CN110878274A - 一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法 - Google Patents
一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110878274A CN110878274A CN201911398755.0A CN201911398755A CN110878274A CN 110878274 A CN110878274 A CN 110878274A CN 201911398755 A CN201911398755 A CN 201911398755A CN 110878274 A CN110878274 A CN 110878274A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus amyloliquefaciens
- fermentation
- culture
- culture medium
- fermentation tank
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 title claims abstract description 28
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 49
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 49
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims abstract description 17
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims abstract description 16
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 14
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 12
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 10
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 10
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims abstract description 9
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims abstract description 7
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 7
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 6
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 6
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims abstract description 5
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 22
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 7
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 claims description 4
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 claims description 4
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 claims description 4
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 claims description 4
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical group [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N ammonium dihydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].OP(O)([O-])=O LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910000387 ammonium dihydrogen phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 235000019837 monoammonium phosphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000006012 monoammonium phosphate Substances 0.000 claims description 3
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 2
- 230000004993 binary fission Effects 0.000 claims description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 claims description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical class [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 9
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 8
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 abstract description 7
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 18
- 230000008859 change Effects 0.000 description 16
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 244000000005 bacterial plant pathogen Species 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 2
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000589157 Rhizobiales Species 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 244000000004 fungal plant pathogen Species 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229940038504 oxygen 100 % Drugs 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 244000000006 viral plant pathogen Species 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，所述解淀粉芽孢杆菌的培养以解淀粉芽孢杆菌为菌种，经种子培养基培养后接种到发酵培养基中进行发酵培养；所述种子培养基包括蛋白胨、酵母粉、氯化钠；所述发酵培养基包括玉米淀粉、可溶性淀粉、玉米浆、玉米面、蔗糖、碳酸钙、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、麸皮、豆粕。本发明提供一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，通过调控种子培养基与发酵培养基原料比，pH数值范畴、培育温度以及通气量比，使得培育出的芽孢杆菌数值最高达326亿/ml，远高于现阶段芽孢杆菌培育数量，并且培育工艺简单，选用的原料均廉价易得，利于工业化生产和芽孢杆菌相关产品的推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及植物疾病防治领域，具体是一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法。
背景技术
近年来，随着公众对食品和环境中化学农药安全性的普遍关注以及危险性化学农药的禁用，促使人们寻求安全有效的植物病害控制途径，而利用有益微生物防治植物病害愈发受到重视。它是向被打破了的植物自然生态系中引入对植物有益的外源拮抗菌、或通过调节环境促使自然的有益微生物群体增长，并标线出生防活性，通过微生物之间的相互作用达到防病的目的。
解淀粉芽孢杆菌为芽孢杆菌属，是一种与枯草芽孢杆菌亲缘性很高的细菌，其在生长过程中可以产生一系列能够抑制真菌和细菌活性的代谢物。解淀粉芽孢杆菌作用机理主要是通过分泌抗菌物质，产生拮抗作用，营养与空间的竞争，进而诱导寄主产生抗性和促进植物生长。解淀粉芽孢杆菌通过产生低分子量抗生素以及抗菌蛋白或多肽等活性物质，抑制植物病原菌，并可作为根围细菌促进植物生长，在生物防治应用中对植物病原细菌、真菌、病毒、线虫的抑制起主要作用。目前的解淀粉芽孢杆菌通常用粉碎玉米粉或豆粕粉等农副产品作为发酵培养基的原料来降低生产成本，但采用此种方法发酵后的发酵液均量交底，菌株发酵的密度和产孢率较低，不利于工业化生产和相关产品的推广应用。
发明内容
本发明要解决的问题是针对现有技术中所存在的上述不足而提供一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法用以解决现有解淀粉芽孢杆菌培养得到的菌株发酵密度和产孢率较低的问题。
为实现上述目的，本发明采用了如下的技术方案：一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，包括如下步骤：
1)电极标定，在发酵罐中用pH计标定采用pH6.86和pH4.01两种标准溶液进行标定，在饱和亚硫酸钠溶液下将发酵罐电极标定至0点；
2)种子培养基制备，将一定比例蛋白胨、酵母粉、氯化钠加入试管中，然后将试管置于漩涡仪的无菌离心管中充分振荡均匀，得到混合溶液，再以等量琼脂与混合溶液接种到种子培养皿中，在温度为37℃，转速为200转/min下振荡培养6h；
3)发酵培养基制备，称量一定比例可溶性淀粉、玉米淀粉、玉米浆、玉米面、蔗糖、碳酸钙、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、麸皮、豆粕后加入脱盐水置于发酵罐中，调节初始pH至7左右，在120℃高压蒸汽灭菌25min，将灭菌后的发酵罐对应安装并设置在培养温度在30-37℃，通气比0.8-1.8，转速800转/min，实罐灭菌结束通气稳定后，再利用电极标定法将发酵罐中溶氧标定至100％；
4)接种，将种子培养基中的溶液镜检，选取镜检种子液无杂菌浸染且菌种处于二分裂期时接种至发酵罐中；
5)培养，发酵罐中菌种接种完毕后对菌种进行发酵18-23h。
优选的，所述步骤3)中初始pH为6.84-7.27，培养温度在37℃，通气比为1.8；
优选的，所述步骤5)中菌种发酵时间为18.58-18.95h；
优选的，所述种子培养基按质量分数包括蛋白胨0.2％、酵母粉0.5％、氯化钠0-0.1％，余量为培养液。
优选的，所述发酵培养基按质量分数包括玉米淀粉0-4％、可溶性淀粉0-4％、玉米浆0-2％、玉米面0-2％、蔗糖0-1.5％、葡萄糖1％、碳酸钙0-0.5％、磷酸一铵0-1.0％、磷酸二氢钾0.3％、磷酸氢二钾0-0.3％、麸皮0-1.0％、豆粕0-4.5％，余量为脱盐水。
优选的，所述种子培养基中还包括按质量分数量的消泡剂0.3％和促进剂0.1％；
优选的，所述促进剂为硫酸锰。
相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：
本发明提供一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，通过调控种子培养基与发酵培养基原料比，pH数值范畴、培育温度以及通气量比，使得培育出的芽孢杆菌数值最高达326亿/ml，远高于现阶段芽孢杆菌培育数量，并且培育工艺简单，选用的原料均廉价易得，利于工业化生产和芽孢杆菌相关产品的推广应用。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为本发明A1组方案pH与溶氧量变化示意图；
图2为本发明A2组方案pH与溶氧量变化示意图；
图3为本发明A3组方案pH与溶氧量变化示意图；
图4为本发明A4组方案pH与溶氧量变化示意图；
图5为本发明A5组方案pH与溶氧量变化示意图；
图6为本发明A组方案显微镜镜检示意图；
图7为本发明B1组方案pH与溶氧量变化示意图；
图8为本发明B2组方案pH与溶氧量变化示意图；
图9为本发明B3组方案pH与溶氧量变化示意图；
图10为本发明B4组方案pH与溶氧量变化示意图；
图11为本发明B5组方案pH与溶氧量变化示意图；
图12为本发明B组方案显微镜镜检示意图；
图13为本发明C1组方案pH与溶氧量变化示意图；
图14为本发明C2组方案pH与溶氧量变化示意图；
图15为本发明C3组方案pH与溶氧量变化示意图；
图16为本发明C4组方案pH与溶氧量变化示意图；
图17为本发明C5组方案pH与溶氧量变化示意图；
图18为本发明C组方案显微镜镜检示意图；
图19为本发明D1组方案pH与溶氧量变化示意图；
图20为本发明D2组方案pH与溶氧量变化示意图；
图21为本发明D3组方案pH与溶氧量变化示意图；
图22为本发明D4组方案pH与溶氧量变化示意图；
图23为本发明D5组方案pH与溶氧量变化示意图；
图24为本发明D组方案显微镜镜检示意图。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与作用更加清楚及易于了解，下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步阐述：
本发明提出的一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，包括：
种子培养基制备，将试管斜面冲洗干净后置于无菌离心管中，充分振荡均匀后等量接种于50ml种子培养基中，在37℃下200转/min振荡培养6h；所述种子培养基蛋白胨、酵母粉、氯化钠质量百分比以500ml培养液为基准定量。
发酵培养基制备，按发酵培养基原料比称量原料后分别加入2L脱盐水，调节初始pH至6.88-7.27左右，在120℃高压蒸汽灭菌25min，将灭菌后的发酵罐对应安装并设置在培养温度在30-37℃，通气比0.8-1.8，转速800转/min，稳定后标定溶氧100％；所述发酵培养基原料质量百分比以2L脱盐水为基准定量。
关于通气比计算规则为每分钟通入气体量/发酵罐体积。
其中消泡剂用于降低培养液表面张力，防止泡沫的形成，硫酸锰能够加快碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢效率，加快解淀粉芽孢杆菌的繁殖效率。
方案A：
在一组5个串联5L发酵罐上，按照下述配方，800转/min发酵培养，待90％以上为芽孢时停罐检测有效芽孢菌数，停罐时间即为解淀粉芽孢杆菌发酵时间，并分析实验结果。
配方A1、A2选用的玉米淀粉与玉米面，配方A3、A4、A5选用的可溶性淀粉。可溶性淀粉相较于玉米淀粉和玉米面，其更容易被菌体直接吸收，加快了发酵进程，能够促进尽快产孢。
方案B：
在一组5个串联5L发酵罐上，按照下述配方，在800转/min发酵培养，待90％以上为芽孢时停罐检测有效芽孢菌数，并分析实验结果。方案B相对于方案A组，其区别在于增加了玉米淀粉、可溶性淀粉及玉米面用量，同时降低了无机盐含量，各项数值以效果较优值进行试验。
| 原料 | 配方B1 | 配方B2 | 配方B3 | 配方B4 | 配方B5 |
| 玉米淀粉 | \ | 55g | 75g | \ | 80g |
| 可溶性淀粉 | \ | \ | \ | 80g | \ |
| 玉米面 | 40g | \ | \ | \ | \ |
| 蔗糖 | 22g | 24g | 26g | 30g | 28g |
| 葡萄糖 | \ | \ | \ | \ | \ |
| 麸皮 | \ | \ | \ | 20g | \ |
| 豆粕 | 70g | 90g | 80g | 65g | 85g |
| 玉米浆 | \ | \ | 38g | 36g | 32g |
| 酵母粉 | 1.2g | 1.8g | 2g | 2.3g | 2.5g |
| 蛋白胨 | 0.8g | 0.6g | 0.4g | \ | \ |
| 磷酸一铵 | \ | \ | \ | 15g | 20g |
| 磷酸二氢钾 | 6g | 6g | 6g | 6g | 6g |
| 磷酸氢二钾 | 6g | 5g | 4g | 3g | 3g |
| 碳酸钙 | 2g | 4g | 6g | 8g | 10g |
| 氯化钠 | 0.4g | 0.5g | 0.3g | \ | \ |
| 硫酸锰5mg/ml | \ | \ | \ | 2ml | 2ml |
| 消泡剂 | 6g | 6g | 6g | 6g | 6g |
| 通气比 | 0.8 | 1.0 | 1.2 | 1.5 | 1.8 |
| 发酵温度 | 37 | 37 | 37 | 37 | 37 |
方案C：
在一组5个串联5L发酵罐上，以B组配方为基准，B组配方为添加2L脱盐水，C组配方为溶液定容至2L。在37℃条件下，800转/min发酵培养，待90％以上为芽孢时停罐检测有效芽孢菌数，并分析实验结果。丰富了碳源和氮源的用量，初始pH为7。
方案D：
在一组5个串联5L发酵罐上，以C组配方为基准，在37℃条件下，800转/min发酵培养，待90％以上为芽孢时停罐检测有效芽孢菌数，并分析实验结果。D1到D5通气比0.8、1.0、1.2、1.5、1.8。
计数方法：
采用稀释涂平板方式测菌数及芽孢数，方法如下：
有效活菌数计数：
1)用移液枪取10ml发酵菌液加入带玻璃珠且装有90ml的无菌水的500ml锥形瓶中，在振荡器上以200转/min充分震荡30min，得到基础菌悬液；
2)取基础菌悬液5ml加入到装有45ml的无菌水的锥形瓶中，得到稀释度1：1*101的菌悬液，依次按1：10进行系列稀释，得到1：1*101、1：1*102、1：1*103、1：1*104、1：1*105、1：1*106、1：1*107、1：1*108稀释度的菌悬液；
3)准确吸取0.1ml两个连续合适稀释度的菌悬液涂布平板，每一稀释度重复三次，30℃培养24h后进行计数。
4)芽孢计数时将基础菌悬液于80℃水浴15min以杀灭菌体保留芽孢，再按上述计数方法计数。
| 消后pH初始值 | 发酵时间/h | 芽孢(亿/ml) | |
| A1 | 6.88 | 20.66 | 81.33 |
| A2 | 7.27 | 20.66 | 123.33 |
| A3 | 7.04 | 20.13 | 103.21 |
| A4 | 7.26 | 20.65 | 131.33 |
| A5 | 7.07 | 18.92 | 104.33 |
A组芽孢测定数量
B组芽孢测定数量
C组芽孢测定数量
D组芽孢测定数量
如图1-24所示，各组芽孢测定数据组中，A1组培养温度相对较低，芽孢数量未突破100亿；C3组中pH值较低，不适宜菌种正常分裂繁殖，芽孢数量仅26亿/ml；D5组为最佳数据，具有最优的营养来源、培育温度、pH值以及通气量比，芽孢数量达326亿/ml，如今公开的解淀粉芽孢杆菌培育，芽孢数量最高仅维持在200亿/ml,D5组培育方案已远超现今解淀粉芽孢杆菌培育工艺，利于工业化生产和相关产品推广应用。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (7)
1.一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)电极标定，在发酵罐中用pH计标定采用pH6.86和pH4.01两种标准溶液进行标定，在饱和亚硫酸钠溶液下将发酵罐电极标定至0点；
2)种子培养基制备，将一定比例蛋白胨、酵母粉、氯化钠加入试管中，然后将试管置于漩涡仪的无菌离心管中充分振荡均匀，得到混合溶液，再以等量琼脂与混合溶液接种到种子培养皿中，在温度为37℃，转速为200转/min下振荡培养6h；
3)发酵培养基制备，称量一定比例可溶性淀粉、玉米淀粉、玉米浆、玉米面、蔗糖、碳酸钙、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、麸皮、豆粕后加入脱盐水置于发酵罐中，调节初始pH至7左右，在120℃高压蒸汽灭菌25min，将灭菌后的发酵罐对应安装并设置在培养温度在30-37℃，通气比0.8-1.8，转速800转/min，实罐灭菌结束通气稳定后，再利用电极标定法将发酵罐中溶氧标定至100％；
4)接种，将种子培养基中的溶液镜检，选取镜检种子液无杂菌浸染且菌种处于二分裂期时接种至发酵罐中；
5)培养，发酵罐中菌种接种完毕后对菌种进行发酵18-23h。
2.根据权利要求1所述一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，其特征在于，所述步骤3)中初始pH为6.84-7.27，培养温度在37℃，通气比为1.8。
3.根据权利要求1所述一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，其特征在于，所述步骤5)中菌种发酵时间为18.58-18.95h。
4.根据权利要求1所述一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，其特征在于，所述种子培养基按质量分数包括蛋白胨0.2％、酵母粉0.5％、氯化钠0-0.1％，余量为培养液。
5.根据权利要求1所述一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，其特征在于，所述发酵培养基按质量分数包括玉米淀粉0-4％、可溶性淀粉0-4％、玉米浆0-2％、玉米面0-2％、蔗糖0-1.5％、葡萄糖1％、碳酸钙0-0.5％、磷酸一铵0-1.0％、磷酸二氢钾0.3％、磷酸氢二钾0-0.3％、麸皮0-1.0％、豆粕0-4.5％，余量为脱盐水。
6.根据权利要求1所述一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，其特征在于，所述种子培养基中还包括按质量分数量的消泡剂0.3％和促进剂0.1％。
7.根据权利要求6所述一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法，其特征在于，所述促进剂为硫酸锰。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911398755.0A CN110878274A (zh) | 2019-12-30 | 2019-12-30 | 一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911398755.0A CN110878274A (zh) | 2019-12-30 | 2019-12-30 | 一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110878274A true CN110878274A (zh) | 2020-03-13 |
Family
ID=69731597
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911398755.0A Pending CN110878274A (zh) | 2019-12-30 | 2019-12-30 | 一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110878274A (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103614323A (zh) * | 2013-11-27 | 2014-03-05 | 江苏苏滨生物农化有限公司 | 一种解淀粉芽孢杆菌的培养基及应用 |
| CN105670976A (zh) * | 2016-03-18 | 2016-06-15 | 湖北中化东方肥料有限公司 | 一种解淀粉芽孢杆菌的发酵培养基及其应用 |
| CN106701619A (zh) * | 2016-12-20 | 2017-05-24 | 湖南泰谷生物科技股份有限公司 | 一种解淀粉芽孢杆菌高密度发酵方法及其菌剂制备方法 |
| KR101837695B1 (ko) * | 2016-10-10 | 2018-03-13 | 전남대학교 산학협력단 | 식물 병원성 곰팡이에 대한 방제 활성을 갖는 신규 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 y1 |
| CN108148783A (zh) * | 2018-01-31 | 2018-06-12 | 山东苏柯汉生物工程股份有限公司 | 一种解淀粉芽孢杆菌g5芽孢菌粉的制备方法 |
-
2019
- 2019-12-30 CN CN201911398755.0A patent/CN110878274A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103614323A (zh) * | 2013-11-27 | 2014-03-05 | 江苏苏滨生物农化有限公司 | 一种解淀粉芽孢杆菌的培养基及应用 |
| CN105670976A (zh) * | 2016-03-18 | 2016-06-15 | 湖北中化东方肥料有限公司 | 一种解淀粉芽孢杆菌的发酵培养基及其应用 |
| KR101837695B1 (ko) * | 2016-10-10 | 2018-03-13 | 전남대학교 산학협력단 | 식물 병원성 곰팡이에 대한 방제 활성을 갖는 신규 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 y1 |
| CN106701619A (zh) * | 2016-12-20 | 2017-05-24 | 湖南泰谷生物科技股份有限公司 | 一种解淀粉芽孢杆菌高密度发酵方法及其菌剂制备方法 |
| CN108148783A (zh) * | 2018-01-31 | 2018-06-12 | 山东苏柯汉生物工程股份有限公司 | 一种解淀粉芽孢杆菌g5芽孢菌粉的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 梁艳琼等: "解淀粉芽孢杆菌TWC2发酵条件的优化", 《中国糖料》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107955794B (zh) | 蛹虫草菌种的优质保藏方法 | |
| US20210007362A1 (en) | Preparation method of beauveria bassiana microsclerotium and formulation thereof, application of formulation thereof | |
| CN111073839B (zh) | 暹罗芽孢杆菌、菌剂及其应用 | |
| CN104928202A (zh) | 一种芽孢杆菌的发酵培养方法 | |
| CN110157624B (zh) | 一种基于自动化种曲机的淡紫拟青霉规模化生产方法 | |
| CN101654665B (zh) | 一种制备枯草芽孢杆菌的方法 | |
| CN107699499A (zh) | 一株米曲霉za127及其应用 | |
| CN103146624A (zh) | 一种三株地衣芽孢杆菌混合液体发酵工艺 | |
| CN103333851B (zh) | 一种哈茨木霉固体发酵生产分生孢子的方法 | |
| CN104705347B (zh) | 一种花生慢生型根瘤菌剂，其制备方法和用途 | |
| CN103525748B (zh) | 哈茨木霉厚垣孢子的生产方法 | |
| CN105296392B (zh) | 防治十字花科根肿病解淀粉芽孢杆菌Bam22的发酵方法 | |
| CN101843260A (zh) | 一种制备防治大豆根腐病的复合菌剂的方法 | |
| CN106479899B (zh) | 一种蛹虫草菌株及其在制备虫草素中的应用 | |
| CN104830696A (zh) | 一种高产安络小皮伞诱变菌株及培育方法 | |
| CN106701655A (zh) | 液固双相发酵生产厚垣孢普可尼亚菌孢子的方法 | |
| CN103289931B (zh) | 一种花域芽孢杆菌菌株sj及其在制备烟草抗病毒制剂和促生剂中的应用 | |
| CN110878274A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法 | |
| CN107557311B (zh) | 一株嗜酸乳杆菌及其在发酵产抑菌多肽中的应用 | |
| CN110066757A (zh) | 一株产阿魏酸酯酶的假单胞菌及其应用 | |
| CN102533604B (zh) | 一种黄色短杆菌及其应用及发酵制备赖氨酸的方法 | |
| CN102648714A (zh) | 液体发酵制备生物农药的方法 | |
| CN101967461B (zh) | 一种固氮螺菌的发酵方法与由该方法得到的发酵液及其用途 | |
| CN115305221A (zh) | 一种复合微生物菌剂及其制备方法和在防治草莓空心病中的应用 | |
| CN109207393A (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌及其在防治芹菜根腐病中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200313 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |