CN112174925A - 一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法,所述过程包括:葡萄籽样品自然风干,粉碎后过筛,添加纤维素酶及乙醇溶液后浸泡,再用微波消解仪浸提,抽滤浓缩并冷冻干燥后得到葡萄籽原花青素粗提物,用AB‑8树脂吸附,后用乙醇洗脱,再旋转蒸发浓缩,冷冻干燥,制成粉末;本发明采用微波、酶法双辅助提取法从葡萄籽中提取原花青素,考察了3个单因素对原花青素提取率的影响,响应面优化得到原花青素最优提取条件,具有广阔的市场前景。
Description
技术领域
本发明涉及食品及其加工技术领域,具体涉及一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法。
背景技术
原花青素(Procyanidins),又被称为缩合单宁,是自然界中第二大天然酚类物质,仅次于木质素,大量存在于水果、坚果以及种子中,葡萄皮和葡萄籽中所含的原花青素受到研究机构的广泛关注。它是一种混合物,是由不同数量的单体聚合而成,按聚合度划分,可分为低聚原花青素和高聚原花青素,粉末一般呈现红棕色,有少许的特殊气味。原花青素溶解性较好,溶于水和有机溶剂,在大多数有机溶剂中能快速溶解。
现有研究表明,原花青素具有极强的抗氧化活性,它的抗氧化能力大概是VE的50倍、VC的20倍。原花青素是清除人体自由基最有效的天然抗氧化剂,由于原花青素分子中有大量的活性酚羟基能与双键共辄,并且能给予氢原子,使得它能显著清除自由基及抑制脂质过氧化,对自由基的清除能力和其立体结构相关。此外,它能防治心脏病、关节炎等80多种因人体自由基而引起的疾病,具有改善体内微循环、抑制细菌、抗疲劳、保健美容的功效。原花青素还具有抗癌抗肿瘤活性以及保护心血管通畅的功能,被医学上作为防治心血管疾病药物的重要成分。
现有原花青素的提取方法主要包括:水-有机溶剂提取法、索式提取法、超临界CO2萃取法等方法。有机溶剂提取法提取时间长、温度高,严重影响原花青素的组成;索式提取法时间长,很难放大;超临界 CO2 萃取法一次性投入大,不能进行工业化大规模生产,产品成本高。
发明内容
针对上述问题,本发明提供一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法。
本发明的目的采用以下技术方案来实现:
一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法,包括以下步骤:
(1)葡萄籽样品自然风干,粉碎后过80目筛;
(2)称取20g葡萄籽粉加入500mL锥形瓶中,添加纯度为80%纤维素酶120mL及纯度为60%乙醇溶液100mL,搅拌后浸泡30min;
(3)提前设置好微波消解仪温度至60℃,将上述溶液浸提10min后取出冷却;
(4)抽滤浓缩并冷冻干燥20h,得到OPC粗提物;
(5)室温下,将AB-8树脂用工业乙醇浸泡24h,树脂充分溶胀后用蒸馏水冲洗至流出液无醇味。蒸馏水洗后的树脂用4%盐酸溶液浸泡4h,之后用蒸馏水冲洗至PH为7。继而用4%的氢氧化钠溶液浸泡4h,再次用蒸馏水冲洗至中性,备用。
(6)在室温下以无水乙醇为溶剂,静置密封浸泡8h,然后用蒸馏水冲洗至无醇味,再按树脂预处理时用4%的盐酸和4%的氢氧化钠溶液浸泡处理,备用。
(7)准确称取处理过的AB-8树脂5g,放置于250mL锥形瓶中,用75%的乙醇浸泡,再加入葡萄籽原花青素粗提液,置于振荡器中转速振荡24h,再取上清液测定原花青素含量。
(8)将上述吸附了原花青素提取液的树脂过滤后,放置于锥形瓶中,加入60%的乙醇水溶液200mL,置于振荡器中振荡,取上清液测定原花青素含量。
(9)旋转蒸发后浓缩,冷冻干燥,制成粉末。
优选的,所述纤维素酶为0.8mg/ml,乙醇纯度为60%。
优选的,所述微波温度为60℃,时长为10min。
优选的,所述树脂的预处理方法为:
室温下,将AB-8树脂用工业乙醇浸泡24h,树脂充分溶胀后用蒸馏水冲洗至流出液无醇味。蒸馏水洗后的树脂用4%盐酸溶液浸泡4h,之后用蒸馏水冲洗至PH为7。继而用4%的氢氧化钠溶液浸泡4h,再次用蒸馏水冲洗至中性,备用。
优选的,所述树脂再生方法为:
在室温下以无水乙醇为溶剂,静置密封浸泡8h,然后用蒸馏水冲洗至无醇味,再按树脂预处理时用4%的盐酸和4%的氢氧化钠溶液浸泡处理,备用。
优选的,所述树脂需要量为5g,乙醇纯度为75%,振荡器工作时长为24h。
优选的,所述洗脱用乙醇纯度为60%。
本发明的有益效果为:
本发明通过微波、酶法双辅助提取法从葡萄籽中提取原花青素,考察了3个单因素对原花青素提取率的影响,响应面优化得到原花青素最优提取条件,提取速率快,产物纯度高,具有广阔的市场前景。也为高效利用酿酒葡萄籽中原花青素等活性成分,增加葡萄酒工业生产的附加值提供科学依据。
具体实施方式
结合以下实施例对本发明作进一步描述。
本发明的实施例涉及一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法,包括以下步骤:
(1)葡萄籽样品自然风干,粉碎后过80目筛;
(2)称取20g葡萄籽粉加入500mL锥形瓶中,添加纯度为80%纤维素酶120mL及纯度为60%乙醇溶液100mL,搅拌后浸泡30min;
(3)提前设置好微波消解仪温度至60℃,将上述溶液浸提10min后取出冷却;
(4)抽滤浓缩并冷冻干燥20h,得到OPC粗提物;
(5)室温下,将AB-8树脂用工业乙醇浸泡24h,树脂充分溶胀后用蒸馏水冲洗至流出液无醇味。蒸馏水洗后的树脂用4%盐酸溶液浸泡4h,之后用蒸馏水冲洗至PH为7。继而用4%的氢氧化钠溶液浸泡4h,再次用蒸馏水冲洗至中性,备用。
(6)在室温下以无水乙醇为溶剂,静置密封浸泡8h,然后用蒸馏水冲洗至无醇味,再按树脂预处理时用4%的盐酸和4%的氢氧化钠溶液浸泡处理,备用。
(7)准确称取处理过的AB-8树脂5g,放置于250mL锥形瓶中,用75%的乙醇浸泡,再加入葡萄籽原花青素粗提液,置于振荡器中转速振荡24h,再取上清液测定原花青素含量。
(8)将上述吸附了原花青素提取液的树脂过滤后,放置于锥形瓶中,加入60%的乙醇水溶液200mL,置于振荡器中振荡,取上清液测定原花青素含量。
(9)旋转蒸发后浓缩,冷冻干燥,制成粉末。
优选的,所述纤维素酶为0.8mg/ml,乙醇纯度为60%。
优选的,所述微波温度为60℃,时长为10min。
优选的,所述树脂的预处理方法为:
室温下,将AB-8树脂用工业乙醇浸泡24h,树脂充分溶胀后用蒸馏水冲洗至流出液无醇味。蒸馏水洗后的树脂用4%盐酸溶液浸泡4h,之后用蒸馏水冲洗至PH为7。继而用4%的氢氧化钠溶液浸泡4h,再次用蒸馏水冲洗至中性,备用。
优选的,所述树脂再生方法为:
在室温下以无水乙醇为溶剂,静置密封浸泡8h,然后用蒸馏水冲洗至无醇味,再按树脂预处理时用4%的盐酸和4%的氢氧化钠溶液浸泡处理,备用。
优选的,所述树脂需要量为5g,乙醇纯度为75%,振荡器工作时长为24h。
优选的,所述洗脱用乙醇纯度为60%。
实施例1
一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法,其制备方法包括以下步骤:
(1)葡萄籽样品自然风干,粉碎后过80目筛;
(2)称取5份20g葡萄籽粉分别加入到5个500mL锥形瓶中,分别添加纯度为80%纤维素酶60mL、90mL、120mL、150mL、180mL及纯度为60%乙醇溶液50mL、75mL、100mL、125mL、150mL,搅拌后浸泡30min;
(3)提前设置好微波消解仪温度至60℃,将上述溶液分别浸提10min后取出冷却;
(4)抽滤浓缩并冷冻干燥20h,得到OPC粗提物;
(5)室温下,将AB-8树脂用工业乙醇浸泡24h,树脂充分溶胀后用蒸馏水冲洗至流出液无醇味。蒸馏水洗后的树脂用4%盐酸溶液浸泡4h,之后用蒸馏水冲洗至PH为7。继而用4%的氢氧化钠溶液浸泡4h,再次用蒸馏水冲洗至中性,备用。
(6)在室温下以无水乙醇为溶剂,静置密封浸泡8h,然后用蒸馏水冲洗至无醇味,再按树脂预处理时用4%的盐酸和4%的氢氧化钠溶液浸泡处理,备用。
(7)准确称取5份处理过的AB-8树脂5g,分别放置于250mL锥形瓶中,用75%的乙醇浸泡,再分别加入(4)所得葡萄籽原花青素粗提液,置于振荡器中转速振荡24h,再取上清液测定原花青素含量。
(8)将上述吸附了原花青素提取液的树脂过滤后,放置于锥形瓶中,加入60%的乙醇水溶液200mL,置于振荡器中振荡,取上清液测定原花青素含量。
(9)旋转蒸发后浓缩,冷冻干燥,制成粉末,称得分别为0.22g、0.28g、0.38g、0.34g、0.32g。
优选的,所述纤维素酶为0.8mg/ml,乙醇纯度为60%。
优选的,所述微波温度为60℃,时长为10min。
优选的,所述树脂的预处理方法为:
室温下,将AB-8树脂用工业乙醇浸泡24h,树脂充分溶胀后用蒸馏水冲洗至流出液无醇味。蒸馏水洗后的树脂用4%盐酸溶液浸泡4h,之后用蒸馏水冲洗至PH为7。继而用4%的氢氧化钠溶液浸泡4h,再次用蒸馏水冲洗至中性,备用。
优选的,所述树脂再生方法为:
在室温下以无水乙醇为溶剂,静置密封浸泡8h,然后用蒸馏水冲洗至无醇味,再按树脂预处理时用4%的盐酸和4%的氢氧化钠溶液浸泡处理,备用。
优选的,所述树脂需要量为5g,乙醇纯度为75%,振荡器工作时长为24h。
优选的,所述洗脱用乙醇纯度为60%。
实施例2
一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法,其制备方法包括以下步骤:
(1)葡萄籽样品自然风干,粉碎后过80目筛;
(2)称取5份20g葡萄籽粉分别加入到5个500mL锥形瓶中,分别添加纯度为80%纤维素酶120mL及纯度为50%、60%、70%、80%、90%乙醇溶液100mL,搅拌后浸泡30min;
(3)提前设置好微波消解仪温度至60℃,将上述溶液分别浸提10min后取出冷却;
(4)抽滤浓缩并冷冻干燥20h,得到OPC粗提物;
(5)室温下,将AB-8树脂用工业乙醇浸泡24h,树脂充分溶胀后用蒸馏水冲洗至流出液无醇味。蒸馏水洗后的树脂用4%盐酸溶液浸泡4h,之后用蒸馏水冲洗至PH为7。继而用4%的氢氧化钠溶液浸泡4h,再次用蒸馏水冲洗至中性,备用。
(6)在室温下以无水乙醇为溶剂,静置密封浸泡8h,然后用蒸馏水冲洗至无醇味,再按树脂预处理时用4%的盐酸和4%的氢氧化钠溶液浸泡处理,备用。
(7)准确称取5份处理过的AB-8树脂5g,分别放置于250mL锥形瓶中,用75%的乙醇浸泡,再分别加入(4)所得葡萄籽原花青素粗提液,置于振荡器中转速振荡24h,再取上清液测定原花青素含量。
(8)将上述吸附了原花青素提取液的树脂过滤后,放置于锥形瓶中,加入60%的乙醇水溶液200mL,置于振荡器中振荡,取上清液测定原花青素含量。
(9)旋转蒸发后浓缩,冷冻干燥,制成粉末,称得分别为0.37g、0.48g、0.42g、0.34g、0.30g。
优选的,所述纤维素酶为0.8mg/ml。
优选的,所述微波温度为60℃,时长为10min。
优选的,所述树脂的预处理方法为:
室温下,将AB-8树脂用工业乙醇浸泡24h,树脂充分溶胀后用蒸馏水冲洗至流出液无醇味。蒸馏水洗后的树脂用4%盐酸溶液浸泡4h,之后用蒸馏水冲洗至PH为7。继而用4%的氢氧化钠溶液浸泡4h,再次用蒸馏水冲洗至中性,备用。
优选的,所述树脂再生方法为:
在室温下以无水乙醇为溶剂,静置密封浸泡8h,然后用蒸馏水冲洗至无醇味,再按树脂预处理时用4%的盐酸和4%的氢氧化钠溶液浸泡处理,备用。
优选的,所述树脂需要量为5g,乙醇纯度为75%,振荡器工作时长为24h。
优选的,所述洗脱用乙醇纯度为60%。
实施例3
一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法,其制备方法包括以下步骤:
(1)葡萄籽样品自然风干,粉碎后过80目筛;
(2)称取5份20g葡萄籽粉分别加入到5个500mL锥形瓶中,分别添加纯度为80%纤维素酶120mL及纯度为60%乙醇溶液100mL,搅拌后浸泡30min;
(3)分次设置好微波消解仪温度至30℃、45℃、60℃、75℃、90℃,将上述溶液分别浸提10min后取出冷却;
(4)抽滤浓缩并冷冻干燥20h,得到OPC粗提物;
(5)室温下,将AB-8树脂用工业乙醇浸泡24h,树脂充分溶胀后用蒸馏水冲洗至流出液无醇味。蒸馏水洗后的树脂用4%盐酸溶液浸泡4h,之后用蒸馏水冲洗至PH为7。继而用4%的氢氧化钠溶液浸泡4h,再次用蒸馏水冲洗至中性,备用。
(6)在室温下以无水乙醇为溶剂,静置密封浸泡8h,然后用蒸馏水冲洗至无醇味,再按树脂预处理时用4%的盐酸和4%的氢氧化钠溶液浸泡处理,备用。
(7)准确称取5份处理过的AB-8树脂5g,分别放置于250mL锥形瓶中,用75%的乙醇浸泡,再分别加入(4)所得葡萄籽原花青素粗提液,置于振荡器中转速振荡24h,再取上清液测定原花青素含量。
(8)将上述吸附了原花青素提取液的树脂过滤后,放置于锥形瓶中,加入60%的乙醇水溶液200mL,置于振荡器中振荡,取上清液测定原花青素含量。
(9)旋转蒸发后浓缩,冷冻干燥,制成粉末,称得分别为0.15g、0.28g、0.37g、0.34g、0.33g。
优选的,所述纤维素酶为0.8mg/ml。
优选的,所述微波时长为10min。
优选的,所述树脂的预处理方法为:
室温下,将AB-8树脂用工业乙醇浸泡24h,树脂充分溶胀后用蒸馏水冲洗至流出液无醇味。蒸馏水洗后的树脂用4%盐酸溶液浸泡4h,之后用蒸馏水冲洗至PH为7。继而用4%的氢氧化钠溶液浸泡4h,再次用蒸馏水冲洗至中性,备用。
优选的,所述树脂再生方法为:
在室温下以无水乙醇为溶剂,静置密封浸泡8h,然后用蒸馏水冲洗至无醇味,再按树脂预处理时用4%的盐酸和4%的氢氧化钠溶液浸泡处理,备用。
优选的,所述树脂需要量为5g,乙醇纯度为75%,振荡器工作时长为24h。
优选的,所述洗脱用乙醇纯度为60%。
最后应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (7)
1.一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)葡萄籽样品自然风干,粉碎后过80目筛;
(2)称取20g葡萄籽粉加入500mL锥形瓶中,添加纯度为80%纤维素酶120mL及纯度为60%乙醇溶液100mL,搅拌后浸泡30min;
(3)提前设置好微波消解仪温度至60℃,将上述溶液浸提10min后取出冷却;
(4)抽滤浓缩并冷冻干燥20h,得到OPC粗提物;
(5)室温下,将AB-8树脂用工业乙醇浸泡24h,树脂充分溶胀后用蒸馏水冲洗至流出液无醇味。蒸馏水洗后的树脂用4%盐酸溶液浸泡4h,之后用蒸馏水冲洗至PH为7。继而用4%的氢氧化钠溶液浸泡4h,再次用蒸馏水冲洗至中性,备用。
(6)在室温下以无水乙醇为溶剂,静置密封浸泡8h,然后用蒸馏水冲洗至无醇味,再按树脂预处理时用4%的盐酸和4%的氢氧化钠溶液浸泡处理,备用。
(7)准确称取处理过的AB-8树脂5g,放置于250mL锥形瓶中,用75%的乙醇浸泡,再加入葡萄籽原花青素粗提液,置于振荡器中转速振荡24h,再取上清液测定原花青素含量。
(8)将上述吸附了原花青素提取液的树脂过滤后,放置于锥形瓶中,加入60%的乙醇水溶液200mL,置于振荡器中振荡,取上清液测定原花青素含量。
(9)旋转蒸发后浓缩,冷冻干燥,制成粉末。
2.根据权利要求1所述的一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法,其特征在于,所述纤维素酶为0.8mg/ml,乙醇纯度为60%。
3.根据权利要求1所述的一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法,其特征在于,所述微波温度为60℃,时长为10min。
4.根据权利要求1所述的一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法,其特征在于,所述树脂的预处理方法为:
室温下,将AB-8树脂用工业乙醇浸泡24h,树脂充分溶胀后用蒸馏水冲洗至流出液无醇味。蒸馏水洗后的树脂用4%盐酸溶液浸泡4h,之后用蒸馏水冲洗至PH为7。继而用4%的氢氧化钠溶液浸泡4h,再次用蒸馏水冲洗至中性,备用。
5.根据权利要求1所述的一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法,其特征在于,所述树脂再生方法为:
在室温下以无水乙醇为溶剂,静置密封浸泡8h,然后用蒸馏水冲洗至无醇味,再按树脂预处理时用4%的盐酸和4%的氢氧化钠溶液浸泡处理,备用。
6.根据权利要求1所述的一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法,其特征在于,所述树脂需要量为5g,乙醇纯度为75%,振荡器工作时长为24h。
7.根据权利要求1所述的一种微波辅助提取葡萄籽原花青素的方法,其特征在于,所述洗脱用乙醇纯度为60%。
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2020
- 2020-11-26 CN CN202011350543.8A patent/CN112174925A/zh not_active Withdrawn
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN115715891A (zh) * | 2022-11-11 | 2023-02-28 | 湖南绿蔓生物科技股份有限公司 | 从罗汉果中分离多种有效成分的连续化方法 |
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PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |
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WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |