷却或通风冷却的一种。
作为优选的，所述植物多糖包括黄芪多糖、柴胡多糖、艾叶多糖、茯苓多糖、香菇多糖、红枣多糖、银耳多糖的一种或多种混合物。
作为优选的，所述蛋白水解物的制备方法包括如下步骤：
P1、称量蛋白粉溶解到蒸馏水中，配置含量为30%的蛋白粉溶液；
P2、将蛋白粉溶液中加入碳酸钙，调节pH至8；
P3、在蛋白粉溶液中加入蛋白酶，混合均匀，进行酶解处理；
P4、将酶解处理后的溶液采用离心机进行离心处理，收集上清液；
P5、将上清液进行过滤，得到蛋白粉水解液；
P6、将蛋白粉水解进行真空冷冻干燥，即可得到蛋白水解物。
作为优选的，所述P3步骤的蛋白酶包括碱性蛋白酶和中性蛋白酶，且比例为1:2。
作为优选的，所述P4步骤的离心力为800克至900克，持续时间为25分钟至30分钟。
本发明提供的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基采用合理配比的原料制作，保证营养成分的多样性，同时在配置时调节酸碱度，保证培养环境的适应性，有利于提高干细胞的培养效率，同时通过调节浓稠度，并且进行冷热转换，可以进行灭菌消毒，保证安全性，有助于高效生产，便于细胞培养，利于使用和疾病治疗。

Claims (8)

1.一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基，其特征在于：该培养基由以下原料制成：蛋白胨10%-15%、碳酸钙8%-15%、氯化钠3%-8%、葡萄糖15%-25%、亚油酸1%-3%、氨基酸3%-5%、维生素2%-6%、蛋白水解物20%-30%、植物多糖10%-25%和蒸馏水20%-30%。
2.根据所述权利要求1的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基，其特征在于：所述培养基的制备方法包括如下步骤：
S1、按照质量百分比称量各原料，备用；
S2、将氯化钠、葡萄糖、亚油酸、氨基酸、维生素、蛋白水解物和植物多糖加入到蒸馏水中，在20转每分钟至30转每分钟速率下，均匀搅拌15分钟至25分钟，充分溶解，得到混合溶液；
S3、将碳酸钙加入到混合溶液中，均匀搅拌，调节pH值至7.2-7.6，得到碱性溶液；
S4、将碱性溶液加热至95摄氏度至98摄氏度，持续保温20分钟至30分钟，进行杀菌处理，得到净化溶液；
S5、将净化溶液冷却至室温状态，加入蛋白胨，调节浓度至含水量为75%-80%，得到粘稠原料；
S6、将粘稠原料至于冷冻环境下，冷冻2小时至4小时，得到胶冻状态原料；
S7、将胶东状态原料分割到培养皿中，覆盖保鲜膜保存，即可得到所述培养基。
3.根据所述权利要求2的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基，其特征在于：所述S3步骤投入碳酸钙为间歇投放方式，即为投放溶解-检测-投放-检测。
4.根据所述权利要求2的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基，其特征在于：所述S5步骤的冷却方式为自然冷却或通风冷却的一种。
5.根据所述权利要求1的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基，其特征在于：所述植物多糖包括黄芪多糖、柴胡多糖、艾叶多糖、茯苓多糖、香菇多糖、红枣多糖、银耳多糖的一种或多种混合物。
6.根据所述权利要求1的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基，其特征在于：所述蛋白水解物的制备方法包括如下步骤：
P1、称量蛋白粉溶解到蒸馏水中，配置含量为25%-30%的蛋白粉溶液；
P2、将蛋白粉溶液中加入碳酸钙，调节pH至8-8.5；
P3、在蛋白粉溶液中加入蛋白酶，混合均匀，进行酶解处理；
P4、将酶解处理后的溶液采用离心机进行离心处理，收集上清液；
P5、将上清液进行过滤，得到蛋白粉水解液；
P6、将蛋白粉水解进行真空冷冻干燥，即可得到蛋白水解物。
7.根据所述权利要求6的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基，其特征在于：所述P3步骤的蛋白酶包括碱性蛋白酶和中性蛋白酶，且比例为1:2-3。
8.根据所述权利要求6的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基，其特征在于：所述P4步骤的离心力为800克至900克，持续时间为25分钟至30分钟。
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