CN110878075A - 从葡萄籽中提取原花青素的方法及原花青素 - Google Patents
从葡萄籽中提取原花青素的方法及原花青素 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种从葡萄籽中提取原花青素的方法及原花青素。其中,一种从葡萄籽中提取原花青素的方法,其包括如下步骤:向预处理后的葡萄籽中加入极性有机溶剂进行萃取,调节pH值至2.5‑3.5以使葡萄籽中含有的蛋白质沉淀,过滤后得到萃取液,调节萃取液的pH值至6.5‑7.5,微波辐照处理以使葡萄籽细胞中的原花青素进入萃取液中;向所述萃取液中加入极性有机溶剂进行二次萃取得到二次萃取液,浓缩至占二次萃取液的体积分数的5%‑25%,加入石油醚,固液分离,得到含原花青素的沉淀物。上述方法既能够提高原花青素提取率,又能够提高原花青素中生物活性成分的富集率。
Description
技术领域
本发明涉及原花青素提取领域,特别是涉及一种从葡萄籽中提取原花青素的方法及原花青素。
背景技术
原花青素是一种生物类黄酮,原花青素可有效清除体内自由基,抗氧化能力远高于维生素C和维生素E,且吸收迅速,使胶原蛋白能更好的发挥作用,滋润皮肤、养颜美容;原花青素还可抑制组胺生成,减少炎症的发生。原花青素的功效广泛,有经济和药用开发价值。
传统的原花青素的提取方法多为用有机溶剂法直接从葡萄籽中提取原花青素,但是提取的原花青素的提取率不高,原花青素常常与葡萄籽中的蛋白质、纤维素结合在一起,无法有效分离。另外,研究发现,原花青素的结构组成较复杂,其包括高聚体原花青素、低聚体原花青素和原花青素单体。其中,具有生物活性的原花青素多为低聚体原花青素和原花青素单体,传统的有机溶剂法提取的原花青素中具有生物活性的低聚体和单体少,多为无生物活性的高聚体原花青素,大大影响其生物活性的利用率。
发明内容
基于此,有必要提供一种既能够提高原花青素提取率,又能够提高原花青素中生物活性成分富集率的从葡萄籽中提取原花青素的方法和原花青素。
一种从葡萄籽中提取原花青素的方法,其包括如下步骤:
向预处理后的葡萄籽中加入极性有机溶剂进行萃取,调节pH值至2.5-3.5以使葡萄籽中含有的蛋白质沉淀,过滤后得到萃取液,调节萃取液的pH值至6.5-7.5,微波辐照处理以使葡萄籽细胞中的原花青素进入萃取液中;
向所述萃取液中加入极性有机溶剂进行二次萃取得到二次萃取液,浓缩至占二次萃取液的体积分数的5%-25%,加入石油醚,固液分离,得到含原花青素的沉淀物。
上述从葡萄籽中提取原花青素的方法简单,其优点如下:
(1)采用多级萃取工艺,即先用极性有机溶剂萃取原花青素,后用非极性的石油醚将原花青素从极性有机溶剂中析出,尽可能的提取更多的原花青素,提升原花青素的提取率。
(2)在萃取的过程中,去除葡萄籽中的蛋白质进而减少其与原花青素的交联结合,利于原花青素纯度的提升,而微波辐照可以使葡萄籽细胞壁充分破裂,释放出更多的原花青素,提升原花青素的提取率。
(3)采用石油醚使极性有机溶剂中的原花青素析出,可以更有效地提取到低聚体原花青素和原花青素单体,从而提高原花青素中生物活性成分的富集率。
在其中一个实施例中,在微波辐照处理的步骤中,微波辐照的功率为500W-1500W,微波辐照的时间为1min-20min。
在其中一个实施例中,在向预处理后的葡萄籽中加入极性有机溶剂进行萃取步骤中,所述葡萄籽与所述极性有机溶剂的料液比为(1:10)-(1:30)。
在其中一个实施例中,在向所述萃取液中加入极性有机溶剂进行二次萃取的步骤中,所述萃取液与所述极性有机溶剂的体积比为(1:3)-(1:1)。
在其中一个实施例中,在向所述萃取液中加入极性有机溶剂进行二次萃取的步骤中,二次萃取的时间为20min-40min,二次萃取的温度为5℃-38℃。
在其中一个实施例中,向预处理后的葡萄籽中加入极性有机溶剂进行萃取的步骤之前,还包括将葡萄籽原料与溶剂混合、酶解处理、过滤和干燥、粉碎和过筛得到葡萄籽渣的步骤。
在其中一个实施例中,在所述酶解处理的步骤中,所用的酶选自纤维素酶和果胶酶中的至少一种。
在其中一个实施例中,在调节pH值至2.5-3.5以使葡萄籽中含有的蛋白质沉淀的步骤之前,还包括除去葡萄籽中油脂的步骤。
在其中一个实施例中,所述极性有机溶剂选自乙酸乙酯、C1-C3的醇、乙醚和丙酮中的至少一种。
本发明还提供一种采用本发明任一项所述的从葡萄籽中提取原花青素的方法提取得到的原花青素。
附图说明
图1为实施例3中原花青素的质谱分析图;
图2为儿茶素标准品的质谱分析图;
图3为表儿茶素标准品的质谱分析图;
图4为表儿茶素没食子酸标准品的质谱分析图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施,本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进,因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明一实施例中提供了一种从葡萄籽中提取原花青素的方法,其包括如下步骤:
S1、向预处理后的葡萄籽中加入极性有机溶剂进行萃取,调节pH值至2.5-3.5以使葡萄籽中含有的蛋白质沉淀,过滤后得到萃取液,调节萃取液的pH值至6.5-7.5,微波辐照处理以使葡萄籽细胞中的原花青素进入萃取液中。
其中,调节pH值至2.5-3.5的目的是使蛋白质在酸性环境下达到其等电点,形成沉淀。
其中,微波辐照的原理是利用高频电磁波穿透萃取媒介,到达被萃取物料的内部,微波能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升,当细胞内部的压力超过细胞壁承受能力时,细胞破裂,磁控管所产生的每秒24.5亿次左右的快速震动,使植物内分子间相互碰撞、挤压至细胞壁破裂,从而使细胞内有效成分浸出于极性有机溶剂中。进一步地,在微波辐照处理的步骤中,微波辐照的功率为500W-1500W,微波辐照的时间为1min-20min。
在其中一个实施例中,在向预处理后的葡萄籽中加入极性有机溶剂进行萃取的步骤中,所述葡萄籽与所述极性有机溶剂的料液比为(1:10)-(1:30)。
在其中一个实施例中,所述极性有机溶剂选自乙酸乙酯、C1-C3的醇、乙醚和丙酮中的至少一种。
在其中一个实施例中,在调节pH值至2.5-3.5以使葡萄籽中含有的蛋白质沉淀的步骤之前,还包括除去葡萄籽中油脂的步骤。具体地,用石油醚洗涤脱去葡萄籽中的油脂。
在其中一个实施例中,在向预处理后的葡萄籽中加入极性有机溶剂进行萃取的步骤之前,还包括将葡萄籽原料与溶剂混合、酶解处理、过滤和干燥、粉碎和过筛得到葡萄籽渣的步骤。具体地,称量一定量的葡萄籽放入石油醚中脱脂处理,酶解、酶解后过滤取滤液、减压浓缩、干燥处理后进行粉粹,过20目筛得葡萄籽渣。进一步地,酶解过程中,所用的酶选自纤维素酶和果胶酶中的至少一种。
S2、向所述萃取液中加入极性有机溶剂进行二次萃取,得到二次萃取液,浓缩至占二次萃取液的体积分数的5%-25%,加入石油醚,固液分离得到含原花青素的沉淀物。
在其中一个实施例中,在向萃取液中加入极性有机溶剂进行二次萃取的步骤中,所述萃取液与所述极性有机溶剂的体积比为(1:3)-(1:1)。
在其中一个实施例中,所述极性有机溶剂选自乙酸乙酯、C1-C3的醇、乙醚和丙酮中的至少一种。
在其中一个实施例中,在向所述萃取液中加入极性有机溶剂进行二次萃取,得到二次萃取液中,二次萃取的时间为20min-40min,二次萃取的温度为5℃-38℃。
上述从葡萄籽中提取原花青素的方法简单,其优点如下:
1、采用多级萃取工艺,即先用极性有机溶剂萃取原花青素,后用非极性的石油醚将原花青素从极性有机溶剂中析出,尽可能的提取更多的原花青素,提升原花青素的提取率。
2、在萃取的过程中,去除葡萄籽中的蛋白质进而减少其与原花青素的交联结合,利于原花青素纯度的提升,而微波辐照可以使葡萄籽细胞壁充分破裂,释放出更多的原花青素,提升原花青素的提取率。
3、采用石油醚使极性有机溶剂中的原花青素析出,可以更有效地提取到低聚体原花青素和原花青素单体,从而提高原花青素中生物活性成分的富集率。
本发明还提供一种采用本发明任一项所述的从葡萄籽中提取原花青素的方法提取得到的原花青素。该原花青素的提取率高且其中的生物活性成分的富集率高。
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白,以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例1
一种从葡萄籽中提取原花青素的方法,其包括如下步骤:
葡萄籽预处理:取1份葡萄籽与20份水混合得到混合液,加入占混合液质量10%的纤维素酶和果胶酶酶解30min,过滤、浓缩、干燥处理后粉碎,过20目筛,得到粒度均匀的葡萄籽渣。
将1份葡萄籽渣与10份丙酮混合进行萃取,调节pH值至3使蛋白质沉淀,过滤后得到萃取液,调节萃取液的pH值至7,微波辐照处理,其中,微波辐照的功率为1000W,微波辐照的时间为1min。
再向萃取液中加入乙酸乙酯进行二次萃取,萃取液和乙酸乙酯的体积比为1:1,二次萃取的时间为30min,二次萃取的温度为20℃。萃取结束后减压浓缩,浓缩至占二次萃取液的体积分数的5%,加入3份的石油醚,固液分离得到含原花青素的沉淀物。
实施例2
一种从葡萄籽中提取原花青素的方法,其包括如下步骤:
葡萄籽预处理:取1份葡萄籽与20份水混合得到混合液,加入占混合液质量10%的纤维素酶和果胶酶酶解30min,过滤、浓缩、干燥处理后粉碎,过20目筛,得到粒度均匀的葡萄籽渣。
将1份葡萄籽渣与30份丙酮混合进行萃取,调节pH值至3使蛋白质沉淀,过滤后得到萃取液,调节萃取液的pH值至7,微波辐照处理,其中,微波辐照的功率为2000W,微波辐照的时间为5min。
再向萃取液中加入乙酸乙酯进行二次萃取,萃取液和乙酸乙酯的体积比为1:3,二次萃取的时间为30min,二次萃取的温度为20℃。萃取结束后减压浓缩,浓缩至占二次萃取液的体积分数的10%,加入3份的石油醚,固液分离得到含原花青素的沉淀物。
实施例3
一种从葡萄籽中提取原花青素的方法,其包括如下步骤:
葡萄籽预处理:取1份葡萄籽与15份水混合得到混合液,加入占混合液质量10%的纤维素酶和果胶酶酶解30min,过滤、浓缩、干燥处理后粉碎,过20目筛,得到粒度均匀的葡萄籽渣。
将1份葡萄籽渣与20份丙酮混合进行萃取,调节pH值至3使蛋白质沉淀,过滤后得到萃取液,调节萃取液的pH值至7,微波辐照处理,其中,微波辐照的功率为1500W,微波辐照的时间为10min。
再向萃取液中加入乙酸乙酯进行二次萃取,萃取液和乙酸乙酯的体积比为1:3,二次萃取的时间为30min,二次萃取的温度为20℃。萃取结束后减压浓缩,浓缩至占二次萃取液的体积分数的10%,加入3份的石油醚,固液分离得到含原花青素的沉淀物。
对比例1
一种从葡萄籽中提取原花青素的方法,其制备方法大体与实施例1相同,不同之处在于:不进行微波辐照处理。
对比例2
一种从葡萄籽中提取原花青素的方法,其制备方法大体与实施例1相同,不同之处在于:不加入石油醚萃取。
对比例3
一种从葡萄籽中提取原花青素的方法,其包括如下步骤:
葡萄籽预处理:取1份葡萄籽与15份水混合得到混合液,加入占混合液质量10%的纤维素酶和果胶酶酶解30min,过滤、浓缩、干燥处理后粉碎,过20目筛,得到粒度均匀的葡萄籽渣。
将1份葡萄籽渣与20份丙酮混合进行萃取,微波辐照处理,其中,微波辐照的功率为1500W,微波辐照的时间为10min。
再向萃取液中加入乙酸乙酯进行二次萃取,萃取液和乙酸乙酯的体积比为1:3,二次萃取的时间为30min,二次萃取的温度为20℃。萃取结束后减压浓缩,浓缩至占二次萃取液的体积分数的10%,加入3份的石油醚,固液分离得到含原花青素的沉淀物。
对比例4
一种从葡萄籽中提取原花青素的方法,其制备方法大体与实施例1相同,不同之处在于:将1份葡萄籽渣与20份乙醇混合进行萃取。
效果实验
提取率测定
采用吸光度法测定原花青素的提取率,结果见表1。
表1
组别 | 提取率 |
实施例1 | 4.63% |
实施例2 | 4.76% |
实施例3 | 4.98% |
对比例1 | 2.45% |
对比例2 | 2.28% |
对比例3 | 3.54% |
对比例4 | 4.23% |
质谱分析
对实施例3中提取到的原花青素进行质谱比较分析,结果参见表2、图1-图4。
表2
原花青素成分 | m/z | 质谱图中对应标识 |
儿茶素 | 289 | 1 |
表儿茶素 | 289 | 2 |
表儿茶素没食子酸 | 441 | 3 |
二聚体 | 577 | 6 |
二聚单酯 | 729 | 7 |
三聚体 | 865 | 4 |
三聚单酯 | 1017 | 5 |
四聚体 | 1153 | 8 |
综合表2、图1-图4可知,在实施例3中,经石油醚提取的单体(儿茶素、表儿茶素和表儿茶素没食子酸)、二聚体和二聚单酯原花青素占提取到的原花青素总质量的59.51%,而经测定,对比例2中的经石油醚提取的单体(儿茶素、表儿茶素和表儿茶素没食子酸)、二聚体和二聚单酯原花青素仅占提取到的原花青素总质量的约40%左右。由此可知,石油醚可以使极性有机溶剂中的原花青素析出,更有效地提取到低聚体原花青素,特别是有生物活性的单体和二聚体,从而提高原花青素中生物活性成分的富集率。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种从葡萄籽中提取原花青素的方法,其特征在于,包括如下步骤:
向预处理后的葡萄籽中加入极性有机溶剂进行萃取,调节pH值至2.5-3.5以使葡萄籽中含有的蛋白质沉淀,过滤后得到萃取液,调节萃取液的pH值至6.5-7.5,微波辐照处理以使葡萄籽细胞中的原花青素进入萃取液中;
向所述萃取液中加入极性有机溶剂进行二次萃取得到二次萃取液,浓缩至占二次萃取液的体积分数的5%-25%,加入石油醚,固液分离,得到含原花青素的沉淀物。
2.根据权利要求1所述的从葡萄籽中提取原花青素的方法,其特征在于,在微波辐照处理的步骤中,微波辐照的功率为500W-1500W,微波辐照的时间为1min-20min。
3.根据权利要求1所述的从葡萄籽中提取原花青素的方法,其特征在于,在向预处理后的葡萄籽中加入极性有机溶剂进行萃取步骤中,所述葡萄籽与所述极性有机溶剂的料液比为(1:10)-(1:30)。
4.根据权利要求1-3任一项所述的从葡萄籽中提取原花青素的方法,其特征在于,在向所述萃取液中加入极性有机溶剂进行二次萃取的步骤中,所述萃取液与所述极性有机溶剂的体积比为(1:3)-(1:1)。
5.根据权利要求1-3任一项所述的从葡萄籽中提取原花青素的方法,其特征在于,在向所述萃取液中加入极性有机溶剂进行二次萃取的步骤中,二次萃取的时间为20min-40min,二次萃取的温度为5℃-38℃。
6.根据权利要求1-3任一项所述的从葡萄籽中提取原花青素的方法,其特征在于,向预处理后的葡萄籽中加入极性有机溶剂进行萃取的步骤之前,还包括将葡萄籽原料与溶剂混合、酶解处理、过滤和干燥、粉碎和过筛得到葡萄籽渣的步骤。
7.根据权利要求6所述的从葡萄籽中提取原花青素的方法,其特征在于,在所述酶解处理的步骤中,所用的酶选自纤维素酶和果胶酶中的至少一种。
8.根据权利要求1-3任一项所述的从葡萄籽中提取原花青素的方法,其特征在于,在调节pH值至2.5-3.5以使葡萄籽中含有的蛋白质沉淀的步骤之前,还包括除去葡萄籽中油脂的步骤。
9.根据权利要求1-3任一项所述的从葡萄籽中提取原花青素的方法,其特征在于,所述极性有机溶剂选自乙酸乙酯、C1-C3的醇、乙醚和丙酮中的至少一种。
10.一种采用权利要求1-9任一项所述的从葡萄籽中提取原花青素的方法提取得到的原花青素。
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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