CN106701619A - 一种解淀粉芽孢杆菌高密度发酵方法及其菌剂制备方法 - Google Patents
一种解淀粉芽孢杆菌高密度发酵方法及其菌剂制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的高密度发酵方法及其菌剂制备方法。高密度发酵培养基含有麸皮或葡萄糖、豆粕或酵母膏、NaCl、MgSO4、CaCO3、初始pH 6.0‑7.0，麸皮与豆粕可分别用葡萄糖与酵母膏代替。在1000L发酵罐规模条件下有效活菌数达8.3×109cfu/mL以上、芽孢数达7.6×109cfu/mL以上、产孢率达91.6％以上。所述菌剂制备方法包括离心收集菌泥与喷雾干燥得干粉制剂，干粉制剂中有效活菌数≥9.0×1010cfu/g，室温下保质期达18个月。本发明发酵工艺简单，原料廉价易得，成本低，适合工厂大规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种微生物发酵技术领域，具体涉及具体涉及一种具有生防功能的解淀粉芽孢杆菌高密度发酵方法及其干粉菌剂制备方法。
背景技术
植物病害不仅降低作物产量与品质，造成直接经济损失，而且这些植物病害会产生有毒物质，对人畜健康造成威胁，严重制约农业的可持续发展。目前植物病害防治主要以抗病品种与化学防治为主，然而抗病品种的筛选周期长且难度大，而化学防治易造成环境与食品污染，随着人类对环境和食品安全质量的要求愈来愈高，化学防治亦愈来愈不受欢迎。绿色、无污染对人畜无害的生物防治成为近年来研究植物病害防治的热点，其中拮抗细菌在生物防治中发挥着重要作用。
目前在拮抗细菌中研究最多的是芽孢杆菌，芽孢杆菌是植物与土壤中的优势微生物种群，大多数为非致病菌，且许多优良菌株对多种植物土传病害具有拮抗作用。芽孢杆菌本身具有种类繁多、抗逆性强、繁殖速度快、易定植于植物根际表面等优点。
解淀粉芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种，解淀粉芽孢杆菌能够分泌抗菌蛋白、抗生素、酶或多肽等活性物质，对植物病原原菌、真菌、病毒、线虫有很好的抑制作用，显著提高植物的抗病性，同时能促进植物生长，提高植物的产量，是一种很好的生防促生菌。目前生防解淀粉芽孢杆菌在瓜果蔬菜等经济作物的枯萎病、灰霉病、疫霉病、炭疽病、青枯病等植物病害均具有显著的防效。
活菌数与芽孢得率是衡量解淀粉芽孢杆菌菌剂的非常关键指标，但目前国内外对解淀粉芽孢杆菌发酵工艺的研究主要集中在产抗菌脂肽、淀粉酶、蛋白酶等酶类物质，较少进行生防解淀粉芽孢杆菌高密度发酵优化研究，且高密度发酵工艺优化中多数只提高活菌数，而芽孢形成率偏低，芽孢率低将降低菌剂的活性和质量稳定性，因此不适合推广使用，生产成本高。因此，开发一种既具有生防功能，又有高芽孢率的菌剂产品将变得非常有意义。
发明内容
本发明的目的在于利用廉价碳氮源液体发酵生产生防解淀粉芽孢杆菌菌剂，降低其生产成本，提高单位体积发酵液中的活菌数及芽孢得率，为生防解淀粉芽孢杆菌菌剂的工业化生产以及推广提供参考依据。
本发明首先提供一种用于发酵解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的发酵培养基，含有以下原料：麸皮或葡萄糖、豆粕或酵母膏、NaCl、MgSO4、CaCO3。
优选地，本发明的发酵培养基含有以下原料：麸皮10-30g/L、豆粕10-30g/L、NaCl1-4g/L、MgSO4 0.5-1.5g/L、CaCO3 0.5-1.5g/L、pH 6.0-7.0。
更优选地，本发明的发酵培养基含有以下原料：麸皮15-25g/L、豆粕15-25g/L、NaCl 1-3g/L、MgSO4 0.8-1.2g/L、CaCO3 0.8-1.2g/L、pH 6.0-7.0。
另一方面，本发明的发酵培养基含有以下原料：葡萄糖和酵母膏，NaCl 1-4g/L、MgSO4 0.5-1.5g/L、CaCO3 0.5-1.5g/L；其中，葡萄糖在发酵培养基中的质量百分比为2％，酵母膏在发酵培养基中的质量百分比为1％，pH 6.0-7.0。
本发明提供了上述发酵培养基在发酵解淀粉芽孢杆菌中的应用。
本发明提供了上述发酵培养基在制备解淀粉芽孢杆菌菌剂中的应用。
本发明提供一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的高密度发酵方法，是将解淀粉芽孢杆菌活化后的种子液接种于本发明上述发酵培养基中，调节温度、压力、通气、搅拌，进行发酵培养。
其中，将解淀粉芽孢杆菌活化后的种子液按体积比1％-3％的接种量接入发酵培养基中；
0-24h培养条件：温度30±2℃、搅拌速率150-200r/min、通气量20-100m3/h、罐压0.04-0.06Mpa；
25h之后的培养条件：温度30±2℃、搅拌速率100-150r/min、通气量10-60m3/h、罐压0.04-0.06Mpa，当发酵液中90％以上菌体形态为芽孢时，停止发酵。
本发明还提供了一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)活化解淀粉芽孢杆菌，进行一级、二级种子液制备，将种子液接种于本发明上述的发酵培养基中；
(2)调节温度、压力、通气、搅拌，进行发酵培养，当发酵液中90％以上菌体形态为芽孢时，停止发酵；
(3)将菌剂保护剂加入发酵液中，离心收集菌泥；
(4)菌泥喷雾干燥得到菌剂粉剂。
步骤(1)中，活化解淀粉芽孢杆菌菌种方法：将解淀粉芽孢杆菌划线接种于营养琼脂培养基平板上进行培养，30-40℃下培养12-28h，然后挑取单菌落划线转接于营养琼脂斜面，30-40℃下培养12-28h后得活化菌种；
摇瓶一级种子液制备：在1000-2000mL锥形瓶中装入20-30％的种子培养基，将活化后的菌种接入摇瓶种子培养基中，培养条件：温度30-40℃、摇床转速160-200r/min、培养时间12-16h；
种子罐二级种子液制备：将所得的种子液经镜检无杂菌污染后按1-3％的接种量接入二级种子罐中，培养条件：温度30±2℃、搅拌速率150-200r/min、种子罐体积100L、装液量50-70％，通气量2-4m3/h、罐压0.04-0.06Mpa、培养时间12-16h。
所述的营养琼脂斜面与营养琼脂平板培养基的组成为：牛肉膏3.0g/L、蛋白胨10g/L、NaCl 5g/L、琼脂15-20g/L、pH 7.0±0.1。
所述的生防解淀粉芽孢杆菌高密度发酵工艺，其中，所述的摇瓶种子培养基组成为：酵母膏10g/L、蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L、pH 7.0±0.1。
所述的生防解淀粉芽孢杆菌高密度发酵工艺，其中，所述的二级种子培养基组成为：酵母膏10g/L、蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L、pH 7.0±0.1。
上述方法在步骤(2)中，发酵培养时，0-24h培养条件：温度30±2℃、搅拌速率150-200r/min、通气量20-100m3/h、罐压0.04-0.06Mpa；
25h之后的培养条件：温度30±2℃、搅拌速率100-150r/min、通气量10-60m3/h、罐压0.04-0.06Mpa；
步骤(3)采用碟片式离心机进行离心，转速6000-6600r/min；
步骤(4)喷雾干燥方法为：进风温度180-220℃、出风温度、90-110℃、进料变频11-13Hz。
步骤(3)所述菌剂保护剂为玉米淀粉，按3％-6％(w/v)的添加量加入发酵液中。
上述制备方法制得的解淀粉芽孢杆菌的菌剂也属于本发明的保护范围。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明发酵工艺简单，直接以麸皮和豆粕作为培养基碳氮源发酵原料简单易得，成本低，发酵周期短(36h)，易扩大化生产。
本发明所得菌剂活菌及芽孢率高，芽孢形成率均高于90％，最终干粉制剂中有效活菌数≥9.0×1010cfu/g，室温下，保质期达18个月。
本发明所述的生防解淀粉芽孢杆菌高密度发酵工艺，除在摇瓶种子培养与高密度发酵培养的培养基成分及比例与现有技术不同外，在发酵培养过程中采用了两步发酵技术，第一步目的为促进菌体快速增长，第二步为促进芽孢的形成，提高芽孢生成率。经试验证实，本发明所述的生防解淀粉芽孢杆菌菌剂对辣椒疫霉病有较好的防效，对辣椒疫霉病盆栽试验防效达到52.38％由此可见，该菌剂在开发防治辣椒疫霉病生物农药或作为功能菌剂添加入生物有机肥中具有巨大的应用前景。
附图说明
图1为本发明的解淀粉芽孢杆菌菌剂在室温下贮藏的稳定性检测结果。
图2为本发明方法制得的解淀粉芽孢杆菌菌剂对7种植物病原真菌的平板对峙拮抗作用效果图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段；若未特别指明，实施例中所用试剂均为市售。
解淀粉芽孢杆菌购自中国农业微生物菌种保藏中心，编号为ACCC10619。
实施例1 1000L罐高密度发酵生产生防解淀粉芽孢杆菌菌剂
(1)菌种活化：将解淀粉芽孢杆菌划线接种于营养琼脂培养基平板上进行培养，36℃下培养24h，然后挑取单菌落划线转接于营养琼脂斜面，36℃下培养24h后得活化菌种。
(2)摇瓶一级种子液制备：在2个2000mL锥形瓶中分别装入500mL的含酵母膏5g、蛋白胨1g、葡萄糖1g、pH 7.0±0.1的种子培养基，将步骤(1)中活化后的菌种用接种环接入摇瓶种子培养基中，培养条件：温度36℃、摇床转速160r/min、培养时间12h。
(3)种子罐二级种子液制备：将步骤(2)中所得的种子液经镜检无杂菌污染后按2％的接种量接入含有酵母膏500g、蛋白胨1000g、葡萄糖1000g、pH 7.0±0.1的二级种子罐中，培养条件：温度30℃、搅拌速率160r/min、种子罐体积100L、装液量50L、通气量2.5m3/h、罐压0.05Mpa、培养时间12h。
(4)发酵罐高密度发酵培养：将步骤(3)中所得的种子液经镜检无杂菌污染后按3％的接种量接入1000L发酵罐中，罐中发酵培养基组成：麸皮14000g、豆粕10500g、NaCl1400g、MgSO4700g、CaCO3700g、初始pH 6.5±0.1、发酵罐装液量700L，0-24h培养条件：温度30℃、搅拌速率180r/min、通气量25m3/h、罐压0.06Mpa，25-36h培养条件：温度30℃、搅拌速率120r/min、通气量13m3/h、罐压0.06Mpa，取发酵液镜检时，当镜检视野中90％菌体形态为芽孢时，发酵停止，得发酵液备用，发酵周期为36h。
(5)菌体收集：将玉米淀粉按5％(w/v)的添加量加入发酵液中，利用碟片式离心机离心浓缩收集菌泥，其中，所述的离心转速为6600r/min，处理时间为40min。
(6)干粉菌剂制备：采用喷雾干燥工艺将收集的菌泥进行喷雾干燥得到干菌粉，其中，所述的喷雾干燥工艺为：进风温度190℃、出风温度110℃、进料变频为13Hz。
最终发酵液中有效活菌数达8.3×109cfu/mL以上、芽孢数达7.6×109cfu/mL以上、产孢率达91.6％以上，干粉制剂中有效活菌数达9.4×1010cfu/g，室温下，保质期为18个月。
实施例2 5000L罐高密度发酵解淀粉芽孢杆菌制备其菌剂
(1)菌种活化：同实施例1。
(2)摇瓶一级种子液制备：同实施例1。
(3)种子罐二级种子液制备：同实施例1。
(4)发酵罐高密度发酵培养：将步骤(3)中所得的种子液经镜检无杂菌污染后按2％的接种量接入5000L发酵罐中，罐中发酵培养基组成：麸皮50000g、豆粕37500g、NaCl5000g、MgSO42500g、CaCO32500g、初始pH 6.5±0.1、发酵罐装液量2500L，0-24h培养条件：温度30℃、搅拌速率160r/min、通气量100m3/h、罐压0.06Mpa，25-36h培养条件：温度30℃、搅拌速率120r/min、通气量60m3/h、罐压0.06Mpa，取发酵液镜检时，当镜检视野中90％菌体形态为芽孢时，发酵停止，得发酵液备用，发酵周期为36h。
(5)菌体收集：将玉米淀粉按5％(w/v)的添加量加入发酵液中，利用碟片式离心机离心浓缩收集菌泥，其中，所述的离心转速为6600r/min，处理时间为2h；
(6)干粉菌剂制备：同实施例1；
最终发酵液中有效活菌数达8.6×109cfu/mL以上、芽孢数达7.9×109cfu/mL以上、产孢率达92.9％以上，最终干粉制剂中有效活菌数达9.7×1010cfu/g，室温下，保质期为18个月。室温下保藏稳定性试验结果见图1。
实施例3利用速效碳氮源高密度发酵生产生防解淀粉芽孢杆菌菌剂
(1)菌种活化：同实施例1。
(2)摇瓶一级种子液制备：同实施例1。
(3)种子罐二级种子液制备：同实施例1。
(4)发酵罐高密度发酵培养：将步骤(3)中所得的种子液经镜检无杂菌污染后按2％的接种量接入5000L发酵罐中，罐中发酵培养基组成：葡萄糖50000g、酵母膏25000g、NaCl 2500g、MgSO45000g、CaCO32500g、初始pH 6.5±0.1、发酵罐装液量2500L，0-24h培养条件：温度30℃、搅拌速率160r/min、通气量100m3/h、罐压0.06Mpa，25-36h培养条件：温度30℃、搅拌速率120r/min、通气量60m3/h、罐压0.06Mpa，取发酵液镜检时，当镜检视野中90％菌体形态为芽孢时，发酵停止，得发酵液备用，发酵周期为36h。
(5)菌体收集：同实施例2。
(6)干粉菌剂制备：同实施例1。
最终发酵液中有效活菌数达8.7×109cfu/mL以上、芽孢数达7.8×109cfu/mL以上、产孢率达90.2％以上，最终干粉制剂中有效活菌数达9.1×1010cfu/g，室温下，保质期为18个月。
实施例4生防解淀粉芽孢杆菌菌剂在制备治疗或预防7种植物病原真菌药物中的应用
(1)将实例1、2或3中所得的生防解淀粉芽孢杆菌菌剂，用无菌水10倍稀释得生防菌悬液，存储备用。
(2)采用平板对峙法考察本说明所述的生防菌剂对植物病原真菌拮抗作用。将植物病原真菌菌饼(d＝6mm)接入PDA培养基中央，置于30℃恒温培养箱中培养24h，然后在其周围4个等距离位置上的3点处用灭菌牙签点接入本发明所述生防菌悬液，以不接菌处作为为空白对照，30℃培养48h后测量该生防菌剂对植物病原的抑菌圈大小，其抑菌效果见表1和图2。结果表明该生防菌剂对黄瓜枯萎病、辣椒疫霉病、烟草疫霉病、烟草炭疽病、烟草赤星病、马铃薯立枯、油菜菌核病均具有拮抗作用。
表1生防解淀粉芽孢杆菌菌剂对植物病原真菌抑菌直径
注:表中数据为平均值±标准差，抑菌直径＝空白处病原菌直径－接菌处病原菌直径
实施例5生防解淀粉芽孢杆菌菌剂对辣椒疫霉病的盆栽防效试验
1、生防菌液制备：取本发明所述的生防菌剂用无菌水稀释至1×108cfu/mL，4℃保藏备用。
2、辣椒疫霉病菌悬液制备：挑取辣椒疫霉病菌单菌落接种于PDA液体培养基中，于30℃,160r/min振荡培养168h，然后用无菌水将菌液稀释至1×108cfu/mL，4℃保藏备用。
3、辣椒育苗：辣椒品种选用湖南省农业科学院蔬菜研究所提供的茄门甜椒，将辣椒种子用0.5％(V/V)的NaClO表面消毒5min，无菌水漂洗3遍，并置于无菌培养皿中30℃暗光催芽。选取芽长约0.5cm的辣椒幼苗播于塑料盒(长×宽×高＝50cm×30cm×10cm)中并保持适宜的湿度，盒内基质为自配营养土(菜园土:草炭:海泡石:有机肥＝5:2.5:2:0.5，灭菌处理)，置于30±1℃温室中进行育苗。
4、拮抗盆栽试验处理：当辣椒3-4片子叶时进行移栽(盆直径15cm，每盆基质2Kg灭菌菜园土)，移栽同时进行处理。试验设置3个处理，处理1：用生防菌悬液液处理，处理方式为灌根与喷雾，灌根每颗用量30mL，喷雾标准为每片叶上有雾状液滴，以不滴水为准，均匀喷雾；处理2：用无菌水代替生防菌液处理，处理方式同处理1。每个处理各20盆。移栽处理7天后接种辣椒疫霉病菌悬液，每株灌根25mL辣椒病原菌菌悬液。第1次处理15天后，进行第2次相同处理。将辣椒置于30±1℃，光照周期14h/10h温室条件下培养，常规水肥管理维持辣椒正常生长。
5、待对照发病且病情稳定后，观察并记录病情等级，计算病情指数和防治效果。
病情分级：
0级：植株健康无症状；
1级:土面茎基部缢缩并变褐色，病斑面积占整个植株1/4以下，叶片有轻微萎蔫；
2级:茎基部缢缩，褐腐斑面积延伸至整个植面积的1/3，叶片萎蔫；
3级:茎基部缢缩，病斑占茎部和主根总面积的1/2以上，叶片严重萎蔫；
4级:整个植株变褐色，地上部萎蔫或枯死。
病情指数＝[∑(各级发病植株数×病级数)/(4×植株总数)]×100
防治效果(％)＝[(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数]×100
在生防菌剂第1次处理60天后的调查结果显示，生防解淀粉芽孢杆菌菌剂对辣椒疫霉病的防治效果达到52.38％(表2)。
表2解淀粉芽孢杆菌菌剂对辣椒疫霉病的防效
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种用于发酵解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的发酵培养基，其特征在于，含有以下原料：麸皮或葡萄糖、豆粕或酵母膏、NaCl、MgSO4、CaCO3。
2.如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，含有以下原料：麸皮10-30g/L、豆粕10-30g/L、NaCl 1-4g/L、MgSO4 0.5-1.5g/L、CaCO3 0.5-1.5g/L、pH 6.0-7.0。
3.如权利要求2所述的发酵培养基，其特征在于，含有以下原料：麸皮15-25g/L、豆粕15-25g/L、NaCl 1-3g/L、MgSO4 0.8-1.2g/L、CaCO3 0.8-1.2g/L、pH 6.0-7.0。
4.如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，含有以下原料：葡萄糖和酵母膏，NaCl1-4g/L、MgSO4 0.5-1.5g/L、CaCO3 0.5-1.5g/L；其中，葡萄糖在发酵培养基中的质量百分比为2％，酵母膏在发酵培养基中的质量百分比为1％，pH 6.0-7.0。
5.一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的高密度发酵方法，其特征在于，将解淀粉芽孢杆菌活化后的种子液接种于权利要求1-4任一所述的发酵培养基中，调节温度、压力、通气、搅拌，进行发酵培养。
6.如权利要求5所述的高密度发酵方法，其特征在于，其特征在于，将解淀粉芽孢杆菌活化后的种子液按体积比1％-3％的接种量接入发酵培养基中；
0-24h培养条件：温度30±2℃、搅拌速率150-200r/min、通气量20-100m3/h、罐压0.04-0.06Mpa；
25h之后的培养条件：温度30±2℃、搅拌速率100-150r/min、通气量10-60m3/h、罐压0.04-0.06Mpa，当发酵液中90％以上菌体形态为芽孢时，停止发酵。
7.一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)活化解淀粉芽孢杆菌，进行一级、二级种子液制备，将种子液接种于权利要求1-4任一所述的发酵培养基中；
(2)调节温度、压力、通气、搅拌，进行发酵培养，当发酵液中90％以上菌体形态为芽孢时，停止发酵；
(3)将菌剂保护剂加入发酵液中，离心收集菌泥；
(4)菌泥喷雾干燥得到菌剂粉剂。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，发酵培养时，0-24h培养条件：温度30±2℃、搅拌速率150-200r/min、通气量20-100m3/h、罐压0.04-0.06Mpa；
25h之后的培养条件：温度30±2℃、搅拌速率100-150r/min、通气量10-60m3/h、罐压0.04-0.06Mpa；
步骤(3)采用碟片式离心机进行离心，转速6000-6600r/min；
步骤(4)喷雾干燥方法为：进风温度180-220℃、出风温度、90-110℃、进料变频11-13Hz。
9.如权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述菌剂保护剂为玉米淀粉，按3％-6％(w/v)的添加量加入发酵液中。
10.权利要求7-9任一所述制备方法制得的菌剂。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108795810A (zh) * | 2018-06-20 | 2018-11-13 | 湖南泰谷生态工程有限公司 | 液固双相发酵生产生防解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法 |
| CN109251879A (zh) * | 2018-11-22 | 2019-01-22 | 青岛中达农业科技有限公司 | 一种杰米拉类芽孢杆菌高密度发酵方法 |
| CN110878274A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-03-13 | 中化农业生态科技(湖北)有限公司 | 一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法 |
| CN111592996A (zh) * | 2019-12-09 | 2020-08-28 | 福建省水产研究所（福建水产病害防治中心） | 一种芽孢杆菌cqn-2高密度发酵培养方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102168045A (zh) * | 2010-12-24 | 2011-08-31 | 北京科为博生物科技有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法 |
| CN102433283A (zh) * | 2011-12-19 | 2012-05-02 | 湖南省微生物研究所 | 一株饲用枯草芽孢杆菌的高密度生产工艺及其制备的菌剂和应用 |
| CN104946375A (zh) * | 2015-05-28 | 2015-09-30 | 南昌大学 | 一种解淀粉芽孢杆菌z16-1水酶法提取樟树籽仁油的方法 |
| CN105886430A (zh) * | 2016-04-27 | 2016-08-24 | 石家庄大众肥业有限公司 | 一种固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法 |
-
2016
- 2016-12-20 CN CN201611184247.9A patent/CN106701619B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102168045A (zh) * | 2010-12-24 | 2011-08-31 | 北京科为博生物科技有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法 |
| CN102433283A (zh) * | 2011-12-19 | 2012-05-02 | 湖南省微生物研究所 | 一株饲用枯草芽孢杆菌的高密度生产工艺及其制备的菌剂和应用 |
| CN104946375A (zh) * | 2015-05-28 | 2015-09-30 | 南昌大学 | 一种解淀粉芽孢杆菌z16-1水酶法提取樟树籽仁油的方法 |
| CN105886430A (zh) * | 2016-04-27 | 2016-08-24 | 石家庄大众肥业有限公司 | 一种固态发酵生产解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 单哲: "解淀粉芽孢杆菌液体发酵动态变化规律的研究", 《饲料研究》 * |
| 魏娇洋: "内生解淀粉芽孢杆菌X-278发酵条件的优化", 《北方园艺》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108795810A (zh) * | 2018-06-20 | 2018-11-13 | 湖南泰谷生态工程有限公司 | 液固双相发酵生产生防解淀粉芽孢杆菌菌剂的方法 |
| CN109251879A (zh) * | 2018-11-22 | 2019-01-22 | 青岛中达农业科技有限公司 | 一种杰米拉类芽孢杆菌高密度发酵方法 |
| CN111592996A (zh) * | 2019-12-09 | 2020-08-28 | 福建省水产研究所（福建水产病害防治中心） | 一种芽孢杆菌cqn-2高密度发酵培养方法 |
| CN110878274A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-03-13 | 中化农业生态科技(湖北)有限公司 | 一种解淀粉芽孢杆菌培养工艺方法 |
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