CN113476586B - 一种富硒细胞修复液制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种富硒细胞修复液制备方法，所述制备方法包括提取富硒多肽、加料搅拌。本发明制得的富硒细胞修复液含硒量高，硒含量2.3‑2.5mg/kg，修复细胞的同时可以补硒，提高细胞的抗氧化能力，皮肤擦伤使用本发明制得的富硒细胞修复液9‑11天可以痊愈；可以提高皮肤的胶原蛋白含量，使用60天后胶原蛋白较普通产品提高12‑13%；能有效的提高细胞存活率，使用本发明制得的富硒细胞修复液较使用普通产品的细胞存活率提升12‑13个百分点。
Description
技术领域
本发明涉及一种富硒细胞修复液制备方法，属于生物医药技术领域。
背景技术
皮肤是人体的重要器官，它起着控制体温，防止感染及体液流失、免疫及传感的作用。由于创伤、擦伤、皮肤溃烂和烧伤等原因，可能导致皮肤的大范围伤害。皮肤的损伤容易造成细菌感染，体液流失并引起各种临床并发症。
我国在伤口处理方面的消费水平与国外同类产品价格上相差甚远，在技术研发方面投入较低，产品优势也不明显，例如功效不明显，品种单一，没有形成系列产品，更没有对目标客户进行市场细分，因此远远没有满足旺盛的市场需求。
经广泛的调研、充分论证，表明目前该市场仍处于低度开发状态。国内外针对伤口愈合的天然生物细胞修复产品少，市场产品疗效差，满足不了患者的需求。
目前现有技术存在以下问题：
（1）不含有微量元素，起不到协同作用达到好的修复效果；
（2）对细胞的增殖能力差；
（3）不能提升细胞的胶原蛋白含量。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷，提供一种富硒细胞修复液制备方法，实现以下发明目的：
（1）含有微量元素，可以起到协同作用达到好的修复效果；
（2）对细胞的增殖能力强；
（3）可以能提升细胞的胶原蛋白含量。
为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：
一种富硒细胞修复液制备方法，所述制备方法包括植物榨油、加料搅拌、后处理。
以下是对上述技术方案的进一步改进：
（1）提取富硒多肽
提取蛋白乳液，取榨油后的富硒豆粕进行粉碎，加入pH为9的氢氧化钠溶液进行浸取，于60-70℃，80-120r/min下浸取1.5-2.5h，浸取完成后过滤使固液分离，得到固料和浸取液；
将浸取液加入盐酸，调节pH为4-5，在50-60℃下沉淀2-3h，沉淀后进行过滤，过滤后用氢氧化钠溶液调节至pH为7, 得到富硒蛋白乳液。
制备多肽粉末，将富硒蛋白乳液加入蛋白酶进行酶解，酶解温度45-55℃，搅拌速度400-600r/min下酶解4.5-5.5h，酶解完成后升温至75-85℃进行灭活，后冷却至室温，得到酶解后富硒多肽乳液；
将酶解后富硒多肽乳液进行离心过滤，离心转速4500-5500r/min，离心时间15-25min，离心后在75-85℃下进行干燥，干燥后得到富硒多肽粉末。
所述豆粕与氢氧化钠溶液的质量比为1:11-13；
所述蛋白酶为木瓜蛋白酶；
所述富硒多肽乳液与蛋白酶的质量比为280-320:1。
（2）加料搅拌
富硒多肽粉末加入生育酚乙酸酯、牡蛎肽、γ-PGA聚谷氨酸、棕榈酸视黄酯、重组人白细胞介素-12、透明质酸在28-35℃下以450-550r/min搅拌35-45min，使其充分混合，得到混合物料；
混合物料中再加入甘油、纯化水、低分子量壳寡糖在28-35℃下以600-800r/min搅拌50-70min，使其充分混合，混合后在28-32℃下以50-70Hz超声25-35min得到富硒细胞修复液。
所述修复液初液按质量份计，包括以下组分：富硒多肽粉末0.8-1.2份、生育酚乙酸酯0.8-1.2份、牡蛎肽0.8-1.2份、γ-PGA聚谷氨酸0.3-0.7份、棕榈酸视黄酯1.5-2.5份、重组人白细胞介素-12 0.3-0.7份、透明质酸1-2份、甘油6-8份、纯化水40-50份、壳寡糖1-2份；
所述低分子量壳寡糖分子量为3000。
与现有技术相比，本发明取得以下有益效果：
（1）本发明制得的富硒细胞修复液含硒量高，硒含量2.3-2.5mg/kg，修复细胞的同时可以补硒，提高细胞的抗氧化能力，皮肤擦伤使用本发明制得的富硒细胞修复液9-11天可以痊愈；
（2）本发明制得的富硒细胞修复液可以提高皮肤的胶原蛋白含量，使用60天后胶原蛋白较普通产品提高12-13%；
（3）本发明制得的富硒细胞修复液能有效的提高细胞存活率，使用本发明制得的富硒细胞修复液较使用普通产品的细胞存活率提升12-13个百分点；
（4）除了用于人，另外，专利技术还能应用农业，畜牧业，水产业去除农药残留，重金属，增产增收，抗病防病，解决土壤板结等作用。
具体实施方式
实施例1一种富硒细胞修复液制备方法
包括以下步骤：
（1）提取富硒多肽
取榨油后的富硒豆粕进行粉碎，加入pH为9的氢氧化钠溶液进行浸取，于65℃，100r/min下浸取2h，浸取完成后过滤使固液分离，得到固料和浸取液；
将浸取液加入盐酸，调节pH为4.5，在55℃下沉淀2.5h，沉淀后进行过滤，过滤后用氢氧化钠溶液调节至pH为7, 得到富硒蛋白乳液。
将富硒蛋白乳液加入蛋白酶进行酶解，酶解温度50℃，搅拌速度500r/min下酶解5h，酶解完成后升温至80℃进行灭活，后冷却至室温，得到酶解后富硒多肽乳液；
将酶解后富硒多肽乳液进行离心过滤，离心转速5000r/min，离心时间20min，离心后在80℃下进行干燥，干燥后得到富硒多肽粉末。
所述豆粕与氢氧化钠溶液的质量比为1:12；
所述蛋白酶为木瓜蛋白酶；
所述富硒多肽乳液与蛋白酶的质量比为300:1。
（2）加料搅拌
富硒多肽粉末加入生育酚乙酸酯、牡蛎肽、γ-PGA聚谷氨酸、棕榈酸视黄酯、重组人白细胞介素-12、透明质酸在30℃下以500r/min搅拌40min，使其充分混合，得到混合物料；
混合物料中再加入甘油、纯化水、低分子量壳寡糖在30℃下以700r/min搅拌60min，使其充分混合，混合后在30℃下以60Hz超声30min得到富硒细胞修复液。
所述修复液初液按质量份计，包括以下组分：富硒多肽粉末1份、生育酚乙酸酯1份、牡蛎肽1份、γ-PGA聚谷氨酸0.5份、棕榈酸视黄酯2份、重组人白细胞介素-12 0.5份、透明质酸1.5份、甘油7份、纯化水45份、壳寡糖1.5份；
所述低分子量壳寡糖分子量为3000。
对比例1一种细胞修复液制备方法
包括以下步骤：
（1）提取多肽
取榨油后的豆粕进行粉碎，加入pH为9的氢氧化钠溶液进行浸取，于65℃，100r/min下浸取2h，浸取完成后过滤使固液分离，得到固料和浸取液；
将浸取液加入盐酸，调节pH为4.5，在55℃下沉淀2.5h，沉淀后进行过滤，过滤后用氢氧化钠溶液调节至pH为7, 得到蛋白乳液；
将蛋白乳液加入蛋白酶进行酶解，酶解温度50℃，搅拌速度500r/min下酶解5h，酶解完成后升温至80℃进行灭活，后冷却至室温，得到酶解后多肽乳液；
将酶解后多肽乳液进行离心过滤，离心转速5000r/min，离心时间20min，离心后在80℃下进行干燥，干燥后得到多肽粉末。
所述豆粕与氢氧化钠的质量比为1:12；
所述蛋白酶为木瓜蛋白酶；
所述多肽乳液与蛋白酶的质量比为300:1。
（2）加料搅拌
多肽粉末加入生育酚乙酸酯、牡蛎肽、棕榈酸视黄酯、透明质酸在30℃下以500r/min搅拌40min，使其充分混合，得到混合物料；
混合物料中再加入甘油、纯化水在30℃下以700r/min搅拌60min，使其充分混合，混合后在30℃下以60Hz超声30min得到富硒细胞修复液；
所述修复液初液按质量份计，包括以下组分：多肽粉末1份、生育酚乙酸酯1.5份、牡蛎肽1份、棕榈酸视黄酯2份、透明质酸2份、甘油7份、纯化水45份。
实施例2
实施例1制得的富硒细胞修复液硒含量为2.4mg/kg；
皮肤擦伤后对皮肤创面使用实施例1制得的富硒细胞修复液进行涂抹，每天两次，每次使用2ml，观察其擦伤愈合情况；
使用实施例1制得的富硒细胞修复液患者创面复原，痊愈时间为10天。
实施例3
挑选40名25-40岁不同年龄段的女性分为两组，每组各20人，其中每组25-30岁7人、30-35岁7人、35-40岁6人，其中实验组每天于脸部涂抹实施例1制得的富硒细胞修复液，每天早上一次，晚上一次，每次1ml，对照组每天于脸部涂抹对比例1制得的细胞修复液，每天早上一次，晚上一次，每次1ml，60天后分别观察其皮肤改善情况，测定其皮肤胶原蛋白含量；
使用实施例1制得的富硒细胞修复液的实验组女性皮肤较对照组女性的更加红润，皮肤光泽度较好，皮肤中胶原蛋白含量较对照组女性平均增加12.3%。
实施例4
挑选状态良好的人表皮细胞接种于培养基，分40个培养基在37oC，5%CO2环境中培养，12h后，其中实验组20个培养基加入占培养基基质2wt%实施例1制得的富硒细胞修复液，其余20个为对照组，加入占培养基基质2wt%对比例1制得的细胞修复液，继续培养24h，测定人表皮细胞的存活率；
实验组细胞平均存活率为115.3%，对照组细胞平均存活率为102.7%，实验组较对照组细胞存活率提升了12.6个百分点。
Claims (3)
1.一种富硒细胞修复液制备方法，其特征在于，所述制备方法包括提取富硒多肽、加料搅拌；
所述提取富硒多肽包括提取蛋白乳液、制备富硒多肽粉末；
所述提取蛋白乳液包括，富硒豆粕粉碎后加入pH为9的氢氧化钠溶液于60-70℃，80-120r/min下浸取1.5-2.5h，浸取后过滤得到固料和浸取液；
在浸取液中加入盐酸，调节pH为4-5，在50-60℃下沉淀2-3h，沉淀后进行过滤，过滤后用氢氧化钠溶液调节至pH为7, 得到富硒蛋白乳液；
所述制备富硒多肽粉末包括，在富硒蛋白乳液中加入蛋白酶进行酶解，酶解温度45-55℃，搅拌速度400-600r/min下酶解4.5-5.5h，酶解完成后升温至75-85℃进行灭活，后冷却至室温，得到酶解后富硒多肽乳液；
将酶解后富硒多肽乳液进行离心过滤，离心转速4500-5500r/min，离心时间15-25min，离心后在75-85℃下进行干燥，得到富硒多肽粉末；
所述加料搅拌包括，在富硒多肽粉末中加入生育酚乙酸酯、牡蛎肽、γ-PGA聚谷氨酸、棕榈酸视黄酯、重组人白细胞介素-12、透明质酸，然后在28-35℃下以450-550r/min搅拌35-45min，得到混合物料；
混合物料中再加入甘油、纯化水、低分子量壳寡糖在28-35℃下以600-800r/min搅拌50-70min，搅拌后在28-32℃下以50-70Hz超声25-35min得到富硒细胞修复液；
所述富硒细胞修复液按质量份计，包括以下组分：富硒多肽粉末0.8-1.2份、生育酚乙酸酯0.8-1.2份、牡蛎肽0.8-1.2份、γ-PGA聚谷氨酸0.3-0.7份、棕榈酸视黄酯1.5-2.5份、重组人白细胞介素-12 0.3-0.7份、透明质酸1-2份、甘油6-8份、纯化水40-50份、低分子量壳寡糖1-2份；
所述低分子量壳寡糖分子量为3000。
2.根据权利要求1所述的一种富硒细胞修复液制备方法，其特征在于：
所述富硒豆粕与氢氧化钠溶液的质量比为1:11-13。
3.根据权利要求1所述的一种富硒细胞修复液制备方法，其特征在于：
所述蛋白酶为木瓜蛋白酶；
所述富硒蛋白乳液与蛋白酶的质量比为280-320:1。
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