CN110799213A - 三联组合抗体疗法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具有抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和检查点抑制剂(包括抗PD‑1或抗PD‑L1抗体)的三联组合疗法。

Description

三联组合抗体疗法
相关申请交叉引用
本申请主张35 U.S.C.§119规定要求2017年6月1日提交的美国专利申请第62/513,960号、2017年6月5日提交的第62/515,452号、2017年7月28日提交的第62/538,563号、2017年8月17日提交的第62/547,051号、2017年11月7日提交的第62/582,756号和2018年1月16日提交的第62/618,005号的优先权，所述专利申请以其全文引入的方式明确地并入本文中。
背景技术
TIGIT是一种在效应和调节性(Treg)CD4+ T细胞、效应CD8+ T细胞和NK细胞上高效表达的共抑制受体。已展示TIGIT通过(1)直接信号传导，(2)诱导配体信号传导，以及(3)竞争和破坏利用共刺激受体CD226(也称为DNAM-1)的信号传导来减弱免疫反应。TIGIT信号传导已经在NK细胞中得到最充分的研究，其中已经证明与其同源配体脊髓灰质炎病毒受体(PVR，也称为CD155)的接合通过其细胞质ITIM结构域直接抑制NK细胞的细胞毒性。TIGIT基因的敲除或TIGIT/PVR相互作用的抗体阻断已展示在体外增强NK细胞杀伤，以及加剧体内自身免疫疾病。除了对T细胞和NK细胞的直接作用外，TIGIT还可在树突状细胞或肿瘤细胞中诱导PVR介导的信号传导，从而导致抗炎细胞因子(例如IL10)的产生增加。在T细胞中，TIGIT还可以通过破坏共刺激受体CD226的同二聚化，并通过与其竞争结合于PVR来抑制淋巴细胞反应。
TIGIT在淋巴细胞上高度表达，包括浸润不同类型肿瘤的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和Treg。PVR也在肿瘤中广泛表达，表明TIGIT-PVR信号轴可能是癌症的主要免疫逃逸机制。值得注意的是，TIGIT表达与另一种重要的共抑制受体PD1的表达密切相关。TIGIT和PD1在许多人类和鼠类肿瘤的TIL上共表达。与TIGIT和CTLA4不同，PD1对T细胞反应的抑制不涉及配体与共刺激受体结合的竞争。
含有脊髓灰质炎病毒受体相关免疫球蛋白结构域(PVRIG，也称为CD112R)的免疫检查点代表TIGIT受体家族内的一种新的抑制受体。PVRIG与其同源配体脊髓灰质炎病毒受体相关2(PVRL2，也称为CD112或nectin-2)以高亲和力结合以通过T细胞和NK细胞内的其ITIM基元递送抑制信号。TIGIT对PVR和PVRIG对PVRL2的亲和力高于CD226对PVR或PVRL2的亲和力，表明TIGIT和PVRIG可以从CD226中胜过PVR和PVRL2，并且提供TIGIT和PVRIG可以减少淋巴细胞功能的间接机制。因此，两个具有相同家族TIGIT和PVRIG的受体递送抑制信号以减弱T细胞和NK细胞反应。
因此，TIGIT和PVRIG对与检查点抑制剂(包括抗PD-1抗体)的三联组合疗法组合具有吸引力。
发明内容
本发明提供方法和组合物，其包含如本文所公开并且如权利要求书中所提供的TIGIT抗体与PVRIG抗体和检查点抑制剂(包括抗PD-1抗体)的组合。本发明还提供编码所述抗体的核酸和其组合物。
本发明提供一种治疗所述患者的癌症的方法，其包含：a)提供来自所述患者的活检，其包含肿瘤细胞；b)测量所述活检中的PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的频率；c)如果与用所用抗体的相关同型对照抗体染色相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的所述频率高于1％，那么施用包含抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-1抗体的三联组合疗法；和d)如果与用所用所述抗体的相关同型对照抗体染色相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的所述频率低于1％，那么施用包含抗TIGIT抗体和抗PVRIG抗体的双联组合疗法。
在所述方法的一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
在所述方法的一些实施例中，抗PVRIG抗体是选自CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
在所述方法的一些实施例中，抗PD-1抗体是选自帕博利珠单抗(pembrolizumab)、西米普利单抗(cemiplimab)和纳武单抗(nivolumab)中的至少一种的抗体。
在所述方法的一些实施例中，双联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
在所述方法的一些实施例中，三联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
在所述方法的一些实施例中，所述抗体同时施用。
在所述方法的一些实施例中，所述抗体依序施用。
在所述方法的一些实施例中，所述癌症选自由以下组成的群组：前列腺癌、肝癌(HCC)、结直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌、胃(stomach/gastric)癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、尿路上皮癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、食道癌、默克细胞癌(Merkel Cells cancer)、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合征(MDS)。在所述方法的一些实施例中，所述癌症选自由以下癌症组成的群组：三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。在所述方法的一些实施例中，所述癌症选自由以下癌症组成的群组：三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、默克细胞癌和高MSI癌。
本发明还提供一种治疗所述患者的癌症的方法，所述方法包含施用三联组合疗法，其包含抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-1抗体。
在所述方法的一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
在所述方法的一些实施例中，抗PVRIG抗体是选自CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
在所述方法的一些实施例中，抗PD-1抗体是选自帕博利珠单抗、西米普利单抗和纳武单抗中的至少一种的抗体。
在所述方法的一些实施例中，所述三联组合疗法包含施用抗PD-1抗体与施用选自以下的双联组合疗法组合：CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
在所述方法的一些实施例中，所述三联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗CHACHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
在所述方法的一些实施例中，所述抗体同时施用。
在所述方法的一些实施例中，所述抗体依序施用。
在所述方法的一些实施例中，用于三联组合疗法的癌症选自由以下组成的群组：前列腺癌、肝癌(HCC)、结直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、尿路上皮癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、食道癌、默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。在所述方法的一些实施例中，所述癌症选自由以下癌症组成的群组：三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
本发明还提供一种药物剂量试剂盒，其包含：a)包含单位剂量的抗TIGIT抗体的容器；和b)包含单位剂量的抗PVRIG抗体的容器。
本发明还提供一种药物剂量试剂盒，其包含：a)包含单位剂量的抗TIGIT抗体的容器；b)包含单位剂量的抗PVRIG抗体的容器；和c)包含抗PD-1抗体的容器。
在另一方面，本发明提供方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)TIGIT蛋白；ii)PVRIG蛋白；iii)PVR蛋白；iv)PD-1蛋白；v)PD-L1蛋白；vi)PVRL2；和vi)i)-vi)中的抗体的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于TIGIT、PVRIG、PVR、PD-1、PVRL2和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果对于TIGIT或PVR、和对于PVRIG或PVRL2和对于PD-1或PD-L1，阳性细胞百分比>1％，那么进行步骤e)；和e)向所述患者施用针对TIGIT、PVRIG和PD-1的抗体。
在另一方面，本发明提供方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)TIGIT蛋白；ii)PVR蛋白；iii)PD-1蛋白；iv)PD-L1蛋白；和v)i)-iv)中的抗体的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于TIGIT、PVR、PD-1和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果对于所有4种受体，阳性细胞百分比≥1％，那么e)向所述患者施用针对TIGIT和PD-1的抗体。
在另一方面，本发明提供方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)PVRIG蛋白；ii)PVRL2蛋白；iii)PD-1蛋白；iv)PD-L1蛋白；和v)i)-iv)中的抗体的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于PVRIG、PVRL2、PD-1和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果所有4种受体，阳性细胞百分比≥1％，那么e)向所述患者施用针对PVRIG和PD-1的抗体。
在另一方面，本发明提供方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)PVRIG蛋白；ii)PVRL2蛋白；iii)TIGIT蛋白；iv)PVR蛋白；和v)i)-iv)中的抗体的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于PVRIG、PVRL2、TIGIT和PVR中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果对于所有4种受体，阳性细胞百分比≥1％，那么e)向所述患者施用针对PVRIG和TIGIT的抗体。
在另一方面，本发明提供方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)PVRIG蛋白；ii)TIGIT蛋白；iii)PVRL2蛋白；iv)PD-1蛋白；v)PD-L1蛋白；和vi)i)-v)中的抗体的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于PVRIG、TIGIT、PVRL2、PD-1和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果对于所有5种受体，阳性细胞百分比≥1％，那么e)向所述患者施用针对PVRIG、TIGIT和PD-1的抗体。
在另一方面，本发明提供方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)PVRIG蛋白；ii)PVRL2蛋白；iii)TIGIT蛋白；iv)PVR蛋白；v)PD-1；和vi)i)-v)中的抗体的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于PVRIG、PVRL2、TIGIT和PVR中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果对于所有4种受体，阳性细胞百分比≥1％，那么e)向所述患者施用针对PVRIG、TIGIT和PD-1的抗体。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗患者的癌症的方法，其包含：a)提供来自所述患者的活检，其包含肿瘤细胞；b)测量所述活检中的PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的频率；c)如果与用所用抗体的相关同型对照抗体染色相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的所述频率高于1％，那么施用包含抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-1抗体的三联组合疗法；和d)如果与用所用所述抗体的相关同型对照抗体染色相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的所述频率低于1％，那么施用包含抗TIGIT抗体和抗PVRIG抗体的双联组合疗法。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自本文所述的任何抗TIGIT抗体的抗体，包括图3中所述的那些抗体中的任一种。
3在一些实施例中，抗PVRIG抗体是选自本文所述的任何抗PVRIG抗体的抗体，包括图5和/或图63中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是选自本文所述的任何抗PD-1抗体的抗体，包括图7中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是选自CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是选自帕博利珠单抗、西米普利单抗和纳武单抗中的至少一种的抗体。
8在一些实施例中，双联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
在一些实施例中，三联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、和CHA.9.547.13.H4(S241P)、和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
在一些实施例中，所述抗体同时施用。
在一些实施例中，所述抗体依序施用。
在一些实施例中，所述癌症选自由以下组成的群组：前列腺癌、肝癌(HCC)、结直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、尿路上皮癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、食道癌、默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
在一些实施例中，所述癌症选自由以下组成的群组：三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)和默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗患者的癌症的方法，所述方法包含施用三联组合疗法，其包含抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-1抗体。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
在一些实施例中，所述抗PVRIG抗体是选自CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
1在一些实施例中，抗PD-1抗体是选自由以下组成的群组的抗体：帕博利珠单抗、西米普利单抗和纳武单抗。
在一些实施例中，所述三联组合疗法包含施用抗PD-1抗体与施用选自以下的双联组合疗法组合：CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
在一些实施例中，所述三联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
在一些实施例中，所述抗体同时施用。
在一些实施例中，所述抗体依序施用。
在一些实施例中，所述癌症选自由以下组成的群组：前列腺癌、肝癌(HCC)、结直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、尿路上皮癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、食道癌、默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
在一些实施例中，所述癌症选自由以下组成的群组：三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)和默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
在一些实施例中，本发明提供一种药物剂量试剂盒，其包含：a)包含单位剂量的抗TIGIT抗体的容器；和b)包含单位剂量的抗PVRIG抗体的容器。
在一些实施例中，本发明提供一种药物剂量试剂盒，其包含：a)包含单位剂量的抗TIGIT抗体的容器；b)包含单位剂量的抗PVRIG抗体的容器；和c)包含抗PD-1抗体的容器。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自本文所述的任何抗TIGIT抗体的抗体，包括图3中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是选自本文所述的任何抗PVRIG抗体的抗体，包括图5和/或图63中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是选自本文所述的任何抗PD-1抗体的抗体，包括图7中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，本发明提供一种方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)TIGIT蛋白；ii)PVRIG蛋白；iii)PVR蛋白；iv)PD-1蛋白；v)PD-L1蛋白；和vi)i)-v)中的抗体中的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于TIGIT、PVRIG、PVR、PD-1和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果对于所有5种受体，阳性细胞百分比>1％，那么e)向所述患者施用针对TIGIT、PVRIG和PD-1的抗体。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自本文所述的任何抗TIGIT抗体的抗体，包括图3中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是选自本文所述的任何抗PVRIG抗体的抗体，包括图5和/或图63中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是选自本文所述的任何抗PD-1抗体的抗体，包括图7中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，TIGIT抗体是CPA.9.086。
在一些实施例中，PD-1抗体选自帕博利珠单抗和纳武单抗。
在一些实施例中，PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)。
在一些实施例中，本发明提供一种方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)PVRIG蛋白；ii)TIGIT蛋白；iii)PVRL2蛋白；iv)PD-1蛋白；v)PD-L1蛋白；和vi)i)-v)中的抗体中的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于PVRIG、TIGIT、PVRL2、PD-1和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果对于所有5种受体，阳性细胞百分比>1％，那么e)向所述患者施用针对PVRIG和PD-1的抗体。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自本文所述的任何抗TIGIT抗体的抗体，包括图3中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是选自本文所述的任何抗PVRIG抗体的抗体，包括图5和/或图63中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是选自本文所述的任何抗PD-1抗体的抗体，包括图7中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PD-L1抗体是选自本文所述的任何抗PD-L1抗体的抗体，包括图62中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)。
在一些实施例中，PD-1抗体选自帕博利珠单抗和纳武单抗。
在一些实施例中，TIGIT抗体是CPA.9.086。
在一些实施例中，本发明提供一种方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)PVRIG蛋白；ii)PD-1蛋白；iii)PVRL2蛋白；iv)TIGIT蛋白；v)PVR蛋白；和vi)i)-v)中的抗体的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于PVRIG、PVRL2、TIGIT和PVR中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果对于所有5种受体，阳性细胞百分比>1％，那么e)向所述患者施用针对PVRIG和TIGIT的抗体。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自本文所述的任何抗TIGIT抗体的抗体，包括图3中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是选自本文所述的任何抗PVRIG抗体的抗体，包括图5和/或图63中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是选自本文所述的任何抗PD-1抗体的抗体，包括图7中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PD-L1抗体是选自本文所述的任何抗PD-L1抗体的抗体，包括图62中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)。
在一些实施例中，TIGIT抗体是CPA9.086。
在一些实施例中，PD-1抗体选自帕博利珠单抗和纳武单抗。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗患者的癌症的方法，其包含：a)提供来自所述患者的活检，其包含肿瘤细胞；b)测量所述活检中的PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的频率；c)如果与用所用抗体的相关同型对照抗体染色相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的所述频率高于1％，那么施用包含抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-L1抗体的三联组合疗法；和d)如果与用所用所述抗体的相关同型对照抗体染色相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的所述频率低于1％，那么施用包含抗TIGIT抗体和抗PVRIG抗体的双联组合疗法。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自本文所述的任何抗TIGIT抗体的抗体，包括图3中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是选自本文所述的任何抗PVRIG抗体的抗体，包括图5和/或图63中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PD-1抗体是选自本文所述的任何抗PD-L1抗体的抗体，包括图62中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是选自CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
58.根据权利要求52至57中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体是选自阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)和度伐单抗(durvalumab)中的至少一种的抗体。
在一些实施例中，双联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
在一些实施例中，三联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
在一些实施例中，所述抗体同时施用。
在一些实施例中，所述抗体依序施用。
在一些实施例中，所述癌症选自由以下组成的群组：前列腺癌、肝癌(HCC)、结直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、尿路上皮癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、食道癌、默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
在一些实施例中，所述癌症选自由以下组成的群组：三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)和默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
在一些实施例中，本发明提供一种治疗患者的癌症的方法，所述方法包含施用三联组合疗法，其包含抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-L1抗体。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是选自CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
在一些实施例中，抗PD-L1抗体是选自阿特珠单抗、阿维鲁单抗和度伐单抗的抗体。
在一些实施例中，三联组合疗法包含施用抗PD-L1抗体与施用选自以下的双联组合疗法组合：CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
在一些实施例中，三联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
在一些实施例中，所述抗体同时施用。
在一些实施例中，所述抗体依序施用。
在一些实施例中，所述癌症选自由以下组成的群组：前列腺癌、肝癌(HCC)、结直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、尿路上皮癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、食道癌、默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
在一些实施例中，所述癌症选自由以下组成的群组：三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)和默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
附图说明
图1A-1B描绘人类IgG1(具有一些有用的氨基酸取代)、IgG2、IgG3、IgG4、具有可用于本发明中的特定用途的铰链变体的IgG4的恒定结构域以及κ和λ轻链的恒定结构域的氨基酸序列。
图2描绘人类和食蟹猕猴(称为食蟹猴)TIGIT、PVRIG和PD-1蛋白的序列。
图3A-3SSSS描绘嵌段TIGIT和PVR、CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P)以及基准抗体BM26和BM29.和多种其它抗TIGIT抗体的相互作用的四种抗TIGIT抗体的序列。
图4A-4C展示抗TIGIT抗体(CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P)以及结合于过表达人类(A)、食蟹猕猴(B)和小鼠(C)TIGIT的Expi293 HEK细胞的基准抗体BM26和BM29的FACS KD结果。
图5A-5F描绘两种抗PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)的序列。图63中提供了其它PVRIG抗体。
图6展示通过流式细胞术将CHA.7.518.1.H4(S241P)与PVRIG的结合。(A)与过表达PVRIG的HEK293细胞的结合。CHA.7.518.1.H4(S241P)结合过表达人类和食蟹猕猴PVRIG的HEK293细胞，但不结合过表达小鼠PVRIG的或亲本HEK293细胞。(A)CHA.7.518.1.H4(S241P)与Jurkat细胞的结合。观察到CHA.7.518.1.H4(S241P)的特异性结合，但观察不到不相关同型对照抗体的特异性结合。表中列出结合于细胞中表达的靶的CHA.7.518.1.H4(S241P)的解离常数(KD)。
图7A-7F描绘两个抗PD-1抗体的序列。
图8展示如实例1的实验中描述，CMVpp65反应性T细胞上的PVRIG、TIGIT、PD1的表达。(A)用于检测四聚体染色的CMV-CTL的圈选策略。展示三个供体中的圈选层次和四聚体阳性细胞。淋巴细胞在FS/SS象限中(左上)中圈选，然后选择单峰，接着去除CD14-CD19-CD56-细胞，接着去除CD3+CD8+阳性细胞。在CD3+CD8+阳性群体中，结合每个四聚体的细胞百分比由单个供体确定。展示使用HLA-A*02:01 CMV四聚体的染色结果。(B)展示从3个供体扩增的CMVpp65反应性T细胞上的PVRIG、TIGIT和PD-1的表达。
图9展示如实例1的实验中描述，CD8+CMV+ T细胞上的PVRIG、TIGIT和PD-1表达的动力学。(A)展示用IL-2、IL-7和CMV pp65肽刺激0、72、144、216和288小时后，CD8 T细胞的pp65四聚体阳性百分比。在刺激后的不同时间点CMVpp65反应性CD8 T细胞上的(B)TIGIT、(C)CHA.7.518.1.H4(S241P)、(D)PD-1表达。(n＝3)
图10展示如实例1的实验中描述，通过流式细胞术评估Colo205和Panc.04.05细胞上的PVRL2、PVR、PDL1和HLA-A2的表达。右上角的数字表示与同型对照抗体相比，肿瘤细胞系上表达的配体(PVRL2、PVR、PDL1)或HLA-A2的百分比。
图11A-11D展示如实例1的实验中描述，与癌细胞系共培养的CMVpp65反应性CD8 T细胞的抑制受体阻断的作用。在10ug/ml CHA.7.518.1.H4(S241P)、抗TIGIT、抗PD-1或同型对照单独或以组合存在下，2个供体(供体4和供体156)的CMVpp65反应性T细胞与0.03ug/ml负载CMVpp65肽的Panc.04.05或Colo205共培养24小时。(A)CHA.7.518.1.H4(S241P)、抗TIGIT或抗PD1抗体单独、以双联组合或以三联组合进行测试。(B)CHA.7.518.1.H4(S241P)和抗TIGIT抗体单独或以组合进行测试。(C)CHA.7.518.1.H4(S241P)和抗PD1抗体单独或以组合进行测试。(D)抗TIGIT和抗PD1抗体单独或以组合进行测试。分析条件培养基的细胞因子分泌。条形图展示IFN-γ的平均值+标准差，每个点代表技术重复。数据代表n>2个实验。
图12展示如在实例2的实验中描述，来自解离肿瘤的细胞上的PVRIG的表达。(A)根据病理报告所定义的肿瘤类型将样品分组。对于每个样品，PVRIG的表达展示于CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、CD4-CD8- T细胞和NK细胞上。列中的每个点代表单个样品。MFIr值大于1的样品表示检测到PVRIG的表达。中值由中线描绘，并且上和下四分位数由中线上方和下方的灰色空间描绘。(B)在所有检查的肿瘤样品中，展示CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、CD4-CD8- T细胞和NK细胞上的PVRIG的表达。中值由中线描绘，并且上和下四分位数由中线上方和下方的浅灰色和深灰色空间描绘。晶须描绘了四分位间距的1.5倍。(C)展示与同型对照(红色)相比，与肺和肾肿瘤分离的4个细胞亚组的PVRIG(蓝色)的代表性FACS直方图。
图13展示在来自解离的子宫内膜肿瘤的CD4+和CD8+ T细胞上的PD1、TIGIT和PVRIG表达的相关性分析，如在实例2的实验中所述。对于每个子宫内膜样品，计算CD4和CD8T细胞上PVRIG、PD1和TIGIT的MFIr。进行了斯皮尔曼相关性分析(Spearman's correlationanalysis)，并且报告了r2和p值。
图14展示来自解离的肺癌和肾癌样品的CD8+ T细胞上PD1、TIGIT和PVRIG表达的共表达分析，如在实例2的实验中所述。
图15展示来自解离肿瘤的T细胞上的PVRIG表达与匹配NAT的比较，如在实例2的实验中所述。(A)评定来自结肠/胃/直肠、子宫内膜/子宫、肾、肺和卵巢肿瘤的匹配的肿瘤和正常邻近组织在CD4和CD8 T细胞上的PVRIG表达。每行代表一个匹配的供体。对所有样品进行配对的学生t检验，比较NAT与PVRIG在CD4和CD8 T细胞上的肿瘤表达。(B)绘制了针对CD4和CD8 T细胞的PVRIG倍数变化(NAT对肿瘤中)对比PD1倍数变化。进行了斯皮尔曼相关性分析，并且展示r值和p值。
图16展示PVRL2在来自所有解离肿瘤样品的免疫和非免疫亚组上的表达，如在实例2的实验中所述。展示PVRL2在源自肿瘤的各种细胞亚组上的表达。MFIr值大于1表示检测到PVRL2表达。中值由中线表示，并且上下四分位数由中线上方和下方的浅灰色和深灰色空间表示。晶须描绘了四分位间距的1.5倍。
图17展示PVRL2在来自解离的肿瘤非免疫亚组上的表达，如在实例2的实验中所述。根据病理报告定义的肿瘤类型将样品分组。对于每个样品，在CD45-非免疫细胞上显示PVRL2的表达。每个点代表单个样品。中值由中线表示，并且上下四分位数由中线上方和下方的灰色空间表示。
图18展示PVRL2在来自离解肿瘤的骨髓细胞亚组上的表达，如实例2的实验中所述。根据病理报告定义的肿瘤类型将样品分组。对于每个样品，PVRL2的表达在包括单核细胞、mDC和pDC群体的骨髓细胞上显示。每个点代表单个样品。中值由中线表示，并且上下四分位数由中线上方和下方的灰色空间表示。
图19显示在来自解离的肿瘤单核细胞和CD45-的肿瘤细胞和匹配NAT的PVRL2表达的比较，如在实施例2的实验中说明。(A)评定来自结肠/胃/直肠、子宫内膜/子宫、肾、肺和卵巢肿瘤的匹配的肿瘤和正常邻近组织在CD45-细胞和单核细胞上的PVRL2表达。每行代表一个匹配的供体。在所有样品上进行了配对的学生t检验，比较了CD45细胞和单核细胞上PVRL2的NAT和肿瘤表达。(B)对于CD45-细胞和单核细胞，绘制PVRL2倍数变化(NAT对比肿瘤中)对PD-L1倍数变化。进行了斯皮尔曼相关性分析，并且展示r值和p值。
图20描绘T细胞上的PVRIG与单核细胞上的PVRL2和肿瘤组织中的CD45-细胞的共表达，如实例2的实验所述。从同一样品中，绘制了CD8 T细胞上的PVRIG和单核细胞或CD45-细胞上的PVRL2的表达。将肿瘤类型分组，每个点代表一个单独的肿瘤。以MFIr值为2绘制参考线。
图21A-21B描述了PVRL2和PD-L1在结肠癌、皮肤癌和乳腺癌中的表达，如实例3的实验中所述。
图22描绘了PVRL2在PD-L1阴性和PD-L1阳性肿瘤中的表达，如实例3的实验中所述。根据PD-L1染色，将肿瘤分为PD-L1阴性(在每个肿瘤的两个重复核心中均未观察到PD-L1染色)或PD-L1阳性(在每个肿瘤的两个重复的核心中均观察到正染色)。A)分析并且显示每种癌症类型的PVRL2表达。B)在PD-L1阴性肿瘤中，展示每种癌症类型的PVRL2表达样品(PVRL2部分阳性或更多/总样品)的数量。
图23展示PVRL2和PD-L1在肿瘤的侵袭前沿的表达，如实例3的实验中所述。A.在这个肿瘤样品中，PVRL2在侵袭前沿的免疫细胞和肿瘤细胞上都表达，如蓝线和红线所示。B)在这一肿瘤样品中，PD-L1在免疫区室中表达。
图24展示CT26肿瘤模型中单、双联和三联抗体治疗的抗肿瘤反应，如实例4的实验中所述。向各组10-15个Balb/c小鼠皮下注射5x105个CT26细胞。与指定的抗体组合接种后第7天开始，小鼠每周2次治疗3周。A)每周2次测量所有测试组的肿瘤体积，包括阳性对照组(抗PDL-1+抗CTLA-4抗体)。三联组合组的TGI和p值与表中所示的指示组相比。。B)分配的组的存活比例。C)蜘蛛图显示个体对治疗组的反应，而PR表示部分反应者的肿瘤大小不超过1000mm3。图25描述了PVRIG和PVRL2以及PD-L1在各种人类肿瘤中的表达谱，如实例2和3的实验所述。
图26描绘了关于在TIGIT-/-小鼠中使用抗PVRIG抗体或在野生型Balb/c小鼠中使用抗PVRIG抗体和抗PD-1抗体的组合以减少同源肿瘤生长的体内数据，在实例4的实验中所述。
图27.PVRIG在人类癌症的细胞毒性淋巴细胞亚组中表达最高。A)展示PVRIG在5-8个健康供体PBMC的白细胞细胞亚组上的表达。PVRIG表达定义为PVRIG MFI相对于同型对照MFI的比率。B)展示与来自5个健康供体PBMC的CD8 T细胞亚组相比，外周血Treg上PVRIG、TIGIT、CD96和PD-1的表达。C)来自3个健康供体的CMV pp65特异性T细胞在体外用pp65(495-503)肽、IL-2和IL-7扩增长达7天。展示TIGIT(蓝色)和PVRIG(黑色)在HLA-A2/pp65(495-503)四聚体阳性细胞上的表达。D)用同种异体DC培养人类T细胞，并在活化后第0天、第1天、第2天和第7天显示CD4+ T细胞上TIGIT和PVRIG的表达。E)显示来自代表性肺癌和肾癌的TILS(CD4T细胞、CD8 T细胞和NK细胞)上与同型对照(红色)相比的PVRIG(蓝色)表达的代表性FACS图。F)展示PVRIG、TIGIT和PD-1在来自肺癌样品的CD4和CD8 TILS上的共表达。G)展示PVRIG在来自各种癌症类型的解离的人肿瘤的CD8+和CD4+ TILS上的表达。每个点代表来自个别患者的不同肿瘤。H)评定来自子宫内膜、肾和肺肿瘤的CD8 TIL与Treg TILS上PVRIG、TIGIT和PD-1的相对表达。对于每个肿瘤，将CD8 TILS上的倍数表达标准化为在TregTILS上的倍数表达并绘图。对于A、B、C、G和H，误差条表示平均值±SEM。
图28A-图28F.PVRL2表达在肿瘤微环境中增强。A)通过IHC评定肺、卵巢/子宫内膜、乳房、结肠和肾肿瘤的PVRL2表达。对于每个肿瘤，由2位独立的观察员评定2个核心。每个描述符的代表性染色在图B)中示出。示出展示肿瘤细胞上和基质中的免疫细胞中的PVRL2表达的代表性黑素瘤肿瘤。C)通过CD45-、CD14+ TAM和CD14-CD33hi mDC细胞亚组上的FACS检查来自解离的肿瘤的PVRL2表达。显示每种癌症类型的平均值±SEM。D)显示关于肺癌的PVRL2表达(蓝色)与IgG(红色)相比的代表性FACS图。E)对于我们能够评定PVRIG和PVRL2表达的肿瘤样品，将CD8 T细胞上的PVRIG表达相对于每个肿瘤的CD14+ TAMS上的PVRL2表达作图。每个点代表单个肿瘤样品。与IgG相比，红线代表PVRIG或PVRL2的2倍表达。
图29.PVRL2和PD-L1对肿瘤细胞的不同调节。A)通过IHC在连续切片上评定PD-L1和PVRL2的表达。展示PD-L1阴性(左)和PD-L1阳性(肿瘤)上PVRL2的表达。PD-L1阴性肿瘤定义为在给定肿瘤的重复核心上未观察到染色。PD-L1阳性染色定义为在给定肿瘤的两个重复核心上至少部分阳性。表中展示来自PD-L1阳性和PD-L1阴性的PVRL2阳性肿瘤的数量(阳性/总计)。B，C)PVRL2+PD-L1-子宫内膜(B)肿瘤和PVRL2+PD-L1-肺(C)肿瘤的代表性表达。D)用指定的刺激物培养未成熟的BM-DC，并在培养的第2天通过FACS评定PVR、PVRL2和PD-L1表达。对于每种条件，将表达相对于仅培养基对照条件标准化。E)展示仅用IFN-γ或培养基处理的HT-29细胞上PVR、PVRL2和PD-L1的表达。PD-L1或PVRL2以蓝色显示，IgG同型对照以红色显示。
图30.CHA.7.518.1.H4(S241P)是一种增强T细胞活化的高亲和力抗体。A)通过FACS显示CHA.7.518.1.H4(S241P)或IgG同型对照与HEK293 PVRIG或HEK293亲本细胞的结合。显示CHA.7.518.1.H4(S241P)与HEK293 hPVRIG、HEK293 cPVRIG和Jurkat细胞结合的FACS KD值。B)CHA.7.518.1.H4(S241P)破坏PVRL2 Fc与异位表达PVRIG的HEK293细胞的结合。显示一式三份值的平均值±标准差。C)CHA.7.518.1.H4(S241P)阻断PVRIG Fc与内源性表达PVRL2的HEK293细胞的结合。D)人类CD4 T细胞与表达细胞表面结合的抗CD3抗体和hPVRL2的aAPC CHO细胞在10μg/ml抗PVRIG抗体和人类IgG同型对照抗体存在下共培养。展示抗PVRIG Ab对从11个不同供体分离的CD4 T细胞增殖的影响。条形图描绘了平均值±SEM。E)gp100特异性T细胞系(TIL-209、TIL-463)与经过工程改造以表达HLA-A2和PVRL2的CHO细胞连同10μg/ml抗PVRIG或IgG同型对照抗体共培养。在共培养后24小时测试IFN-γ和TNF-α的产生。显示一式三份值的平均值±标准差。相对于同型对照的每种条件下IFN-γ和TNF-α的百分比变化由每个条上方的数字表示。F)展示在MEL624、Colo205和Panc.05.04细胞上相对于IgG(蓝色)的PVR、PVRL2和PD-L1(红色)的表达。对于T细胞，显示TIL-209和TIL-463gp100特异性T细胞上以及CMVpp65特异性T细胞上PVRIG、TIGIT和PD-1(红色)相对于IgG(蓝色)的表达。为了扩增CMVpp65反应性T细胞，将PBMC与pp65(495-503)肽、IL-2和IL-7一起培养10天。PVRIG、TIGIT、PD-1的表达显示在HLA-A2/pp65四聚体阳性细胞上。G)由来源于黑素瘤肿瘤的TILS扩增的gp100特异性T细胞(TIL-209、TIL-463)与MEL624细胞在10μg/ml指定抗体存在下共培养。在24小时测定条件培养基中的IFN-γ浓度。H，I)将扩增的CMVpp65特异性T细胞与10μg/ml Colo205和Panc.05.04细胞、CMVpp65肽和指定抗体共培养。在24小时测定条件培养基中的IFN-γ浓度。对于E、G、H、I，显示一式三份的平均值±标准差。相对于同型对照的每种条件下IFN-γ的百分比变化由每个条上方的数字表示。
图31.PVRIG缺陷小鼠具有增加的T细胞功能。A)评定通过qRT-PCR从纯化的小鼠免疫细胞亚组测量的PVRIG的RNA表达。管家的相对表达由ΔCt法确定。B)用gp100(25-33)活化pmel CD8+ TCR转基因T细胞，并在指定的时间点通过qRT-PCR评定PVRIG和TIGIT RNA转录物水平。图表显示来自5个不同实验的结果的平均值±SEM。C)从PVRIG-/-和WT同窝仔畜收获脾，并通过流式细胞术分析PVRIG在NK、CD4+和CD8+ T细胞(“静息”细胞)上的表达。另外，从脾细胞分离CD3+ T细胞，并用抗CD3/抗CD28珠活化11天。活化后，通过流式细胞术分析CD4+和CD8+ T细胞(“活化”细胞)上的PVRIG表达。每个点代表来自单个小鼠的细胞。D)WT和PVRIG-/-源性脾细胞用Cell Proliferation Dye eFluor450标记，并在对照-Fc(小鼠IgG2a)或小鼠PVRL2 Fc存在下培养。培养4天后，通过流式细胞术分析细胞分裂。给出了来自实验的代表性FACS图(左)和3个独立实验的PVRL2 Fc的抑制百分比概述(定义为％增殖对照-Fc从％增殖PVRL2 Fc中减去)(右)。*表示WT对比PVRIG-/- T细胞中在PVRL2-FC存在下的增殖相对于在蛋白质对照存在下的增殖变化的配对学生t检验的p值<0.05。E)来源于pmel PVRIG-/-或pmel PVRIG WT小鼠的pmel CD8+ T细胞用其同源肽和IL2活化11天。然后将活化的pmel CD8+细胞与B16-Db/gp100细胞共培养18小时，并在共培养后评估CD107表达和细胞因子产生。如每个配对点所示，呈现四个独立实验。*表示比较PVRIG-/-与WT的学生t检验的p值<0.05。
图32.PVRIG缺乏导致肿瘤生长减少和CD8效应T细胞机制增加。(A)向C57BL/6WT或PVRIG-/-小鼠皮下注射5×105个MC38细胞。每周2次测量肿瘤体积。*表示WT小鼠与PVRIG-/-小鼠(ANOVA)的p值<0.05。(B)显示个体肿瘤生长曲线。显示所进行的2个实验中的一个代表性实验。(C)向C57BL/6WT或PVRIG-/-小鼠皮下注射5×105个MC38细胞。在接种后14天，用抗PD-L1治疗小鼠，每周2次，持续2周。每周2次测量肿瘤体积。都用抗PD-L1治疗的WT小鼠对比PVRIG-/-小鼠，p值＝0.052。(D)显示个体肿瘤生长曲线。显示所进行的2个实验中的一个代表性实验。(E)显示在第18天来自4个治疗组的引流肿瘤的淋巴结中CD8+IFN-γ+ TNF-α+效应细胞的频率。(F)展示在第18天每mg肿瘤组织的CD8+IFN-γ+ TNF-α+效应细胞的总数。(GH)相对于TIL的总TILS评分和细胞毒性T细胞评分，源自对小鼠泛癌免疫密码集面板(Nanostring Technologies，Seattle，WA)进行的nSolver 3.0先进分析，所述CD45+富含来自MC38第18天TIL的富集细胞来自每只野生型和PVRIG缺陷小鼠的2个治疗组。
图33.拮抗性抗PVRIG抗体协同抑制PD-1抑制剂或TIGIT遗传缺陷组合中生长的肿瘤。A)显示mPVRL2 Fc融合蛋白与mPVRIG HEK293工程细胞的结合，所述mPVRIG HEK293工程细胞与连续稀释的抗mPVRIG mAb或IgG同型对照Ab预孵育。B)向BALB/c小鼠皮下注射5×105个CT26细胞。在接种后第14天，处死小鼠并收获脾、引流淋巴结和肿瘤。通过流式细胞术分析细胞有关PVRIG在CD3+CD4+ T细胞、CD3+CD8+ T细胞、CD3-CD49b+NK细胞、CD11b+Gr-1+骨髓衍生的抑制细胞(MDSC)和CD11b+F4/80+巨噬细胞上的表达。C，D)向BALB/c小鼠皮下注射5×105个CT26细胞。在接种后第7天，用抗PD-L1和/或抗PVRIG Ab处理小鼠，每周2次，持续3周(箭头指示Ab处理)。C)显示肿瘤体积。***表示与抗PD-L1+aPVRIG治疗组相比，抗PD-L1+大鼠IgG2b的p值＜0.001(ANOVA)。箭头表示何时给药抗体。D.完全反应者小鼠的存活率分析。*表示与抗PD-L1+抗PVRIG处理组相比，抗PD-L1+大鼠IgG2b的p值<0.05(对数秩检验)。显示3项研究中的一项代表性研究。向C57BL/6或TIGIT-/-小鼠皮下注射1×105个B16/Db-hmgp100细胞。从接种当天(第0天)开始，用指定的mAb每周处理小鼠2次，持续3周。每周测量肿瘤体积2次，显示平均值±SEM。在指定天测量的肿瘤生长抑制与对照WT+mIgG1同型对照相比。***表示与WT+mIgG1同型对照相比，TIGIT-/-+aPVRIG的p值<0.001。箭头表示何时给药抗体。F.显示每只小鼠的个体肿瘤生长曲线。显示所进行的2个实验中的一个代表性实验。
图34.PVRIG在人类癌症中TILS的T细胞和NK细胞上表达。A)显示PVRIG、TIGIT、CD96和PD-1在来自健康供体PBMC的CD4 T细胞亚组上的表达。显示平均值±SEM。B)将人类T细胞与同种异体PBMC共培养，并显示PVRIG蛋白在CD4和CD8 T细胞上的表达(上图)。C)解离肿瘤并用抗CD3和抗CD28活化单细胞。在第0天(直接离体)和活化后第5天评定PVRIG(蓝色)相对于IgG同型对照(红色)的表达。D)显示PVRIG在来自解离的人肿瘤的NK细胞上的表达。每个点代表来自个别患者的不同肿瘤。显示平均值±95％置信区间。D)解离的肿瘤细胞用抗CD3和抗CD28珠活化5天。对于2个解离的肿瘤样品，显示在第0天直接离体和在活化后第5天PVRIG(蓝色)相对于IgG对照(红色)在CD4和CD8 T细胞上的表达。E)评定PVRIG在来自解离的肿瘤和来自解离的供体匹配的正常邻近组织的CD4和CD8 T细胞上的表达。每条线代表从个别患者获得的匹配组织。进行了配对的学生t检验。F)显示在来自肿瘤的CD4和CD8 T细胞上PVRIG、TIGIT和PD-1相对于IgG同型对照的倍数表达量级的相关性分析。每个点代表单个肿瘤样品。展示斯皮尔曼相关系数和p值。
图35.PVRL2的表达在结肠癌、皮肤癌和乳腺癌中得到增强。A)显示Sigma抗人类PVRL2抗体与阳性细胞CHO-S人类PVRL2(右)的FFPE切片的结合与在pH9下抗原修复后的阴性细胞CHO-S(左)相比的显微照片。B)在一组PVRL2+(HT29、MCF7、PC3、PANC1、RT4、NCI-H1573)和PVRL2-(Jurkat、OPM2、Daudi、CA46)细胞系上测试抗PVRL2抗体。C-F)PVRL2在肺正常组织和癌组织中的实例表达。C)正常组织显示无染色。D)肺腺癌显示部分阳性染色。E)肺腺癌显示阳性染色。F)肺腺癌显示强阳性染色。
图36.与正常邻近组织相比，肿瘤中TAM和CD45-细胞上的PVRL2上调。显示PVRL2在来自供体匹配的肿瘤和正常邻近组织的CD45-细胞和TAM上的表达。显示配对学生t检验的p值。
图37.PVRIG和PVRL2在相同的肿瘤样品中共表达。对于单个肿瘤，将CD4 T细胞(A)和NK细胞(B)上的PVRIG表达针对TAMS上的PVRL2表达作图。
图38.CHA.7.518.1.H4(S241P)对人类T细胞的活性。A)PVRIG在用表达细胞表面结合的抗CD3和PVRL2的CHO细胞活化的CD4 T细胞上的表达。B)显示HLA-A2、B-2m和PVRL2在CHO-S亲本细胞系和经过工程改造的CHO-S细胞系上的表达。相对于同型的表达倍数由数字表示。C)异位表达细胞表面结合的抗CD3和PVRL2的CHO细胞与纯化的CD8 T细胞在不同浓度的抗PVRIG Ab或相关IgG对照存在下共培养。显示％增殖。每个点代表一式三份值的平均值。D)异位表达HLA-A2/B2m和PVRL2的CHO细胞与2个gp100特异性T细胞系(TIL F4、TIL209)在1μg/ml gp100和不同浓度的抗PVRIG抗体或相关IgG对照存在下共培养。TNF-α浓度在共培养的第3天下降。每个值代表一式三份的平均值。
图39.mPVRIG结合相互作用和替代抗mPVRIG抗体的表征。A，B)通过表面等离子共振评定mPVRIG与mPVRL2的结合。C)可溶性受体Fc或对照蛋白在剂量反应中与固定化的mPVRL2 HIS以ELISA形式孵育。展示结合的受体Fc。D)可溶性PVRL2 HIS蛋白在剂量反应中用PVRIG Fc或Fc涂布板孵育。E)显示mPVRIG Fc或对照Fc融合蛋白与用mPVRL2 siRNA、mPVRsRNA或乱序siRNA转染转染的B16-F10细胞系的结合。F)通过检查抗mPVRIG与过表达mPVRIG的HEK293细胞的结合来进行大鼠抗小鼠PVRIG mAb的亲和力表征。G)显示通过检查抗mPVRIG与内源性表达mPVRIG的D10.G4.1细胞系相对于同型对照大鼠IgG来进行大鼠抗小鼠PVRIG mAb的亲和力表征。H)抗mPVRIG与用小鼠PVRIG-siRNA(绿色直方图)相对于scrsiRNA(橙色直方图)转染的D10.G4.1细胞的结合。I)用抗mPVRIG Ab预孵育的mPVRIG Fc与内源性表达PVRL2的B16-F10细胞的结合。
图40.转基因PVRIG和TIGIT敲除小鼠的产生。PVRIG条件性敲除和Tigit敲除小鼠品系由Ozgene Pty Ltd(Bentley WA，Australia)生成。A)将PVRIG外显子1至4条件性敲除的靶向构建体电穿孔至C57BL/6ES细胞系Bruce4中(Koentgen等人,《国际免疫学(IntImmunol)》5:957-964、1993)。B)将Tigit外显子1(包括ATG)以及外显子2和3的编码区用FRT侧翼的neo盒置换的靶向构建体电穿孔至C57BL/6ES细胞系Bruce4中。通过Southern杂交鉴定同源重组ES细胞克隆并且将其注射至goGermline胚泡中(Koentgen等人,《起源(genesis)》54:326-333、2016)。获得雄性嵌合小鼠并与C57BL/6J雌性杂交以在C57BL/6背景上建立杂合生殖系后代。将生殖系小鼠与普遍存在的FLP C57BL/6小鼠品系杂交以除去FRT侧翼选择标记盒并产生条件性或敲除等位基因(分别用于PVRIG和Tigit)。对于PVRIG敲除，将小鼠进一步与普遍存在的Cre C57BL/6小鼠品系杂交以除去loxP侧翼外显子并产生敲除等位基因。
图41.PVRIG敲除小鼠与野生型小鼠的免疫表型相似。在静脉血收集在抗凝血剂涂布的试管中并且收获器官之前，对小鼠(每个野生型和PVRIG敲除群组n＝5)实施安乐死。从新收获的骨髓、胸腺、脾、皮肤和肠系膜淋巴结中回收单细胞。细胞用荧光染料缀合的表面标志物抗体染色并在BD LSR Fortessa流式细胞仪上获得。各图展示各种淋巴组织类型中骨髓细胞(A)、树突状细胞(B)、B细胞(C)、T细胞(D)、CD4 T细胞(E)、CD8 T细胞(F)和NK细胞(G)的可比频率。(H-I)在Hemavet 950兽医血液学系统上运行全静脉血，以比较来自野生型和PVRIG缺陷小鼠的血细胞亚组的差异计数和频率。
图42.与用抗PD-L1处理的WT相比，用抗PDL1处理的PVRIG-/-小鼠的T细胞效应功能增加。将MC38肿瘤接种至WT或PVRIG-/-小鼠中，随后用抗PD-L1或大鼠IgG2b同型对照处理。在第18天，从肿瘤中纯化CD45+肿瘤浸润淋巴细胞，提取RNA并进行转录谱分析。展示数种T细胞相关基因，每个点代表单个小鼠。展示学生t检验的p值。
图43.抗TIGIT和抗PVRIG抗体诱导肿瘤细胞杀伤。利用扩增的人类CMV特异性CD8+T细胞的体外共培养分析来评定基准抗TIGIT抗体和CHA.7.518.1.H4(S241P)对抗原特异性肿瘤细胞杀伤的影响。用于分析的HLA-A2+靶细胞系是Mel624(A)和Panc05.04(B)。SynagishIgG4是同型对照抗体。用Bio-Glo荧光素酶底物测量靶细胞中的荧光素酶活性。代表性数据(n≥2)显示与来自三个不同供体的人类CMV特异性CD8+ T细胞共培养16小时后Mel624或Panc05.04细胞的特异性杀伤百分比(平均值+/-标准差)。
图44.抗TIGIT抗体与CHA.7.518.1.H4(S241P)的剂量依赖性肿瘤细胞杀伤。用人类CMV特异性CD8+ T细胞进行体外共培养分析，用于评定两种不同抗TIGIT抗体BM26和CPA.9.086与CHA.7.518.1.H4(S241P)组合时对抗原特异性Mel624细胞杀伤的影响。用Bio-Glo荧光素酶底物测量靶细胞中的荧光素酶活性。代表性数据(n≥2)显示与来自一个供体的人类CMV特异性CD8+ T细胞共培养16小时后Mel624细胞的特异性杀伤百分比(平均值+/-标准差)。
图45.CPA.9.086CDR序列，IMGT和Kabat编号。
图46.抗TIGIT hIgG4+CHA.7.518.1.H4(S241P)组合诱导肿瘤细胞杀伤。CMV反应性CD8+ T细胞与Mel624 PVR、PVRL2和荧光素酶OE单剂量10μg/ml aTIGIT Ab和10μg/mlCHA.7.518.1.H4(S241P)与CMV反应性供体4共培养，而剂量滴定开始于0.5μg/ml aTIGITAb和10μg/ml CHA.7.518.1.H4(S241P)与CMV反应性供体156。
图47当与抗PD-1抗体组合使用时，抗TIGIT抗体会增强IFN-γ。利用与人类CMV特异性CD8+ T细胞进行的体外共培养测定来评定CPA.9.086与基准抗体BM26和BM29相比与抗PD-1抗体帕博利珠单抗组合对抗原特异性细胞因子分泌的影响。分析中所用的靶细胞系是内源性表达人类PVR和PD-L1的HLA-A2+胰腺癌细胞Panc.05.04。将Panc.05.04细胞用CMVpp65肽以0.01μg/ml在37℃下脉冲1小时。然后洗涤细胞并且以50,000个细胞/孔铺在96孔圆底组织培养物处理的平板中。抗人类TIGIT抗体或同型对照hIgG4抗体(抗Synagis)以0.1μg/ml的浓度与10μg/ml的抗PD-1抗体(阴影条)或对照hIgG4同型抗体(实心条)组合添加。根据上述方案扩增来自单个供体的人类CMV特异性CD8+ T细胞。每孔加入50,000个人类CD8+ T细胞。将共培养物在37℃，5％CO2下孵育24小时。使用细胞计数珠分析(BDBiosciences)通过流式细胞术测量共培养物上清液中人类IFNγ的量。
图48描绘了PVRIG/TIGIT轴在肿瘤中的表达谱；PVRIG-PVRL2和TIGIT-PVR途径的肺癌和子宫内膜癌高发。(A，B)通过FACS分析来自分离的人肿瘤的CD4+和CD8+ T细胞上的PVRIG和TIGIT表达。通过将PVRIG或TIGIT的MFI除以IgG对照的MFI来计算折叠表达。灰线＝未检测到表达式。每个橙色点是不同的肿瘤样品，蓝色条形表示样品的中位数。C，D)CD8+ T细胞上对比CD45 PVR细胞或TIGIT对CD8+ T细胞对比PVRL2上CD45 PVRIG的表达的细胞是从解离的肿瘤绘制。每个点代表单个肿瘤样品。
图49描绘了CD8 T细胞上PD-1，PVRIG和TIGIT的表达数据，其显示PVRIG+ TIGIT+PD-1+CD8+ TIL非常普遍并且具有穷尽的特征。A)对来自人类癌症的TILS进行CD8 T细胞上PD1，PVRIG和TIGIT表达的染色。通过布尔圈选确定在CD8+ T细胞上表达PD-1，PVRIG或TIGIT组合的细胞百分比。B)展示来自肺肿瘤的CD4+和CD8+ T细胞上的代表性PD-1，PVRIG和TIGIT表达。C)对来自人类癌症的TILS进行CD8+ T细胞上的细胞表面PD1，PVRIG和TIGIT染色，进行透化，并对Eomes和T-bet进行染色。在每个细胞亚组中，展示Eomes+T-bet-细胞的百分比。进行了配对的学生t检验，并且展示p值。D)展示代表性的FACS图，其展示来自卵巢和膀胱肿瘤的PD-1，PVRIG或TIGIT表达CD8 T细胞上的Eomes和T-bet表达。E)确定基于PD-1，PVRIG和TIGIT表达的表达Eomes+T-bet-细胞的百分比。因此，PVRIG表达与Eomes+T-bet-转录因子表达相关，Eomes+T-bet-转录因子表达是已知与T细胞耗竭有关的表型。三重阳性PVRIG+TIGIT+PD-1+细胞的Eomes+T-bet-细胞百分比也很高。
图50展示PVRL2在癌症诱导的并在PD-L1表达-肿瘤。A)通过IHC评定肺、卵巢/子宫内膜、乳腺、结肠、肾和黑素瘤肿瘤的PVRL2表达。条形图描绘了平均值±SEM。对于每个肿瘤，由病理学家评定2个核心，并基于补充方法中描述的肿瘤细胞上膜染色的盛行率和强度进行评分。对于每个肿瘤，显示2个核心的平均评分。B)通过IHC在连续切片上评定PD-L1和PVRL2的表达。基于组织类型对肿瘤进行分组，并且显示PD-L1阴性和PD-L1阳性的PVRL2的表达。PD-L1阴性肿瘤定义为对于给定肿瘤，来自任一一式两份核心的肿瘤或免疫细胞上没有膜染色。PD-L1阳性染色定义为肿瘤的至少1个核心上的膜染色。条形图描绘了每组的平均值±SEM。C)PVRL2+PD-L1-子宫内膜(B)肿瘤和PVRL2+PD-L1-肺(C)肿瘤的代表性表达。
图51显示抗PVRIG/TIGIT/PD-1协同增加T细胞功能。(A)将CMVpp65 CD8 T细胞染色以进行TIGIT/PD-1/PVRIG表达，并对肿瘤细胞系进行PD-L1，HLA-A2，PVR和PVRL2染色。展示代表性的FAC直方图。B)将CMVpp65特异性T细胞与Panc0504和Colo205细胞，CMVpp65肽和所示抗体以10μg/ml共培养。在18小时测定条件培养基中的IFN-γ浓度。柱状图上方的百分比是同型IgG的IFN-γ分泌增加的百分比。
图52显示，PVRIG-PVRL2相互作用的阻断诱导PD-1和TIGIT表达。将来自1-2个供体的CMVpp65特异性T细胞与Panc0504，CMVpp65肽和所示抗体以10ug/ml共培养18小时。然后对细胞进行FAC染色，并显示每种治疗条件下细胞PD-1，TIGIT和LAG3的百分比。展示每种受体的代表性直方图。红色＝同型，蓝色＝目标表达。A)通过CHA7.518.1.H4(S241P)或抗PD1处理诱导TIGIT表达。(B)通过CHA7.518.1.H4(S241P)和/或CPA.9.083.H4(S241P)诱导PD-1表达。(C)CHA7.518.1.H4(S241P)，抗TIGIT或抗PD-1不会诱导LAG-3表达。
图53.将在手术切除的24小时内获得的肿瘤解离并与表达表面结合的抗CD3的MEL624细胞和所示抗体以10ug/ml共培养纯化的CD3+TILS。在72小时测定条件培养基中的IFN-γ浓度。展示相对于hIgG4的每种条件的IFN-γ的％变化。
图54.PVRIG抗体阻断或缺乏导致肿瘤生长降低。PVRIG抗体阻断或缺乏抑制肿瘤生长。A)向BALB/c小鼠皮下注射5×105个CT26细胞。在接种后第7天，用抗PD-L1和/或抗PVRIG Ab处理小鼠，每周2次，持续3周。展示肿瘤体积。每组n＝10只小鼠。显示平均值+/-SEM。***表示与抗PD-L1+抗PVRIG治疗组相比，抗PD-L1+大鼠IgG2b的p值<0.001(重复测量的ANOVA)。B)向C57BL/6WT或PVRIG-/-小鼠皮下注射5×105个MC38细胞。n＝10只小鼠/组。显示平均值±SEM。*表示WT小鼠与PVRIG-/-小鼠的p值<0.05(重复测量的ANOVA)。还展示每个肿瘤的生长曲线。来自n＝2个实验的代表性数据。
图55.PVRIG/TIGIT轴在人类肿瘤中的表达分布。PVRIG-PVRL2和TIGIT-PVR途径的肺癌和子宫内膜癌高发。(A，B)通过FACS分析来自分离的人肿瘤的CD4+和CD8+ T细胞上的PVRIG和TIGIT表达。通过将PVRIG或TIGIT的MFI除以IgG对照的MFI来计算折叠表达。灰线＝未检测到表达式。每个橙色点是不同的肿瘤样品，蓝色条形表示样品的中位数。C，D)PVRIG对CD8+ T细胞VS PVRL2上CD45-细胞或TIGIT上CD8+ T细胞上VS细胞CD45-表达PVR从解离的人肿瘤作图。每个点代表单个肿瘤样品。
图56.PVRIG+TIGIT+PD1+细胞是CD8+瓷砖中百分比最高且消耗最多的细胞。PVRIG+TIGIT+PD1+CD8+TIL非常普遍，并且具有耗竭的表型。A)对来自人类癌症的CD8+ TIL进行PD-1，PVRIG和TIGIT染色。通过布尔圈选确定表达PD-1，PVRIG或TIGIT组合的CD8+ TIL在CD8+ T细胞上的百分比。每个点代表单个肿瘤样品。B)对人类癌症的CD8+ TILs进行细胞表面PD1，PVRIG和TIGIT染色，进行透化，并对细胞内Eomes和T-bet进行染色。展示Eomes+ T-bet-CD8+ T细胞的百分比。进行了配对的学生t检验，并且展示p值。C)在多种人类癌症中确定了表达PD-1，PVRIG和TIGIT的Eomes+ T-bet-CD8+ T细胞的百分比。
图57.PVRL2 VS PVR肿瘤类型的相对表达。跨不同人类肿瘤的PVRL2和PVR的相对RNA和蛋白质表达。将TCGA中PVRL2和PVR的RNA表达绘制为跨多个人类肿瘤的PVRL2相对于PVR的比率(左图)。与PVR相比，PVRL2RNA表达更高的肿瘤包括乳腺，卵巢，前列腺，子宫内膜，膀胱，胰腺和肺。从解离的人类肿瘤中绘制了PVRL2相对于PVR在CD45-肿瘤细胞上的蛋白质表达(gMFI)比率(右图)。每个点代表单个肿瘤样品。与PVR相比，PVRL2蛋白表达更高的肿瘤包括卵巢，乳房，子宫内膜，肺，前列腺，口腔和胃。在包括乳腺癌，卵巢癌，子宫内膜癌，前列腺癌和肺癌在内的多种肿瘤中，较高的RNA表达与较高的PVRL2蛋白水平相关。
图58.人肿瘤中存在PVRL2+PVR-肿瘤细胞和APC。PVRL2+PVR-肿瘤细胞和APC存在于人类肿瘤中。PVRL2和从通过FACS所确定的解离的肿瘤)CD45-肿瘤细胞PVR表达，和B)CDC2(CD1C+CD14 HLA-DR喜林-CD141-)和CD14+的TAM被绘制。PVRL2+PVR-肿瘤细胞和APC在阳性百分比图中以红点表示。对于卵巢和子宫内膜肿瘤，展示与IgG同型对照(红色)相比PVRL2和PVR表达的代表性FACS图(蓝色)。
图59.CHA7.518.1.H4(S241P)+CPA.9.083.H4(S241P)组合在原代CD3+ TILS上的活性≥帕博利珠单抗。CHA7.518.1.H4(S241P)和/或CPA.9.083.H4(S241P)在新鲜分离的人类TIL上具有比帕博利珠单抗相似或更高的效价。将在手术切除后24小时内获得的人肿瘤解离，并纯化CD3+TIL。分离的CD3+TIL与修饰的Mel-624肿瘤细胞系共培养，表达表面结合的抗CD3和所示抗体的浓度为10μg/ml.。在72小时时测量条件培养基中的IFN-γ分泌。展示相对于hIgG同型对照的每种处理的IFN-γ的百分比变化。
图60.PVRIG/PVRL2的阻断诱导PD-1和TIGIT表达。对PVRIG/PVRL2的阻断可诱导PD-1和TIGIT表达。CMVpp65-从2个供体特异性CD8+ T细胞共-与Panc.05.04，CMVpp65肽培养，并以10微克/毫升18个小时指定的抗体。将细胞染色，并显示每次处理后A)TIGIT+，B)PD-1+和C)LAG3+CD8+细胞的百分比。
图61A-61C.三联组合显示出提高的抗肿瘤功效。A)在最小疾病模型中CT26肿瘤的生长动力学。在右侧腹中，每组10只雌性Balb/c接种CT26细胞。当肿瘤达到期望的平均体积(30-60mm3)时，开始施用Ip抗体。小鼠分别以10mg/kg的抗TIGIT mIgG1或抗PVRIG mIgG1、3mg/kg的抗PD-L1 mIgG1以及10mg/kg的对照同型以双重或三联形式治疗，每两周3次，总计6剂。通过将％TGI＝[1-(测试物品的平均肿瘤体积除以对照物品的平均肿瘤体积)×100]来计算结合有抗TIGIT mIgG1的TGI。星号(***，****)分别表示同型对照的双重或三联组合相对于通过2-way ANOVA的双重或三联组合组之间的差异，p<0.001或p<0.0001。B)测量三个治疗组中每只小鼠的单个肿瘤体积的蜘蛛图，直到达到>1500mm3或45天(研究终点)。C)在三个不同治疗组中治疗的小鼠的Kaplan-Meier存活曲线。对数秩(Mantel-Cox)测试显示p值<0.0001，在用三抗体组合治疗的小鼠中90％的存活率与在用双抗体组合治疗的小鼠中40％的存活率。
图62A-62I描绘例示性抗PD-L1抗体的序列。
图63A-63AAAA描绘许多例示性PVRIG抗体的序列。
具体实施方式
A.简介
针对免疫检查点抑制剂(例如PD-1)的治疗性抗体在临床上用于治疗癌症的有限环境中展示极大的前景。癌症可以认为是患者无法识别和消除癌细胞。在许多情况下，这些转化的(例如癌性)细胞抵消免疫监视。存在限制体内T细胞活化的自然控制机制以防止无限制的T细胞活性，其可被癌细胞利用以逃避或抑制免疫反应。恢复免疫效应细胞(尤其是T细胞)识别和消除癌症的能力是免疫疗法的目标。免疫肿瘤学领域，有时被称为“免疫疗法”，正在迅速发展，最近批准了几种T细胞检查点抑制性抗体，例如和这些抗体通常被称为“检查点抑制剂”，因为其阻断T细胞免疫的正常负调节因子。通常理解的是，共刺激和共抑制的各种免疫调节信号可用于协调最佳抗原特异性免疫反应。
通常，这些单克隆抗体结合于检查点抑制蛋白，例如CTLA-4或PD-1，其在正常情况下预防或抑制细胞毒性T细胞(CTL)的活化。通过抑制检查点蛋白质，例如通过使用结合这些蛋白质的抗体，可以实现针对肿瘤的T细胞反应增加。也就是说，这些癌症检查点蛋白质抑制免疫反应；当例如使用针对检查点蛋白质的抗体阻断蛋白质时，免疫系统被活化，产生免疫刺激，从而治疗例如癌症和传染病的病况。
本发明涉及以组合使用几种抗检查点抑制剂以产生更好的患者结果的组合物和方法。特别地，考虑抗TIGIT、抗PVRIG和抗PD-1抗体的组合。此外，这些方法尤其适用于与评定来自患者肿瘤的PD-L1表达水平的组合。如果与用所用抗体的抗体相关同型对照抗体染色的相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的百分比大于1％(>1％)，那么应施用抗TIGIT、抗PVRIG和抗PD-1的三联组合。然而，应向与同型对照相比PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的频率低于1％(<1％)的患者施用抗TIGIT和抗PVRIG抗体的双联组合。
如本文所讨论，TIGIT是一种在效应和调节性(Treg)CD4+ T细胞、效应CD8+ T细胞和NK细胞上高效表达的共抑制受体。已展示TIGIT通过(1)直接信号传导，(2)诱导配体信号传导，以及(3)竞争和破坏利用共刺激受体CD226(也称为DNAM-1)的信号传导来减弱免疫反应。
PVRIG在NK细胞和T细胞的细胞表面上表达，并且与其它已知的免疫检查点共享若干相似之处。PVRIG已被确认为检查点抑制剂，参见USSN62/118,208、62/141,120、62/235,823、62/376,334、15/048,967、62/376,335、62/417,217和62/477,974，所有文献都以全文引用的方式明确地并入本文中，并且尤其是针对其中的抗体的序列、图和图例。如这些文献所示，PVRL2被鉴定/确认为PVRIG的对应物。产生结合于PVRIG的抗体，并且然后鉴定结合于PVRIG并且阻断PVRIG和PVLR2的相互作用的抗体亚组。当PVRIG与其配体(PVRL2)结合时，引发抑制信号，其起到减弱NK细胞和T细胞针对靶细胞的免疫反应(即类似于PD-1/PDL1)的作用。阻断PVRL2与PVRIG的结合中断了PVRIG的这种抑制信号，并因此调节NK细胞和T细胞的免疫反应。
PD-1或“程序性细胞死亡蛋白1”是已知的检查点抑制剂。有两种已获批准的抗PD-1抗体：帕博利珠单抗
Figure BDA0002340382800000401
西米普利单抗(REGN2810)和纳武单抗
Figure BDA0002340382800000402
和更多研发中的抗体(包括但不限于如在WO2015/112900中列出(其序列以引入的方式明确地并入本文中)的匹立珠单抗BAP049克隆、如在WO2015/035606中列出(其序列以引入的方式明确地并入本文中)的抗体317-4B6、如在US2016/0075783中列出(其序列以明确地引入的方式并入本文中)的抗体APE2058)。
有三种已获批准的抗PD-L1抗体阿特珠单抗阿维鲁单抗
Figure BDA0002340382800000412
和度伐单抗以及其它研发中的抗PD-L1抗体。
这些抗体的组合对NK细胞和T细胞的功能作用可以通过测量以下参数的变化在体外(并且在一些情况下在体内，如下文更充分地描述)来评定：增殖、细胞因子释放和细胞表面标志物。因此，抗TIGIT抗体对NK细胞、效应T细胞和Treg细胞的功能作用可以通过测量以下参数的变化在体外(并且在一些情况下，在体内，如下文更充分地描述)来评定：增殖、细胞因子释放和细胞表面受体。关于NK细胞，细胞增殖、细胞毒性(杀伤靶细胞的能力，如通过CD107a、颗粒酶和穿孔素表达的增加，或通过直接测量靶细胞杀伤所测量)、细胞因子产生(例如，IFN-γ和TNF)和细胞表面受体表达(例如，CD25)的增加指示免疫调节，例如癌细胞杀伤增强。对于效应T细胞和Treg细胞，增殖的增加、活化的细胞表面受体(例如CD25、CD69、CD137和PD-1)的表达增加、细胞毒性(如上文所提及，杀伤靶细胞的能力)和细胞因子产生(例如IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-17A)指示免疫调节，例如增强的癌细胞杀伤。因此，可以使用评估以下中的一个或多个的分析来评定治疗：(i)免疫反应的增加；(ii)αβ和/或γδT细胞的活化的增加；(iii)细胞毒性T细胞活性的增加；(iv)NK细胞和/或NKT细胞活性的增加；(v)αβ和/或γδT细胞抑制的缓解；(vi)促炎性细胞因子分泌的增加；(vii)IL-2分泌的增加；(viii)干扰素γ产生的增加；(ix)Th1反应的增加；(x)Th2反应的减少；(xi)减少或消除调节性T细胞中的至少一种的细胞数量和/或活性。
特别地，实例1中所示的任何一种分析可用于测量T细胞活化和/或T细胞抑制的遏制。
因此，在一些实施例中，本发明提供使用抗TIGIT、抗PVRIG和抗PD-1抗体(或在一些情况下，如本文所概述，仅抗TIGIT和抗PVRIG抗体)的组合疗法来进行有需要的个体的以下中的一个或多个：(a)上调促炎性细胞因子；(b)增加T细胞增殖和/或扩增；(c)增加T细胞的干扰素或TNF-α产生；(d)增加IL-2分泌；(e)刺激抗体反应；(f)抑制癌细胞生长；(g)促进抗原特异性T细胞免疫；(h)促进CD4+和/或CD8+ T细胞活化；(i)缓解Treg介导的细胞抑制；(j)促进NK细胞活性；(k)促进癌细胞的细胞凋亡或裂解；和/或(l)对癌细胞的细胞毒性或细胞抑制作用。
因此，本发明提供抗TIGIT、抗PVRIG和抗PD-1抗体，其用于组合疗法和与测量TIGIT、PVRIG和PD-1表达中的一种或多种的水平和/或测量TIGIT(例如PVR)、PVRIG(PVRL2)和PD-1(PD-L1)的配体的水平的诊断分析结合。
B.定义
为了能更全面地了解本申请，下文阐述几种定义。这类定义意味着包含语法等同物。
本文的“消融”意味着活性的降低或去除。在一些实施例中，从抗体的恒定结构域中去除活性是有用的。因此，举例来说，“消融FcγR结合”意指初始结合比不含有特定变体的Fc区小50％的Fc区氨基酸变体，其中优选小于70-80-90-95-98％的活性损失，并且一般来说，活性低于在Biacore分析中可检测到的结合水平。如图1所示，IgG1恒定区中的一个消融变体是N297A变体，其去除天然糖基化位点并且显著降低FcγRIIIa结合，并且因此降低抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。
“抗原结合结构域”或“ABD”在本文中意味着六个互补决定区(ComplementaryDetermining Region，CDR)的组，当作为多肽序列的一部分存在时，特异性结合如本文所讨论的靶抗原。因此，“TIGIT抗原结合结构域”结合如本文所概述的TIGIT抗原(其序列如图2所示)。如本领域中已知，这些CDR通常作为可变重链CDR(vhCDR或VHCDR)的第一组和可变轻链CDR(vlCDR或VLCDR)的第二组存在，其各自包含三个CDR：重链的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3和轻链的vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。CDR分别存在于可变重链结构域和可变轻链结构域中，并且一起形成Fv区。因此，在一些情况下，抗原结合结构域的六个CDR由可变重链和可变轻链贡献。在“Fab”形式中，6个CDR的组由两个不同的多肽序列贡献，可变重链结构域(vh或VH；含有vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3)和可变轻链结构域(vl或VL；含有vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)，其中vh结构域的C端连接到重链CH1结构域的N端，并且vl结构域的C端连接到轻链恒定结构域的N端(并且因此形成轻链)。
本文的“修饰”意味着多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失或与蛋白质化学连接的部分的改变。举例来说，修饰可以是连接到蛋白质的改变的碳水化合物或PEG结构。本文的“氨基酸修饰”意味着多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失。为清楚起见，除非另外指出，否则氨基酸修饰始终是针对由DNA编码的氨基酸，例如在DNA和RNA中具有密码子的20个氨基酸。
本文的“氨基酸取代”或“取代”意味着用不同的氨基酸置换亲本多肽序列中特定位置的氨基酸。特别地，在一些实施例中，取代是针对并非天然存在于特定位置、并非天然存在于生物体内或任何生物体内的氨基酸。举例来说，取代N297A是指在位置297处的天冬酰胺被丙氨酸置换的变体多肽，在这种情况下是Fc变体。为了清楚起见，已经过工程改造以改变核酸编码序列但不改变起始氨基酸(例如将CGG(编码精氨酸)换成CGA(仍然编码精氨酸)来提高宿主生物体表达水平)的蛋白质不是“氨基酸取代”；也就是说，尽管创建了编码相同蛋白质的新基因，但是如果蛋白质在其起始的特定位置具有相同的氨基酸，那么它就不是氨基酸取代。
如本文所用的“氨基酸插入”或“插入”意味着在亲本多肽序列的特定位置添加氨基酸序列。举例来说，-233E或233E表示在位置233之后和位置234之前插入谷氨酸。另外，-233ADE或A233ADE表示在位置233之后和位置234之前插入AlaAspGlu。
如本文所用的“氨基酸缺失”或“缺失”意味着去除亲本多肽序列中特定位置的氨基酸序列。举例来说，E233-或E233#、E233()或E233del表示在位置233处的谷氨酸的缺失。另外，EDA233-或EDA233#表示从位置233开始的序列GluAspAla的缺失。
如本文所用的“变体蛋白质”或“蛋白质变体”或“变体”意味着通过至少一个氨基酸修饰而不同于亲本蛋白质的蛋白质。蛋白质变体可以指蛋白质本身、包含蛋白质的组合物或编码它的氨基酸序列。优选地，蛋白质变体与亲本蛋白质相比具有至少一个氨基酸修饰，例如与亲本相比，约1个到约70个氨基酸修饰，并且优选约1个到约5个氨基酸修饰。如下所述，在一些实施例中，亲本多肽，例如Fc亲本多肽，是人类野生型序列，例如来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc区，尽管具有变体的人类序列也可以充当“亲本多肽”。本文的蛋白质变体序列将优选与亲本蛋白质序列具有至少约80％的一致性，并且最优选至少约90％的一致性，更优选至少约95-98-99％的一致性。变体蛋白质可以指变体蛋白质本身、包含蛋白质变体的组合物或编码它的DNA序列。因此，如本文所用的“抗体变体”或“变体抗体”意味着通过至少一个氨基酸修饰与亲本抗体不同的抗体，如本文所用的“IgG变体”或“变体IgG”意味着通过至少一个氨基酸修饰与亲本IgG(同样，在许多情况下，来自人类IgG序列)不同的抗体，并且如本文所用的“免疫球蛋白变体”或“变体免疫球蛋白”意味着通过至少一个氨基酸修饰与亲本免疫球蛋白序列不同的免疫球蛋白序列。如本文所用的“Fc变体”或“变体Fc”意味着包含Fc结构域中的氨基酸修饰的蛋白质。本发明的Fc变体是根据构成其的氨基酸修饰来定义。因此，例如，S241P或S228P是相对于亲本IgG4铰链多肽在位置228处具有取代脯氨酸的铰链变体，其中编号S228P是根据EU索引而S241P是Kabat编号。EU索引或如Kabat或EU编号方案中的EU索引是指EU抗体的编号(Edelman等人,1969,《美国国家科学院院刊(ProcNatl Acad Sci USA)》63:78-85，在本文中以引用的方式整体并入本文中)。修饰可以是添加、缺失或取代。取代可包括天然存在的氨基酸，并且在一些情况下，可包括合成氨基酸。实例包括美国专利第6,586,207号；WO 98/48032；WO 03/073238；US2004-0214988A1；WO 05/35727A2；WO 05/74524A2；J.W.Chin等人,(2002),《美国化学学会杂志(Journal of theAmerican Chemical Society)》124:9026-9027；J.W.Chin和P.G.Schultz,(2002),《化学生物化学(ChemBioChem)》11:1135-1137；J.W.Chin等人,(2002),PICAS美国(United Statesof America)99:11020-11024；和L.Wang和P.G.Schultz,(2002),《化学(Chem.)》1-10，所有所述文献以引用的方式整体并入本文中。
如本文所用，“蛋白质”在本文中意味着至少两个共价连接的氨基酸，其包括蛋白质、多肽、寡肽和肽。肽基可以包含天然存在的氨基酸和肽键或合成的拟肽结构，即“类似物”，例如类肽(参见Simon等人,PNAS USA 89(20):9367(1992)，其以引用的方式整体并入本文中)。氨基酸可以是天然存在的或合成的(例如不是由DNA编码的氨基酸)；如将由本领域技术人员所理解。举例来说，出于本发明的目的，同型苯丙氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸和正亮氨酸被认为是合成氨基酸，并且可以使用D-和L-(R或S)构型的氨基酸。本发明的变体可以包含修饰，其包括使用例如Schultz和同事研发的技术掺入的合成氨基酸，所述技术包括但不限于Cropp和Shultz,2004,《遗传学趋势(Trends Genet.)》20(12):625-30,Anderson等人,2004,《美国国家科学院院刊》101(2):7566-71,Zhang等人,2003,303(5656):371-3和Chin等人,2003,《科学(Science)》301(5635):964-7所描述的方法，所有所述文献都以引用的方式整体并入本文中。另外，多肽可包括一个或多个侧链或末端的合成衍生、糖基化、聚乙二醇化、环状排列、环化、与其它分子的连接子、与蛋白质或蛋白质结构域的融合以及肽标签或标记的添加。
如本文所用的“残基”意味着蛋白质中的位置和其相关的氨基酸身份标识。举例来说，天冬酰胺297(也称为Asn297或N297)是人类抗体IgG1中位置297处的残基。
如本文所用的“Fab”或“Fab区”意味着包含VH、CH1、VL和CL免疫球蛋白结构域的多肽。Fab可以单独指这一区域，或者在全长抗体或抗体片段的情况下指代这一区域。
如本文所用的“Fv”或“Fv片段”或“Fv区”意味着包含单一抗体的VL和VH结构域的多肽。如本领域技术人员所理解，这些通常由两条链组成。
本文中的“单链Fv”或“scFv”意味着通常使用如本文所讨论的scFv连接子将可变重链结构域共价连接到可变轻链结构域，以形成scFv或scFv结构域。scFv结构域从N端到C端可呈任一定向(vh-连接子-vl或vl-连接子-vh)。通常，连接子是本领域通常已知的scFv连接子，连接肽主要包括以下氨基酸残基：Gly、Ser、Ala或Thr。连接肽应具有足以连接两个分子的长度，使得其相对于彼此呈现正确的构形，从而使其保留所期望的活性。在一个实施例中，连接子的长度是约1个到50个氨基酸，优选长度是约1个到30个氨基酸。在一个实施例中，可以使用长度为1个到20个氨基酸的连接子，在一些实施例中使用约5个到约10个氨基酸。有用的连接子包括甘氨酸-丝氨酸聚合物(包括例如(GS)n、(GSGGS)n、(GGGGS)n和(GGGS)n，其中n是至少为一(并且通常为3到4)的整数)、甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-丝氨酸聚合物和其它柔性连接子。或者，各种非蛋白质聚合物，包括但不限于可用作连接子的聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧化烯或聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物可用作连接子。
如本文所用的“IgG亚类修饰”或“同型修饰”意味着将一种IgG同型的一个氨基酸转化为不同的比对IgG同型中的相应氨基酸的氨基酸修饰。举例来说，因为在EU位置296处IgG1包含酪氨酸并且IgG2包含苯丙氨酸，所以IgG2中的F296Y取代被认为是IgG亚类修饰。类似地，因为IgG1在位置241处具有脯氨酸并且IgG4在那里具有丝氨酸，所以具有S241P的IgG4分子被认为是IgG亚类修饰。注意，亚类修饰在本文中被认为是氨基酸取代。
如本文所用的“非天然存在的修饰”意味着不是同型的氨基酸修饰。举例来说，因为没有IgG在位置297处包含天冬酰胺，所以IgG1、IgG2、IgG3或IgG4(或其杂合体)中的取代N297A被认为是非天然存在的修饰。
如本文所用的“氨基酸”和“氨基酸身份标识”意味着由DNA和RNA编码的20种天然存在的氨基酸之一。
如本文所用的“效应功能”意味着由抗体Fc区与Fc受体或配体相互作用产生的生物化学事件。效应功能包括但不限于ADCC、ADCP和CDC。在许多情况下，期望使用Fc结构域中的不同的IgG同型(例如IgG4)或氨基酸取代来消除大多数或所有效应功能；然而，保持与FcRn受体的结合是所期望的，因为这有助于抗体在人类血清中的半衰期。
如本文所用的“IgG Fc配体”意味着与IgG抗体的Fc区结合以形成Fc/Fc配体复合物的任何生物体的分子，优选多肽。Fc配体包括但不限于FcγRI、FcγRII、FcγRIII、FcRn、C1q、C3、甘露聚糖结合凝集素、甘露糖受体、葡萄球菌蛋白A、链球菌蛋白G和病毒FcγR。Fc配体还包括Fc受体同源物(FcRH)，其是与FcγR同源的Fc受体家族(Davis等人,2002,《免疫评论(Immunological Reviews)》190:123-136，其以引用的方式整体并入本文中)。Fc配体可包括结合Fc的未发现分子。特定的IgG Fc配体是FcRn和Fcγ受体。如本文所用的“Fc配体”意味着与抗体的Fc区结合以形成Fc/Fc配体复合物的任何生物体的分子，优选多肽。
如本文所用的“亲本多肽”意味着随后经过修饰以产生变体的起始多肽。亲本多肽可以是天然存在的多肽，或天然存在的多肽的变体或工程改造版本。亲本多肽可以指多肽本身、包含亲本多肽的组合物或编码它的氨基酸序列。因此，如本文所用的“亲本免疫球蛋白”意味着未修饰的免疫球蛋白多肽，其被修饰以产生变体，并且如本文所用的“亲本抗体”意味着未修饰的抗体，其被修饰以产生变体抗体。应注意，“亲本抗体”包括如下概述的已知的商业重组产生的抗体。
如本文所用的“Fc”或“Fc区”或“Fc结构域”意味着包含抗体恒定区(不包括第一恒定区免疫球蛋白结构域)的多肽，并且在一些情况下是铰链的一部分。因此，Fc是指IgA、IgD和IgG的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域、IgE和IgM的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域，以及这些结构域的柔性铰链N端。对于IgA和IgM，Fc可包括J链。对于IgG，Fc结构域包含免疫球蛋白结构域Cγ2和Cγ3(Cγ2和Cγ3)以及Cγ1(Cγ1)与Cγ2(Cγ2)之间的下铰链区。尽管Fc区的边界可以变化，但是人类IgG重链Fc区通常被定义为包括其羧基端的残基C226或P230，其中编号是根据如Kabat中的EU索引。在一些实施例中，如下文更全面地描述，对Fc区进行氨基酸修饰，例如改变与一种或多种FcγR受体或FcRn受体的结合。
“重链恒定区”在本文中意味着抗体的CH1-铰链-CH2-CH3部分。
如本文所用的“位置”意味着蛋白质序列中的位置。位置可以顺序编号，或根据确定的形式(例如用于抗体编号的EU索引)编号。
如本文所用的“靶抗原”意味着由给定抗体的可变区特异性结合的分子。本文中所关注的靶抗原是TIGIT，通常是人类TIGIT和任选的食蟹猴TIGIT，其序列展示于以下中。
如本文所用的“靶细胞”意味着表达靶抗原的细胞。
如本文所用的“可变区”意味着免疫球蛋白的区域，其包含一个或多个基本上由分别构成κ、λ和重链免疫球蛋白遗传基因座的Vκ(V.κ)、Vλ(V.λ)和/或VH基因编码的Ig结构域。
“野生型或WT”在本文中意味着在自然界中发现的氨基酸序列或核苷酸序列，包括等位基因变体。WT蛋白质具有未经过有意修饰的氨基酸序列或核苷酸序列。
本发明的抗体通常是分离的或重组的。当用于描述本文公开的各种多肽时，“分离的”意味着多肽已经从表达其的细胞或细胞培养物中鉴定和分离和/或回收。通常，通过至少一个纯化步骤制备分离的多肽。“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其它抗体的抗体。“重组”意味着使用重组核酸技术在外源宿主细胞中产生抗体。
“特异性结合”或“特异性结合于”特定抗原或表位，或“对”特定抗原或表位“具有特异性”意味着与非特异性相互作用可测量地不同的结合。特异性结合可以例如通过相比于对照分子的结合确定分子的结合来测量，对照分子通常是不具有结合活性的类似结构的分子。举例来说，可以通过与类似于靶标的对照分子竞争来确定特异性结合。
针对特定抗原或表位的特异性结合可以例如通过抗体对抗原或表位的KD为至少约10-9M、至少约10-10M、至少约10-11M、至少约10-12M、至少约10-13M、至少约10-14M、至少约10- 15M来展现，其中KD是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。通常，特异性结合抗原的抗体的KD对于对照分子相对于抗原或表位大20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍或更多倍。
另外，可以例如通过抗体对抗原或表位的KA或Ka对于表位相对于对照大至少20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍或更多倍来展现对特定抗原或表位的特异性结合，其中KA或Ka是指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率。通常使用表面等离子共振(例如Biacore分析)和使用表达抗原的细胞的流式细胞术测量结合亲和力。
V.抗体
如下所述，通常使用术语“抗体”。传统的抗体结构单元通常包含四聚体。每个四聚体通常由两对相同的多肽链构成，每对具有一个“轻链”(分子量通常为约25kDa)和一个“重链”(分子量通常为约50-70kDa)。人类轻链被分类为κ和λ轻链。本发明涉及通常基于IgG类的抗体，其具有几个亚类，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。通常，IgG1、IgG2和IgG4比IgG3更频繁地使用。应注意，IgG1具有不同的同种异型，其在356(D或E)和358(L或M)处具有多态性。本文所描绘的序列使用356D/358M同种异型，然而本文包括其它同种异型。也就是说，本文所包括的包括IgG1 Fc结构域的任何序列可以具有356E/358L置换356D/358M同种异型。
每条链的氨基端部分包括主要负责抗原识别的约100到110个或更多个氨基酸的可变区，在本领域和本文中通常称为“Fv结构域”或“Fv区”。在可变区中，重链和轻链的每个V结构域聚集三个环以形成抗原结合位点。每个环被称为互补决定区(下文中称为“CDR”)，其中氨基酸序列的变化是最显著的。“可变”是指可变区的某些区段在抗体之间序列差异很大的事实。可变区内的可变性不是均匀分布的。相反，V区由通过称为“高变区”的极端可变性的较短区分隔开的称为框架区(FR)的15-30个氨基酸的相对不变的区段组成，所述高变区各自9-15个氨基酸长或更长。
每个VH和VL由三个高变区(“互补决定区”，“CDR”)和四个FR构成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
高变区通常涵盖来自轻链可变区中约氨基酸残基24-34(LCDR1；“L”表示轻链)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)以及重链可变区中约31-35B(HCDR1；“H”表示重链)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)的氨基酸残基；Kabat等人,《免疫学相关蛋白质的序列(SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST)》,第5版.马里兰州贝塞斯达美国国家卫生研究院公共卫生服务部(Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.)(1991)和/或那些形成高变环的残基(例如轻链可变区中的残基26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)以及重链可变区中的26-32(HCDR1)、53-55(HCDR2)和96-101(HCDR3)；Chothia和Lesk(1987)《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》196:901-917。下面描述本发明的特定CDR。
如本领域技术人员所理解，CDR的确切编号和放置在不同编号系统之间可以是不同的。然而，应理解，可变重链和/或可变轻链序列的公开内容包括相关(固有)CDR的公开内容。因此，每个重链可变区的公开内容是vhCDR(例如vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3)的公开内容，并且每个轻链可变区的公开内容是vlCDR(例如vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)的公开内容。CDR编号的有用比较如下，参见Lafranc等人,《发育与比较免疫学(Dev.Comp.Immunol.)》27(1):55-77(2003)：
Kabat+Clothia IMGT Kabat AbM Chothia Contact
vhCDR1 26-35 27-38 31-35 26-35 26-32 30-35
vhCDR2 50-65 56-65 50-65 50-58 53-55 47-58
vhCDR3 95-102 105-117 95-102 95-102 96-101 93-101
vlCDR1 24-34 27-38 24-34 24-34 26-32 30-36
vlCDR2 50-56 56-65 50-56 50-56 50-52 46-55
vlCDR3 89-97 105-117 89-97 89-97 91-96 89-96
在整个本说明书中，当提及可变结构域(大致是轻链可变区的残基1-107和重链可变区的残基1-113)和铰链中的残基以及用于Fc区的EU编号系统时，通常使用Kabat编号系统(例如Kabat等人,见上文(1991))。
本发明提供大量不同的CDR组。在这种情况下，“完整CDR组”包含三个可变轻链和三个可变重链CDR，例如vlCDR1、vlCDR2、vlCDR3、vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3。这些可以分别是较大可变轻链结构域或可变重链结构域的一部分。另外，如本文中更全面概述，当使用重链和轻链时，可变重链结构域和可变轻链结构域可以在分开的多肽链上，或者在scFv序列的情况下，可以在单个多肽链上。
CDR有助于形成抗体的抗原结合位点，或更具体来说，表位结合位点。“表位”是指与称为互补位的抗体分子可变区中的特定抗原结合位点相互作用的决定簇。表位是分子的分组，例如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的结构特征以及特定的电荷特征。单个抗原可具有超过一个表位。
表位可以包含直接参与结合的氨基酸残基(也称为表位的免疫显性组分)和其它不直接参与结合的氨基酸残基，例如被特异性抗原结合肽有效阻断的氨基酸残基；换句话说，氨基酸残基在特异性抗原结合肽的覆盖面积内。
表位可以是构形的也可以是线性的。通过来自线性多肽链的不同区段的空间并置的氨基酸产生构形表位。线性表位是由多肽链中的相邻氨基酸残基产生的表位。构形和非构形表位的区别可以在于在变性溶剂存在下，与前者而非后者的结合丧失。
表位通常包括独特空间构形中的至少3个、并且更通常至少5个或8-10个氨基酸。识别相同表位的抗体可以在简单的免疫分析中验证，展示一种抗体阻断另一种抗体与靶抗原结合的能力，例如“装箱”。如下文所概述，本发明不仅包括本文所列举的抗原结合结构域和抗体，还包括竞争与所列举的抗原结合结构域结合的表位结合的抗原结合结构域和抗体。
每条链的羧基端部分限定主要负责效应功能的恒定区。Kabat等人收集重链和轻链可变区的许多一级序列。基于序列的保守度，其将单个一级序列分类为CDR和框架并且列出其列表(参见《免疫学相关序列(SEQUENCES OF IMMUNOLOGICAL INTEREST)》,第5版,NIH公开第91-3242号,E.A.Kabat等人，其以引用的方式整体并入本文中)。
在免疫球蛋白的IgG亚类中，重链中存在数个免疫球蛋白结构域。“免疫球蛋白(Ig)结构域”在本文中意味着具有不同三级结构的免疫球蛋白区域。本发明所关注的是重链结构域，包括重链恒定(CH)结构域和铰链结构域。在IgG抗体的情况下，IgG同型各自具有三个CH区。因此，IgG情况下的“CH”结构域如下：“CH1”根据如Kabat中的EU索引是指位置118-220。“CH2”根据如Kabat中的EU索引是指位置237-340，并且“CH3”根据如Kabat中的EU索引是指位置341-447。如本文所示和下文所述，pI变体可以在一个或多个CH区以及铰链区中，在下面讨论。
重链的另一种类型的Ig结构域是铰链区。“铰链”或“铰链区”或“抗体铰链区”或“免疫球蛋白铰链区”在本文中意味着包含抗体的第一与第二恒定结构域之间的氨基酸的柔性多肽。在结构上，IgG CH1结构域在EU位置220处终止，并且IgG CH2结构域在残基EU位置237处开始。因此，对于IgG，抗体铰链在本文中定义为包括位置221(IgG1中的D221)到236(IgG1中的G236)，其中编号是根据如Kabat中的EU索引。在一些实施例中，例如在Fc区的情况下，包括下铰链，其中“下铰链”通常是指位置226或230。
轻链通常包含两个结构域，即可变轻链结构域(含有轻链CDR并与可变重链结构域一起形成Fv区)和轻链恒定区(通常称为CL或Cκ)。
下文概述的用于其它取代的另一所关注区是Fc区。
A.嵌合和人类化抗体
在一些实施例中，本文的抗体可衍生自来自不同物种的混合物，例如嵌合抗体和/或人类化抗体。通常，“嵌合抗体”和“人类化抗体”两者都指组合来自超过一种物种的区域的抗体。举例来说，“嵌合抗体”传统上包含来自小鼠(或在某些情况下为大鼠)的可变区和来自人类的恒定区。“人类化抗体”通常是指非人类抗体，其具有与人类抗体中发现的序列交换的可变结构域框架区。通常，在人类化抗体中，除CDR之外的整个抗体由人类来源的多核苷酸编码或除了在其CDR内之外，与这种抗体相同。CDR(部分或全部由源自非人类生物体的核酸编码)被移植到人类抗体可变区的β-折叠框架中以形成抗体，其特异性由移植的CDR决定。这类抗体的形成描述于例如WO 92/11018，Jones,1986,《自然(Nature)》321:522-525,Verhoeyen等人,1988,《科学》239:1534-1536，所有所述文献都以引用的方式整体并入本文中。所选择的受体框架残基“回复突变”到相应的供体残基通常需要重新获得在初始移植构建体中丧失的亲和力(US 5530101；US 5585089；US 5693761；US 5693762；US6180370；US 5859205；US 5821337；US 6054297；US 6407213，所有所述文献都以引用的方式整体并入本文中)。人类化抗体最佳还包含免疫球蛋白恒定区的至少一部分，通常是人类免疫球蛋白的至少一部分，并且因此通常将包含人类Fc区。使用具有基因工程改造的免疫系统的小鼠也可以产生人类化抗体。Roque等人,2004,《生物技术进展(Biotechnol.Prog.)》20:639-654，其以引用的方式整体并入本文中。用于人类化和重塑非人类抗体的多种技术和方法是本领域熟知的(参见Tsurushita和Vasquez,2004,《单克隆抗体的人类化(Humanization of Monoclonal Antibodies)》,《B细胞分子生物学(MolecularBiology of B Cells)》,533-545,爱思唯尔科学公司(Elsevier Science)(美国)和其中引用的参考文献，所有所述文献都以引用的方式整体并入本文中)。人类化方法包括但不限于以下文献中所述的方法：Jones等人,1986,《自然》321:522-525；Riechmann等人,1988；《自然》332:323-329；Verhoeyen等人,1988,《科学》239:1534-1536；Queen等人,1989,《美国国家科学院院刊》86:10029-33；He等人,1998,《免疫学杂志(J.Immunol.)》160:1029-1035；Carter等人,1992,《美国国家科学院院刊》89:4285-9；Presta等人,1997,《癌症研究(Cancer Res.)》57(20):4593-9；Gorman等人,1991,《美国国家科学院院刊》88:4181-4185；O'Connor等人,1998,《蛋白质工程(Protein Eng)》11:321-8，所有所述文献都以引用的方式整体并入本文中。降低非人类抗体可变区免疫原性的人类化或其它方法可以包括表面再塑方法，如例如Roguska等人,1994,《美国国家科学院院刊》91:969-973中所述，其以引用的方式整体并入本文中。
在某些实施例中，本发明的抗体包含来自特定生殖系重链免疫球蛋白基因的重链可变区和/或来自特定生殖系轻链免疫球蛋白基因的轻链可变区(其中突变如本文通常所描述)。举例来说，这类抗体可以包含人类抗体或由人类抗体组成，所述人类抗体包含作为特定生殖系序列“的产物”或“衍生自”特定生殖系序列的重链或轻链可变区。通过比较人类抗体的氨基酸序列与人类生殖系免疫球蛋白的氨基酸序列并且选择序列与人类抗体序列最接近(即，最大％一致性)的人类生殖系免疫球蛋白序列，可以鉴定人类抗体是人类生殖系免疫球蛋白序列“的产物”或“衍生自”人类生殖系免疫球蛋白序列。由于例如天然存在的体细胞突变或有意引入定点突变，作为特定人类生殖系免疫球蛋白序列“的产物”或“衍生自”特定人类生殖系免疫球蛋白序列的人类抗体与生殖系序列相比可含有氨基酸差异。然而，人类化抗体的氨基酸序列与人类生殖系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列通常至少90％一致，并且与其它物种的生殖系免疫球蛋白氨基酸序列(例如鼠生殖系序列)相比时，含有将抗体鉴定为衍生自人类序列的氨基酸残基。在某些情况下，人类化抗体的氨基酸序列与生殖系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列可以至少95、96、97、98或99％或甚至至少96％、97％、98％或99％一致。通常，衍生自特定人类生殖系序列的人类化抗体将显示与人类生殖系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过10-20个氨基酸差异。在某些情况下，人类化抗体可显示与生殖系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过5个，或甚至不超过4个、3个、2个或1个氨基酸差异(再次，在本文中在引入任何变体之前；也就是说，在引入本发明的变体之前，变体的数量通常较低)。
在一个实施例中，亲本抗体已经亲和力成熟，如本领域中已知。基于结构的方法可用于人类化和亲和力成熟，例如如USSN 11/004,590中所述。基于选择的方法可用于人类化和/或亲和成熟抗体可变区，包括但不限于以下文献中所述的方法：Wu等人,1999,《分子生物学杂志》294:151-162；Baca等人,1997,《生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》272(16):10678-10684；Rosok等人,1996,《生物化学杂志》271(37):22611-22618；Rader等人,1998，《美国国家科学院院刊》95:8910-8915；Krauss等人,2003,《蛋白质工程改造(ProteinEngineering)》16(10):753-759，所有所述文献都以引用的方式整体并入本文中。其它人类化方法可涉及仅移植部分CDR，包括但不限于以下文献中所述的方法：USSN09/810,510；Tan等人,2002,《免疫学杂志》169:1119-1125；De Pascalis等人,2002,《免疫学杂志》169:3076-3084，所有所述文献都以引用的方式整体并入本文中。
B.特异性抗TIGIT抗体
本发明提供抗原结合结构域，其包括全长抗体，其含有多个特定的所列举的6个CDR的组和所定义的可变重链(vh、VH或VH)和可变轻链(vl、VL或VL)，其结合于TIGIT。
在一个实施例中，抗TIGIT抗体是包含来自如图3中所描绘的CPA.9.083.H4(S241P)的六个CDR(vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)的组的抗体。在一个实施例中，抗TIGIT抗体是包含来自如图3中所描绘的CPA.9.083.H4(S241P)的可变重链(vh)和可变轻链(vl)结构域的抗体，所述结构域与IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和IgG4(S241P)的人类IgG恒定结构域连接。在一个实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)。
在一个实施例中，抗TIGIT抗体是包含来自如图3中所描绘的CPA.9.086.H4(S241P)的六个CDR(vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)的组的抗体。在一个实施例中，抗TIGIT抗体是包含来自如图3中所描绘的CPA.9.086.H4(S241P)的可变重链(vh)和可变轻链(vl)结构域的抗体，所述结构域与IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和IgG4(S241P)的人类IgG恒定结构域连接。在一个实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)。
在一个实施例中，抗TIGIT抗体是包含来自如图3中所描绘的CHA.9.547.7.H4(S241P)的六个CDR(vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)的组的抗体。在一个实施例中，抗TIGIT抗体是包含来自如图3中所描绘的CHA.9.547.7.H4(S241P)的可变重链(vh)和可变轻链(vl)结构域的抗体，所述与IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和IgG4(S241P)的人类IgG恒定结构域连接。在一个实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)。
在一个实施例中，抗TIGIT抗体是包含来自如图3中所描绘的CHA.9.547.13.H4(S241P)的六个CDR(vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)的组的抗体。在一个实施例中，抗TIGIT抗体是包含来自如图3中所描绘的CHA.9.547.13.H4(S241P)的可变重链(vh)和可变轻链(vl)结构域的抗体，所述结构域与IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和IgG4(S241P)的人类IgG恒定结构域连接。在一个实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)。
可与本文所概述的抗PVRIG抗体组合使用的其它抗TIGIT抗体是受让方Compugen于2017年6月1日提交的标题为“抗TIGIT抗体和使用方法(Anti-TIGIT Antibodies andMethods of Use)”的USSN 62/513,916的图4中的那些抗体以及图3中包括的那些抗体。
C.用于组合治疗的额外抗TIGIT抗体
还包括可以与如本文所概述的抗PVRIG抗体和任选的抗PD-1抗体组合使用的额外抗TIGIT抗体。如下文更充分地讨论，抗TIGIT抗体与抗PVRIG抗体组合展示特定功效。因此，在一些实施例中，替代性抗TIGIT抗体与本文所概述的抗PVRIG抗体组合使用，并且尤其是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)中的任一个。
因此，在一个实施例中，可以将如美国专利第9,499,596号(以全文引用的方式并入本文中，并且尤其是对于下面列出的SEQ ID NO:)中所概述的抗TIGIT抗体可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，具有SEQ ID NO:21的轻链序列和SEQ ID NO:22的重链序列的抗TIGIT抗体(来自USP9,499,596)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。另外，具有SEQ ID NO:29的轻链序列和SEQ ID NO:30的重链序列的抗TIGIT抗体(来自USP9,499,596)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
类似地，在一个实施例中，如WO 2016/191643(以全文引用的方式并入本文中，并且尤其是针对下面列出的SEQ ID NO:，并且尤其是针对OMP-313M32抗体的序列)中所概述的抗TIGIT抗体可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，具有SEQ ID NO:72的轻链序列和SEQ ID NO:70的重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO2016/191643)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
因此，在一个实施例中，如WO 2017/053748(以全文引用的方式并入本文中，并且尤其是针对下面列出的SEQ ID NO:)中所概述的抗TIGIT抗体可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，具有SEQ ID NO:36的可变轻链序列和SEQ ID NO:34的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/053748)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。另外，具有SEQ ID NO:36的可变轻链序列和SEQ ID NO:35的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/053748)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。另外，具有SEQ ID NO:38的可变轻链序列和SEQ ID NO:37的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/053748)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。另外，具有SEQ ID NO:40的可变轻链序列和SEQ ID NO:39的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/053748)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。在一个实施例中，抗TIGIT抗体包括基因泰克公司(Genentech)的抗体MTIG7192A，其目前正在临床试验中(参见网址为clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02794571？term＝MTIG7192A&rank＝1的万维网)。在一个实施例中，MTIG7192A抗TIGIT抗体可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
类似地，在一个实施例中，如WO2016/191643(以全文引用的方式并入本文中，并且尤其是针对下面列出的SEQ ID NO:，并且尤其是针对OMP-313M32抗体的序列)中所概述的抗TIGIT抗体可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，具有SEQ ID NO:72的轻链序列和SEQ ID NO:70的重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO2016/191643)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)组合或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。在一个实施例中，抗TIGIT抗体包括Oncomed抗体OMP-313M32，其目前正在临床试验中(参见网址为clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT03119428？term＝OMP-313M32&rank＝1的万维网)。在一个实施例中，OMP-313M32抗TIGIT抗体可与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
另外，在一个实施例中，如WO 2016/028656(以全文引用的方式并入本文中，并且尤其是针对下面列出的SEQ ID NO:，并且尤其是针对MEB125.31C6.A1.205 VH4/VL1(SEQID NO:127的VH、SEQ ID NO:130的VL与人类IgG1恒定结构域)、MEB 125.31C6.A1.205 VH5/VL4(SEQ ID NO:128的VH、SEQ ID NO:133的VL和人类IgG1恒定区)和MEB125.31.C6,A1.205VH5/VL3(SEQ ID NO:128的VH、SEQ ID NO:132的VL和人类IgG1恒定区)抗体的序列)中所概述的抗TIGIT抗体可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体MEB125.31C6.A1.205VH4/VL1(SEQ ID NO:127的VH、SEQ ID NO:130的VL与人类IgG1恒定结构域)可以组合(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体MEB125.31C6.A1.205VH5/VL4(SEQ ID NO:128的VH、SEQ ID NO:133的VL和人类IgG1恒定区(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体MEB125.31.C6.A1.205VH5/VL3(SEQ ID NO:128的VH、SEQ ID NO:132的VL和人类IgG1恒定区)(来自WO2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:7的VH、SEQ ID NO:8的VL和人类IgG1恒定区的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:63的VH、SEQ ID NO:64的VL和人类IgG1恒定区的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:94的VH、SEQ ID NO:95的VL和人类IgG1恒定区的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:126的VH、SEQ ID NO:131的VL和人类IgG1恒定区的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:128的VH、SEQ ID NO:131的VL和人类IgG1恒定区的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:125的VH、SEQ ID NO:133的VL和人类IgG1恒定区的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:126的VH、SEQ ID NO:130的VL和人类IgG1恒定区的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:125的VH、SEQ ID NO:132的VL和人类IgG1恒定区的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:143的VH、SEQ ID NO:145的VL和人类IgG1恒定区的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:144的VH、SEQ ID NO:146的VL和人类IgG1恒定区的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:149的VH、SEQ ID NO:151的VL和人类IgG1恒定区的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:150的VH、SEQ ID NO:152的VL和人类IgG1恒定区的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/028656)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)组合)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
另外，在一个实施例中，如WO 2017/030823(以全文引用的方式并入本文中，并且尤其是针对下面列出的SEQ ID NO:)中所概述的抗TIGIT抗体可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，具有SEQ ID NO:8的可变轻链序列和SEQ ID NO:7的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/030823)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，具有SEQ ID NO:13的可变轻链序列和SEQ ID NO:9的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/030823)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，具有SEQ IDNO:24的可变轻链序列和SEQ ID NO:23的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/030823)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，具有SEQ ID NO:29的可变轻链序列和SEQ ID NO:25的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO2017/030823)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。在一些实施例中，具有选自SEQ ID NO:14、15、16、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80的序列的可变轻链以及SEQ ID NO:10、11、12、48、49、50、51、52、53、54、55或56的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/030823)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。在一些实施例中，具有选自SEQ ID NO:14、15、16、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80的序列的可变轻链以及SEQID NO:10、11、12、48、49、50、51、52、53、54、55或56的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO2017/030823)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。在一些实施例中，具有选自SEQ ID NO:30、31或32的序列的可变轻链以及SEQ ID NO:26、27、28、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111或112的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO2017/030823)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。在一个实施例中，抗TIGIT抗体包括默克公司(Merck)抗体MK-7684，其目前正在临床试验中(参见网址为Wide Web atclinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02964013？term＝MK-7684&rank＝1的万维网)。在一个实施例中，MK-7684抗TIGIT抗体可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
在一个实施例中，如美国专利申请第2016/0176963号(以全文引用的方式并入本文中，并且尤其是针对下面列出的SEQ ID NO:)中所概述的抗TIGIT抗体可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，具有SEQ ID NO:6、9、11或13的可变轻链序列和SEQ ID NO:2、3、4、5、7、8、10或12的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自US2016/0176963)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合使用。具体来说，具有SEQ ID NO:6的可变轻链序列和SEQ ID NO:2、3、4或5的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自US2016/0176963)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，具有SEQ ID NO:9的可变轻链序列和SEQ ID NO:7或8的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自US2016/0176963)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，具有SEQ ID NO:11的可变轻链序列和SEQ ID NO:10的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自US2016/0176963)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，具有SEQ ID NO:13的可变轻链序列和SEQ ID NO:12的可变重链序列的抗TIGIT抗体(来自US2016/0176963)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。在一个实施例中，抗TIGIT抗体包括BMS抗体BMS-98620，其当前正在临床试验中(参见网址为clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02913313？term＝BMS-986207&rank＝1的万维网)。在一个实施例中，BMS-98620抗TIGIT抗体可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
在一个实施例中，抗TIGIT抗体包括Arcus Bio抗体AB154。在一个实施例中，AB154抗TIGIT抗体可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
另外，在一个实施例中，抗TIGIT抗体如WO 2017/037707(以全文引用的方式并入本文中，并且尤其是针对下面列出的SEQ ID NO:，并且尤其是针对下面列出的SEQ ID NO:的序列，并且尤其是针对VSIG9#1抗体(SEQ ID NO:7VH和SEQ ID NO:8VL)和258-csl#4抗体(SEQ ID NO:18VH和SEQ ID NO:19VL))中所概述。具体来说，抗TIGIT抗体VSIG9#1抗体(来自WO2017/037707；SEQ ID NO:7VH和SEQ ID NO:8VL)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体258-csl#4(来自WO2017/037707；SEQID NO:18VH和SEQ ID NO:19VL)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
另外，在一个实施例中，抗TIGIT抗体如WO 2017/059095(以全文引用的方式并入本文中，并且尤其是针对下面列出的SEQ ID NO:，并且尤其是针对其中所公开的序列)中所概述。具体来说，包含SEQ ID NO:13的VH序列和SEQ ID NO:26的VL序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:12的VH序列和SEQ ID NO:26的VL序列的抗TIGIT抗体(来自WO2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:14的VH序列和SEQ ID NO:26的VL序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ IDNO:15的VH序列和SEQ ID NO:26的VL序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)组合或CHA.7.518.1.H4(S241P)。具体来说，包含SEQ ID NO:9的VH序列和SEQ ID NO:26的VL序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:10的VH序列和SEQ ID NO:26的VL序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:11的VH序列和SEQ ID NO:26的VL序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:99的重链和SEQ ID NO:92的轻链；或(其)SEQ ID NO:100的重链和SEQ ID NO:92的轻链的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:97的重链和SEQ ID NO:92的轻链；或(ii)SEQ IDNO:98的重链和SEQ ID NO:92的轻链的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体地说，包含SEQ ID NO:101的重链和SEQ ID NO:92的轻链；或(ii)SEQ ID NO:102的重链和SEQ ID NO:92的轻链的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:103的重链和SEQ ID NO:92的轻链；或(ii)SEQ IDNO:104的重链和SEQ ID NO:92的轻链的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:90的重链和SEQ ID NO:92的轻链；或(ii)SEQ ID NO:91的重链和SEQ ID NO:92的轻链的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)。具体来说，包含SEQ ID NO:93的重链和SEQ ID NO:92的轻链；或(ii)SEQ ID NO:94的重链和SEQ ID NO:92的轻链的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)。具体来说，包含SEQ ID NO:95的重链和SEQ ID NO:92的轻链；或(ii)SEQ ID NO:96的重链和SEQ ID NO:92的轻链的抗TIGIT抗体(来自WO 2017/059095)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。另外，在一个实施例中，抗TIGIT抗体如WO 2016/106302(以全文引用的方式并入本文中，并且尤其是针对下面列出的SEQ ID NO:，并且尤其是针对其中所公开的特定序列的序列)中所概述。特别地，包含选自SEQ ID NO:2、3、4、5、7、8、10或12的重链序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/106302)和来自SEQ ID NO:6、9、11或13的轻链序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2016/106302)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体22G2(来自WO 2016/106302)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体11G11(来自WO 2016/106302)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体15A6(来自WO 2016/106302)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
另外，在一个实施例中，抗TIGIT抗体如美国专利公开第2017281764号(以全文引用的方式并入本文中，并且尤其是针对下面列出的SEQ ID NO:，并且尤其是针对其中所公开的序列)中所概述。具体来说，包含SEQ ID NO:10的VH序列和SEQ ID NO:14的VL序列的抗TIGIT抗体(来自US 2017281764)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:18的VH序列和SEQ ID NO:22的VL序列的抗TIGIT抗体(来自US 2017281764)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:26的VH序列和SEQ ID NO:30的VL序列的抗TIGIT抗体(来自US2017281764)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:35的VH序列和SEQ ID NO:37的VL序列的抗TIGIT抗体(来自US 2017281764)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)。具体来说，包含SEQ ID NO:34的VH序列和SEQ ID NO:36的VL序列的抗TIGIT抗体(来自US 2017281764)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)。
在另一个实施例中，抗TIGIT抗体如国际专利公开第WO 2015/009856号(以全文引用的方式并入本文中，并且尤其是针对下面列出的SEQ ID NO:，并且尤其是针对其中所公开的序列(也参见国际专利公开第WO 2016/011264号))中所概述。包含SEQ ID NO:15的VH序列和SEQ ID NO:13的VL序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2015/009856)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，包含SEQ ID NO:16的VH序列和SEQ ID NO:14的VL序列的抗TIGIT抗体(来自WO 2015/009856)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是美国专利申请第20170037133号、国际专利公开第WO 2017/048824号中的任一个中所述的抗体MBSA43(可购自eBioscience)，是抗TIGIT抗体pab2197或pab2196(美国专利申请第2017/0081409号)、EOS084448、CASC-674(可购自Adimab LLC)。具体来说，如美国专利申请第2017/0037133号中所述的抗TIGIT抗体可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，如国际专利公开第WO 2017/048824号中所述的抗TIGIT抗体可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体MBSA43可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体pab2197可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体pab2196可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体EOS084448可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体CASC-674可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是美国专利第9,713,364号(以全文引用之方式併入本文中)中所述的抗体。在一些实施例中，抗TIGIT抗体是PTZ-201(ASP8374)。具体来说，抗TIGIT抗体PTZ-201(ASP8374)可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。在一些实施例中，如美国专利第9,713,364号中所述，抗TIGIT抗体是选自由以下组成的群组的抗体：MAB1、MAB2、MAB3、MAB4、MAB5、MAB6、MAB7、MAB8、MAB9、MAB10、MAB11、MAB12、MAB13、MAB14、MAB15、MAB16、MAB17、MAB18、40MAB19、MAB20或MAB21。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB1可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB2可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB3可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB4可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB5可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB6可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB7可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB8可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB9可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB10可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体Mab11可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB12可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB13可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB14可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB15可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB16可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB17可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB18可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB19可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB20可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，来自美国专利第9,713,364号的抗TIGIT抗体MAB21可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是10A7、1F4、14A6、28H5、31C6、15A6、22G2、11G11和/或10D7，其每一者的公开内容以全文引用的方式并入本文中。具体来说，抗TIGIT抗体10A7可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体1F4可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体14A6可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体28H5可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体31C6可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体15A6可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体22G2可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体11G11可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。具体来说，抗TIGIT抗体10D7可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是国际专利公开WO 2016/028656中所述的抗体中的一种，所述文献全文并入本文中。具体来说，抗TIGIT抗体提供于国际专利公开第WO2016/028656号(并且在图3中在本文中再现)中，可以与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)或CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
本文所述的抗TIGIT抗体可根据本发明的三联组合疗法方法使用，标记以下。这类抗体具有参考编号，例如“CPA.9.086”。这代表可变重链和可变轻链的组合，如图3中所描绘，例如，理解这些抗体包括两条重链和两条轻链。“CPA.9.086.VH”是指CPA.9.086的可变重链部分，而“CPA.9.086.VL”是可变轻链。“CPA.9.086.vhCDR1”,“CPA.9.086.vhCDR2”,“CPA.9.086.vhCDR3”,“CPA.9.086.vlCDR1”,“CPA.9.086.vlCDR2”和“CPA.9.086.vlCDR3”是指所指示的CDR。“CPA.9.086.HC”是指这一分子的整个重链(例如可变结构域和恒定结构域)，并且“CPA.9.086.LC”是指同一分子的整个轻链(例如可变结构域和恒定结构域)。通常，人类κ轻链用于本文中每种噬菌体(或人类化杂交瘤)抗体的恒定结构域，尽管在一些实施例中使用λ轻链恒定结构域。“CPA.9.086.H1”是指包含可变重链结构域和可变轻链结构域的全长抗体，包括人类IgG1(因此，例如，H1；IgG1、IgG2、IgG3和IgG4序列展示于图1中)的恒定结构域。因此，“CPA.9.086.H2”将是与人类IgG2连接的CPA.9.086可变结构域。“CPA.9.086.H3”将是与人类IgG3连接的CPA.9.086可变结构域，并且“CPA.9.086.H4”将是与人类IgG4连接的CPA.9.086可变结构域。注意，在一些情况下，人类IgG可能具有额外的突变，这类突变如下所述，并且这可以注释。举例来说，在许多实施例中，人类IgG4中可能存在S241P突变，并且这可以例如注释为“CPA.9.086.H4(S241P)”。具有这一S241P铰链变体的人类IgG4序列示于图1中。其它可能的变体是IgG1(N297A)，(或在这一位点消除糖基化的其它变体，并且因此许多效应功能与FcγRIIIa结合相关)和IgG1(D265A)，其降低与FcγR受体的结合。用于本发明的抗TIGIT抗体可以包含TIGIT抗体结构域序列中的任一种。用于本发明的抗TIGIT抗体可以包含TIGIT抗原结合结构域中的任一种。
本发明还提供重域可变结构域和轻域可变结构域以及全长重链和轻链。
在一些实施例中，本发明提供结合于TIGIT的scFv，其包含如上所概述通过scFv连接子连接的可变重链结构域和可变轻链结构域。VL和VH结构域可以呈任一定向，例如从N端到C端“VH-连接子-VL”或“VL-连接子”VH”。这些是由其组成部分命名的；例如“scFv-CPA.9.086.VH-连接子-VL”或“scFv-CPA.9.086.VL-连接子-VH”。因此，“scFv-CPA.9.086”可以呈任一定向。用于本发明的抗TIGIT抗体可以包含与TIGIT结合的任何scFv。用于本发明的抗TIGIT抗体可以包含与TIGIT结合的任何scFv。用于本发明的抗TIGIT抗体可包括以下中的任一种：
CPA.9.018、CPA.9.018.VH、CPA.9.018.VL、CPA.9.018.HC、CPA.9.018.LC、CPA.9.018.H1、CPA.9.018.H2、CPA.9.018.H3、CPA.9.018.H4；CPA.9.018.H4(S241P)；CPA.9.018.vhCDR1、CPA.9.018.vhCDR2、CPA.9.018.vhCDR3、CPA.9.018.vlCDR1、CPA.9.018.vlCDR2、CPA.9.018.vlCDR3和scFv-CPA.9.018；
CPA.9.027、CPA.9.027.VH、CPA.9.027.VL、CPA.9.027.HC、CPA.9.027.LC、CPA.9.027.H1、CPA.9.027.H2、CPA.9.027.H3、CPA.9.027.H4；CPA.9.018.H4(S241P)；CPA.9.027.vhCDR1、CPA.9.027.vhCDR2、CPA.9.027.vhCDR3、CPA.9.027.vlCDR1、CPA.9.027.vlCDR2、CPA.9.027.vlCDR3和scFv-CPA.9.027；
CPA.9.049、CPA.9.049.VH、CPA.9.049.VL、CPA.9.049.HC、CPA.9.049.LC、CPA.9.049.H1、CPA.9.049.H2、CPA.9.049.H3；CPA.9.049.H4；CPA.9.049.H4(S241P)；CPA.9.049.vhCDR1、CPA.9.049.vhCDR2、CPA.9.049.vhCDR3、CPA.9.049.vlCDR1、CPA.9.049.vlCDR2、CPA.9.049.vlCDR3和scFv-CPA.9.049；
CPA.9.057、CPA.9.057.VH、CPA.9.057.VL、CPA.9.057.HC、CPA.9.057.LC、CPA.9.057.H1、CPA.9.057.H2、CPA.9.057.H3；CPA.9.057.H4；CPA.9.057.H4(S241P)；CPA.9.057.vhCDR1、CPA.9.057.vhCDR2、CPA.9.057.vhCDR3、CPA.9.057.vlCDR1、CPA.9.057.vlCDR2、CPA.9.057.vlCDR3和scFv-CPA.9.057；
CPA.9.059、CPA.9.059.VH、CPA.9.059.VL、CPA.9.059.HC、CPA.9.059.LC、CPA.9.059.H1、CPA.9.059.H2、CPA.9.059.H3；CPA.9.059.H4；CPA.9.059.H4(S241P)；CPA.9.059.vhCDR1、CPA.9.059.vhCDR2、CPA.9.059.vhCDR3、CPA.9.059.vlCDR1、CPA.9.059.vlCDR2、CPA.9.059.vlCDR3和scFv-CPA.9.059；
CPA.9.083、CPA.9.083.VH、CPA.9.083.VL、CPA.9.083.HC、CPA.9.083.LC、CPA.9.083.H1、CPA.9.083.H2、CPA.9.083.H3；CPA.9.083.H4；CPA.9.083.H4(S241P)；CPA.9.083.vhCDR1、CPA.9.083.vhCDR2、CPA.9.083.vhCDR3、CPA.9.083.vlCDR1、CPA.9.083.vlCDR2、CPA.9.083.vlCDR3和scFv-CPA.9.083；
CPA.9.086、CPA.9.086.VH、CPA.9.086.VL、CPA.9.086.HC、CPA.9.086.LC、CPA.9.086.H1、CPA.9.086.H2、CPA.9.086.H3；CPA.9.086.H4；CPA.9.086.H4(S241P)；CPA.9.086.vhCDR1、CPA.9.086.vhCDR2、CPA.9.086.vhCDR3、CPA.9.086.vlCDR1、CPA.9.086.vlCDR2、CPA.9.086.vlCDR3和scFv-CPA.9.086；
CPA.9.089、CPA.9.089.VH、CPA.9.089.VL、CPA.9.089.HC、CPA.9.089.LC、CPA.9.089.H1、CPA.9.089.H2、CPA.9.089.H3；CPA.9.089.H4；CPA.9.089.H4(S241P)；CPA.9.089.vhCDR1、CPA.9.089.vhCDR2、CPA.9.089.vhCDR3、CPA.9.089.vlCDR1、CPA.9.089.vlCDR2、CPA.9.089.vlCDR3和scFv-CPA.9.089；
CPA.9.093、CPA.9.093.VH、CPA.9.093.VL、CPA.9.093.HC、CPA.9.093.LC、CPA.9.093.H1、CPA.9.093.H2、CPA.9.093.H3；CPA.9.093.H4；CPA.9.093.H4(S241P)；CPA.9.093.vhCDR1、CPA.9.093.vhCDR2、CPA.9.093.vhCDR3、CPA.9.093.vlCDR1、CPA.9.093.vlCDR2、CPA.9.093.vlCDR3和scFv-CPA.9.093；
CPA.9.101、CPA.9.101.VH、CPA.9.101.VL、CPA.9.101.HC、CPA.9.101.LC、CPA.9.101.H1、CPA.9.101.H2、CPA.9.101.H3；CPA.9.101.H4；CPA.9.101.H4(S241P)；CPA.9.101.vhCDR1、CPA.9.101.vhCDR2、CPA.9.101.vhCDR3、CPA.9.101.vlCDR1、CPA.9.101.vlCDR2、CPA.9.101.vlCDR3和scFv-CPA.9.101；和
CPA.9.103、CPA.9.103.VH、CPA.9.103.VL、CPA.9.103.HC、CPA.9.103.LC、CPA.9.103.H1、CPA.9.103.H2、CPA.9.103.H3；CPA.9.103.H4；CPA.9.103.H4(S241P)；CPA.9.103.vhCDR1、CPA.9.103.vhCDR2、CPA.9.103.vhCDR3、CPA.9.103.vlCDR1、CPA.9.103.vlCDR2、CPA.9.103.vlCDR3和scFv-CPA.9.103.
此外，本发明提供许多CHA抗体，其是由杂交瘤产生的鼠类抗体。如本领域众所周知的，当置于人类框架重链可变区和轻链可变区中或当可变重链结构域和可变轻链结构域人类化时，六个CDR是有用的。因此，本发明提供了抗体，通常是全长或scFv结构域，其包含以下CDR组，其序列显示在图3和/或序列表中：
CHA.9.536.1、CHA.9.536.1.VH、CHA.9.536.1.VL、CHA.9.536.1.HC、CHA.9.536.1.LC、CHA.9.536.1.H1、CHA.9.536.1.H2、CHA.9.536.1.H3；CHA.9.536.1.H4、CHA.9.536.1.H4(S241P)、CHA.9.536.1.vhCDR1、CHA.9.536.1.vhCDR2、CHA.9.536.1.vhCDR3、CHA.9.536.1.vlCDR1、CHA.9.536.1.vlCDR2和CHA.9.536.1.vhCDR3；
CHA.9.536.3、CHA.9.536.3.VH、CHA.9.536.3.VL、CHA.9.536.3.HC、CHA.9.536.3.LC、CHA.9.536.3.H1、CHA.9.536.3.H2、CHA.9.536.3.H3；CHA.9.536.3.H4、CHA.9.536.3.H4(S241P)；CHA.9.536.3.vhCDR1、CHA.9.536.3.vhCDR2、CHA.9.536.3.vhCDR3、CHA.9.536.3.vlCDR1、CHA.9.536.3.vlCDR2和CHA.9.536.3.vhCDR3；
CHA.9.536.4、CHA.9.536.4.VH、CHA.9.536.4.VL、CHA.9.536.4.HC、CHA.9.536.4.LC、CHA.9.536.4.H1、CHA.9.536.4.H2、CHA.9.536.4.H3；CHA.9.536.4.H4、CHA.9.536.4.H4(S241P)、CHA.9.536.4.vhCDR1、CHA.9.536.4.vhCDR2、CHA.9.536.4.vhCDR3、CHA.9.536.4.vlCDR1、CHA.9.536.4.vlCDR2和CHA.9.536.4.vhCDR3；
CHA.9.536.5、CHA.9.536.5.VH、CHA.9.536.5.VL、CHA.9.536.5.HC、CHA.9.536.5.LC、CHA.9.536.5.H1、CHA.9.536.5.H2、CHA.9.536.5.H3；CHA.9.536.5.H4、CHA.9.536.5.H4(S241P)、CHA.9.536.5.vhCDR1、CHA.9.536.5.vhCDR2、CHA.9.536.5.vhCDR3、CHA.9.536.5.vlCDR1、CHA.9.536.5.vlCDR2和CHA.9.536.5.vhCDR3；
CHA.9.536.6、CHA.9.536.6.VH、CHA.9.536.6.VL、CHA.9.536.6.HC、CHA.9.536.6.LC、CHA.9.536.6.H1、CHA.9.536.6.H2、CHA.9.536.6.H3；CHA.9.536.6.H4、CHA.9.536.6.vhCDR1、CHA.9.536.6.vhCDR2、CHA.9.536.6.vhCDR3、CHA.9.536.6.vlCDR1、CHA.9.536.6.vlCDR2和CHA.9.536.6.vhCDR3；
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CHA.9.547.9、CHA.9.547.9、CHA.9.547.9VH、CHA.9.547.9.VL、CHA.9.547.9.HC、CHA.9.547.9.LC、CHA.9.547.9.H1、CHA.9.547.9.H2、CHA.9.547.9.H3；CHA.9.547.9.H4、CHA.9.547.9.H4、CHA.9.547.9.H4(S241P)、CHA.9.547.9.H4(S241P)、CHA.9.547.9.vhCDR1、CHA.9.547.9.vhCDR2、CHA.9.547.9.vhCDR3、CHA.9.547.9.vlCDR1、CHA.9.547.9.vlCDR2和CHA.9.547.9.vhCDR3；
CHA.9.547.13、CHA.9.547.13、CHA.9.547.13VH、CHA.9.547.13.VL、CHA.9.547.13.HC、CHA.9.547.13.LC、CHA.9.547.13.H1、CHA.9.547.13.H2、CHA.9.547.13.H3；CHA.9.547.13.H4、CHA.9.547.13.H4、CHA.9.547.13.H4(S241P)、CHA.9.547.13.H4(S241P)、CHA.9.547.13.vhCDR1、CHA.9.547.13.vhCDR2、CHA.9.547.13.vhCDR3、CHA.9.547.13.vlCDR1、CHA.9.547.13.vlCDR2和CHA.9.547.13.vhCDR3；
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CHA.9.541.5、CHA.9.541.5.VH、CHA.9.541.5.VL、CHA.9.541.5.HC、CHA.9.541.5.LC、CHA.9.541.5.H1、CHA.9.541.5.H2、CHA.9.541.5.H3；CHA.9.541.5.H4、CHA.9.541.5.H4(S241P)、CHA.9.541.5.vhCDR1、CHA.9.541.5.vhCDR2、CHA.9.541.5.vhCDR3、CHA.9.541.5.vlCDR1、CHA.9.541.5.vlCDR2和CHA.9.541.5.vhCDR3；
CHA.9.541.6、CHA.9.541.6.VH、CHA.9.541.6.VL、CHA.9.541.6.HC、CHA.9.541.6.LC、CHA.9.541.6.H1、CHA.9.541.6.H2、CHA.9.541.6.H3；CHA.9.541.6.H4、CHA.9.541.6.H4(S241P)、CHA.9.541.6.vhCDR1、CHA.9.541.6.vhCDR2、CHA.9.541.6.vhCDR3、CHA.9.541.6.vlCDR1、CHA.9.541.6.vlCDR2和CHA.9.541.6.vhCDR3；
CHA.9.541.7、CHA.9.541.7.VH、CHA.9.541.7.VL、CHA.9.541.7.HC、CHA.9.541.7.LC、CHA.9.541.7.H1、CHA.9.541.7.H2、CHA.9.541.7.H3；CHA.9.541.7.H4、CHA.9.541.7.H4(S241P)、CHA.9.541.7.vhCDR1、CHA.9.541.7.vhCDR2、CHA.9.541.7.vhCDR3、CHA.9.541.7.vlCDR1、CHA.9.541.7.vlCDR2和CHA.9.541.7.vhCDR3；和
CHA.9.541.8、CHA.9.541.8.VH、CHA.9.541.8.VL、CHA.9.541.8.HC、CHA.9.541.8.LC、CHA.9.541.8.H1、CHA.9.541.8.H2、CHA.9.541.8.H3；CHA.9.541.8.H4、CHA.9.541.8.H4(S241P)；CHA.9.541.8vhCDR1、CHA.9.541.8.vhCDR2、CHA.9.541.8.vhCDR3、CHA.9.541.8.vlCDR1、CHA.9.541.8.vlCDR2和CHA.9.541.8.vhCDR3。
在包含上述抗体的CDR的scFv的情况下，将这些标记为scFv，其包括包含具有vhCDR的可变重链结构域、连接子和具有vlCDR的可变轻链结构域的scFv，同样如上所述呈任一定向。因此，本发明包括scFv-CHA.9.536.3.1、scFv-CHA.9.536.3、scFv-CHA.9.536.4、scFv-CHA.9.536.5、scFv-CHA.9.536.7、scFv-CHA.9.536.8、scFv-CHA.9.560.1、scFv-CHA.9.560.3、scFv-CHA.9.560.4、scFv-CHA.9.560.5、scFv-CHA.9.560.6、scFv-CHA.9.560.7、scFv-CHA.9.560.8、scFv-CHA.9.546.1、scFv-CHA.9.547.1、scFv-CHA.9.547.2、scFv-CHA.9.547.3、scFv-CHA.9.547.4、scFv-CHA.9.547.6、scFv-CHA.9.547.7、scFv-CHA.9.547.8、scFv-CHA.9.547.9、scFv-CHA.9.547.13、scFv-CHA.9.541.1、scFv-CHA.9.541.3、scFv-CHA.9.541.4、scFv-CHA.9.541.5、scFv-CHA.9.541.6、scFv-CHA.9.541.7和scFv-CHA.9.541.8的用途。
此外，CHA.9.543与TIGIT结合但不阻断TIGIT-PVR相互作用。
如本文所讨论，本发明还提供了上述组分(CPA和CHA)的变体，包括CDR中的变体的用途，如上所概述。因此，本发明提供了包含如本文所概述的6个CDR的组的抗体，其可以在CDR组中含有一个、两个或三个氨基酸差异，只要所述抗体仍然与TIGIT结合即可。用于测试抗TIGIT抗体与本文所概述的CDR序列相比是否含有突变的合适分析是本领域已知的，例如Biacore分析。
此外，本发明还提供了上述可变重链和轻链的变体的用途。在这种情况下，可变重链可以与本文的“VH”序列80％、90％、95％、98％或99％一致，和/或当使用Fc变体时，含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个氨基酸变化或更多。提供可变轻链，其可与本文的“VL”序列(特别是CPA.9.086)80％、90％、95％、98％或99％相同，和/或当使用Fc变体时，含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个氨基酸变化或更多。在这些实施例中，用于本发明的抗TIGIT抗体仍与TIGIT结合。用于测试抗TIGIT抗体与本文所概述的CDR序列相比是否含有突变的合适分析是本领域已知的，例如Biacore分析。
类似地，提供重链和轻链，其与本文的全长“HC”和“LC”序列(并且特别是CPA.9.086)80％、90％、95％、98％或99％一致，和/或当使用Fc变体时，含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个氨基酸变化或更多。在这些实施例中，只要抗TIGIT抗体仍与TIGIT结合，本发明就包括这些变体。用于测试抗TIGIT抗体与本文所概述的CDR序列相比是否含有突变的合适分析是本领域已知的，例如Biacore分析。
此外，本文中CPA或CHA抗体的可变重链和可变轻链的框架区可以如本领域已知(根据需要偶尔在CDR中产生变体)进行人类化(或者，在CHA抗体的情况下，“再人类化”，达到可以进行替代人类化方法的程度)，因此可以产生图23的VH和VL链的人类化变体(并且特别是CPA.9.086)。此外，人类化可变重链结构域和可变轻链结构域然后可以与人类恒定区，例如来自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的恒定区(包括IgG4(S241P))融合。
特别地，如本领域中已知，鼠类VH和VL链可以如本领域中已知般进行人类化，例如使用NCBI网站的IgBLAST程序，如Ye等人《核酸研究(Nucleic Acids Res.)》41:W34-W40(2013)中所概述，所述文献关于人类化方法以全文引用的方式并入本文中。IgBLAST采用鼠类VH和/或VL序列并且将其与已知人类生殖系序列的文库进行比较。如本文所示，对于本文产生的人类化序列，使用的数据库是IMGT人类VH基因(F+ORF，273个生殖系序列)和IMGT人类VLκ基因(F+ORF，74个生殖系序列)。选择例示性的五种CHA序列：CHA.9.536、CHA9.560、CHA.9.546、CHA.9.547和CHA.9.541(参见图3)。对于人类化的这个实施例，5个全都选择人类生殖系IGHV1-46(等位基因1)作为受体序列并且选择人类重链IGHJ4(等位基因1)连接区(J基因)。对于四个(CHA.7.518、CHA.7.530、CHA.7.538_1和CHA.7.538_2)中的三个，选择人类生殖系IGKV1-39(等位基因1)作为受体序列并且选择人类轻链IGKJ2(等位基因1)(J基因)。J基因选自在
Figure BDA0002340382800000811
国际ImMunoGeneTics信息系统(如www.imgt.org)下汇编的人类连接区序列。CDR根据AbM定义(参见www.bioinfo.org.uk/abs/)来定义。在一些实施例中，用于本发明的抗TIGIT抗体包括TIGIT结合部分或抗原结合结构域，其中不同TIGIT结合部分或抗原结合结构域的VH和VL序列可以“混合和匹配”以形成其它TIGIT结合部分或抗原结合结构域。可以使用上文所述的结合分析(例如，ELISA或Biacore分析)测试这类“混合和匹配”抗TIGIT抗体的TIGIT结合。在一些实施例中，当VH和VL链混合和匹配时，来自特定VH/VL配对的VH序列被结构上类似的VH序列置换。同样地，在一些实施例中，来自特定VH/VL配对的VL序列被结构上类似的VL序列置换。举例来说，同源抗体的VH和VL序列特别适合于混合和匹配。
因此，用于本发明的抗TIGIT抗体可以包含选自由以下组成的群组的的CDR氨基酸序列：(a)如本文所列的序列；(b)由于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个氨基酸取代而与(a)中指定的那些CDR氨基酸序列不同的序列；(c)与(a)或(b)中指定的序列具有90％或更高、95％或更高、98％或更高、或99％或更高序列一致性的氨基酸序列；(d)具有由多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽，所述多核苷酸具有编码如本文所列氨基酸的核酸序列。特别地，抗TIGIT抗体可以包含来自可具有选自(a)、(b)、(c)或(d)的序列的CPA.9.086抗体的抗原结合结构域。
在用于本发明的抗TIGIT抗体的定义中另外包括的是包含与来自本文中所列举的TIGIT抗体的结合结构域共享一致性的TIGIT结合结构域的抗体。也就是说，在某些实施例中，根据本发明的抗TIGIT抗体包含重链和轻链可变区，其包含与来自优选的抗TIGIT抗体的抗TIGIT氨基酸序列的全部或部分结合结构域一致的氨基酸序列，其中抗体保留亲本抗TIGIT抗体的所期望功能特性。两个序列之间的一致性百分比是序列共享的相同位置的数量的函数(即，同源性％＝相同位置的数量/位置总数×100)，考虑到空位的数量和每个空位的长度，这些需要引入以使两个序列最佳对齐。序列的比较和两个序列之间的一致性百分比的测定可以使用数学算法完成，如下面的非限制性实例中所述。
两个氨基酸序列之间的一致性百分比可以使用已并入到ALIGN程序(2.0版)中的E.Meyers和W.Miller(《计算机在生物科学中的应用(Comput.Appl.Biosci.)》,4:11-17(1988))算法，使用PAM120权重残基表(weight residue table)、空位长度罚分(gaplength penalty)12和空位罚分(gap penalty)4来测定。另外，两个氨基酸序列之间的一致性百分比可以使用已经并入到GCG软件包中的GAP程序中的Needleman和Wunsch(《分子生物学杂志》48:444-453(1970))算法、使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵以及空位权重(gapweight)16、14、12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6来测定。
通常，TIGIT结合结构域或抗原结合结构域之间比较的一致性百分比为至少75％、至少80％、至少90％，优选一致性百分比为至少约95％、96％、97％、98％或99％。一致性百分比可以沿着整个氨基酸序列，例如整个重链或轻链或沿着链的一部分。举例来说，包括于用于本发明的抗TIGIT抗体的定义内的是其TIGIT结合部分抗原结合结构域沿着整个可变区(例如，其中一致性是沿着可变区95％或98％一致)，或沿着整个恒定区，或仅沿着Fc结构域共享一致性的那些抗体。特别地，用于本发明的抗TIGIT抗体包括具有TIGIT结合部分或抗原结合结构域的抗体，所述TIGIT结合部分或抗原结合结构域与CPA.9.086抗体具有至少75％、至少80％、至少90％、优选具有至少约95％、96％、97％、98％或99％一致性百分比。
另外，还包括可以具有一致CDR但在可变结构域(或整个重链或轻链)的框架部分中发生变化的序列。举例来说，用于本发明的抗TIGIT抗体包括具有与图3中所示一致的CDR的那些，但其沿着可变区的一致性可以更低，例如95或98％一致。特别地，本发明提供具有TIGIT结合部分或抗原结合结构域的抗TIGIT抗体的用途，所述TIGIT结合部分或抗原结合结构域具有与CPA.9.086一致的CDR，但是与CPA.9.086具有95％或98％一致的框架区。
D.抗TIGIT抗体与抗PD-1抗体组合
在另一个实施例中，本发明提供了本发明的抗TIGIT抗体和抗PD-1抗体的组合。有两种已获批准的抗PD-1抗体帕博利珠单抗
Figure BDA0002340382800000831
和纳武单抗
Figure BDA0002340382800000832
以及更多研发中的抗体，其可与本发明的抗TIGIT抗体组合使用。
因此，本发明提供以下特定组合：如图3F中所示的CPA.9.083.H4(S241P)与帕博利珠单抗；如图3F中所示的CPA.9.083.H4(S241P)与纳武单抗；如图3G中所示的CPA.9.086.H4(S241P)与帕博利珠单抗；如图3G中所示的CPA.9.086.H4(S241P)与纳武单抗；如图4HH中所示的CHA.9.547.7H4(S241P)与帕博利珠单抗；如图3HH中所示的CHA.9.547.7H4(S241P)与纳武单抗；如图3VV中所示的CHA.9.547.13.H4(S241P)帕博利珠单抗以及如图3VV中所示的CHA.9.547.13.H4(S241P)与纳武单抗；其所有都来自受让方2017年6月1日提交的标题为“抗TIGIT抗体和使用方法”的USSN 62/513,916的图4。图3中还提供了可以与抗PD-1抗体组合的其它抗TIGIT抗体。
E.特异性抗PVRIG抗体
本发明提供了抗原结合结构域，包括全长抗体，其含有许多特定的所列举的6个CDR的组和定义的可变重链(vh、VH或VH)和可变轻链(vl、VL或VL)，其与PVRIG结合。
在一个实施例中，抗PVRIG抗体是包含来自如图5中所描绘的CHA.7.518.1.H4(S241P)的六个CDR(vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)的组的抗体。在一个实施例中，抗TIGIT抗体是包含来自如图5中所描绘的CHA.7.518.1.H4(S241P)的可变重链(vh)和可变轻链(vl)结构域的抗体，所述结构域与IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和IgG4(S241P)的人类IgG恒定结构域连接。在一个实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)。在一些实施例中，抗PVRIG抗体是如图5或图63中所示的抗PVRIG抗体。
特别地，可使用Zhu等人WO2017/041004(其以引入的方式特定地并入本文中)的2H6抗PVRIG抗体，其具有来自WO2017/041004的SEQ ID NO:6的vhCDR1、SEQ ID NO:7的vhCDR2、SEQ ID NO:8的vhCDR3、SEQ ID NO:9的vlCDR1、SEQ ID NO:10的vlCDR2和SEQ IDNO:11的vhCDR3。Zhu等人的2H6抗PVRIG抗体具有包含SEQ ID NO:6的可变重链结构域和包含SEQ ID NO:3的可变轻链结构域，所述结构域可与IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和IgG4(S241P)的人类IgG恒定结构域连接。本段中的所有SEQ ID都来自WO2017/041004，并且也提供于图5中。
特别地，可使用来自以引入的方式特定地并入本文中的WO2018/017864的334M5抗PVRIG抗体，其具有来自WO2018/017864的SEQ ID NO:31的vhCDR1、SEQ ID NO:32的vhCDR2、SEQ ID NO:33的vhCDR3、SEQ ID NO:26的vlCDR1、SEQ ID NO:27的vlCDR2和SEQ ID NO:28的vhCDR3。来自WO2018/017864的334M5抗PVRIG抗体具有包含SEQ ID NO:30的可变重链结构域和包含SEQ ID NO:25的可变轻链结构域，所述结构域可与IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和IgG4(S241P)的人类IgG恒定结构域。本段中的所有SEQ ID都来自WO2018/017864，并且也提供于图5中。
F.额外抗PVRIG抗体
可根据本发明的三联组合使用的PVRIG抗体标记如下。本文所述的这些PVRIG抗体标记如下。PVRIG抗体具有参考编号，例如“CPA.7.013”。这代表可变重链和可变轻链的组合，例如如图63所示。“CPA.7.013.VH”是指CPA.7.013的可变重链部分，而“CPA.7.013.VL”是可变轻链。“CPA.7.013.vhCDR1”、“CPA.7.013.vhCDR2”、“CPA.7.013.vhCDR3”、“CPA.7.013.vlCDR1”、“CPA.7.013.vlCDR2”和“CPA.7.013.vlCDR3”是指所指示的CDR。“CPA.7.013.HC”是指这一分子的整个重链(例如可变结构域和恒定结构域)，并且“CPA.7.013.LC”是指同一分子的整个轻链(例如可变结构域和恒定结构域)。“CPA.7.013.H1”是指包含可变重链结构域和可变轻链结构域的全长抗体，包括人类IgG1(因此，例如如提供于图1中的H1；IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)的恒定结构域。因此，“CPA.7.013.H2”将是与人类IgG2连接的CPA.7.013可变结构域。“CPA.7.013.H3”将是与人类IgG3连接的CPA.7.013可变结构域，并且“CPA.7.013.H4”将是与人类IgG4连接的CPA.7.013可变结构域。
可根据本发明的三联组合使用的PVRIG抗体标记如下。抗体具有参考编号，例如“CHA.7.518.1”。这代表可变重链和可变轻链的组合，如图5和63中所示，例如，理解这些抗体包括两条重链和两条轻链。“CPA.7.518.1.VH”是指CPA.7.518.1的可变重链部分，而“CPA.7.518.1.VL”是可变轻链。“CPA.7.518.1.vhCDR1”、“CPA.7.518.1.vhCDR2”、“CPA.7.518.1.vhCDR3”、“CPA.7.518.1.vlCDR1”、“CPA.7.518.1.vlCDR2”和“CPA.7.518.1.vlCDR3”是指所指示的CDR。“CPA.7.518.1.HC”是指这一分子的整个重链(例如可变结构域和恒定结构域)，并且“CPA.7.518.1.LC”是指同一分子的整个轻链(例如可变结构域和恒定结构域)。通常，人类κ轻链用于本文中每种噬菌体(或人类化杂交瘤)抗体的恒定结构域，尽管在一些实施例中使用λ轻链恒定结构域。“CPA.7.518.1.H1”是指包含可变重链结构域和可变轻链结构域的全长抗体，包括人类IgG1(因此，例如如提供于图1中的H1；IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)的恒定结构域。因此，“CPA.7.518.1.H2”将是与人类IgG2连接的CPA.7.518.1可变结构域。“CPA.7.518.1.H3”将是与人类IgG3连接的CPA.7.518.1可变结构域，并且“CPA.7.518.1.H4”将是与人类IgG4连接的CPA.7.518.1可变结构域。注意，在一些情况下，人类IgG可能具有额外的突变，如下所述，并且这可以注释。举例来说，在许多实施例中，人类IgG4中可能存在S241P突变，并且这可以注释为例如“CPA.7.518.1.H4(S241P)”。具有这一S241P铰链变体的人类IgG4序列示于图1中。其它可能的变体是IgG1(N297A)，(或在这一位点消除糖基化的其它变体，并且因此许多效应功能与FcγRIIIa结合相关)和IgG1(D265A)，其降低与FcγR受体的结合。用于本发明的抗PVRIG抗体可以包含PVRIG抗体序列中的任一种。用于本发明的抗PVRIG抗体可以包含PVRIG抗原结合结构域序列中的任一种。
本发明进一步提供可变重链结构域和可变轻链结构域以及全长的重链和轻链，其任何一个都可以用作根据本发明使用的抗PVRIG抗体的一部分。
在一些实施例中，本发明提供与PVRIG结合的scFv，其包含如上所概述通过scFv连接子连接的可变重链结构域和可变轻链结构域。VL和VH结构域可以呈任一定向，例如从N端到C端“VH-连接子-VL”或“VL-连接子”VH"。这些是由其组成部分命名的；例如“scFv-CHA.7.518.1VH-连接子-VL”或“scFv-CPA.7.518.1.VL-linker-VH”。因此，“scFv-CPA.7.518.1”可以呈任一定向。用于本发明的抗PVRIG抗体可以包含与PVRIG结合的scFv。
本发明提供抗原结合结构域，包括全长抗体，其含有许多特定的所列举的6个CDR的组。用于本发明的抗PVRIG抗体可以包含来自本文所提供的PVRIG抗体序列的6个CDR的组中的任一种。
本发明还提供重域可变结构域和轻域可变结构域以及全长重链和轻链。
在许多实施例中，用于本发明的抗PVRIG抗体是人类(衍生自噬菌体)的，并且阻断PVRIG和PVLR2的结合。本发明的抗PVRIG抗体可以包含能够结合和阻断受体-配体相互作用的PVRIG抗体和/或抗原结合结构域序列。抗PVRIG可以包含能够结合和阻断受体-配体相互作用的PVRIG抗体序列的CDR。结合和阻断受体-配体相互作用的CPA抗体以及CDR序列如下，并且也概述其组分，其序列如图63中所示：
CPA.7.001、CPA.7.001.VH、CPA.7.001.VL、CPA.7.001.HC、CPA.7.001.LC和CPA.7.001.H1、CPA.7.001.H2、CPA.7.001.H3、CPA.7.001.H4；CPA.7.001.vhCDR1、CPA.7.001.vhCDR2、CPA.7.001.vhCDR3、CPA.7.001.vlCDR1、CPA.7.001.vlCDR2和CPA.7.001.vlCDR3；
CPA.7.003、CPA.7.003.VH、CPA.7.003.VL、CPA.7.003.HC、CPA.7.003.LC、CPA.7.003.H1、CPA.7.003.H2、CPA.7.003.H3、CPA.7.003.H4；CPA.7.003.vhCDR1、CPA.7.003.vhCDR2、CPA.7.003.vhCDR3、CPA.7.003.vlCDR1、CPA.7.003.vlCDR2和CPA.7.003.vlCDR3；
CPA.7.004、CPA.7.004.VH、CPA.7.004.VL、CPA.7.004.HC、CPA.7.004.LC、CPA.7.004.H1、CPA.7.004.H2、CPA.7.004.H3、CPA.7.004.H4；CPA.7.004.vhCDR1、CPA.7.004.vhCDR2、CPA.7.004.vhCDR3、CPA.7.004.vlCDR1、CPA.7.004.vlCDR2和CPA.7.004.vlCDR3；
CPA.7.006、CPA.7.006.VH、CPA.7.006.VL、CPA.7.006.HC、CPA.7.006.LC、CPA.7.006.H1、CPA.7.006.H2、CPA.7.006.H3、CPA.7.006.H4；CPA.7.006.vhCDR1、CPA.7.006.vhCDR2、CPA.7.006.vhCDR3、CPA.7.006.vlCDR1、CPA.7.006.vlCDR2和CPA.7.006.vlCDR3；
CPA.7.008、CPA.7.008.VH、CPA.7.008.VL、CPA.7.008.HC、CPA.7.008.LC、CPA.7.008.H1、CPA.7.008.H2、CPA.7.008.H3、CPA.7.008.H4；CPA.7.008.vhCDR1、CPA.7.008.vhCDR2、CPA.7.008.vhCDR3、CPA.7.008.vlCDR1、CPA.7.008.vlCDR2和CPA.7.008.vlCDR3；
CPA.7.009、CPA.7.009.VH、CPA.7.009.VL、CPA.7.009.HC、CPA.7.009.LC、CPA.7.009.H1、CPA.7.009.H2、CPA.7.009.H3、CPA.7.009.H4；CPA.7.009.vhCDR1、CPA.7.009.vhCDR2、CPA.7.009.vhCDR3、CPA.7.009.vlCDR1、CPA.7.009.vlCDR2和CPA.7.009.vlCDR3；
CPA.7.010、CPA.7.010.VH、CPA.7.010.VL、CPA.7.010.HC、CPA.7.010.LC、CPA.7.010.H1、CPA.7.010.H2、CPA.7.010.H3、CPA.7.010.H4；CPA.7.010.vhCDR1、CPA.7.010.vhCDR2、CPA.7.010.vhCDR3、CPA.7.010.vlCDR1、CPA.7.010.vlCDR2和CPA.7.010.vlCDR3；
CPA.7.011、CPA.7.011.VH、CPA.7.011.VL、CPA.7.011.HC、CPA.7.011.LC、CPA.7.011.H1、CPA.7.011.H2、CPA.7.011.H3、CPA.7.011.H4；CPA.7.011.vhCDR1、CPA.7.011.vhCDR2、CPA.7.011.vhCDR3、CPA.7.011.vlCDR1、CPA.7.011.vlCDR2和CPA.7.011.vlCDR3；
CPA.7.012、CPA.7.012.VH、CPA.7.012.VL、CPA.7.012.HC、CPA.7.012.LC、CPA.7.012.H1、CPA.7.012.H2、CPA.7.012.H3、CPA.7.012.H4；CPA.7.012.vhCDR1、CPA.7.012.vhCDR2、CPA.7.012.vhCDR3、CPA.7.012.vlCDR1、CPA.7.012.vlCDR2和CPA.7.012.vlCDR3；
CPA.7.013、CPA.7.013.VH、CPA.7.013.VL、CPA.7.013.HC、CPA.7.013.LC、CPA.7.013.H1、CPA.7.013.H2、CPA.7.013.H3、CPA.7.013.H4；CPA.7.013.vhCDR1、CPA.7.013.vhCDR2、CPA.7.013.vhCDR3、CPA.7.013.vlCDR1、CPA.7.013.vlCDR2和CPA.7.013.vlCDR3；
CPA.7.014、CPA.7.014.VH、CPA.7.014.VL、CPA.7.014.HC、CPA.7.014.LC、CPA.7.014.H1、CPA.7.014.H2、CPA.7.014.H3、CPA.7.014.H4；CPA.7.014.vhCDR1、CPA.7.014.vhCDR2、CPA.7.014.vhCDR3、CPA.7.014.vlCDR1、CPA.7.014.vlCDR2和CPA.7.014.vlCDR3；
CPA.7.015、CPA.7.015.VH、CPA.7.015.VL、CPA.7.015.HC、CPA.7.015.LC、CPA.7.015.H1、CPA.7.015.H2、CPA.7.015.H3、CPA.7.015.H4；CPA.7.015.vhCDR1、CPA.7.015.vhCDR2、CPA.7.015.vhCDR3、CPA.7.015.vlCDR1、CPA.7.015.vlCDR2和CPA.7.015.vlCDR3；
CPA.7.017、CPA.7.017.VH、CPA.7.017.VL、CPA.7.017.HC、CPA.7.017.LC、CPA.7.017H1、CPA.7.017.H2、CPA.7.017.H3、CPA.7.017.H4；CPA.7.017.vhCDR1、CPA.7.000171.vhCDR2、CPA.7.017.vhCDR3、CPA.7.017.vlCDR1、CPA.7.017.vlCDR2和CPA.7.017.vlCDR3；
CPA.7.018、CPA.7.018.VH、CPA.7.018.VL、CPA.7.018.HC、CPA.7.018.LC、CPA.7.018.H1、CPA.7.018.H2、CPA.7.018.H3、CPA.7.018.H4；CPA.7.017.vhCDR1、CPA.7.017.vhCDR2、CPA.7.017.vhCDR3、CPA.7.017.vlCDR1、CPA.7.017.vlCDR2和CPA.7.017.vlCDR3；
CPA.7.019、CPA.7.019.VH、CPA.7.019.VL、CPA.7.019.HC、CPA.7.019.LC、CPA.7.019.H1、CPA.7.019.H2、CPA.7.019.H3、CPA.7.019.H4；CPA.7.019.vhCDR1、CPA.7.019.vhCDR2、CPA.7.019.vhCDR3、CPA.7.019.vlCDR1、CPA.7.019.vlCDR2和CPA.7.019.vlCDR3；
CPA.7.021、CPA.7.021.VH、CPA.7.021.VL、CPA.7.021.HC、CPA.7.021.LC、CPA.7.021.H1、CPA.7.021.H2、CPA.7.021.H3、CPA.7.021.H4；CPA.7.021.vhCDR1、CPA.7.021.vhCDR2、CPA.7.021.vhCDR3、CPA.7.021.vlCDR1、CPA.7.021.vlCDR2和CPA.7.021.vlCDR3；
CPA.7.022、CPA.7.022.VH、CPA.7.022.VL、CPA.7.022.HC、CPA.7.022.LC、CPA.7.022.H1、CPA.7.022.H2、CPA.7.022.H3、CPA.7.022.H4；CPA.7.022.vhCDR1、CPA.7.022.vhCDR2、CPA.7.002201.vhCDR3、CPA.7.022.vlCDR1、CPA.7.022.vlCDR2和CPA.7.022.vlCDR3；
CPA.7.023、CPA.7.023.VH、CPA.7.023.VL、CPA.7.023.HC、CPA.7.023.LC、CPA.7.023.H1、CPA.7.023.H2、CPA.7.023.H3、CPA.7.023.H4；CPA.7.023.vhCDR1、CPA.7.023.vhCDR2、CPA.7.023.vhCDR3、CPA.7.023.vlCDR1、CPA.7.023.vlCDR2和CPA.7.023.vlCDR3；
CPA.7.024、CPA.7.024.VH、CPA.7.024.VL、CPA.7.024.HC、CPA.7.024.LC、CPA.7.024.H1、CPA.7.024.H2、CPA.7.024.H3、CPA.7.024.H4；CPA.7.024.vhCDR1、CPA.7.024.vhCDR2、CPA.7.024.vhCDR3、CPA.7.024.vlCDR1、CPA.7.024.vlCDR2和CPA.7.024.vlCDR3；
CPA.7.033、CPA.7.033.VH、CPA.7.033.VL、CPA.7.033.HC、CPA.7.033.LC、CPA.7.033.H1、CPA.7.033.H2、CPA.7.033.H3、CPA.7.033.H4；CPA.7.033.vhCDR1、CPA.7.033.vhCDR2、CPA.7.033.vhCDR3、CPA.7.033.vlCDR1、CPA.7.033.vlCDR2和CPA.7.033.vlCDR3；
CPA.7.034、CPA.7.034.VH、CPA.7.034.VL、CPA.7.034.HC、CPA.7.034.LC、CPA.7.034.H1、CPA.7.034.H2、CPA.7.034.H3、CPA.7.034.H4；CPA.7.034.vhCDR1、CPA.7.034.vhCDR2、CPA.7.034.vhCDR3、CPA.7.034.vlCDR1、CPA.7.034.vlCDR2和CPA.7.034.vlCDR3；
CPA.7.036、CPA.7.036.VH、CPA.7.036.VL、CPA.7.036.HC、CPA.7.036.LC、CPA.7.036.H1、CPA.7.036.H2、CPA.7.036.H3、CPA.7.036.H4；CPA.7.036.vhCDR1、CPA.7.036.vhCDR2、CPA.7.036.vhCDR3、CPA.7.036.vlCDR1、CPA.7.036.vlCDR2和CPA.7.036.vlCDR3；
CPA.7.040、CPA.7.040.VH、CPA.7.040.VL、CPA.7.040.HC、CPA.7.040.LC、CPA.7.040.H1、CPA.7.040.H2、CPA.7.040.H3和CPA.7.040.H4；CPA.7.040.vhCDR1、CPA.7.040.vhCDR2、CPA.7.040.vhCDR3、CPA.7.040.vlCDR1、CPA.7.040.vlCDR2和CPA.7.040.vlCDR3；
CPA.7.046、CPA.7.046.VH、CPA.7.046.VL、CPA.7.046.HC、CPA.7.046.LC、CPA.7.046.H1、CPA.7.046.H2、CPA.7.046.H3、CPA.7.046.H4；CPA.7.046.vhCDR1、CPA.7.046.vhCDR2、CPA.7.046.vhCDR3、CPA.7.046.vlCDR1、CPA.7.046.vlCDR2和CPA.7.046.vlCDR3；
CPA.7.047、CPA.7.047.VH、CPA.7.047.VL、CPA.7.047.HC、CPA.7.047.LC、CPA.7.047.H1、CPA.7.047.H2、CPA.7.047.H3、CPA.7.047.H4；CPA.7.047.vhCDR1、CPA.7.047.vhCDR2、CPA.7.047.vhCDR3、CPA.7.047.vlCDR1、CPA.7.004701.vlCDR2和CPA.7.047.vlCDR3；
CPA.7.049、CPA.7.049.VH、CPA.7.049.VL、CPA.7.049.HC、CPA.7.049.LC、CPA.7.049.H1、CPA.7.049.H2、CPA.7.049.H3、CPA.7.049.H4；CPA.7.049.vhCDR1、CPA.7.049.vhCDR2、CPA.7.049.vhCDR3、CPA.7.049.vlCDR1、CPA.7.049.vlCDR2和CPA.7.049.vlCDR3；和
CPA.7.050、CPA.7.050.VH、CPA.7.050.VL、CPA.7.050.HC、CPA.7.050.LC、CPA.7.050.H1、CPA.7.050.H2、CPA.7.050.H3、CPA.7.050.H4、CPA.7.050.vhCDR1、CPA.7.050.vhCDR2、CPA.7.050.vhCDR3、CPA.7.050.vlCDR1、CPA.7.050.vlCDR2和CPA.7.050.vlCDR3。
另外，存在与PVRIG结合但不阻断PVRIG和PVLR2的相互作用的本文产生的许多CPA抗体。用于本发明的抗PVRIG抗体可以包含能够结合但不阻断受体-配体相互作用的PVRIG抗体和/或抗原结合结构域序列。用于本发明的抗PVRIG可以包含来自能够结合但不阻断受体-配体相互作用的PVRIG抗体序列的CDR。结合但不阻断受体-配体相互作用的CPA抗体以及CDR序列如下，并且概述其组分，其序列如图63中所示：
CPA.7.028、CPA.7.028.VH、CPA.7.028.VL、CPA.7.028.HC、CPA.7.028.LC、CPA.7.028.H1、CPA.7.028.H2、CPA.7.028.H3和CPA.7.028.H4；CPA.7.028.vhCDR1、CPA.7.028.vhCDR2、CPA.7.028.vhCDR3、CPA.7.028.vlCDR1、CPA.7.028.vlCDR2和CPA.7.028.vlCDR3。
CPA.7.030、CPA.7.030.VH、CPA.7.030.VL、CPA.7.030.HC、CPA.7.030.LC、CPA.7.030.H1、CPA.7.030.H2、CPA.7.030.H3和CPA.7.030.H4；CPA.7.030.vhCDR1、CPA.7.030.vhCDR2、CPA.7.030.vhCDR3、CPA.7.030.vlCDR1、CPA.7.030.vlCDR2和CPA.7.030.vlCDR3。
CPA.7.041、CPA.7.041.VH、CPA.7.041.VL、CPA.7.041.HC、CPA.7.041.LC、CPA.7.041.H1、CPA.7.041.H2、CPA.7.041.H3和CPA.7.041.H4；CPA.7.041.vhCDR1、CPA.7.041.vhCDR2、CPA.7.041.vhCDR3、CPA.7.041.vlCDR1、CPA.7.041.vlCDR2和CPA.7.041.vlCDR3。
CPA.7.016、CPA.7.016.VH、CPA.7.016.VL、CPA.7.016.HC、CPA.7.016.LC、CPA.7.016.H1、CPA.7.016.H2、CPA.7.016.H3和CPA.7.016.H4；CPA.7.016.vhCDR1、CPA.7.016.vhCDR2、CPA.7.016.vhCDR3、CPA.7.016.vlCDR1、CPA.7.016.vlCDR2和CPA.7.016.vlCDR3。
CPA.7.020、CPA.7.020.VH、CPA.7.020.VL、CPA.7.020.HC、CPA.7.020.LC、CPA.7.020.H1、CPA.7.020.H2、CPA.7.020.H3和CPA.7.020.H4；CPA.7.020.vhCDR1、CPA.7.020.vhCDR2、CPA.7.020.vhCDR3、CPA.7.020.vlCDR1、CPA.7.020.vlCDR2和CPA.7.020.vlCDR3。
CPA.7.038、CPA.7.038.VH、CPA.7.038.VL、CPA.7.038.HC、CPA.7.038.LC、CPA.7.038.H1、CPA.7.038.H2、CPA.7.038.H3和CPA.7.038.H4；CPA.7.038.vhCDR1、CPA.7.038.vhCDR2、CPA.7.038.vhCDR3、CPA.7.038.vlCDR1、CPA.7.038.vlCDR2和CPA.7.038.vlCDR3。
CPA.7.044、CPA.7.044.VH、CPA.7.044.VL、CPA.7.044.HC、CPA.7.044.LC、CPA.7.044.H1、CPA.7.044.H2、CPA.7.044.H3和CPA.7.044.H4；CPA.7.044.vhCDR1、CPA.7.044.vhCDR2、CPA.7.044.vhCDR3、CPA.7.044.vlCDR1、CPA.7.044.vlCDR2和CPA.7.044.vlCDR3。
CPA.7.045、CPA.7.045.VH、CPA.7.045.VL、CPA.7.045.HC、CPA.7.045.LC、CPA.7.045.H1、CPA.7.045.H2、CPA.7.045.H3和CPA.7.045.H4；CPA.7.045.vhCDR1、CPA.7.045.vhCDR2、CPA.7.045.vhCDR3、CPA.7.045.vlCDR1、CPA.7.045.vlCDR2和CPA.7.045.vlCDR3。
如本文所讨论，本发明还提供上述组分的变体，包括如上所述的CDR中的变体。另外，可变重链可以与本文的“VH”序列80％、90％、95％、98％或99％一致，和/或当使用Fc变体时，含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个氨基酸变化或更多。提供可变轻链，其可与本文的“VL”序列80％、90％、95％、98％或99％一致，和/或当使用Fc变体时，含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个氨基酸变化或更多。类似地，提供重链和轻链，其与本文的全长“HC”和“LC”序列80％、90％、95％、98％或99％一致，和/或当使用Fc变体时，含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个氨基酸变化或更多。用于本发明的抗PVRIG可以包含这些PVRIG抗体和/或抗原结合结构域序列中的任一种。
此外，本发明提供许多CHA抗体，其是由杂交瘤产生的鼠类抗体。如本领域众所周知的，当置于人类框架重链可变区和轻链可变区中或当可变重链结构域和可变轻链结构域人类化时，六个CDR是有用的。参见例如图5和63。
用于本发明的抗PVRIG可以包含来自PVRIG抗体序列的CDR的以下CHA组中的任一种。因此，本发明提供了抗PVRIG的用途，所述抗PVRIG包含CDR的以下CHA组，其序列展示于图5和/或图63中：
CHA.7.502.vhCDR1、CHA.7.502.vhCDR2、CHA.7.502.vhCDR3、CHA.7.502.vlCDR1、CHA.7.502.vlCDR2和CHA.7.502.vlCDR3。
CHA.7.503.vhCDR1、CHA.7.503.vhCDR2、CHA.7.503.vhCDR3、CHA.7.503.vlCDR1、CHA.7.503.vlCDR2和CHA.7.503.vlCDR3。
CHA.7.506.vhCDR1、CHA.7.506.vhCDR2、CHA.7.506.vhCDR3、CHA.7.506.vlCDR1、CHA.7.506.vlCDR2和CHA.7.506.vlCDR3。
CHA.7.508.vhCDR1、CHA.7.508.vhCDR2、CHA.7.508.vhCDR3、CHA.7.508.vlCDR1、CHA.7.508.vlCDR2和CHA.7.508.vlCDR3。
CHA.7.510.vhCDR1、CHA.7.510.vhCDR2、CHA.7.510.vhCDR3、CHA.7.510.vlCDR1、CHA.7.510.vlCDR2和CHA.7.510.vlCDR3。
CHA.7.512.vhCDR1、CHA.7.512.vhCDR2、CHA.7.512.vhCDR3、CHA.7.512.vlCDR1、CHA.7.512.vlCDR2和CHA.7.512.vlCDR3。
CHA.7.514.vhCDR1、CHA.7.514.vhCDR2、CHA.7.514.vhCDR3、CHA.7.514.vlCDR1、CHA.7.514.vlCDR2和CHA.7.514.vlCDR3。
CHA.7.516.vhCDR1、CHA.7.516.vhCDR2、CHA.7.516.vhCDR3、CHA.7.516.vlCDR1、CHA.7.516.vlCDR2和CHA.7.516.vlCDR3。
CHA.7.518.vhCDR1、CHA.7.518.vhCDR2、CHA.7.518.vhCDR3、CHA.7.518.vlCDR1、CHA.7.518.vlCDR2和CHA.7.518.vlCDR3。
CHA.7.520_1.vhCDR1、CHA.7.520_1.vhCDR2、CHA.7.520_1.vhCDR3、CHA.7.520_1.vlCDR1、CHA.7.520_1.vlCDR2和CHA.7.520_1.vlCDR3。
CHA.7.520_2.vhCDR1、CHA.7.520_2.vhCDR2、CHA.7.520_2.vhCDR3、CHA.7.520_2.vlCDR1、CHA.7.520_2.vlCDR2和CHA.7.520_2.vlCDR3。
CHA.7.522.vhCDR1、CHA.7.522.vhCDR2、CHA.7.522.vhCDR3、CHA.7.522.vlCDR1、CHA.7.522.vlCDR2和CHA.7.522.vlCDR3。
CHA.7.524.vhCDR1、CHA.7.524.vhCDR2、CHA.7.524.vhCDR3、CHA.7.524.vlCDR1、CHA.7.524.vlCDR2和CHA.7.524.vlCDR3。
CHA.7.526.vhCDR1、CHA.7.526.vhCDR2、CHA.7.526.vhCDR3、CHA.7.526.vlCDR1、CHA.7.526.vlCDR2和CHA.7.526.vlCDR3。
CHA.7.527.vhCDR1、CHA.7.527.vhCDR2、CHA.7.527.vhCDR3、CHA.7.527.vlCDR1、CHA.7.527.vlCDR2和CHA.7.527.vlCDR3。
CHA.7.528.vhCDR1、CHA.7.528.vhCDR2、CHA.7.528.vhCDR3、CHA.7.528.vlCDR1、CHA.7.528.vlCDR2和CHA.7.528.vlCDR3。
CHA.7.530.vhCDR1、CHA.7.530.vhCDR2、CHA.7.530.vhCDR3、CHA.7.530.vlCDR1、CHA.7.530.vlCDR2和CHA.7.530.vlCDR3。
CHA.7.534.vhCDR1、CHA.7.534.vhCDR2、CHA.7.534.vhCDR3、CHA.7.534.vlCDR1、CHA.7.534.vlCDR2和CHA.7.534.vlCDR3。
CHA.7.535.vhCDR1、CHA.7.535.vhCDR2、CHA.7.535.vhCDR3、CHA.7.535.vlCDR1、CHA.7.535.vlCDR2和CHA.7.535.vlCDR3。
CHA.7.537.vhCDR1、CHA.7.537.vhCDR2、CHA.7.537.vhCDR3、CHA.7.537.vlCDR1、CHA.7.537.vlCDR2和CHA.7.537.vlCDR3。
CHA.7.538_1.vhCDR1、CHA.7.538_1.vhCDR2、CHA.7.538_1.vhCDR3、CHA.7.538_1.vlCDR1、CHA.7.538_1.vlCDR2和CHA.7.538_1.vlCDR3。
CHA.7.538_2.vhCDR1、CHA.7.538_2.vhCDR2、CHA.7.538_2.vhCDR3、CHA.7.538_2.vlCDR1、CHA.7.538_2.vlCDR2和CHA.7.538_2.vlCDR3。
CHA.7.543.vhCDR1、CHA.7.543.vhCDR2、CHA.7.543.vhCDR3、CHA.7.543.vlCDR1、CHA.7.543.vlCDR2和CHA.7.543.vlCDR3。
CHA.7.544.vhCDR1、CHA.7.544.vhCDR2、CHA.7.544.vhCDR3、CHA.7.544.vlCDR1、CHA.7.544.vlCDR2和CHA.7.544.vlCDR3。
CHA.7.545.vhCDR1、CHA.7.545.vhCDR2、CHA.7.545.vhCDR3、CHA.7.545.vlCDR1、CHA.7.545.vlCDR2和CHA.7.545.vlCDR3。
CHA.7.546.vhCDR1、CHA.7.546.vhCDR2、CHA.7.546.vhCDR3、CHA.7.546.vlCDR1、CHA.7.546.vlCDR2和CHA.7.546.vlCDR3。
CHA.7.547.vhCDR1、CHA.7.547.vhCDR2、CHA.7.547.vhCDR3、CHA.7.547.vlCDR1、CHA.7.547.vlCDR2和CHA.7.547.vlCDR3。
CHA.7.548.vhCDR1、CHA.7.548.vhCDR2、CHA.7.548.vhCDR3、CHA.7.548.vlCDR1、CHA.7.548.vlCDR2和CHA.7.548.vlCDR3。
CHA.7.549.vhCDR1、CHA.7.549.vhCDR2、CHA.7.549.vhCDR3、CHA.7.549.vlCDR1、CHA.7.549.vlCDR2和CHA.7.549.vlCDR3。
CHA.7.550.vhCDR1、CHA.7.550.vhCDR2、CHA.7.550.vhCDR3、CHA.7.550.vlCDR1、CHA.7.550.vlCDR2和CHA.7.550.vlCDR3。
如上所述，这些CDR组也可以是如上所述的氨基酸变体。
另外，可变重链和可变轻链的框架区可以如本领域已知的(根据需要偶尔在CDR中产生变体)人类化，并且因此可以产生图63的VH和VL链的人类化变体。此外，人类化可变重链结构域和可变轻链结构域然后可以与人类恒定区，例如来自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的恒定区融合。
特别地，如本领域中已知，鼠类VH和VL链可以如本领域中已知的人类化，例如使用NCBI网站的IgBLAST程序，如Ye等人《核酸研究(Nucleic Acids Res.)》41:W34-W40(2013)中所概述，所述文献关于人类化方法以全文引用的方式并入本文中。IgBLAST采用鼠类VH和/或VL序列并且将其与已知人类生殖系序列的文库进行比较。如本文所示，对于本文所产生的人类化序列，使用的数据库是IMGT人类VH基因(F+ORF，273个生殖系序列)和IMGT人类VLκ基因(F+ORF，74个生殖系序列)。选择例示性的五个CHA序列：CHA.7.518、CHA.7.530、CHA.7.538_1、CHA.7.538_2和CHA.7.524(关于VH和VL序列，参见图5和63)。对于人类化的这个实施例，5个全都选择人类生殖系IGHV1-46(等位基因1)作为受体序列并且选择人类重链IGHJ4(等位基因1)连接区(J基因)。对于四个(CHA.7.518、CHA.7.530、CHA.7.538_1和CHA.7.538_2)中的三个，选择人类生殖系IGKV1-39(等位基因1)作为受体序列并且选择人类轻链IGKJ2(等位基因1)(J基因)。J基因选自在
Figure BDA0002340382800000961
国际ImMunoGeneTics信息系统(如www.imgt.org)下汇编的人类连接区序列。CDR根据AbM定义(参见www.bioinfo.org.uk/abs/)来定义。图63还描绘人类化序列以及一些可能的变化，以优化与PVRIG的结合。用于本发明的抗PVRIG抗体可以包含这些人类化PVRIG抗体或抗原结合结构域序列中的任一种。
CHA抗体的特异性人类化抗体包括例如图5和63中所示的抗体。用于本发明的抗PVRIG可以包含如图5或63中所示的CHA PVRIG抗体序列。如本领域的普通技术人员将了解，每个人类化可变重链(人类化重链；HH)和可变轻链(人类化轻链；HL)序列可以与人类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的恒定区组合。也就是说，CHA.7.518.HH1是第一人类化可变重链，并且CHA.7.518.HH1.1是全长重链，包含具有IgG1恒定区的“HH1”人类化序列(CHA.7.518.HH1.2是具有IgG2的CHA.7.518.HH1等)。
在一些实施例中，本发明的抗PVRIG抗体包括这样的抗PVRIG抗体，其中不同的抗PVRIG抗体的VH和VL序列可以“混合和匹配”以形成其它抗PVRIG抗体。可以使用上文所述的结合分析(例如，ELISA)测试这类“混合和匹配”抗体的PVRIG结合。在一些实施例中，当VH和VL链混合和匹配时，来自特定VH/VL配对的VH序列被结构上类似的VH序列置换。同样地，在一些实施例中，来自特定VH/VL配对的VL序列被结构上类似的VL序列置换。举例来说，同源抗体的VH和VL序列特别适合于混合和匹配。用于本发明的抗PVRIG可以包含来自已经“混合和匹配”的不同抗PVRIG抗体的PVRIG VH和VL序列。
因此，本发明的抗体包含选自由以下组成的群组的的CDR氨基酸序列：(a)如本文所列的序列；(b)由于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个氨基酸取代而与(a)中指定的那些CDR氨基酸序列不同的序列；(c)与(a)或(b)中指定的序列具有90％或更高、95％或更高、98％或更高、或99％或更高序列一致性的氨基酸序列；(d)具有由多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽，所述多核苷酸具有编码本文所列氨基酸的核酸序列。用于本发明的抗PVRIG可以包含PVRIG变体CDR序列。
在PVRIG抗体的定义中另外包括的是与本文所列举的抗PVRIG抗体共享一致性的抗体。也就是说，在某些实施例中，根据本发明的抗PVRIG抗体包含重链和轻链可变区，所述重链和轻链可变区分别包含与优选的抗PVRIG免疫分子的分离后的抗PVRIG氨基酸序列同源的氨基酸序列，其中抗体保留亲本抗PVRIG抗体的所期望的功能特性。两个序列之间的一致性百分比是序列共享的相同位置的数量的函数(例如，同源性％＝相同位置的数量/位置总数×100)，考虑到空位的数量和每个空位的长度，这些需要引入以使两个序列最佳对齐。序列的比较和两个序列之间的一致性百分比的确定可以使用数学算法完成，如下面的非限制性实例中所述。用于本发明的抗PVRIG抗体可以包含重链和轻链可变区，所述重链和轻链可变区包含与如本文所述的分离过的抗PVRIG氨基酸序列同源的氨基酸序列。
两个氨基酸序列之间的一致性百分比可以使用已并入到ALIGN程序(2.0版)中的E.Meyers和W.Miller(《计算机在生物科学中的应用(Comput.Appl.Biosci.)》,4:11-17(1988))算法，使用PAM120权重残基表(weight residue table)、空位长度罚分(gaplength penalty)12和空位罚分(gap penalty)4来测定。另外，两个氨基酸序列之间的一致性百分比可以使用已经并入到GCG软件包中的GAP程序中的Needleman和Wunsch(《分子生物学杂志》48:444-453(1970))算法、使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵以及空位权重16、14、12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6来测定。
通常，PVRIG抗体之间比较的一致性百分比为至少75％、至少80％、至少90％，优选一致性百分比至少约95％、96％、97％、98％或99％。一致性百分比可以沿着整个氨基酸序列，例如整个重链或轻链或沿着链的一部分。举例来说，在本发明的抗PVRIG抗体的定义内包括的是沿着整个可变区(例如，其中一致性是沿着可变区95％或98％一致)，或沿着整个恒定区，或仅沿着Fc结构域共享一致性的抗体。
G.TIGIT抗体与抗肿瘤抗体
在一些实施例中，本发明的抗TIGIT抗体与如下抗体共同施用，所述抗体与通常作用于免疫系统以增加患者的天然免疫反应的免疫肿瘤学/检查点抑制剂不同，而是针对特定肿瘤靶抗原(TTA)。存在大量已获批准或研发中的可与本发明TIGIT抗体组合的抗TTA抗体。目前批准的抗体包括但不限于西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)(全部针对EGFR)、利妥昔单抗(rituximab)(CD20)、曲妥珠单抗(trastuzumab)和帕妥珠单抗(pertuzumab)(HER2)、阿仑单抗(alemtuzumab)(CD52)、贝伐单抗(bevacizumab)(VEGF)、奥法木单抗(ofatumumab)(CD20)、地诺单抗(denosumab)(RANK配体)、贝伦妥单抗(brentuximab)(CD30)、达土木单抗(daratumumab)(CD38)、替伊莫单抗(ibritumomab)(CD20)和伊匹单抗(ipilimumab)(CTLA-4)。可与本文的抗TIGIT抗体组合的临床试验中的特定靶肿瘤抗体包括但不限于：抗CTLA4 mAb，例如伊匹单抗、曲美木单抗(tremelimumab)(参见例如美国专利公开第2017/0306025号)；抗PD-1，例如纳武单抗BMS-936558/MDX-1106/ONO-4538、AMP224、CT-011、MK-3475、抗PD-L1拮抗剂，例如阿特珠单抗(IMpower133)、BMS-936559/MDX-1105、MEDI4736、RG-7446/MPDL3280A以及美国专利公开第2017/0281764号中描述的那些)；抗LAG-3，例如IMP-321、抗TIM-3、抗BTLA、抗B7-H4、抗B7-H3、抗VISTA；靶向免疫刺激蛋白的促效性抗体，包括抗CD40 mAb，例如CP-870,893、鲁卡木单抗(lucatumumab)、达西珠单抗(dacetuzumab)；抗CD137mAb，例如BMS-663513乌瑞鲁单抗(urelumab)(抗4-1BB；参见例如美国专利第7,288,638号和第8,962,804号，其全文以引用的方式并入本文中)；PF-05082566乌托米单抗(utomilumab)(参见例如美国专利第8,821,867号；第8,337,850号；和第9,468,678号，以及国际专利申请公开第WO 2012/032433号其全文以引用的方式并入本文中)；抗OX40 mAb，例如抗OX40(参见例如WO2006/029879或WO2010096418，其全文以引用的方式并入本文中)；抗GITR mAb，例如TRX518(参见例如美国专利第7,812,135号，其以引用的方式全部并入本文中)；抗CD27 mAb，例如varlilumabCDX-1127(参见例如WO 2016/145085和美国专利公开第US 2011/0274685号和第US 2012/0213771号，其全文以引用的方式并入本文中)抗ICOS mAb(例如MEDI-570、JTX-2011和抗TIM3抗体)(参见例如WO 2013/006490或美国专利公开第US 2016/0257758号，其全文以引用的方式并入本文中)以及针对以下的单克隆抗体：前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌、多发性骨髓瘤、黑素瘤、淋巴瘤、包括小细胞肺癌的肺癌、肾癌、结直肠癌、胰腺癌、胃癌、脑癌(一般参见www.clinicaltrials.gov)。
H.特异性抗PD-1抗体
在另一个实施例中，本发明提供了本发明的抗TIGIT抗体和抗PD-1抗体的组合。有两种已获批准的抗PD-1抗体帕博利珠单抗(
Figure BDA0002340382800001001
MK-3475-033)、西米普利单抗(REGN2810；参见US20170174779)和纳武单抗(CheckMate078)以及更多研发中的抗体，其可与本发明的抗TIGIT抗体组合使用。在其它实施例中，抗PD-1抗体可包括例如SHR-1210(CTR20160175和CTR20170090)、SHR-1210(CTR20170299和CTR20170322)、JS-001(CTR20160274)、IBI308(CTR20160735)、BGB-A317(CTR20160872)和/或如美国专利公开第2017/0081409号中所叙述的PD-1抗体。例示性的抗PD-1抗体序列在图7中示出，并且这些中的任一种可以与本文所述的组合治疗方法一起使用。
在一些实施例中，本发明的抗TIGIT抗体与如本文所述的抗PVRIG抗体以及如本文所述的抗PD-1抗体或本领域已知的其它抗PD-1抗体组合作为三联组合疗法。
I.特异性抗PD-L1抗体
在另一个实施例中，本发明提供了本发明的抗TIGIT抗体和抗PD-L1抗体的组合。有三种已获批准的抗PD-L1抗体：阿特珠单抗(
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MPDL3280A)、阿维鲁单抗(MSB001071 8C)和度伐单抗(MEDI4736)以及其它研发中的抗PD-L1抗体。可获得多种抗PD-L1抗体以及更多研发中的抗体，其可与本发明的抗TIGIT抗体组合使用。在实施例中，PD-L1抗体是美国专利公开第2017/0281764号以及国际专利公开第WO 2013/079174号(阿维鲁单抗)和第WO 2010/077634号(或美国专利申请第20160222117号或美国专利第8,217,149号；阿特珠单抗)。在一些实施例中，PD-L1抗体包含SEQ ID NO:34的重链序列和SEQ ID NO:36的轻链序列(来自US 2017/281764)。在一些实施例中，PD-L1抗体是阿特珠单抗(
Figure BDA0002340382800001011
MPDL3280A；IMpower110)。在一些实施例中，PD-L1抗体是阿维鲁单抗(MSB001071 8C)。在一些实施例中，PD-L1抗体是度伐单抗(MEDI4736)。在一些实施例中，PD-L1抗体包括例如阿特珠单抗(IMpower133)、BMS-936559/MDX-1105和/或RG-7446/MPDL3280A和/或YW243.55.S70以及图62中所提供的抗体中的任一种。
在一些实施例中，本发明的抗TIGIT抗体与如本文所述的抗PVRIG抗体以及如本文所述的抗PD-L1抗体或本领域已知的其它抗PD-L1抗体组合作为三联组合疗法。
J.任选的抗体工程改造
本发明抗体可以通过氨基酸取代进行修饰或工程改造以改变氨基酸序列。如本文所讨论，可以进行氨基酸取代以改变CDR对抗原的亲和力(包括增加和减少的结合两者)，以及改变抗体的额外功能特性。举例来说，抗体可以经过工程改造以在Fc区内包括修饰，通常用于改变抗体的一种或多种功能特性，例如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。此外，根据本发明的至少一些实施例的抗体可以经过化学修饰(例如，一个或多个化学部分可以连接到抗体上)或被修饰以改变其糖基化，同样用于改变抗体的一种或多种功能特性。下面进一步描述这类实施例。Fc区中残基的编号是Kabat的EU索引的编号。
在一个实施例中，修饰CH1的铰链区，使得铰链区中半胱氨酸残基的数量改变，例如增加或减少。这一方法进一步描述于Bodmer等人的美国专利第5,677,425号中。改变CH1铰链区中半胱氨酸残基的数量，以便例如促进轻链和重链的装配或增加或降低抗体的稳定性。
在再一实施例中，可以修饰抗体以消除体内Fab臂交换，尤其是当使用IgG4恒定结构域时。具体来说，这一过程涉及在其它IgG4抗体之间交换IgG4半分子(一条重链加一条轻链)，这有效地产生功能上单价的抗体。铰链区和重链恒定结构域的突变可以消除这种交换(参见Aalberse,RC,Schuurman J.,2002,《免疫学(Immunology)》105:9-19)。如本文所概述，在本发明中特别有用的突变是在IgG4恒定结构域情况下的S241P。IgG4可用于本发明，因为其没有显著的效应功能，并且因此用于阻断受体-配体结合而没有细胞耗竭。
在一些实施例中，氨基酸取代可以在Fc区中进行，通常用于改变与FcγR受体的结合。如本文所用的“Fcγ受体”、“FcγR”或“FcγR(FcgammaR)”意味着结合IgG抗体Fc区并且由FcγR基因编码的蛋白质家族的任何成员。在人类中，这一家族包括但不限于FcγRI(CD64)，包括同种型FcγRIa、FcγRIb和FcγRIc；FcγRII(CD32)，包括同种型FcγRIIa(包括同种异型H131和R131)、FcγRIIb(包括FcγRIIb-1和FcγRIIb-2)和FcγRIIc；和FcγRIII(CD16)，包括同种型FcγRIIIa(包括同种异型V158和F158)和FcγRIIIb(包括同种异型FcγRIIIb-NA1和FcγRIIIb-NA2)(Jefferis等人,2002,《免疫学快报(Immunol Lett)》82:57-65，其以引用的方式整体并入本文中)，以及任何未发现的人类FcγR或FcγR同种型或同种异型。FcγR可以来自任何生物体，包括但不限于人类、小鼠、大鼠、兔和猴。小鼠FcγR包括但不限于FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)、FcγRIII-1(CD16)和FcγRIII-2(CD16-2)，以及任何未发现的小鼠FcγR或FcγR同种型或同种异型。
可以进行许多有用的Fc取代以改变与一种或多种FcγR受体的结合。导致结合增加以及结合减少的取代可能是有用的。举例来说，已知增加与FcγRIIIa的结合通常导致ADCC增加(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性；细胞介导的反应，其中表达FcγR的非特异性细胞毒性细胞识别靶细胞上的结合抗体并且随后引起靶细胞的裂解。类似地，在一些情况下，与FcγRIIb(抑制受体)的结合减少也是有益的。可用于本发明的氨基酸取代包括美国系列第11/124,620号(尤其是图41)和美国专利第6,737,056号中列出的那些，两个专利都以全文引用的方式明确地并入本文中，并且尤其是关于其中所公开的变体。
在又其它实施例中，通过用不同的氨基酸残基置换至少一个氨基酸残基来改变Fc区，以改变抗体的效应功能。举例来说，一个或多个选自氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320和322的氨基酸可以用不同的氨基酸残基置换，以使得抗体对效应配体的亲和力改变，但是保留亲本抗体的抗原结合能力。亲和力改变的效应配体可以是例如补体的Fc受体或C1组分。这种方法进一步详细描述于Winter等人的美国专利第5,624,821号和第5,648,260号中。
在另一个实例中，一个或多个选自氨基酸残基329、331和322的氨基酸可以用不同的氨基酸残基置换，以使得抗体具有改变的C1q结合和/或降低或消除补体依赖性细胞毒性(CDC)。这种方法进一步详细描述于Idusogie等人的美国专利第6,194,551号中。
在另一个实例中，改变氨基酸位置231和239内的一个或多个氨基酸残基，从而改变针对固定补体的抗体的能力。这种方法进一步描述于Bodmer等人的PCT公开WO 94/29351中。
在又一个实例中，通过修饰在以下位置处的一个或多个氨基酸来修饰Fc区，以增加抗体介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或增加抗体对Fcγ受体的亲和力：238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439。这种方法进一步描述于Presta的PCT公开WO00/42072中。此外，人类IgG1上关于FcγRI、FcγRII、FcγRIII和FcRn的结合位点已经映射并且具有改良结合的变体已有描述(参见Shields,R.L.等人(2001)《生物化学杂志》276:6591-6604)。显示位置256、290、298、333、334和339处的特异性突变改善了与FcγRIII的结合。另外，显示以下组合突变体改善了FcγRIII结合：T256A/S298A、S298A/E333A、S298A/K224A和S298A/E333A/K334A。此外，例如M252Y/S254T/T256E或M428L/N434S的突变改善了与FcRn的结合并且增加了抗体循环半衰期(参见Chan CA和Carter PJ(2010)《自然综述免疫学(Nature Rev Immunol)》10:301-316)。
此外，修饰本发明的抗体以增加其生物半衰期。各种方法都是可能的。举例来说，可以引入以下突变中的一种或多种：T252L、T254S、T256F，如Ward的美国专利第6,277,375号中所述。或者，为了增加生物半衰期，可以在CH1或CL区内改变抗体以含有取自IgG的Fc区的CH2结构域的两个环的补救受体结合表位，如Presta等人的美国专利第5,869,046号和第6,121,022号中所述。增加血清半衰期的额外突变公开于美国专利第8,883,973号、第6,737,056号和第7,371,826号中，并且包括428L、434A、434S和428L/434S。
在再一个实施例中，修饰抗体的糖基化。举例来说，可以制备无糖基化抗体(即，抗体缺乏糖基化)。可以改变糖基化，以例如增加抗体对抗原的亲和力或降低效应功能，例如ADCC。这类碳水化合物修饰可以通过例如改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点，例如N297来完成。举例来说，可以进行一个或多个氨基酸取代，其导致消除一个或多个可变区框架糖基化位点，从而消除所述位点的糖基化，在一些实施例中发现使用丙氨酸置换。
另外或可替代地，可以制备具有改变的糖基化类型的抗体，例如具有减少量的岩藻糖基残基的低岩藻糖基化抗体或具有增加的二等分GlcNac结构的抗体。已经证明这类改变的糖基化模式增加抗体的ADCC能力。这类碳水化合物修饰可以通过例如在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体来实现。具有改变的糖基化机制的细胞已在本领域中描述，并且可用作宿主细胞，其中根据本发明的至少一些实施例表达重组抗体，从而产生具有改变的糖基化的抗体。举例来说，细胞系Ms704、Ms705和Ms709缺乏岩藻糖基转移酶基因FUT8(α(1,6)岩藻糖基转移酶)，使得在Ms704、Ms705和Ms709细胞系中表达的抗体在其碳水化合物上缺乏岩藻糖。Ms704、Ms705和Ms709 FUT8细胞系通过使用两个置换载体通过FUT8基因在CHO/DG44细胞中的靶向破坏而形成(参见Yamane等人的美国专利公开第20040110704号和Yamane-Ohnuki等人(2004)《生物技术与生物工程(Biotechnol Bioeng)》87:614-22)。作为另一实例，Hanai等人的EP 1,176,195描述了一种具有功能被破坏的FUT8基因的细胞系，其编码岩藻糖基转移酶，使得在这类细胞系中表达的抗体通过减少或消除α1,6键相关酶而展现低岩藻糖基化。Hanai等人还描述关于向结合到抗体的Fc区的N-乙酰葡糖胺中添加岩藻糖具有低酶活性或不具有酶活性的细胞系，例如大鼠骨髓瘤细胞系YB2/0(ATCC CRL 1662)。Presta的PCT公开WO 03/035835描述了一种变体CHO细胞系Lec13细胞，其将岩藻糖连接到Asn(297)连接的碳水化合物上的能力降低，还导致在所述宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖基化(也参见Shields,R.L.等人(2002)《生物化学杂志》277:26733-26740)。Umana等人的PCT公开WO 99/54342描述了经过工程改造以表达糖蛋白修饰的糖基转移酶(例如β(1,4)-N-乙酰葡糖胺基转移酶III(GnTIII))的细胞系，以使得在经过工程改造的细胞系中表达的抗体展现增加的二等分GlcNac结构，这使得抗体的ADCC活性增加(也参见Umana等人(1999)《自然·生物技术(Nat.Biotech.)》17:176-180)。或者，可使用岩藻糖苷酶将抗体的岩藻糖残基裂解掉。举例来说，岩藻糖苷酶α-L-岩藻糖苷酶从抗体中去除岩藻糖基残基(Tarentino,A.L.等人(1975)《生物化学(Biochem.)14:5516-23)。
本发明考虑的本文抗体的另一种修饰是聚乙二醇化或添加其它水溶性部分，通常是聚合物，例如以增强半衰期。可以使抗体聚乙二醇化，以例如增加抗体的生物(例如，血清)半衰期。为了使抗体聚乙二醇化，抗体或其片段通常与聚乙二醇(PEG)(例如PEG的反应性酯或醛衍生物)在一个或多个PEG基团能连接到抗体或抗体片段上的条件下反应。优选地，通过与反应性PEG分子(或类似的反应性水溶性聚合物)的酰化反应或烷基化反应进行聚乙二醇化。如本文所用，术语“聚乙二醇”打算涵盖已用于衍生其它蛋白质的PEG形式中的任一种，例如单(C1-C10)烷氧基或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-顺丁烯二酰亚胺。在某些实施例中，待聚乙二醇化的抗体是无糖基化的抗体。使蛋白质聚乙二醇化的方法是本领域中已知的并且可应用于根据本发明的至少一些实施例的抗体。参见例如Nishimura等人的EP0 154 316和Ishikawa等人的EP 0 401 384。
除了进行取代以改变对FcγR和/或FcRn的结合亲和力和/或增加体内血清半衰期之外，可以进行额外抗体修饰，如下文进一步详细描述。
在某些情况下，完成亲和力成熟。CDR中的氨基酸修饰有时被称为“亲和力成熟”。“亲和力成熟的”抗体是在一个或多个CDR中具有一个或多个改变的抗体，与不具有那些改变的亲本抗体相比，其导致抗体对抗原的亲和力的改善。在某些情况下，可能需要降低抗体对其抗原的亲和力。
在一些实施例中，在本发明抗体的一个或多个CDR中进行一个或多个氨基酸修饰。通常，任何单一CDR中仅1或2或3个氨基酸被取代，并且在CDR组内一般做出不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变。然而，应理解，在任何CDR中没有取代、1个、2个或3个取代的任何组合可以独立地和任选地与任何其它取代组合。
与“亲本”抗体相比，可以进行亲和力成熟以使抗体对抗原的结合亲和力增加至少约10％到50-100-150％或更多，或1到5倍。优选的亲和力成熟抗体将对抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。亲和力成熟的抗体通过已知方法产生。参见例如Marks等人,1992,《生物技术(Biotechnology)》10:779-783，其描述了通过可变重链(VH)和可变轻链(VL)结构域改组实现的亲和力成熟。以下文献中描述了CDR和/或框架残基的随机突变诱发：例如Barbas等人1994,《美国国家科学院院刊》91:3809-3813；Shier等人,1995,《基因(Gene)》169:147-155；Yelton等人,1995,《免疫学杂志》155:1994-2004；Jackson等人,1995,《免疫学杂志》154(7):3310-9；以及Hawkins等人,1992,《分子生物学杂志》226:889-896。
或者，可以在本发明抗体的一个或多个CDR中进行“沉默的”氨基酸修饰，例如不显著改变抗体对抗原的亲和力。这么做的原因有很多，包括优化表达(如可以对编码本发明抗体的核酸进行)。
因此，在本发明的CDR和抗体的定义内包括的是变体CDR和抗体；也就是说，本发明的抗体可以包括本发明所列举的抗体的一个或多个CDR中的氨基酸修饰。另外，如下文所概述，氨基酸修饰也可以独立地和任选地在CDR之外的任何区(包括框架区和恒定区)中进行。
VI.组合治疗中的抗TIGIT抗体
在组合使用，例如与如本文所述的检查点抑制剂(例如抗PD-1抗体)组合使用时，本发明的TIGIT和PVRIG抗体尤其适用于治疗癌症。通常，本发明的抗体是免疫调节的，因为本发明的抗TIGIT和抗PVRIG抗体通常通过分别抑制TIGIT和PVRIG的作用来刺激免疫系统而不是直接攻击癌细胞。因此，与旨在抑制对肿瘤生长和发育至关重要的分子途径和/或消耗肿瘤细胞的肿瘤靶向疗法不同，癌症免疫疗法旨在刺激患者自身的免疫系统以消除癌细胞，破坏长期的肿瘤。在癌症免疫疗法中可以使用各种方法，其中有用于诱导肿瘤特异性T细胞反应的治疗性癌症疫苗和用于去除免疫抑制途径的免疫刺激抗体(即抑制受体的拮抗剂＝免疫检查点)。
靶向疗法或常规抗癌疗法的临床反应往往是短暂的，因为癌细胞产生抗性，并且发生肿瘤复发。然而，过去几年中癌症免疫疗法的临床使用表明，这种类型的疗法可以具有持久的临床反应，显示出对长期存活的显著影响。然而，尽管反应是长期的，但只有少数患者有反应(与常规或靶向疗法相反，在常规或靶向疗法中，大量患者有反应，但反应是暂时的)。
当临床上检测到肿瘤时，其已经通过获得免疫耐受和免疫抑制特性以及通过各种机制和多种免疫细胞形成免疫抑制性肿瘤微环境来逃避免疫防御系统。
因此，本发明的抗TIGIT和抗PVRIG组合可用于治疗癌症。由于免疫肿瘤学作用机制的性质，TIGIT和或PVRIG不一定需要在特定癌症类型上过表达或与特定癌症类型相关；也就是说，目标是使抗TIGIT抗体去除对T细胞和NK细胞活化的抑制，以使得免疫系统将对癌症起作用。
VII.核酸组合物
还提供了编码本发明的抗TIGIT、抗PVRIG和抗PD-1抗体的核酸组合物，以及含有核酸的表达载体和用核酸和/或表达载体组合物转化的宿主细胞。如本领域技术人员所理解，由于遗传密码的简并性，本文所描绘的蛋白质序列可由任何数量的可能核酸序列编码。
编码抗体的核酸组合物将取决于抗体的形式。传统上，含有两条重链和两条轻链的四聚抗体由两个不同核酸编码，一个编码重链并且一个编码轻链。这些可以放入单个表达载体或两个表达载体中，如本领域中已知，转化到宿主细胞中，在宿主细胞中表达其以形成本发明的抗体。在一些实施例中，例如当使用scFv构建体时，通常使用编码可变重链-连接子-可变轻链的单个核酸，其可以插入表达载体中以转化到宿主细胞中。可将核酸置于含有适当转录和翻译控制序列的表达载体中，转录和翻译控制序列包括但不限于信号和分泌序列、调控序列、启动子、复制起点、选择基因等。
用于表达根据本发明的至少一些实施例的重组抗体的优选哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)、PER.C6、HEK293和本领域已知的其它细胞。
核酸可以存在于完整细胞中、细胞裂解物中、或部分纯化或基本上纯的形式中。当通过标准技术(包括碱/SDS处理、CsCl条带、柱层析、琼脂糖凝胶电泳和本领域熟知的其它技术)从其它细胞组分或其它污染物(例如其它细胞核酸或蛋白质)中纯化时，核酸被“分离”或“基本上纯化”。
为了形成scFv基因，编码VH和VL的DNA片段可操作地连接到编码柔性连接子，例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3的另一片段，使得VH和VL序列可以表达为连续的单链蛋白质，其中VL和VH区通过柔性连接子连接(参见例如Bird等人(1988)Science 242:423-426；Huston等人(1988)《美国国家科学院院刊》85:5879-5883；McCafferty等人,(1990)《自然》348:552-554)。
VIII.本发明抗体的制剂
在实践以上方法时所用的治疗组合物可以配制成包含适合于所期望的递送方法的载体的药物组合物。合适的载体包括当与治疗组合物组合时保留治疗组合物的抗肿瘤功能，并且通常不与患者的免疫系统反应的任何材料。实例包括但不限于许多标准药物载体中的任一种，例如无菌磷酸盐缓冲盐水溶液、抑菌水等(总体上参见《雷明顿氏药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)》第16版,A.Osal.编辑，1980)。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者无毒，并且可包括缓冲剂。
在一优选实施例中，包含本发明抗体的药物组合物可以是水溶形式，例如作为药学上可接受的盐存在，其意在包括酸加成盐和碱加成盐。“药学上可接受的酸加成盐”是指那些保留游离碱的生物有效性并且不在生物学上或其它方面不合意的用无机酸等形成的盐。“药学上可接受的碱加成盐”包括衍生自无机碱等的盐。
优选呈无菌水溶液形式、包含本发明抗体的药物组合物的施用可以多种方式，包括但不限于皮下和静脉内进行。
在优选的实施例中，给药量和施用频率选择为治疗或预防有效的。如本领域中已知，可能需要针对蛋白质降解、全身性对比局部递送和新蛋白酶合成速率以及年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、药物相互作用和病况的严重程度做出调整，并且这些调整将由本领域技术人员通过常规实验来确定。
为了治疗患者，可以施用治疗有效剂量的本发明的Fc变体。本文的“治疗有效剂量”意味着产生其施用效果的剂量。确切的剂量将取决于治疗的目的，并且本领域技术人员可以使用已知技术确定。
A.组合制剂
可以如本领域技术人员应了解的多种方式完成本发明的抗体(以抗TIGIT、抗PVRIG和抗PD-1抗体的三联组合或以抗TIGIT和抗PVRIG抗体的双联组合)。在一些情况下，例如以分开的输注(例如，每个IV袋容纳单个抗体)或以抗体混合物的一次输注的方式同时施用抗体。或者，可以例如在数小时或数天的时间内依序施用抗体。
在一些情况下，抗体以施用试剂盒的形式提供，每种抗体的剂量单位也分别包装成单独的剂量单位，或者以抗体的混合物形式一起包装成单个剂量单位。
IX.组合疗法和用途
A.癌症疗法
如本文所用的“癌症”泛指以引起恶性生长或肿瘤(例如，不受调控的细胞生长)的异常和不受控制的细胞分裂为特征的任何肿瘤性疾病(无论是侵袭性的还是转移性的)。如本文所用的术语“癌症”或“癌性”应理解为涵盖以引起恶性生长或肿瘤的异常和不受控制的细胞分裂为特征的任何肿瘤性疾病(无论是侵袭性的、非侵袭性的还是转移性的)，其非限制性实例在本文中有描述。这包括哺乳动物中通常以不受调控的细胞生长为特征的任何生理病况。癌症实例举例说明于实施例中并且在说明书内也有描述。
可以使用抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体以及抗TIGIT抗体和其它抗体(例如抗TIGIT、抗PVRIG、抗PD-1和/或抗PD-L1抗体中的任一种)的组合治疗的癌症的非限制性实例如本文所提供。这类癌症包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病。这类癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(包括胃肠癌)、食道癌、黑素瘤、间皮瘤、默克细胞癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌和各种类型的头颈癌、喉癌、口腔癌、尿路上皮癌、KRAS突变肿瘤、骨髓增生异常综合症(MDS)以及B细胞恶性肿瘤、B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞NHL；高级淋巴母细胞性NHL；高级小型非裂解细胞NHL；肿块性病变NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(
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Macroglobulinemia))；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；急性淋巴母细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性骨髓母细胞白血病；成人T细胞白血病/淋巴瘤；多发性骨髓瘤和移植后淋巴增生性疾病(PTLD)、淋巴恶性肿瘤、与母斑病相关的异常血管增生、水肿(例如与脑肿瘤相关的水肿)和梅格斯综合症(Meigs'syndrome)、直肠癌、肾细胞癌、软组织肉瘤、卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma)、类癌样癌、早期或晚期(包括转移性)卵巢癌。适用于本发明治疗的癌性病况包括表达或不表达TIGIT、PVRIG、PVRL、PD-1和/或PD-L1的癌症，并且还包括非转移性或非侵袭性以及侵袭性或转移性癌症，其中免疫、基质或病变细胞的TIGIT、PVRIG、PVRL、PD-1和/或PD-L1表达抑制了抗肿瘤反应和抗侵袭性免疫反应。本发明的方法特别适合于治疗血管化肿瘤。在一些实施例中，所述癌症选自由以下组成的群组：前列腺癌、肝癌(HCC)、结直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、尿路上皮癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、食道癌、默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。在所述方法的一些实施例中，所述癌症选自由以下癌症组成的群组：三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
本文中的“癌症疗法”是指预防或治疗癌症或改善一种或多种癌症症状的任何方法。通常，这类疗法将包含与化学疗法或放射线疗法或其它生物制剂和用于增强其活性组合施用免疫刺激抗TIGIT和抗PVRIG抗体(包括抗原结合片段)，即在TIGIT和或PVRIG的表达抑制抗肿瘤反应和化学疗法或放射线疗法的功效或生物功效的个体中施用。
本发明提供了抗TIGIT抗体和抗PVRIG抗体的组合疗法和用途，有时还添加了抗PD-1抗体以用于三联组合疗法。本发明提供了抗TIGIT抗体和抗PVRIG抗体的组合疗法和用途，有时还添加了抗PD-L1抗体。上面或图中列出的任何PVRIG抗体都可用于三联组合疗法。上面或图中列出的任何TIGIT抗体都可用于三联组合疗法。上面或图中列出的任何PD-1抗体都可用于三联组合疗法。上面或图中列出的任何PD-L1抗体都可用于三联组合疗法。在一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自本文所述的任何抗TIGIT抗体的抗体，包括图3中所述的那些抗体中的任一种。在一些实施例中，抗PVRIG抗体是选自本文所述的任何抗PVRIG抗体的抗体，包括图5和/或图63中所述的那些抗体中的任一种。在一些实施例中，抗PD-1抗体是选自本文所述的任何抗PD-1抗体的抗体，包括图7中所述的那些抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PD-1抗体选自帕博利珠单抗(
Figure BDA0002340382800001121
MK-3475-033)、纳武单抗(
Figure BDA0002340382800001122
CheckMate078)、cemplimab(REGN2810)、SHR-1210(CTR20160175和CTR20170090)、SHR-1210(CTR20170299和CTR20170322)、JS-001(CTR20160274)、IBI308(CTR20160735)、BGB-A317(CTR20160872)和/或如美国专利公开第2017/0081409号中所叙述的PD-1抗体。
在一些实施例中，抗PD-L1抗体选自美国专利公开第2017/0281764号以及国际专利公开第WO 2013/079174号(阿维鲁单抗)和第WO 2010/077634号(或美国专利申请第20160222117号或美国专利第8,217,149号；阿特珠单抗)中描述的抗体。在一些实施例中，PD-L1抗体包含SEQ ID NO:34的重链序列和SEQ ID NO:36的轻链序列(来自US 2017/281764)。在一些实施例中，PD-L1抗体是阿特珠单抗(
Figure BDA0002340382800001131
MPDL3280A；IMpower110)。在一些实施例中，PD-L1抗体是阿维鲁单抗(
Figure BDA0002340382800001132
MSB0010718C)。在一些实施例中，PD-L1抗体是度伐单抗(MEDI4736)。在一些实施例中，PD-L1抗体包括例如阿特珠单抗(IMpower133)、BMS-936559/MDX-1105和/或RG-7446/MPDL3280A和/或YW243.55.S70以及本文在图62中提供的抗体中的任一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体选自其序列展示于图5和/或63中的抗体：
CPA.7.001、CPA.7.001.VH、CPA.7.001.VL、CPA.7.001.HC、CPA.7.001.LC和CPA.7.001.H1、CPA.7.001.H2、CPA.7.001.H3、CPA.7.001.H4；CPA.7.001.vhCDR1、CPA.7.001.vhCDR2、CPA.7.001.vhCDR3、CPA.7.001.vlCDR1、CPA.7.001.vlCDR2和CPA.7.001.vlCDR3；
CPA.7.003、CPA.7.003.VH、CPA.7.003.VL、CPA.7.003.HC、CPA.7.003.LC、CPA.7.003.H1、CPA.7.003.H2、CPA.7.003.H3、CPA.7.003.H4；CPA.7.003.vhCDR1、CPA.7.003.vhCDR2、CPA.7.003.vhCDR3、CPA.7.003.vlCDR1、CPA.7.003.vlCDR2和CPA.7.003.vlCDR3；
CPA.7.004、CPA.7.004.VH、CPA.7.004.VL、CPA.7.004.HC、CPA.7.004.LC、CPA.7.004.H1、CPA.7.004.H2、CPA.7.004.H3、CPA.7.004.H4；CPA.7.004.vhCDR1、CPA.7.004.vhCDR2、CPA.7.004.vhCDR3、CPA.7.004.vlCDR1、CPA.7.004.vlCDR2和CPA.7.004.vlCDR3；
CPA.7.006、CPA.7.006.VH、CPA.7.006.VL、CPA.7.006.HC、CPA.7.006.LC、CPA.7.006.H1、CPA.7.006.H2、CPA.7.006.H3、CPA.7.006.H4；CPA.7.006.vhCDR1、CPA.7.006.vhCDR2、CPA.7.006.vhCDR3、CPA.7.006.vlCDR1、CPA.7.006.vlCDR2和CPA.7.006.vlCDR3；
CPA.7.008、CPA.7.008.VH、CPA.7.008.VL、CPA.7.008.HC、CPA.7.008.LC、CPA.7.008.H1、CPA.7.008.H2、CPA.7.008.H3、CPA.7.008.H4；CPA.7.008.vhCDR1、CPA.7.008.vhCDR2、CPA.7.008.vhCDR3、CPA.7.008.vlCDR1、CPA.7.008.vlCDR2和CPA.7.008.vlCDR3；
CPA.7.009、CPA.7.009.VH、CPA.7.009.VL、CPA.7.009.HC、CPA.7.009.LC、CPA.7.009.H1、CPA.7.009.H2、CPA.7.009.H3、CPA.7.009.H4；CPA.7.009.vhCDR1、CPA.7.009.vhCDR2、CPA.7.009.vhCDR3、CPA.7.009.vlCDR1、CPA.7.009.vlCDR2和CPA.7.009.vlCDR3；
CPA.7.010、CPA.7.010.VH、CPA.7.010.VL、CPA.7.010.HC、CPA.7.010.LC、CPA.7.010.H1、CPA.7.010.H2、CPA.7.010.H3、CPA.7.010.H4；CPA.7.010.vhCDR1、CPA.7.010.vhCDR2、CPA.7.010.vhCDR3、CPA.7.010.vlCDR1、CPA.7.010.vlCDR2和CPA.7.010.vlCDR3；
CPA.7.011、CPA.7.011.VH、CPA.7.011.VL、CPA.7.011.HC、CPA.7.011.LC、CPA.7.011.H1、CPA.7.011.H2、CPA.7.011.H3、CPA.7.011.H4；CPA.7.011.vhCDR1、CPA.7.011.vhCDR2、CPA.7.011.vhCDR3、CPA.7.011.vlCDR1、CPA.7.011.vlCDR2和CPA.7.011.vlCDR3；
CPA.7.012、CPA.7.012.VH、CPA.7.012.VL、CPA.7.012.HC、CPA.7.012.LC、CPA.7.012.H1、CPA.7.012.H2、CPA.7.012.H3、CPA.7.012.H4；CPA.7.012.vhCDR1、CPA.7.012.vhCDR2、CPA.7.012.vhCDR3、CPA.7.012.vlCDR1、CPA.7.012.vlCDR2和CPA.7.012.vlCDR3；
CPA.7.013、CPA.7.013.VH、CPA.7.013.VL、CPA.7.013.HC、CPA.7.013.LC、CPA.7.013.H1、CPA.7.013.H2、CPA.7.013.H3、CPA.7.013.H4；CPA.7.013.vhCDR1、CPA.7.013.vhCDR2、CPA.7.013.vhCDR3、CPA.7.013.vlCDR1、CPA.7.013.vlCDR2和CPA.7.013.vlCDR3；
CPA.7.014、CPA.7.014.VH、CPA.7.014.VL、CPA.7.014.HC、CPA.7.014.LC、CPA.7.014.H1、CPA.7.014.H2、CPA.7.014.H3、CPA.7.014.H4；CPA.7.014.vhCDR1、CPA.7.014.vhCDR2、CPA.7.014.vhCDR3、CPA.7.014.vlCDR1、CPA.7.014.vlCDR2和CPA.7.014.vlCDR3；
CPA.7.015、CPA.7.015.VH、CPA.7.015.VL、CPA.7.015.HC、CPA.7.015.LC、CPA.7.015.H1、CPA.7.015.H2、CPA.7.015.H3、CPA.7.015.H4；CPA.7.015.vhCDR1、CPA.7.015.vhCDR2、CPA.7.015.vhCDR3、CPA.7.015.vlCDR1、CPA.7.015.vlCDR2和CPA.7.015.vlCDR3；
CPA.7.017、CPA.7.017.VH、CPA.7.017.VL、CPA.7.017.HC、CPA.7.017.LC、CPA.7.017H1、CPA.7.017.H2、CPA.7.017.H3、CPA.7.017.H4；CPA.7.017.vhCDR1、CPA.7.000171.vhCDR2、CPA.7.017.vhCDR3、CPA.7.017.vlCDR1、CPA.7.017.vlCDR2和CPA.7.017.vlCDR3；
CPA.7.018、CPA.7.018.VH、CPA.7.018.VL、CPA.7.018.HC、CPA.7.018.LC、CPA.7.018.H1、CPA.7.018.H2、CPA.7.018.H3、CPA.7.018.H4；CPA.7.017.vhCDR1、CPA.7.017.vhCDR2、CPA.7.017.vhCDR3、CPA.7.017.vlCDR1、CPA.7.017.vlCDR2和CPA.7.017.vlCDR3；
CPA.7.019、CPA.7.019.VH、CPA.7.019.VL、CPA.7.019.HC、CPA.7.019.LC、CPA.7.019.H1、CPA.7.019.H2、CPA.7.019.H3、CPA.7.019.H4；CPA.7.019.vhCDR1、CPA.7.019.vhCDR2、CPA.7.019.vhCDR3、CPA.7.019.vlCDR1、CPA.7.019.vlCDR2和CPA.7.019.vlCDR3；
CPA.7.021、CPA.7.021.VH、CPA.7.021.VL、CPA.7.021.HC、CPA.7.021.LC、CPA.7.021.H1、CPA.7.021.H2、CPA.7.021.H3、CPA.7.021.H4；CPA.7.021.vhCDR1、CPA.7.021.vhCDR2、CPA.7.021.vhCDR3、CPA.7.021.vlCDR1、CPA.7.021.vlCDR2和CPA.7.021.vlCDR3；
CPA.7.022、CPA.7.022.VH、CPA.7.022.VL、CPA.7.022.HC、CPA.7.022.LC、CPA.7.022.H1、CPA.7.022.H2、CPA.7.022.H3、CPA.7.022.H4；CPA.7.022.vhCDR1、CPA.7.022.vhCDR2、CPA.7.002201.vhCDR3、CPA.7.022.vlCDR1、CPA.7.022.vlCDR2和CPA.7.022.vlCDR3；
CPA.7.023、CPA.7.023.VH、CPA.7.023.VL、CPA.7.023.HC、CPA.7.023.LC、CPA.7.023.H1、CPA.7.023.H2、CPA.7.023.H3、CPA.7.023.H4；CPA.7.023.vhCDR1、CPA.7.023.vhCDR2、CPA.7.023.vhCDR3、CPA.7.023.vlCDR1、CPA.7.023.vlCDR2和CPA.7.023.vlCDR3；
CPA.7.024、CPA.7.024.VH、CPA.7.024.VL、CPA.7.024.HC、CPA.7.024.LC、CPA.7.024.H1、CPA.7.024.H2、CPA.7.024.H3、CPA.7.024.H4；CPA.7.024.vhCDR1、CPA.7.024.vhCDR2、CPA.7.024.vhCDR3、CPA.7.024.vlCDR1、CPA.7.024.vlCDR2和CPA.7.024.vlCDR3；
CPA.7.033、CPA.7.033.VH、CPA.7.033.VL、CPA.7.033.HC、CPA.7.033.LC、CPA.7.033.H1、CPA.7.033.H2、CPA.7.033.H3、CPA.7.033.H4；CPA.7.033.vhCDR1、CPA.7.033.vhCDR2、CPA.7.033.vhCDR3、CPA.7.033.vlCDR1、CPA.7.033.vlCDR2和CPA.7.033.vlCDR3；
CPA.7.034、CPA.7.034.VH、CPA.7.034.VL、CPA.7.034.HC、CPA.7.034.LC、CPA.7.034.H1、CPA.7.034.H2、CPA.7.034.H3、CPA.7.034.H4；CPA.7.034.vhCDR1、CPA.7.034.vhCDR2、CPA.7.034.vhCDR3、CPA.7.034.vlCDR1、CPA.7.034.vlCDR2和CPA.7.034.vlCDR3；
CPA.7.036、CPA.7.036.VH、CPA.7.036.VL、CPA.7.036.HC、CPA.7.036.LC、CPA.7.036.H1、CPA.7.036.H2、CPA.7.036.H3、CPA.7.036.H4；CPA.7.036.vhCDR1、CPA.7.036.vhCDR2、CPA.7.036.vhCDR3、CPA.7.036.vlCDR1、CPA.7.036.vlCDR2和CPA.7.036.vlCDR3；
CPA.7.040、CPA.7.040.VH、CPA.7.040.VL、CPA.7.040.HC、CPA.7.040.LC、CPA.7.040.H1、CPA.7.040.H2、CPA.7.040.H3和CPA.7.040.H4；CPA.7.040.vhCDR1、CPA.7.040.vhCDR2、CPA.7.040.vhCDR3、CPA.7.040.vlCDR1、CPA.7.040.vlCDR2和CPA.7.040.vlCDR3；
CPA.7.046、CPA.7.046.VH、CPA.7.046.VL、CPA.7.046.HC、CPA.7.046.LC、CPA.7.046.H1、CPA.7.046.H2、CPA.7.046.H3、CPA.7.046.H4；CPA.7.046.vhCDR1、CPA.7.046.vhCDR2、CPA.7.046.vhCDR3、CPA.7.046.vlCDR1、CPA.7.046.vlCDR2和CPA.7.046.vlCDR3；
CPA.7.047、CPA.7.047.VH、CPA.7.047.VL、CPA.7.047.HC、CPA.7.047.LC、CPA.7.047.H1、CPA.7.047.H2、CPA.7.047.H3、CPA.7.047.H4；CPA.7.047.vhCDR1、CPA.7.047.vhCDR2、CPA.7.047.vhCDR3、CPA.7.047.vlCDR1、CPA.7.004701.vlCDR2和CPA.7.047.vlCDR3；
CPA.7.049、CPA.7.049.VH、CPA.7.049.VL、CPA.7.049.HC、CPA.7.049.LC、CPA.7.049.H1、CPA.7.049.H2、CPA.7.049.H3、CPA.7.049.H4；CPA.7.049.vhCDR1、CPA.7.049.vhCDR2、CPA.7.049.vhCDR3、CPA.7.049.vlCDR1、CPA.7.049.vlCDR2和CPA.7.049.vlCDR3；和
CPA.7.050、CPA.7.050.VH、CPA.7.050.VL、CPA.7.050.HC、CPA.7.050.LC、CPA.7.050.H1、CPA.7.050.H2、CPA.7.050.H3、CPA.7.050.H4、CPA.7.050.vhCDR1、CPA.7.050.vhCDR2、CPA.7.050.vhCDR3、CPA.7.050.vlCDR1、CPA.7.050.vlCDR2和CPA.7.050.vlCDR3。
CPA.7.028、CPA.7.028.VH、CPA.7.028.VL、CPA.7.028.HC、CPA.7.028.LC、CPA.7.028.H1、CPA.7.028.H2、CPA.7.028.H3和CPA.7.028.H4；CPA.7.028.vhCDR1、CPA.7.028.vhCDR2、CPA.7.028.vhCDR3、CPA.7.028.vlCDR1、CPA.7.028.vlCDR2和CPA.7.028.vlCDR3。
CPA.7.030、CPA.7.030.VH、CPA.7.030.VL、CPA.7.030.HC、CPA.7.030.LC、CPA.7.030.H1、CPA.7.030.H2、CPA.7.030.H3和CPA.7.030.H4；CPA.7.030.vhCDR1、CPA.7.030.vhCDR2、CPA.7.030.vhCDR3、CPA.7.030.vlCDR1、CPA.7.030.vlCDR2和CPA.7.030.vlCDR3。
CPA.7.041、CPA.7.041.VH、CPA.7.041.VL、CPA.7.041.HC、CPA.7.041.LC、CPA.7.041.H1、CPA.7.041.H2、CPA.7.041.H3和CPA.7.041.H4；CPA.7.041.vhCDR1、CPA.7.041.vhCDR2、CPA.7.041.vhCDR3、CPA.7.041.vlCDR1、CPA.7.041.vlCDR2和CPA.7.041.vlCDR3。
CPA.7.016、CPA.7.016.VH、CPA.7.016.VL、CPA.7.016.HC、CPA.7.016.LC、CPA.7.016.H1、CPA.7.016.H2、CPA.7.016.H3和CPA.7.016.H4；CPA.7.016.vhCDR1、CPA.7.016.vhCDR2、CPA.7.016.vhCDR3、CPA.7.016.vlCDR1、CPA.7.016.vlCDR2和CPA.7.016.vlCDR3。
CPA.7.020、CPA.7.020.VH、CPA.7.020.VL、CPA.7.020.HC、CPA.7.020.LC、CPA.7.020.H1、CPA.7.020.H2、CPA.7.020.H3和CPA.7.020.H4；CPA.7.020.vhCDR1、CPA.7.020.vhCDR2、CPA.7.020.vhCDR3、CPA.7.020.vlCDR1、CPA.7.020.vlCDR2和CPA.7.020.vlCDR3。
CPA.7.038、CPA.7.038.VH、CPA.7.038.VL、CPA.7.038.HC、CPA.7.038.LC、CPA.7.038.H1、CPA.7.038.H2、CPA.7.038.H3和CPA.7.038.H4；CPA.7.038.vhCDR1、CPA.7.038.vhCDR2、CPA.7.038.vhCDR3、CPA.7.038.vlCDR1、CPA.7.038.vlCDR2和CPA.7.038.vlCDR3。
CPA.7.044、CPA.7.044.VH、CPA.7.044.VL、CPA.7.044.HC、CPA.7.044.LC、CPA.7.044.H1、CPA.7.044.H2、CPA.7.044.H3和CPA.7.044.H4；CPA.7.044.vhCDR1、CPA.7.044.vhCDR2、CPA.7.044.vhCDR3、CPA.7.044.vlCDR1、CPA.7.044.vlCDR2和CPA.7.044.vlCDR3。
CPA.7.045、CPA.7.045.VH、CPA.7.045.VL、CPA.7.045.HC、CPA.7.045.LC、CPA.7.045.H1、CPA.7.045.H2、CPA.7.045.H3和CPA.7.045.H4；CPA.7.045.vhCDR1、CPA.7.045.vhCDR2、CPA.7.045.vhCDR3、CPA.7.045.vlCDR1、CPA.7.045.vlCDR2和CPA.7.045.vlCDR3。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体选自其序列展示于图3中的抗体：
CPA.9.018、CPA.9.018.VH、CPA.9.018.VL、CPA.9.018.HC、CPA.9.018.LC、CPA.9.018.H1、CPA.9.018.H2、CPA.9.018.H3、CPA.9.018.H4；CPA.9.018.H4(S241P)；CPA.9.018.vhCDR1、CPA.9.018.vhCDR2、CPA.9.018.vhCDR3、CPA.9.018.vlCDR1、CPA.9.018.vlCDR2、CPA.9.018.vlCDR3和scFv-CPA.9.018；
CPA.9.027、CPA.9.027.VH、CPA.9.027.VL、CPA.9.027.HC、CPA.9.027.LC、CPA.9.027.H1、CPA.9.027.H2、CPA.9.027.H3、CPA.9.027.H4；CPA.9.018.H4(S241P)；CPA.9.027.vhCDR1、CPA.9.027.vhCDR2、CPA.9.027.vhCDR3、CPA.9.027.vlCDR1、CPA.9.027.vlCDR2、CPA.9.027.vlCDR3和scFv-CPA.9.027；
CPA.9.049、CPA.9.049.VH、CPA.9.049.VL、CPA.9.049.HC、CPA.9.049.LC、CPA.9.049.H1、CPA.9.049.H2、CPA.9.049.H3；CPA.9.049.H4；CPA.9.049.H4(S241P)；CPA.9.049.vhCDR1、CPA.9.049.vhCDR2、CPA.9.049.vhCDR3、CPA.9.049.vlCDR1、CPA.9.049.vlCDR2、CPA.9.049.vlCDR3和scFv-CPA.9.049；
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CPA.9.059、CPA.9.059.VH、CPA.9.059.VL、CPA.9.059.HC、CPA.9.059.LC、CPA.9.059.H1、CPA.9.059.H2、CPA.9.059.H3；CPA.9.059.H4；CPA.9.059.H4(S241P)；CPA.9.059.vhCDR1、CPA.9.059.vhCDR2、CPA.9.059.vhCDR3、CPA.9.059.vlCDR1、CPA.9.059.vlCDR2、CPA.9.059.vlCDR3和scFv-CPA.9.059；
CPA.9.083、CPA.9.083.VH、CPA.9.083.VL、CPA.9.083.HC、CPA.9.083.LC、CPA.9.083.H1、CPA.9.083.H2、CPA.9.083.H3；CPA.9.083.H4；CPA.9.083.H4(S241P)；CPA.9.083.vhCDR1、CPA.9.083.vhCDR2、CPA.9.083.vhCDR3、CPA.9.083.vlCDR1、CPA.9.083.vlCDR2、CPA.9.083.vlCDR3和scFv-CPA.9.083；
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在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PD-1抗体是帕博利珠单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PD-1抗体是帕博利珠单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PD-1抗体是帕博利珠单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PD-1抗体是帕博利珠单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PD-1抗体是纳武单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PD-1抗体是纳武单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PD-1抗体是纳武单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，PD-1抗体是纳武单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PD-1抗体是西米普利单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PD-1抗体是西米普利单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PD-1抗体是西米普利单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，PD-1抗体是西米普利单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，抗PD-1抗体是帕博利珠单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，抗PD-1抗体是帕博利珠单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，抗PD-1抗体是纳武单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，抗PD-1抗体是纳武单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，抗PD-1抗体是西米普利单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，抗PD-1抗体是西米普利单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是帕博利珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是帕博利珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是帕博利珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是帕博利珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是帕博利珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是帕博利珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是帕博利珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是帕博利珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是SHR-1210。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是SHR-1210。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是SHR-1210。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是SHR-1210。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是SHR-1210。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是SHR-1210。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是SHR-1210。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是SHR-1210。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是IBI308。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是IBI308。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是IBI308。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是IBI308。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是IBI308。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是IBI308。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是IBI308。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是IBI308。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是BGB-A317。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是BGB-A317。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是BGB-A317。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是BGB-A317。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是BGB-A317。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是BGB-A317。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是BGB-A317。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是BGB-A317。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是如美国专利公开第2017/0081409号中所述的抗PD-1抗体。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是如美国专利公开第2017/0081409号中所述的抗PD-1抗体。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是如美国专利公开第2017/0081409号中所述的抗PD-1抗体。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是如美国专利公开第2017/0081409号中所述的抗PD-1抗体。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是抗如美国专利公开第2017/0081409号中所述的PD-1抗体。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是抗如美国专利公开第2017/0081409号中所述的PD-1抗体。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是抗如美国专利公开第2017/0081409号中所述的PD-1抗体。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是抗如美国专利公开第2017/0081409号中所述的PD-1抗体。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是西米普利单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是西米普利单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是西米普利单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是西米普利单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是西米普利单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是西米普利单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是西米普利单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-1抗体是西米普利单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是度伐单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是度伐单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是度伐单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是度伐单抗，并且抗PVRIG抗体是以上和/或来自图5或63中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是度伐单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是度伐单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是度伐单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，抗PD-L1抗体是度伐单抗，并且抗TIGIT抗体是以上和/或来自图3中的一种。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿特珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿特珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿特珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿特珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿特珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿特珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿特珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿特珠单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是度伐单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.083.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是度伐单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是度伐单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CPA.9.086.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是度伐单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是度伐单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.7.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是度伐单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.538.1.2.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是度伐单抗。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是CHA.9.547.13.H4(S241P)，抗PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)，并且抗PD-L1抗体是度伐单抗。
B.生物标志物分析
如本文所示，可以使用对来自肿瘤活检的特定生物标志物的表达的评估来选择要施用的组合疗法。也就是说，通过从患者的肿瘤样品中取活检并且使用蛋白质染色和分选测试某些蛋白质的存在和含量，可以选择合适的疗法。如实例2中所示，可以筛选来自肿瘤的细胞以鉴定免疫和非免疫细胞群，并且然后评定免疫细胞群中多种生物标志物，包括PD-1、PD-L1、PVRIG、PVR、PVRL2和TIGIT的含量，包括通过检查配体和抗原含量。
因此，例如，为了鉴定免疫细胞群，可以评定针对CD45、CD3、CD8、CD33、CD25、CD127、CD14、CD4和CD56中的一种或多种的抗体，以对如下表1中所示的肿瘤样品中的细胞群进行分类：
然后通常使用标记抗体评定这些细胞类型中的几种的PD-1、PD-L1、PVRIG、PVR、PVRL2和TIGIT中的一种或多种的表达，并且进行评分。如果与用所用抗体的抗体相关同型对照抗体染色的相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的百分比大于1％(>1％)，那么应施用抗TIGIT、抗PVRIG和抗PD1抗体的三联组合。然而，应向与同型对照相比PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的频率低于1％(<1％)的患者施用抗TIGIT和抗PVRIG抗体的双联组合。
1.抗TIGIT、抗PVRIG和抗PD-1抗体的组合疗法
在一些实施例中，一旦已经任选地测试了来自肿瘤的免疫细胞的至少一种选自PD-1、PD-L1、PVRIG、PVR、PVRL2和TIGIT的细胞表面标志物的表达，就可以做出治疗决定。在PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的表达＞1％的情况下，可以向患者施用如本文所概述的抗TIGIT、抗PVRIG和抗PD-1抗体的三联组合。
因此，在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合。在一特定实施例中，将CPA.9.083.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合。在一特定实施例中，将CPA.9.083.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合。在一特定实施例中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合。在一特定实施例中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.7的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.7H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.7的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合。在一个具体的实施例中，将CHA.9.547.7.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.13的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.13.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.13的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合。在一个具体的实施例中，将CHA.9.547.13.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和纳武单抗组合。在一特定实施例中，将CPA.9.083.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和纳武单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和纳武单抗组合。在一特定实施例中，将CPA.9.083.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和纳武单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和纳武单抗组合。在一特定实施例中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和纳武单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和纳武单抗组合。在一特定实施例中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和纳武单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.7的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和纳武单抗组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.7H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和纳武单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.7的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和纳武单抗组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.7.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和纳武单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.13的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和纳武单抗组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.13.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和纳武单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.13的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和纳武单抗组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.13.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和纳武单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和西米普利单抗组合。在一特定实施例中，将CPA.9.083.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和西米普利单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和西米普利单抗组合。在一特定实施例中，将CPA.9.083.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和西米普利单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和西米普利单抗组合。在一特定实施例中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和西米普利单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和西米普利单抗组合。在一特定实施例中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和西米普利单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.7的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和西米普利单抗组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.7H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和西米普利单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.7的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和西米普利单抗组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.7.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和西米普利单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.13的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和西米普利单抗组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.13.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和西米普利单抗组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.13的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和西米普利单抗组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.13.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和西米普利单抗组合。
2.抗TIGIT和抗PVRIG抗体的组合疗法
类似地，一旦已经测试了来自肿瘤的免疫细胞的至少一种选自PD-1、PD-L1、PVRIG、PVR、PVRL2和TIGIT的细胞表面标志物的表达，就可以做出治疗决定。在PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的表达＜1％的情况下，可以向患者施用如本文所概述的抗TIGIT和抗PVRIG抗体的双联组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体组合。在一特定实施例中，将CPA.9.083.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体组合。在一特定实施例中，将CPA.9.083.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体组合。在一特定实施例中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体组合。在一特定实施例中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.7的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.7H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.7的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.7.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.13的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.13.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)组合。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.13的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体组合。在一特定实施例中，将CHA.9.547.13.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)组合。
在一个实施例中，本发明提供了本发明的抗TIGIT抗体和抗PD-1抗体的组合。在一个实施例中，本发明提供了本发明的抗TIGIT抗体和抗PD-L1抗体的组合。
在一个实施例中，活检取自癌症患者的肿瘤，并且如本领域已知的解离用于FACS分析。用针对(1)TIGIT(例如使用本文所述的任一者或本领域中的其它者，例如MBSA43)；(2)PD-1(例如使用本领域已知的那些，包括EH12.2H7、
Figure BDA0002340382800001431
西米普利单抗等)；(3)PD-L1(例如使用本领域已知的那些，例如本文所概述的BM-1、阿特珠单抗、阿维鲁单抗和度伐单抗)和(4)PVR(例如使用本领域已知的那些，例如SKII.4)；和(5)所用抗体的相关同型对照抗体的标记抗体对细胞进行染色。进行FACS，并且对于每种受体，计算表达受体的细胞相对于对照抗体的百分比。如果对于所有4种受体，TIGIT、PD-1、PD-1和PVR的阳性细胞百分比≥1％，那么如本文所概述用针对TIGIT和PD-1的抗体治疗患者。
在一个实施例中，活检取自癌症患者的肿瘤，并且如本领域已知的解离用于FACS分析。用针对(1)PVRIG(通常使用例如CHA.7.518.1H4(S241P)，尽管可使用WO2016/134333(具体包括结合，即使其不阻断的任何抗体)或WO2017/041004中所概述的任何抗体)；(2)PD-1(例如使用本领域已知的那些，包括EH12.2H7、
Figure BDA0002340382800001432
西米普利单抗等)；(3)PD-L1(例如使用本领域已知的那些，如本文所概述的BM-1、阿特珠单抗、阿维鲁单抗和度伐单抗)和(4)PVRL2(例如使用本领域已知的那些，例如TX11)；和(5)所用抗体的相关同型对照抗体的标记抗体对细胞进行染色。进行FACS，并且对于每种受体，计算表达受体的细胞相对于对照抗体的百分比。如果对于所有4种受体，PVRIG、PD-1、PD-1和PVRL2的阳性细胞百分比≥1％，那么如本文所概述用针对PVRIG和PD-1的抗体治疗患者。
在一个实施例中，活检取自癌症患者的肿瘤，并且如本领域已知的解离用于FACS分析。用针对(1)PVRIG(通常使用例如CHA.7.518.1H4(S241P)，尽管可使用WO2016/134333(具体包括结合，即使其不阻断的任何抗体)或WO2017/041004中所概述的任何抗体)；(2)TIGIT(例如使用本文所述的任何抗体或本领域的其它抗体，例如MBSA43)；(3)PVR(例如使用本领域已知的那些，例如SKII.4)和(4)PVRL2(例如使用本领域已知的那些，例如TX11)；和(5)所用抗体的相关同型对照抗体的标记抗体对细胞进行染色。进行FACS，并且对于每种受体，计算表达受体的细胞相对于对照抗体的百分比。如果对于所有4种受体，PVRIG、TIGIT、PVR和PVRL2的阳性细胞百分比≥1％，那么用针对PVRIG和TIGIT的抗体治疗患者。在这方面，优选的组合是CHA.7.518.1.H4(S241P)和CPA.9.086。
在一个实施例中，活检取自癌症患者的肿瘤，并且如本领域已知的解离用于FACS分析。用针对(1)PVRIG(通常使用例如CHA.7.518.1H4(S241P)，尽管可使用WO2016/134333(具体包括结合，即使其不阻断的任何抗体)或WO2017/041004中所概述的任何抗体)；(2)TIGIT(例如使用本文所述的任何抗体或本领域的其它抗体，例如MBSA43)；(3)PVR(例如使用本领域已知的那些，例如SKII.4)和(4)PVRL2(例如使用本领域已知的那些，例如TX11)；(5)PD-1(例如使用本领域已知的那些，包括EH12.2H7、西米普利单抗等)；和(6)所用抗体的相关同型对照抗体的标记抗体对细胞进行染色。进行FACS，并且对于每种受体，计算表达受体的细胞相对于对照抗体的百分比。如果对于所有5种受体，PVRIG、TIGIT、PVR、PVRL2和PD-1的阳性细胞百分比≥1％，那么用针对PVRIG、TIGIT和PD-1的抗体治疗患者。在这方面，优选的组合是CHA.7.518.1.H4(S241P)、CPA.9.086和EH12.2H7。在这方面，其它优选的组合是CHA.7.518.1.H4(S241P)、CPA.9.086和
Figure BDA0002340382800001442
在这方面，又其它优选的组合是CHA.7.518.1.H4(S241P)、CPA.9.086和
Figure BDA0002340382800001443
在一个实施例中，活检取自癌症患者的肿瘤，并且如本领域已知的解离用于FACS分析。用针对(1)PVRIG(通常使用例如CHA.7.518.1H4(S241P)，尽管可使用WO2016/134333(具体包括结合，即使它们不阻断的任何抗体)或WO2017/041004中所概述的任何抗体)；(2)TIGIT(例如使用本文所述的任何抗体或本领域的其它抗体，例如MBSA43)；(3)PD-L1(例如使用本文所述的任何抗体或本领域的其它抗体，例如本文所概述的BM-1、阿特珠单抗、阿维鲁单抗和度伐单抗)和(4)PVR(例如使用本领域已知的那些，例如SKII.4)；(5)PD-1(例如使用本领域已知的那些，包括EH12.2H7、
Figure BDA0002340382800001451
西米普利单抗等)；和(6)所用抗体的相关同型对照抗体的标记抗体对细胞进行染色。进行FACS，并且对于每种受体，计算表达受体的细胞相对于对照抗体的百分比。如果对于所有5种受体，PVRIG、TIGIT、PD-L1、PVR和PD-1的阳性细胞百分比≥1％，那么用针对PVRIG、TIGIT和PD-1的抗体治疗患者。在这方面，优选的组合是CHA.7.518.1.H4(S241P)、CPA.9.086和EH12.2H7。在这方面，其它优选的组合是CHA.7.518.1.H4(S241P)、CPA.9.086和
Figure BDA0002340382800001452
在这方面，又其它优选的组合是CHA.7.518.1.H4(S241P)、CPA.9.086和
3.用于难治性患者的抗TIGIT和抗PVRIG抗体与PD-1抗体的组合疗法
在一些实施例中，所述治疗包括抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-1抗体的组合以用于靶向具有高PD-L1表达的肿瘤细胞。在一些实施例中，所述治疗包括抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-1抗体的组合以用于其肿瘤表达PD-L1的患者。在一些实施例中，所述治疗包括抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-1抗体的组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一些实施例中，所述治疗包括抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-1抗体的组合以用于其肿瘤表达PD-L1并且对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
因此，在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CPA.9.083.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CPA.9.083.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.7的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1和帕博利珠单抗的CDR组的抗体组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CHA.9.547.7H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.7的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CHA.9.547.7.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.13的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CHA.9.547.13.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.13的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CHA.9.547.13.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和帕博利珠单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CPA.9.083.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.083的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CPA.9.083.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CPA.9.086的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CPA.9.086.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.7的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CHA.9.547.7H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.7的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CHA.9.547.7.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.13的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.518.1的CDR组的抗体和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CHA.9.547.13.H4(S241P)与CHA.7.518.1.H4(S241P)和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一个实施例中，将含有来自抗TIGIT抗体CHA.9.547.13的CDR组的抗体与含有来自抗PVRIG抗体CHA.7.538.1.2的CDR组的抗体和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。在一特定实施例中，将CHA.9.547.13.H4(S241P)与CHA.7.538.1.2.H4(S241P)和纳武单抗组合以用于其肿瘤表达PD-L1和/或对抗PD-1治疗剂难治的癌症患者。
在一些实施例中，抗TIGIT抗体是选自本文所述的任何抗TIGIT抗体的抗体，包括图3中所述的那些抗体中的任一种。在一些实施例中，抗PVRIG抗体是选自本文所述的任何抗PVRIG抗体的抗体，包括图5和/或图63中所述的那些抗体中的任一种。在一些实施例中，抗PD-1抗体是选自本文所述的任何抗PD-1抗体的抗体，包括图7中所述的那些抗体中的任一种。
4.治疗评定
通常，向癌症患者单独或组合施用本发明的抗体(PVRIG与PD-1、TIGIT与PD-1或TIGIT与PVRIG、和/或PVRIG与TIGIT和PD-1两者)，并且以如本文所述的多种方式评定功效。因此，虽然可以进行标准的功效分析，例如癌症负荷、肿瘤大小、转移的存在或程度的评估等，但也可以基于免疫状态评估来评定免疫肿瘤学治疗。这可以通过多种方式完成，包括体外和体内分析。举例来说，可以进行免疫状态变化(例如，ipi治疗后ICOS+CD4+T细胞的存在)的评估以及“老式”测量，例如肿瘤负荷、大小、侵袭性、LN受累、转移等。因此，可以评估以下中的任一个或全部：PVRIG对CD4+ T细胞活化或增殖、CD8+ T(CTL)细胞活化或增殖、CD8+ T细胞介导的细胞毒性活性和/或CTL介导的细胞耗竭、NK细胞活性和NK介导的细胞耗竭的抑制作用；PVRIG对Treg细胞分化和增殖和Treg或骨髓来源的抑制细胞(MDSC)介导的免疫抑制或免疫耐受的增强作用；和/或PVRIG对通过免疫细胞产生的促炎性细胞因子的影响，例如通过T细胞或其它免疫细胞产生的IL-2、IFN-γ或TNF-α。
在一些实施例中，通过使用例如CFSE稀释法、免疫效应细胞的Ki67细胞内染色以及3H-胸苷掺入法评估免疫细胞增殖来评定治疗。
在一些实施例中，通过评估基因表达的增加或活化相关标志物的蛋白质含量的增加来评定治疗，所述标志物包括以下中的一个或多个：CD25、CD69、CD137、ICOS、PD1、GITR、OX40以及通过CD107A的表面表达测量的细胞脱粒。
在一些实施例中，通过在不存在治疗的情况下，例如在施用本发明的抗体之前评定T细胞增殖的量来进行治疗评定。如果在施用后患者的T细胞增殖增加，例如患者T细胞的亚组增殖，那么表明T细胞被活化。
类似地，用本发明的抗体治疗的评定可以通过在施用前和施用后测量患者的IFNγ含量来进行，以评定治疗功效。这可以在几小时或几天内完成。
通常，如本领域已知的那样进行基因表达分析。参见例如Goodkind等人,《计算机与化学工程(Computers and Chem.Eng.)》29(3):589(2005)；Han等人,《生物信息学与生物学见解(Bioinform.Biol.Insights)》11/15/15 9(增刊1):29-46；Campo等人,《现代病理学(Nod.Pathol.)》2013年1月；26增刊1:S97-S110，其基因表达测量技术以引用的方式明确并入本文中。
通常，蛋白质表达测量也类似地如本领域中已知般进行，参见例如Wang等人,用于生物标志物发现的基于毛细管电泳的蛋白质组技术的最新进展(Recent Advances inCapillary Electrophoresis-Based Proteomic Techniques for BiomarkerDiscovery),《分子生物学方法(Methods.Mol.Biol.)》2013:984:1-12；Taylor等人,《生物医学研究(BioMed Res.)》第2014卷,文章编号361590,8页；Becerk等人,《突变研究(Mutat.Res)》2011年6月17日:722(2):171-182，其测量技术以引用的方式明确地并入本文中。
在一些实施例中，通过估计许多细胞参数，例如酶活性(包括蛋白酶活性)、细胞膜渗透性、细胞粘附、ATP产生、辅酶产生和核苷酸摄取活性来评定由靶细胞活力检测测量的细胞毒性活性，从而评定治疗。这些分析的具体实例包括但不限于台盼蓝(Trypan Blue)或PI染色、51Cr或35S释放法、LDH活性、MTT和/或WST分析、钙黄绿素-AM分析、基于发光的分析以及其它分析。
在一些实施例中，通过评定由细胞因子产生测量的T细胞活性，使用细胞因子，使用众所周知的技术，细胞内测量培养物上清液来评定治疗，所述细胞因子包括但不限于：IFN-γ、TNF-α、GM-CSF、IL-2、IL-6、IL-4、IL-5、IL-10和/或IL-13。
因此，可以使用评估以下中的一个或多个的分析来评定治疗：(i)免疫反应的增加；(ii)αβ和/或γδT细胞活化的增加；(iii)细胞毒性T细胞活性的增加；(iv)NK和/或NKT细胞活性的增加；(v)αβ和/或γδT细胞抑制的缓解；(vi)促炎性细胞因子分泌的增加；(vii)IL-2分泌的增加；(viii)干扰素γ产生的增加；(ix)Th1反应的增加；(x)Th2反应的减少；(xi)减少或消除调节性T细胞(Treg)中的至少一种的细胞数量和/或活性。。
测量功效的分析
在一些实施例中，使用如实例中所述的混合淋巴细胞反应(MLR)分析来评定T细胞活化。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量免疫反应的增加或减少，如例如通过不同因子的磷酸化或去磷酸化或通过测量其它翻译后修饰所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量αβ和/或γδT细胞活化的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD137、CD107a、PD1等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量细胞毒性T细胞活性的增加或减少，如例如通过直接杀伤靶细胞(例如癌细胞)或通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD137、CD107a、PD1等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量NK和/或NKT细胞活性的增加或减少，如通过直接杀伤靶细胞(例如癌细胞)或通过细胞因子分泌或通过如例如CD107a等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量αβ和/或γδT细胞抑制的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD137、CD107a、PD1等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量促炎性细胞因子分泌的增加或减少，如例如通过ELISA或通过Luminex或通过基于珠粒的多重方法或通过细胞内染色和FACS分析或通过Alispot等所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量IL-2分泌的增加或减少，如例如通过ELISA或通过Luminex或通过基于珠粒的多重方法或通过细胞内染色和FACS分析或通过Alispot等所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量干扰素γ产生的增加或减少，如例如通过ELISA或通过Luminex或通过基于珠粒的多重方法或通过细胞内染色和FACS分析或通过Alispot等所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量Th1反应的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量Th2反应的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量调节性T细胞(Treg)中的至少一种的细胞数量和/或活性的增加或减少，如例如通过流式细胞术或通过IHC所测量。反应减少指示免疫刺活化性。适当的减少与增加相同，如下所述。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量M2巨噬细胞细胞数量的增加或减少，如例如通过流式细胞术或通过IHC所测量。反应减少指示免疫刺活化性。适当的减少与增加相同，如下所述。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量M2巨噬细胞促肿瘤发生活性的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过活化标志物的表达变化所测量。反应减少指示免疫刺活化性。适当的减少与增加相同，如下所述。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量N2嗜中性粒细胞增量的增加或减少，如例如通过流式细胞术或通过IHC所测量。反应减少指示免疫刺活化性。适当的减少与增加相同，如下所述。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量N2嗜中性粒细胞促肿瘤发生活性的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过活化标志物的表达变化所测量。反应减少指示免疫刺活化性。适当的减少与增加相同，如下所述。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量T细胞活化抑制的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD137、CD107a、PD1等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量CTL活化抑制的增加或减少，如例如通过直接杀伤靶细胞(例如癌细胞)或通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD137、CD107a、PD1等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量αβ和/或γδT细胞耗竭的增加或减少，如例如通过活化标志物的表达变化所测量。反应减少指示免疫刺活化性。适当的减少与增加相同，如下所述。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量αβ和/或γδT细胞反应的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD137、CD107a、PD1等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量抗原特异性记忆反应的刺激的增加或减少，如例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过如例如CD45RA、CCR7等活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量癌细胞的细胞凋亡或裂解的增加或减少，如例如通过细胞毒性分析(如例如MTT、Cr释放、Calcine AM)或通过基于流式细胞仪的分析(如例如CFSE稀释或碘化丙啶染色等)所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量对癌细胞的细胞毒性或细胞抑制作用的刺激的增加或减少，如例如通过细胞毒性分析(如例如MTT、Cr释放、Calcine AM)或通过基于流式细胞仪的分析(如例如CFSE稀释或碘化丙啶染色等)所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量癌细胞的直接杀伤的增加或减少，如例如通过细胞毒性分析(如例如MTT、Cr释放、Calcine AM)或通过基于流式细胞仪的分析(如例如CFSE稀释或碘化丙啶染色等)所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量Th17活性的增加或减小，如例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过活化标志物的表达变化所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，信号传导途径分析测量补体依赖性细胞毒性和/或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的诱导的增加或减少，如例如通过细胞毒性分析(如例如MTT、Cr释放、Calcine AM)或通过基于流式细胞仪的分析(如例如CFSE稀释或碘化丙啶染色等)所测量。活性增加指示免疫刺活化性。适当的活性增加概述如下。
在一个实施例中，例如通过直接杀伤靶细胞(例如癌细胞)或通过细胞因子分泌或通过增殖或活化标志物(例如CD137、CD107a、PD1等)的表达变化来测量T细胞活化。对于T细胞，增殖、细胞表面活化标志物(例如CD25、CD69、CD137、PD1)、细胞毒性(杀伤靶细胞的能力)和细胞因子产生(例如IL-2、IL-4、IL-6、IFNγ、TNF-α、IL-10、IL-17A)的增加将指示免疫调节，这将符合癌细胞的杀伤增强。
在一个实施例中，例如通过直接杀死靶细胞(例如癌细胞)或通过细胞因子分泌或通过活化标志物(例如CD107a等)的表达变化来测量NK细胞活化。对于NK细胞，增殖、细胞毒性(杀死靶细胞并增加CD107a、颗粒酶和穿孔素表达的能力)、细胞因子产生(例如IFNγ和TNF)和细胞表面受体表达(例如CD25)的增加将指示免疫调节，这将符合癌细胞的杀伤增强。
在一个实施例中，例如通过细胞因子分泌或通过增殖或通过活化标志物的表达变化来测量γδT细胞活化。
在一个实施例中，例如通过细胞因子分泌或通过活化标志物的表达变化来测量Th1细胞活化。
相比参考样品或对照样品，例如不含本发明的抗PVRIG抗体的测试样品中的信号，活性或反应的适当增加(或如上所概述适当减少)是至少约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或98％到99％的增加。附图中描绘了活性的特定增加。举例来说，关于T细胞增殖的增加，CHA.7.518.1.H4(S241P)展示增加约60％并且CHA.7.538.1.2.H4(S241P)展示增加47％；相关的增加展示在T细胞增殖或IFN-γ中约10到70％，其中约20到60％也有用。
类似地，与参考或对照样品相比，增加至少一倍、两倍、三倍、四倍或五倍展示功效。
X.例示性实施例
1.一种治疗患者的癌症的方法，其包含：
a)提供来自所述患者的活检，其包含肿瘤细胞；
b)测量所述活检中的PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的频率；
c)如果与用所用抗体的相关同型对照抗体染色相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的所述频率高于1％，那么施用包含抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-1抗体的三联组合疗法；和
d)如果与用所用所述抗体的相关同型对照抗体染色相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的所述频率低于1％，那么施用包含抗TIGIT抗体和抗PVRIG抗体的双联组合疗法。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗TIGIT抗体是选自本文所述的任何抗TIGIT抗体的抗体，包括图3中所述的那些抗体中的任一种。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗PVRIG抗体是选自本文所述的任何抗PVRIG抗体的抗体，包括图5和/或图63中所述的那些抗体中的任一种。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗PD-1抗体是选自本文所述的任何抗PD-1抗体的抗体，包括图7中所述的那些抗体中的任一种。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述抗TIGIT抗体是选自CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述抗PVRIG抗体是选自CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述抗PD-1抗体是选自帕博利珠单抗、西米普利单抗和纳武单抗中的至少一种的抗体。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述双联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述三联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述抗体同时施用。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述抗体依序施用。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：前列腺癌、肝癌(HCC)、结直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、尿路上皮癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌))、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、食道癌、默克细胞癌和高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)和默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
14.一种治疗患者的癌症的方法，所述方法包含施用三联组合疗法，其包含抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-1抗体。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗TIGIT抗体是选自CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
16.根据权利要求14或15所述的方法，其中所述抗PVRIG抗体是选自CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
17.根据权利要求14、15或16中任一项所述的方法，其中所述抗PD-1抗体是选自帕博利珠单抗和纳武单抗的抗体。
18.根据权利要求14至17中任一项所述的方法，所述三联组合疗法包含施用抗PD-1抗体与施用选自以下的双联组合疗法组合：CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
19.根据权利要求14至18中任一项所述的方法，其中所述三联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
20.根据权利要求14至19中任一项所述的方法，其中所述抗体同时施用。
21.根据权利要求14至20中任一项所述的方法，其中所述抗体依序施用。
22.根据权利要求14至21中任一项所述的方法，其中所述癌症选自前列腺癌、肝癌(HCC)、结直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、尿路上皮癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、食道癌、默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
23.根据权利要求14至22中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)和默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
24.一种药物剂量试剂盒，其包含：
a)包含单位剂量的抗TIGIT抗体的容器；和
b)包含单位剂量的抗PVRIG抗体的容器。
25.一种药物剂量试剂盒，其包含：
a)包含单位剂量的抗TIGIT抗体的容器；
b)包含单位剂量的抗PVRIG抗体的容器；和
c)包含抗PD-1抗体的容器。
26.根据权利要求24或25所述的方法，其中所述抗TIGIT抗体是选自本文所述的任何抗TIGIT抗体的抗体，包括图3中所述的那些抗体中的任一种。
27.根据权利要求24或25所述的方法，其中所述抗PVRIG抗体是选自本文所述的任何抗PVRIG抗体的抗体，包括图5和/或图63中所述的那些抗体中的任一种。
28.根据权利要求24或25所述的方法，其中所述抗PD-1抗体是选自本文所述的任何抗PD-1抗体的抗体，包括图7中所述的那些抗体中的任一种。
29.一种方法，其包含：
a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；
b)用标记的抗体对所述群体进行染色，所述抗体结合：
i)TIGIT蛋白；
ii)PVRIG蛋白；
iii)PVR蛋白；
iv)PD-1蛋白；
v)PD-L1蛋白；
vi)PVRL2；和
vii)i)-vi)中的所述抗体的相关同型对照；
c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；
d)对于TIGIT、PVRIG、PVR、PD-1、PVRL2和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；
其中如果对于TIGIT或PVR，并且对于PVRIG或PVRL2，并且对于PD-1或PD-L1，阳性细胞的百分比>1％，那么进行步骤e)；和
e)向所述患者施用针对TIGIT、PVRIG和PD-1的抗体。
30.根据权利要求27所述的方法，其中所述抗TIGIT抗体是选自本文所述的任何抗TIGIT抗体的抗体，包括图3中所述的那些抗体中的任一种。
31.根据权利要求27所述的方法，其中所述抗PVRIG抗体是选自本文所述的任何抗PVRIG抗体的抗体，包括图5和/或图63中所述的那些抗体中的任一种。
32.根据权利要求27所述的方法，其中所述抗PD-1抗体是选自本文所述的任何抗PD-1抗体的抗体，包括图7中所述的那些抗体中的任一种。
33.根据权利要求29、31或32所述的方法，其中所述TIGIT抗体是CPA.9.086。
34.根据权利要求29、30或31所述的方法，其中所述PD-1抗体选自帕博利珠单抗和纳武单抗。
35.根据权利要求29、30或32所述的方法，其中所述PVRIG抗体是CHA.7.518.1.H4(S241P)。
36.一种治疗患者的癌症的方法，其包含：
a)提供来自所述患者的活检，其包含肿瘤细胞；
b)测量所述活检中的PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的频率；
c)如果与用所用抗体的相关同型对照抗体染色相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的所述频率高于1％，那么施用包含抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-L1抗体的三联组合疗法；和
d)如果与用所用所述抗体的相关同型对照抗体染色相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的所述频率低于1％，那么施用包含抗TIGIT抗体和抗PVRIG抗体的双联组合疗法。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述抗TIGIT抗体是选自本文所述的任何抗TIGIT抗体的抗体，包括图3中所述的那些抗体中的任一种。
38.根据权利要求36所述的方法，其中所述抗PVRIG抗体是选自本文所述的任何抗PVRIG抗体的抗体，包括图5和/或图63中所述的那些抗体中的任一种。
39.根据权利要求36所述的方法，其中所述抗PD-1抗体是选自本文所述的任何抗PD-L1抗体的抗体，包括图62中所述的那些抗体中的任一种。
40.根据权利要求36至39中任一项所述的方法，其中所述抗TIGIT抗体是选自CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
41.根据权利要求36至39中任一项所述的方法，其中所述抗PVRIG抗体是选自CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
42.根据权利要求36至41中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体是选自阿特珠单抗、阿维鲁单抗和度伐单抗中的至少一种的抗体。
43.根据权利要求36至42中任一项所述的方法，其中所述双联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
44.根据权利要求36至43中任一项所述的方法，其中所述三联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
45.根据权利要求36至44中任一项所述的方法，其中所述抗体同时施用。
46.根据权利要求36至45中任一项所述的方法，其中所述抗体依序施用。
47.根据权利要求36至46中任一项所述的方法，其中所述癌症选自前列腺癌、肝癌(HCC)、结直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、尿路上皮癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌))、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、食道癌、默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
48.根据权利要求36至47中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)和默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
49.一种在患者中治疗癌症的方法，所述方法包含施用三联组合疗法，其包含抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-L1抗体。
50.根据权利要求49所述的方法，其中所述抗TIGIT抗体是选自CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
51.根据权利要求49或50所述的方法，其中所述抗PVRIG抗体是选自CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
52.根据权利要求49、50或51中任一项所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体是选自阿特珠单抗、阿维鲁单抗和度伐单抗的抗体。
53.根据权利要求49至52中任一项所述的方法，其中所述三联组合疗法包含施用抗PD-L1抗体与施用选自以下的双联组合疗法组合：CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
54.根据权利要求49至53中任一项所述的方法，其中所述三联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿特珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、阿维鲁单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)、度伐单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
55.根据权利要求49至54中任一项所述的方法，其中所述抗体同时施用。
56.根据权利要求49至54中任一项所述的方法，其中所述抗体依序施用。
57.根据权利要求49至56中任一项所述的方法，其中所述癌症选自前列腺癌、肝癌(HCC)、结直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、尿路上皮癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌))、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、食道癌、默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
58.根据权利要求49至57中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)和默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
实例
实例1：功能分析
这项研究的目的是表征在基于体外原代细胞的分析中CHA.7.518.1.H4(S241P)单独或与抗TIGIT和/或抗PD-1抗体组合对人类T细胞功能的功能活性。我们证明CHA.7.518.1.H4(S241P)增强了病毒抗原特异性CD8 T细胞的细胞因子产生，所述CD8 T细胞用作模型替代抗原来研究CD8 T细胞反应。CHA.7.518.1.H4(S241P)与抗TIGIT抗体的组合可导致T细胞功能的累加，或在一些条件下协同增效。我们还进行了CHA.7.518.1.H4(S241P)、抗TIGIT和抗PD-1的三联组合，并且观察到与双联组合或单独抗体相比，使用三联组合，与PD-L1hi靶肿瘤细胞共培养的T细胞功能的最大增加。在与PD-L1lo靶肿瘤细胞的共培养中，与CHA.7.518.1.H4(S241P)和抗TIGIT双联组合相比，CHA.7.518.1.H4(S241P)、抗TIGIT、抗PD-1的三联组合未进一步增强T细胞功能，表明CHA.7.518.1.H4(S241P)和抗TIGIT治疗可在具有低或阴性PD-L1表达的患者中有效。综上所述，我们证明了CHA.7.518.1.H4(S241P)单独或与抗TIGIT或抗PD-1组合增强人类CD8+ T细胞功能的作用。
这一报告描述了在基于细胞的分析中CHA.7.518.1.H4(S241P)(一种完全人类化的IgG4抗PVRIG抗体)的表征。CHA.7.518.1.H4(S241P)以高亲和力并且特异性与PVRIG结合，并且阻断PVRIG与PVRL2的相互作用。为了了解CHA.7.518.1.H4(S241P)对T细胞功能的影响，我们在体外分析中检查了CHA.7.518.1.H4(S241P)对细胞因子产生的影响。这一分析是基于T细胞活化的2个信号假设设计的：信号1来自T细胞受体的活化；信号2是有助于增强或抑制T细胞反应的免疫调节受体。这些分析的设计由将人类T细胞与用衍生自病毒抗原(CMV)的抗原肽脉冲的靶细胞系共培养组成。这种信号通过T细胞受体提供T细胞活化的“信号1”。这些靶细胞系表达内源性PVRL2，并且在这种情况下，PVRL2为T细胞提供“信号2”。
CMV：肿瘤细胞系分析
通过根据CTL“解冻冷冻保存的PBMC”方案解冻CMV反应性供体扩增CMVpp65反应性T细胞，并且将2e6个细胞/毫升再悬浮于补充有1％格鲁塔玛(glutamax)(Gibco)、1％NEAA、青霉素/链霉素(Gibco)、10％人类AB血清(Corning)、1ug/ml CMV肽、2ng/ml IL-2(R&D)和10ng/ml IL-7(R&D)的培养基(Gibco)中。在第三天和第六天补充IL-2和IL-7的情况下将PBMC培养八天。在第8天，收获细胞，并且以2e6/ml的低剂量IL-2(100U/ml)在完全RPMI培养基中重新铺板5天。在第九天，针对CD8+ T细胞纯度和CMV四聚体反应性对细胞进行分表型。细胞用以下染色：0.25μL CD3(克隆：OKT)-别藻蓝蛋白7(allophycocyanin seven)(APC-Cy7；Biolegend)、0.25ul CD8(克隆：H1T8a)-Alexafluor 488(AF488；Biolegend)、0.125μLCD14(克隆：HCD14)、0.5ul CD19(克隆：HIBCD14)、0.5ul CD56(克隆：HCD56)-多甲藻素叶绿素蛋白(peridinin chlorophyll protein)(PerCP；Biolegend)、1.25ul TIGIT(克隆：MBSA43)-别藻蓝蛋白(APC；e-Bioscience)或1.25μL IgG4(内部)-同型对照(APC：Biolegend)、1.25ul CHA.7.518.1.H4(S241P)-别藻蓝蛋白(内部)或1.25μL IgG4-APC同型对照(内部)和0.5ul PD-1(克隆EH12.2H7)-亮紫色(Brilliant Violet)421(BV421；Biolegend)或1.25ul IgG1(克隆：MOPC21)-亮紫色421(BV421；Biolegend)。为了评定四聚体反应性CD8+ T细胞，在室温下用10μL iTAg四聚体-HLA-A*02:01 CMV pp65(NLVPMVATV)-藻红蛋白(phycoerythrin)(PE，MBL-BION)培育30分钟后将未标记的PBMC染色。将细胞用PBS/BSA/叠氮化物溶液洗涤，并且再悬浮在缓冲液中)。使用Fortessa获取数据，并且使用FlowJo(Treestar)和Prism(Graphpad)软件分析。
共培养分析中使用的靶细胞是Panc.05.4和Colo205细胞系(ATCC)。这些细胞系用1.25ul PVR(SKII.4)-藻红蛋白(PE,Biolegend)、1.25ul PVRL2(TX31)-多甲藻素叶绿素蛋白(peridinin chlorophyll protein)(PerCP5.5；Biolegend)、2.5ul PD-L1(29E.2A3)-亮紫色785(BV785；Biolegend)和1.25ul HLA-A2(BB7.2)-别藻蓝蛋白(APC；Biolegend)表达染色。还评定了每个荧光团的1.25ul相应的同型(MOPC-21)。
为了建立共培养物，从培养物中收获肿瘤细胞系，并且在37℃下定期混合用CMV肽(Anaspec)脉冲1小时的肿瘤细胞系。孵育后，将靶细胞彻底洗涤，计数，并且再悬浮于完全RPMI培养基中。用1:1比例的T细胞(100,000)与靶细胞(100,000)建立分析。将靶细胞、T细胞和每种抗体治疗剂的10ug/ml一起添加到96孔U底板(Costar)中，并且在37℃下孵育24小时。抗体治疗包括CHA.7.518.1.H4(S241P)hIgG4、抗TIGIT hIgG4(Benchmark 26，Compugen)、抗PD-1hIgG4(Benchmark 3，Compugen)和人类IgG4同型对照(Compugen)。为了使所有单独和组合组的总抗体浓度匹配，将额外的人类IgG4同型对照添加到单一或双联组合条件，最终总抗体浓度为30ug/ml。孵育24小时后，分析共培养物上清液中分泌的细胞因子，包括IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22、TNF-α和/或IFN-γ，与细胞计数珠阵列(CBA)人类Th1/Th2/Th17细胞因子试剂盒(BDBiosciences)，或与LEGENDplexTM人类Th细胞因子试剂盒(Biolegend)。使用Fortessa获取数据，并且使用FlowJo(Treestar)和Prism(Graphpad)软件分析。
1.结果和讨论
a.CMV T细胞分析：CMVpp65反应性T细胞表达PVRIG、TIGIT和PD1
人类巨细胞病毒(CMV)是一种广泛存在的持久性β疱疹病毒，感染了高比例的人群，在西欧和美国的血清阳性率略低(Cannon MJ等人2010)。患有慢性病毒感染或癌症的患者的免疫系统通常会功能受损，并且无法对病毒进行有效反应，也无法识别和消除恶性细胞。在这些患者中，抑制受体的表达增加，并且发现这与T细胞功能障碍有关。因此，阴性检查点受体的上调可以作为逆转T细胞耗竭的潜在靶标。对CMV pp65蛋白具有特异性的CD8 T细胞已得到很好的表征，并且这些CMV特异性T细胞可用于研究调节性受体对T细胞的作用。
如通过四聚体染色确定，使用CMV pp65肽、IL-2和IL-7刺激HLA-A2+供体PBMC导致CMV pp65特异性T细胞强烈扩增到纯度为50-90％。图8展示扩增后来自若干供体的CMVpp65特异性T细胞的百分比。PVRIG、TIGIT和PD-1在T细胞上的表面表达由CMV+供体评定，并且通过流式细胞术与受体表达的相应同型进行比较。在活化的第9天CMV pp65特异性T细胞表达PVRIG(中值gMFI比率：7)、TIGIT(中位数gMFI比：37)和PD1(中值gMFI比：2)(图8B)。
我们进一步评定时程中相对于CMV pp65特异性T细胞扩增的PVRIG、TIGIT和PD1表达的动力学。对于每个供体，CMVpp65反应性CD8+ T细胞的频率随时间绘制(图9A)。在所有供体中都观察到CMVpp65反应性T细胞频率的显著扩增(范围：50-97％)，其中供体198在第3天开始扩增(第3天CMV+百分比：85.7％)。然而，供体198在第6天具有CMV四聚体表达损失(第6天CMV+百分比：50.4％)。CMV特异性CD8+ T细胞的PVRIG、TIGIT和PD-1表达通过流式细胞术在十二天时程内评定。在供体4、供体198和供体210中，CMVpp65特异性CD8+ T细胞间的TIGIT表达在十二天的扩增时段期间增加(三种供体的三种供体TIGIT表达的平均gMFIr表达，第0天gMFIr：1.2，第12天gMFIr：47)(图9B)。CMV+T细胞的PVRIG表达也增加(三种供体的平均gMFI PVRIG，第0天gMFIr：0.92，第12天gMFIr：8.6)(图6C)。也评定PD-1表达，并且我们观察到表达的最小诱导(平均gMFIr PD-1，第0天gMFI：0.93，第12天gMFI：2)(图9C)。
b.CHA.7.518.1.H4(S241P)、抗TIGIT和抗PD1抗体增强IFN-γ分泌
在CD8 CMV细胞的TIGIT、PVRIG和PD-1表达的上调与T细胞功能障碍相关的理论基础下，我们旨在评估PVRIG、TIGIT和PD-1阻断对促炎性细胞因子产生的能力的作用。来自2种供体CMVpp65反应性T细胞与负载CMV肽的PD-L1hi(Panc04.05)和PD-L1lo(Colo205)肿瘤细胞系共培养，随后进行细胞因子产生的流式细胞测量分析(图10)。
在Panc.04.05(PD-L1hi)共培养物中，我们观察到，与IgG对照mAb相比，抗TIGIT单阻断增加了IFN-γ产生，而CHA.7.518.1.H4(S241P)或抗PD-1有最小作用(图11)。与单独的CHA.7.518.1.H4(S241P)或抗TIGIT单一阻断相比，双重抗TIGIT和CHA.7.518.1.H4(S241P)协同阻断并且持续增加CD8+ T细胞的细胞因子产生。在供体4中，通过CHA.7.518.1.H4(S241P)、抗TIGIT和抗PD-1的三联组合观察到IFN-γ进一步增加，这表明当PD-L1、PVR和PVRL2在肿瘤细胞上以高水平表达，利用三联组合实现T细胞活化的最大增加。在Colo205(PD-L1lo)共培养物中，单独的抗TIGIT阻断会增加IFN-γ分泌，而CHA.7.518.1.H4(S241P)或抗PD1抗体的作用极小，与Panc.04.05共同培养物类似。也类似于Panc.04.05共培养，与单独的抗TIGIT、抗PD-1或CHA.7.518.1.H4(S241P)相比，抗TIGIT和CHA.7.518.1.H4(S241P)的双重阻断也协同增加了IFN-γ，并且增加到与抗PD-1组合的CHA.7.518.1.H4(S241P)或抗TIGIT更大量值。与Panc.04.05(PD-L1hi)相比，供体4的三联组合条件并不优于Colo205共培养物(PD-L1lo)中CHA.7.518.1.H4(S241P)和抗TIGIT的双联组合，这表明在肿瘤细胞上以高水平表达PVR和PVRL2并且以低水平表达PD-L1时，CHA.7.518.1.H4(S241P)和抗TIGIT的双联组合产生IFN-γ表达的最大增加。这些发现表明，TIGIT和PVRIG阻断足以增强PD-L1lo肿瘤中的CD8+ T细胞反应，并且三联组合产生PD-L1hi肿瘤中T细胞活化的最大增加。
c.概要
人类抗CMV T细胞反应被用作体外抗原特异性方法，以评定检查点抑制剂抗体功能能力。我们观察到，与单抗体阻断相比，TIGIT和CHA.7.518.1.H4(S241P)的共同阻断使得T细胞功能的恢复更大，这表明破坏TIGIT和PVRIG途径可能比破坏CD8肿瘤细胞共培养物中的PD1途径更为重要。此外，我们观察到，当PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞>1％时，使用针对PD-1、TIGIT和PVRIG的抗体进行三重阻断可使得IFN-γ的最大增加，这等效于PD-L1高表达水平。这些发现表明，TIGIT和PVRIG阻断足以增强PD-L1lo肿瘤中的CD8+ T细胞反应，并且三联组合产生PD-L1hi肿瘤中T细胞活化的最大增加。
在另一方面，本发明提供一种方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)TIGIT蛋白；ii)PVRIG蛋白；iii)PVR蛋白；iv)PD-1蛋白；v)PD-L1蛋白；vi)PVRL2；和vii)i)-vi)中的所述抗体的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于TIGIT、PVRIG、PVR、PD-1、PVRL2和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果对于TIGIT或PVR、和PVRIG或PVRL2、和PD-1或PD-L1，阳性细胞百分比>1％，那么进行e)；和e)向所述患者施用针对TIGIT、PVRIG和PD-1的抗体。
在另一方面，本发明提供一种方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)TIGIT蛋白；ii)PVRIG蛋白；iii)PVR蛋白；iv)PD-1蛋白；v)PD-L1蛋白；vi)PVRL2；和vii)i)-vi)中的所述抗体的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于TIGIT、PVRIG、PVR、PD-1、PVRL2和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果对于TIGIT或PVR、和PVRIG或PVRL2、和PD-1或PD-L1，阳性细胞百分比>1％，那么进行e)；和e)向所述患者施用针对TIGIT和PD-1的抗体。
在另一方面，本发明提供一种方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)TIGIT蛋白；和ii)PVR蛋白；和iii)i)-ii)中的所述抗体的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于TIGIT和PVR中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果对于TIGIT或PVR，阳性细胞百分比≥1％，那么进行e)；和e)向所述患者施用针对TIGIT、PVRIG和PD-1的抗体。
在另一方面，本发明提供一种方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)PVRIG蛋白；和ii)PVRL2蛋白；和iii)i)-ii)中的所述抗体的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于PVRIG和PVRL2中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果对于PVRIG或PVRL2，阳性细胞百分比>1％，那么进行e)；和e)向所述患者施用针对TIGIT、PVRIG和PD-1的抗体。
在另一方面，本发明提供一种方法，其包含：a)提供来自患者的肿瘤样品的细胞群体；b)用标记的抗体将所述群体染色，所述抗体结合：i)PD-1蛋白；和ii)PD-L1蛋白；和iii)i)-ii)中的所述抗体的相关同型对照；c)运行荧光活化细胞分选术(FACS)；d)对于PD-1和PD-L1中的每一种，确定所述群体中相对于所述同型对照抗体表达所述蛋白质的细胞百分比；其中如果对于PD-1或PD-L1，阳性细胞百分比>1％，那么进行e)；和e)向所述患者施用针对TIGIT和PD-1的抗体。
实例2：PVRIG和PVRL2在人类癌症和正常邻近组织中的表达
这项研究的目的是检查PVRIG和PVRL2在人类肿瘤和正常相邻样品中的表达。观察到PVRIG在CD8+ T细胞、随后NK细胞，CD4-CD8- T细胞上和由CD4+ T细胞最高表达。在单核细胞、mDC、pDC或肿瘤细胞上未观察到表达。在检查的肿瘤类型中，子宫内膜、肺和肾肿瘤在淋巴细胞上表达最高含量的PVRIG。与来自同一患者的肿瘤组织相比，正常邻近组织的CD4+和CD8+ T细胞上PVRIG表达的比较表明肿瘤组织中的PVRIG显著增加。PVRIG表达量与TIGIT或PD-1表达量的相关性分析展示CD4和CD8 T细胞呈正相关和显著相关。另外，对PD-1、TIGIT和PVRIG的共表达单细胞分析表明，PVRIG与PD-1和TIGIT在细胞亚组上共表达。这些数据支持以下结论：PVRIG与TIGIT和/或PD-1的组合阻断将使得T细胞反应增加。PVRIG的配体PVRL2在骨髓细胞(单核细胞、mDC、pDC)和来自多个肿瘤的CD45非免疫细胞(可能由肿瘤上皮细胞和基质细胞构成)上表达。在来自正常邻近组织和肿瘤组织的细胞上进行的PVRL2比较展示单核细胞和CD45非免疫细胞上PVRL2的表达显著增加。PVRL2表达量与PD-L1表达量的相关性分析展示CD45非免疫细胞和单核细胞呈正相关和显著相关。在这些样品中，我们还评定了同一样品中PVRIG和PVRL2的共表达，以了解哪种肿瘤类型具有受体和配体的高的共表达。在检查的肿瘤类型中，我们观察到大多数子宫内膜样品、肾样品和肺肿瘤样品中PVRIG和PVRL2的高表达。总之，这些数据证明PVRIG和PVRL2在肿瘤微环境中的白细胞和肿瘤细胞上表达，并且表明这一途径可用于调节抗肿瘤反应。
我们使用流式细胞术检查了来自解离人类肿瘤的细胞和来自多个不同组织的匹配的正常邻近组织的细胞中PVRIG和PVRL2的表达。免疫调节剂在肿瘤中的表达可用于帮助预测哪种肿瘤类型或患者可能对特定疗法最有反应。
健康的人类外周血单核细胞(PBMC)供体是从斯坦福血库(Stanford Blood Bank)获得的。将血沉棕黄层或LRS产品在1×PBS+2％FBS中以1:1稀释，并通过Ficoll-Paque梯度(Sigma)分离PBMC。将纯化的PBMC用PBS+2％FBS洗涤两次，并且保存于液氮中。肿瘤和正常邻近组织由国家癌症研究所支持的资源合作人体组织网络(Cooperative Human TissueNetwork,a National Cancer Institute supported resource)提供。基于回顾每个样品的病理学报告确定肿瘤类型。下面报告了我们检查PVRIG和PVRL2表达的每种肿瘤类型的样品数量。
Figure BDA0002340382800001751
1.肿瘤解离方案
用手术刀将肿瘤和NAT样品切成小块，然后转移到含有酶混合物的GentleMACsTM C管(Miltenyi Biotec)中。根据制造商的方案，在GentleMACs(Miltenyi Biotec)上解离样品。解离后，在进行FACS染色之前，将细胞通过100μm过滤器过滤。
2.抗体和试剂：
为了鉴定免疫和非免疫细胞群，以下抗体处于制造商推荐的浓度：
表2.展示用于鉴定特定细胞亚组的抗体。
抗体 荧光团 克隆 销售公司 目录号
CD45 Alexa Fluor 700 HI30 BioLegend 304024
CD3 APC Cy7 OKT3 BioLegend 317342
CD8 BV 785 RPA-T8 BioLegend 301046
CD33 BV711 WM53 BioLegend 303424
CD25 BV 650 BC96 BioLegend 302634
CD127 BV 605 A019D5 BioLegend 351334
CD14 BUV395 MoP9 BD Pharmingen 563562
CD4 BUV496 SK3 BD Pharmingen 564651
CD56 PE Dazzle HCD56 BioLegend 318348
在同型对照混合液中以5ug/ml使用以下抗体。
表3.展示用作目标靶标的同型对照的抗体。
抗体 荧光团 克隆 销售公司 目录号
mIgG1 AF647 内部 Compugen 内部
hIgG4 PE 内部 Compugen 内部
mIgG1 BV421 MOPC21 BioLegend 400158
mIgG1 PerCP Cy5-5 MOPC21 BioLegend 400150
mIgG1 PE Cy7 MOPC21 BioLegend 400126
mIgG1 FITC MOPC21 BioLegend 400110
以下混合液用于以5ug/ml的浓度对目标靶标进行染色：
表4.展示用于分析目标靶标的抗体。
抗体 荧光团 克隆 销售公司 目录号
PDL1 AF647 BM1(M1) Compugen 内部
PVRIG PE 518(H4) BioLegend 93930
PD1 BV421 EH12.2H7(M1) BioLegend 329920
PVR PerCP Cy5-5 SKII.4(M1) BioLegend 337612
PVRL2 PE Cy7 TX31(M1) BioLegend 337414
TIGIT FITC MBSA43(M1) eBioscience 11-9500-42
所有同型对照抗体和靶标抗体都以5ug/ml的最终浓度使用。
3.FACS染色
将1×106个PBMC细胞或解离的肿瘤细胞接种到96孔V底平板中进行染色。首先将样品用Aqua Live Dead(Thermo Scientific)进行染色以区分活细胞和死细胞，并且用抗CD16(Biolegcnd)、抗CD32(Thermo Scientific)、抗CD64(Biolegend)Ab混合液染色以阻断Fc受体。样品用FACS缓冲液洗涤两次，并且用所用抗体的抗体的相关同型对照或“抗体和试剂”部分中所述的靶标抗体混合液染色。所有染色在4℃下进行30分钟。然后将样品洗涤两次，并且在BD Fortessa流式细胞仪上获得。使用FlowJo进行分析，对上面表1中指定的特定群体进行圈选(圈选所有活细胞)。
从具有至少100个细胞的每个群体中导出MFI值，并且通过将靶标的MFI除以相关同型对照的MFI来计算MFI比(MFIr)。MFIr值大于1表示检测到阳性表达。
4.结果和讨论
a.PVRIG在多种肿瘤类型的TILS上表达，并且与TIGIT和PD1共表达
为了通过流式细胞术检查PVRIG在源自肿瘤的细胞上的表达，肿瘤对于免疫细胞谱系标志物解离和染色以鉴定免疫和非免疫细胞亚组，并且对于PVRIG、TIGIT、PD1、PVRL2和PVR检查这些目标在这些亚组上的表达。在来自乳房、结肠/直肠/胃、子宫内膜、头颈部、肺、肾、前列腺和卵巢肿瘤的CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、CD4-CD8- T细胞和NK细胞上检测到PVRIG的表达(图12A)。在所有检查的肿瘤组织中，PVRIG从最高到最低在CD8+ T细胞、NK细胞、CD4-CD8- T细胞和CD4+ T细胞上表达。在单核细胞、mDC、pDC或非免疫细胞上未检测到PVRIG表达(图1B)。由于已知CD8+ T细胞和NK细胞是免疫系统中重要的细胞毒性淋巴细胞，因此表明PVRIG可直接调节这些细胞毒性淋巴细胞的活性。
接下来，我们检查了与肿瘤浸润T细胞上TIGIT和PD-1的量有关的PVRIG量的表达。对于这个分析，我们将分析重点放在子宫内膜样品上，因为我们有足够数量的样品可以执行相关性分析。PVRIG与CD4和CD8 T细胞上的TIGIT表达PD1表达显著并且直接相关，这表明这些分子在TME内共同调节(图13)。
我们进一步检查了CD8 T细胞在单个细胞基础上的PVRIG、TIGIT和PD1的共表达。在有代表性的肺癌和肾癌上没有观察到PVRIG与PD-1和与TIGIT的共表达(图14)。
b.与正常邻近组织相比，来自肿瘤的T细胞上的PVRIG表达显著增强。
对于结肠/直肠/胃、子宫内膜、肾、肺或卵巢肿瘤的亚组，我们能够从同一供者处获得匹配的肿瘤和正常邻近肿瘤(NAT)样品。使用这些匹配样品，我们比较PVRIG和PD1在从NAT或肿瘤样品衍生的细胞上的表达以确定与健康组织相比，肿瘤中是否存在经过调节的表达(图15)。总体而言，与匹配的正常相邻组织相比，PVRIG在衍生自肿瘤组织的CD4和CD8T细胞上显著增加(图15A)。在肿瘤类型内，PVRIG在3/9结肠肿瘤、1或2种子宫内膜肿瘤、4/11肾肿瘤和4/5肺肿瘤中上调至少2倍(图15A)。在相同的样品中，我们还评估PD-1表达。在CD4和CD8 T细胞上PVRIG倍数变化(在NAT与肿瘤之间)与PD-1倍数变化之间的相关性分析显示，这些样品中存在正相关和显著相关，表明这些分子可以在肿瘤中以类似方式共同调控。
c.PVRL2在多种肿瘤的骨髓和CD45-(非免疫)细胞上表达。
在我们检查PVRIG表达的相同样品中，我们还检查了PVRIG配体PVRL2的表达。在2个主要细胞亚组(包括单核细胞、mDC和pDC群体的骨髓细胞以及可能由肿瘤上皮、基质细胞和内皮细胞构成的CD45非免疫细胞)中检测到PVRL2表达(图16)。
来自乳房、结肠/直肠/胃、子宫内膜、肺、前列腺和卵巢肿瘤细胞中检测到CD45-非免疫细胞上的PVRL2表达(图17)。在子宫内膜肿瘤和卵巢肿瘤中检测到PVRL2的最高表达中值表达。
在免疫细胞上，PVRL2在来自乳腺、结肠/直肠/胃、子宫内膜/子宫、头颈部、肺、肾、前列腺、和卵巢组织的骨髓细胞上表达(
图18)。在所有肿瘤类型中，骨髓细胞(单核细胞、mDC、pDC)上PVRL2的中值表达具有可比性。
肿瘤组织与正常邻近组织相比，PVRL2表达在肿瘤CD45-细胞或来自肿瘤组织的单核细胞上显著增加(图19)。与5/9结肠肿瘤、1/2子宫内膜肿瘤、5/11肾肿瘤、4/5肺肿瘤和1/1卵巢瘤中的正常相邻组织相比，在肿瘤中诱导至少2倍的单核球或CD45-细胞上的PVRL2表达。这些数据支持PVLR2在肿瘤细胞和肿瘤内免疫细胞上的表达增加。CD45-细胞和单核细胞上PVRL2倍数变化(在NAT与肿瘤之间)与PD-L1倍数变化之间的相关性分析表明，这些样品中存在正相关和显著相关，表明这些分子可以在肿瘤中以相似的方式共同调控。
d.PVRIG和PVRL2在相同肿瘤中共表达。
我们进一步评定了哪种肿瘤类型T细胞上的PVRIG和单核细胞和肿瘤细胞上的PVRL2都有高表达。在这个样品组，来自子宫内膜、肺和肾组织中的肿瘤显示T细胞上的PVRIG和单核细胞或CD45-细胞上的PVRL2的都有高表达(图20)，这表明这些肿瘤类型可能会对CHA.7.518.1.H4(S241P)治疗更具反应性。
e.结论
这些研究的结果表明，PVRIG在肿瘤微环境中的效应淋巴细胞(例如CD8 T细胞和NK细胞)上表达。PVRIG和PVRL2都在乳腺、结肠/直肠/胃、子宫内膜、肺、前列腺和卵巢肿瘤的多个肿瘤样品中表达。与匹配的正常邻近组织相比，肿瘤组织中T细胞上的PVRIG表达显著增加。此外，观察到来自子宫内膜样品的CD4和CD8 T细胞上PVRIG和PD-1与PVRIG和TIGIT表达之间存在显著的直接相关性。在单细胞的基础上，在CD8 T细胞上观察到PVRIG与PD1或与TIGIT的共表达。PVRIG的配体PVRL2在来自多种肿瘤组织的抗原呈递细胞(单核细胞、mDC、pDC)以及CD45-细胞(可能由上皮、基质、内皮细胞构成)上表达。与正常的邻近组织相比，在源自肿瘤的细胞上检测到PVRL2表达的诱导。受体和配体的细胞表达谱表明这一途径在调节多种肿瘤类型的效应淋巴细胞反应中起作用。
实例3：通过IHC在人类癌和正常组织中PVRL2和PD-L1的表达
这项研究的目的是检查PVRL2和PD-L1在人类健康和癌症组织中的表达。在福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)固定样品中，鉴定了两种针对PVRL2的抗体以对PVRL2染色。使用商业验证的抗体评定PD-L1。使用这些抗体，我们检查了由乳房、结肠、肺、卵巢和皮肤组织构成的肿瘤微阵列(TMA)的连续组织切片中PVRL2和PD-L1的表达。与健康组织相比，在乳腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌和皮肤癌中观察到PVRL2表达增强。在两种PVRL2抗体之间观察到相似的染色，有助于证实获得的结果。与健康组织相比，PD-L1在乳腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌和皮肤癌中的表达也增加了。在肿瘤上皮和浸润的免疫细胞上观察到PVRL2的表达。在这些肿瘤样品中，PVRL2表达的发生率高于PD-L1表达。通过PD-L1阴性和阳性表达进一步分组单个肿瘤样品，并在这些亚组中分析PVRL2表达。所有PD-L1阳性肿瘤也表达PVRL2，为肿瘤组合治疗提供了理论基础。在PD-L1阴性肿瘤中，在这些样品的亚组中检测到PVRL2表达，为在PD-L1阴性肿瘤中靶向PVRL2途径提供了理论基础。综上所述，这些数据表明，在乳腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌和皮肤癌的肿瘤微环境中，PVRL2的表达得到了增强，为单一疗法和与靶向PVRL2途径的药剂组合治疗提供了理论基础。
方案
抗体
在这项研究中使用了抗PVRL2(Abcam ab135246，Sigma HPA-012759)和抗PDL1(SpringBio Sp142)。同型对照抗体(兔IgG)用作阴性对照。
IHC染色
自其获得乳房、结肠、肺、卵巢、皮肤肿瘤微阵列。每个微阵列含有2-4个供体的健康组织和30-40个供体的肿瘤组织，一式两份地存在于载片上。抗PVRL2 Abcam ab135246染色以1:250的稀释度进行，没有热诱导的抗原修复(HIER)。以0.1ug/ml使用抗PVRL2(SigmaHPA-012759)，HIER的pH为9.5。根据制造商的建议，以1ug/ml使用抗PD-L1(SpringBioSP142)，HIER的pH为6.2。在每个相关条件下使用匹配的兔IgG同型对照。根据以下方法由2个单独的操作员对每个核心进行定性评分：无染色(评分0)，部分阳性(评分1)，阳性(评分2)，强阳性(评分3)。如果两个操作员之间的评分存在差异，那么由两个操作员重新评定样品以获得最终评分。将来自相同肿瘤的2个核心的评分进行平均化，并为每个肿瘤获得一个评分。绘制评分并且根据供应商提供的病理数据对样品进行分组。
结果和讨论
在乳腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌和皮肤癌中，PVRL2和PD-L1表达增加
测试了两种抗PVRL2抗体(ab135246、HPA-012759)评定福尔马林固定石蜡包埋组织中PVRL2表达的能力。评定乳腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌和皮肤癌的肿瘤微阵列的连续切片的PVRL2和PD-L1的表达。在乳腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌和皮肤癌中，PVRL2和PD-L1的表达增加(图21)。
PVRL2在PD-L1阳性和PD-L1阴性肿瘤中表达。
由于PVRL2和PD-L1的表达是在同一TMA的连续切片上进行的，因此我们能够检查来自肿瘤的相同部位的这些肿瘤中的每一种的PVRL2和PD-L1表达(图22)。PD-L1阴性肿瘤样品(尤其是肺、卵巢、乳腺肿瘤)的亚组表达了PVRL2(如由至少部分阳性所定义)，这是由两种抗PVRL2抗体检测到的。这些数据表明PVRL2可以在PD-L1阴性肿瘤中表达。相反，如通过两种PVRL2抗体检测，所有PD-L1阳性肿瘤都表达PVRL2。
PVRL2在上皮细胞和侵袭前沿的免疫区室上表达
肿瘤侵袭前沿处的免疫检查点的空间表达对于调节抗肿瘤反应很重要。已知的检查点靶标(例如PD-1和PD-L1)在侵袭前沿具有突出的表达。由于这些TMA是从穿孔活检中产生的，并且不含整个肿瘤，因此我们检查了这些样品中肿瘤侵袭前沿处是否存在免疫浸润。我们鉴定了1个样品，在其中我们观察到了免疫浸润中和肿瘤上皮上的PVRL2表达(图23)。在免疫浸润中观察到PD-L1表达，这进一步表明这可能是肿瘤的侵袭前沿。
结论
这些结果证明，与来自相同器官的健康组织相比，PVRL2表达在乳房、结肠、肺、卵巢、皮肤肿瘤中得到增强。PVRL2在肿瘤上皮和浸润性白细胞上都表达。我们进一步证明，所有PD-L1阳性肿瘤都表达PVRL2，这表明靶向PVRL2途径的药剂与PD-1/PD-L1抑制剂组合可能是有效的。另外，在PD-L1阴性肿瘤中检测到PVRL2表达，这表明靶向PVRL2途径的药剂在PD-L1阴性肿瘤中可能是有效的。
实例4：单、双联或三联组合抗体治疗在CT26肿瘤模型中的抗肿瘤反应理论基础和目标
为了检查与单抗体或双抗体治疗相比，PVRIG、TIGIT和PD-L1的抗体阻断是否可以在同基因小鼠肿瘤模型中增强肿瘤生长抑制和存活。
材料和方法
体内肿瘤模型
在含有10％FBS和100ug/mL青霉素/链霉素的RPMI 1640中培养CT26结肠癌细胞(ATCC)。对于肿瘤植入，将5×105个CT26细胞皮下注射到8周龄雌性BALB/c小鼠的右侧腹。在肿瘤随机化之后，通过腹膜内(i.p.)注射施用抗体，从肿瘤接种后第7天当肿瘤达到60-90mm3的体积时开始，并且持续3周，总共6次施用。每2-3天用电子卡尺测量肿瘤尺寸，并且以0.5X W2 X L mm3的形式报告。小鼠在任一研究终止或任何临床终点被处死，所述临床终点包括肿瘤体积≥3250mm3，肿瘤溃疡，体重损失≥20％，或垂死的外观
抗体
这些研究中使用的嵌合抗小鼠PVRIG抗体(克隆407，内部生产)被工程改造为小鼠IgG1(mIgG1)抗体。已展示抗体与过度表达小鼠PVRIG的293HEK细胞结合，并且阻断配体小鼠PVRL2的结合。根据WO/2010/077634中的描述产生抗小鼠PD-L1 mIgG1抗体(克隆YW243.55.S70)。根据WO2016/028656中的描述产生抗小鼠TIGIT mIgG1抗体(克隆11A11)。Synagis IgG1用作同型对照，并且在内部产生。在低内毒素(<0.05EU/mg)的无菌PBS中配制抗体。抗PVRIG抗体以10mg/kg的剂量施用，抗PD-L1以5mg/kg的剂量施用，抗TIGIT以18mg/kg的剂量施用。
统计分析
通过JUMP软件(Statistical DiscoveriesTM)进行重复测量的双向ANOVA，随后进行针对所选择的组对的重复测量的双向ANOVA。通过比较在所有研究动物存活的最后一天测量的肿瘤体积来进行肿瘤生长测量的分析。通过对数秩Mantel-Cox检验确定无肿瘤小鼠百分比的统计学差异。P<0.05的值被认为是显著的。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001。
结果
抗TIGIT和抗PVRIG抗体与抗PD-L1抗体的体内功效
在小鼠同基因CT26.WT异位皮下肿瘤模型中评估了对小鼠PVRIG、TIGIT和PD-L1阻断的组合疗法的体内功效。与同型对照相比，用抗PVRIG抗体与抗PD-L1抗体组合治疗携带肿瘤的小鼠产生47％的肿瘤生长抑制(TGI)。然而，在本研究中，与单独的抗PD-L1抗体治疗相比，抗PD-L1和抗PVRIG抗体的双联组合未观察到益处。与用抗TIGIT抗体的其它双联组合治疗(抗PDL-1+抗TIGIT、抗PVRIG+抗TIGIT和抗PDL-1+抗TIGIT，其分别对应于TGI的29％、61％和55％(图24A和C)相比，三联组合(抗PVRIG、抗TIGIT和抗PD-L1)中的TIGIT的阻断引起TGI的显著改善。三联组合产生更高的反应率(55％对比40％)，并且促进了持久的抗肿瘤活性，并且具有直到第35天的更高存活率的趋势(图24B)。
实例5：PVRIG拮抗作用增强T细胞效应功能并且减少肿瘤生长
摘要
尽管最近取得了进展，但大多数患者并未从检查点抑制剂中获得长期益处。PVRIG是DNAM/TIGIT家族的新型免疫抑制受体，我们在此证明了PVRIG在调节抗肿瘤反应中的作用。与来自正常组织的淋巴细胞相比，PVRIG与PVRL2结合并且在肿瘤浸润性淋巴细胞上显示出显著增强的表达。PVRIG拮抗作用增强人类T细胞活化，并且PVRIG与PD-1或TIGIT抑制剂的组合进一步协同增加淋巴细胞功能。我们接下来讨论了PVRIG在临床前肿瘤模型中的作用。PVRIG-/-小鼠在体外显示出显著增加的T细胞活化和由CD8效应功能增加介导的MC38肿瘤生长减少。拮抗性抗PVRIG抗体与抗PD-L1组合或在TIGIT-/-小鼠中测试时显著降低肿瘤生长。总之，我们证明PVRIG-PVRL2途径在人类癌症中被诱导，并且拮抗PVRIG-PVRL2相互作用导致T细胞功能增加和肿瘤生长减少。
意义状态
这些数据证明，PVRIG是治疗癌症的有前景的靶标，并且提供了测试PVRIG抑制剂CHA.7.518.1.H4(S241P)以单一疗法或与TIGIT或PD1阻断组合作为一种新型癌症免疫治疗剂的理论基础。
简介
越来越多的证据表明，内源性免疫反应在塑造癌症的发生、发展和抑制方面至关重要(1)(2)。患者的免疫状态以及肿瘤浸润性白细胞(TIL)在肿瘤微环境(TME)内的含量不仅是癌症存活率的关键预后指标，也是患者对疗法的反应的关键预后指标(3)(4)。T细胞是TIL的关键组分，可以引发抗肿瘤反应，并且大多数抗肿瘤免疫反应最终依赖于效应淋巴细胞的功能。患者肿瘤TME中CD8 T细胞的富集，以及使免疫反应偏向有效CD8 T细胞反应的其它因素，如突变负荷和Th1极化TME，都是有利的抗肿瘤免疫反应的关键预后指标(5)(6)。
在许多实体肿瘤中的一个关键的发现是，效应T细胞在TME内具有活化或‘耗竭’表型(7)。这表明虽然TME内的T细胞最初已经发现同源抗原，被活化并且被运输至肿瘤，但其随后不能引发有效的抗肿瘤反应。预活化或耗竭的T细胞定义为共抑制受体如PD-1和CTLA-4的表面表达增加(8)。用抑制与其同源配体相互作用的抗体治疗靶向这些共抑制受体已经在患有多种晚期癌症的患者中显示出显著的临床功效(9)。从机制上讲，已经证明靶向这些共抑制受体导致预先存在于TME中的已具肿瘤反应性的T细胞的扩增和具有加宽的T细胞受体多样性的T细胞池的产生(10)(11)(12)。虽然目前临床上的检查点抑制剂已经彻底改变了癌症治疗并且证明了免疫系统对抗癌症的能力，但许多患者仍然复发和/或对治疗没有反应。因此，增加对癌症中免疫反应的理解并针对其它基于免疫的途径将产生额外的治疗性治疗。
在这些新途径中，目前正在研究nectin和nectin样家族中的一组受体和配体作为潜在的新型癌症免疫疗法。此家族内的受体包括DNAM-1(CD226)、CD96(TACTILE)、TIGIT以及最近的PVRIG(CD112R)(13)(14)(15)。在这些分子中，DNAM是这一亚家族内的活化受体，与2个配体PVR(CD155)和PVRL2(CD112)结合，向淋巴细胞递送活化信号(16)。这一家族中的两种受体已经被证明能够抑制人体淋巴细胞功能，即TIGIT以及最近的PVRIG(17)(18)。据报道，TIGIT与PVR具有高亲和力相互作用，对PVRL2的亲和力弱得多，并且已经显示通过其ITSM基序向淋巴细胞递送抑制信号来抑制T细胞和NK细胞反应(19)(20)。最近，PVRIG显示出以高亲和力结合PVRL2并且通过其ITIM基序递送抑制信号(15)。在这两种情况下，TIGIT对PVR和PVRIG对PVRL2的亲和力高于DNAM对PVR或PVRL2的亲和力，表明TIGIT和PVRIG可以从DNAM中胜过PVR和PVRL2，提供了TIGIT和PVRIG可以减少T细胞功能的间接机制。在这一家族中，PVR也是CD96的配体。据报道，CD96的功能对小鼠淋巴细胞具有抑制作用(21)但对人淋巴细胞有活化作用(22)。基于这些数据，我们假设在人淋巴细胞上，2种受体TIGIT和PVRIG分别以高亲和力结合PVR和PVRL2，以提供抑制信号以减弱T细胞功能。
尽管人类PVRIG在最近的一份报告中已被证明可抑制T细胞反应，但PVRIG和PVRL2在癌症免疫监视中的作用尚不清楚。特别地，尚未报道这一途径在癌症中的表达谱和PVRIG在调节CD8 T细胞抗肿瘤反应中的作用。此外，尚未报道小鼠PVRIG基因的功能表征和破坏体内PVRIG-PVRL2相互作用在临床前肿瘤模型中的作用。在此，我们通过报告癌症中的PVRIG和PVRL2表达谱以及PVRIG拮抗作用在肿瘤细胞共培养分析和临床前肿瘤模型中的作用阐明了PVRIG在癌症环境中的作用。我们证明，与TIGIT或CD96相比，PVRIG在T细胞亚组上具有分化的表达谱，并且与正常邻近组织相比，PVRIG和PVRL2表达在癌症中被诱导。在多种人体外分析系统中，高亲和力PVRIG拮抗性单克隆抗体(CHA.7.518.1.H4(S241P))增强T细胞功能，并且尤其是当与抗TIGIT或抗PD1抗体组合时。此外，我们使用拮抗性抗体或PVRIG缺陷小鼠报告了小鼠PVRIG的新表征，并证明PVRIG-PVRL2相互作用的抑制减少了肿瘤生长，与PD-1抑制或TIGIT遗传缺陷组合时效果最显著。总之，这一数据显示PVRIG是调节T细胞抗肿瘤反应的关键抑制受体，并支持CHA.7.518.1.H4(S241P)的研发，用于癌症患者的临床测试。
材料和方法
人体外周血和肿瘤表达研究
根据赫尔辛基宣言(the Declaration of Helsinki)，从斯坦福大学获得健康的供体人PBMC。人体组织由国家癌症研究所支持的资源合作人体组织网络提供。根据制造商的方案(Miltenyi Biotec)将人类癌组织和匹配的正常邻近组织解离成单细胞。通过流式细胞术分析解离的细胞，以在不同细胞亚组上表达各种靶标。对于个别细胞亚组上的每个靶标表达，通过将靶标的MFI值除以同型对照的MFI值来计算倍数表达值。其它研究者可能已收到这些相同组织标本的样品。基于回顾每个样品的病理学报告确定肿瘤类型。对于IHC研究，使用抗PVRL2抗体(HPA-012759，Sigma)和PD-L1(Sp142，SpringBio)使用补充方法中描述的条件对肿瘤微阵列(Biochain institute)进行染色。由2个独立评价者对来自相同肿瘤的一式两份核心进行评分。
PVRIG抗体生成和表征
如补充方法中详述的，生成抗人类PVRIG和抗小鼠PVRIG抗体。简而言之，通过选择性结合PVRIG工程改造的细胞来评定抗体结合特异性和亲和力，而对不表达所述基因的细胞没有可检测的结合。使用基于ELISA和FACS的分析测定这些抗PVRIG抗体的拮抗活性，其中PVRIG与PVRL2的相互作用被破坏。为了在基于细胞的分析中表征，在几种T细胞-靶细胞共培养分析系统中测试抗体，所述系统由在培养物中表达PVRL2的靶细胞与PBMC或肿瘤衍生的T细胞组成。如前所述，gp100特异性T细胞系从黑素瘤肿瘤扩增(23)。用CMVpp65(495-503)、IL-2和IL-7从健康供体PBMC(CTL免疫斑点)扩增CMVpp65反应性T细胞10天。对于组合研究，使用10μg/ml针对PD-1、TIGIT和PVRIG的抗体。使用细胞计数珠阵列(CBA)测定条件培养基中的细胞因子浓度，并且如补充方法中所述进行FACS染色。
小鼠PVRIG表达和功能的表征
使用重组PVRIG、PVRL2和PVR蛋白通过SPR和ELISA，并使用异位工程改造的PVRIG和PVRL2过表达细胞系或PVR或PVRL2 siRNA转染的细胞系通过FACS评定小鼠PVRIG与mPVRL2和mPVR的结合相互作用。如在补充方法中所述产生PVRIG和TIGIT缺陷小鼠。进行表达分析以检查各种细胞亚组中脾、淋巴结和肿瘤中PVRIG的表达。使用WT和PVRIG-/- T细胞和PVRL2Fc或PVRL2异位表达的靶细胞建立证明小鼠PVRIG的T细胞调节活性的细胞功能分析，如补充材料和方法中详述。如补充方法中所述进行CT26、MC38和B16/Db-hmgp100肿瘤模型。所有研究均由特拉维夫大学(Tel-Aviv University)(以色列特拉维夫(Tel-aviv,Israel))或约翰霍普金斯大学(Johns Hopkins University)(美国巴尔的摩(Baltimore,USA))的机构动物护理和使用委员会(Institutional Animal Care)批准。
结果
PVRIG表达在外周血和肿瘤的效应T细胞上最高
Ig超家族(IgSF)由数百种蛋白质组成，但其中只有少数是T细胞抑制受体。IgSF的蛋白质倾向于快速进化(24)，因此这些蛋白质之间的序列相似性通常较低，并且不是鉴定新型免疫受体的最佳选择。为了鉴定新型免疫检查点，我们基于已知免疫检查点之间共享的基因组和蛋白质组学特征，例如基因结构、蛋白质结构域、预测的细胞定位和表达模式开发了生物信息学算法。使用这些算法，我们将PVRIG鉴定为新型免疫受体。最近的一份报告还证明，人类PVRIG(CD112R)与PVRL2结合并抑制T细胞功能(15)。然而，尚未报道这一途径在调节肿瘤免疫监视中的相关性。在这里，我们已经阐明了PVRIG和PVRL2在人类癌症和临床前肿瘤模型中的表达和功能。在来自健康供体的外周血中，PVRIG仅在淋巴细胞上表达，在CD8 T细胞和NK细胞上表达最高(图27A)。T细胞的进一步亚组分析显示与Treg亚组相比，CD8或CD4记忆/效应T细胞亚组上的PVRIG表达最高(图27B，图34A)。主要记忆T细胞表达模式将PVRIG与家族中的其它受体(TIGIT、CD96)区分开来，所述其它受体倾向于在Treg上具有与记忆/效应T细胞相比相同或更高的表达。我们进一步比较了2种分析系统中PVRIG和TIGIT T细胞活化后的表达动力学(CMV回忆反应图27C，DC-MLR图27D，图34B)，并且显示PVRIG与TIGIT相比延迟诱导的动力学并在后期时间点更持久的表达。与TIGIT相比，PVRIG在记忆/效应细胞上的优先表达表明PVRIG在调节T细胞反应中的独特作用。
活化后T细胞上PVRIG表达的延迟和持续诱导表明其可以在肿瘤微环境中表达。接下来，我们通过FACS直接离体分析了PVRIG在来自解离的人肿瘤的白细胞上的表达。在来自多种肿瘤类型的CD8 T细胞、CD4 T细胞和NK细胞上检测到PVRIG的表达(图27E-G，图27C)。PVRIG在CD4和CD8 T细胞(图27F)上与PD-1和TIGIT共表达。平均来说，与膀胱、结直肠和前列腺相比，在来自乳房、子宫内膜、头颈部、肺、肾和卵巢肿瘤的CD4+和CD8+ TIL上检测到更高的表达。在PVRIG表达低/不离体存在的肿瘤样品中，用抗CD3和抗CD28的活化增强了PVRIG的表达，表明PVRIG的TIL表达可以在再活化时进一步诱导(图34D)。对于结肠、肺、肾、子宫内膜和卵巢肿瘤，我们能够从同一患者获得正常的邻近组织，并对从肿瘤与正常组织分离的淋巴细胞进行PVRIG表达的比较。与从匹配正常邻近组织(NAT)分离的细胞相比，TILS显示CD4和CD8 T细胞上PVRIG的显著诱导(图34E)。与PBMC一样，我们进一步比较了来自肺、子宫内膜和肾肿瘤的Treg与CD8 T细胞上的PVRIG、TIGIT和PD1表达。在TILS上，与CD8T细胞相比，TIGIT表达在Treg上更高，而对于PVRIG和PD1，与Treg相比，在CD8 T细胞上观察到相似或更高的表达(图27E)。接下来，我们通过离体TILS表达量或肿瘤与NAT之间表达倍数变化幅度的相关性分析，检测了PVRIG、TIGIT和PD-1对T细胞群的共调节。在两种分析中，CD4和CD8 T细胞在PVRIG和PD1或TIGIT之间显示出正的并且显著的相关性(图34F)。总之，这些数据表明PVRIG在来自多种人类癌症的T细胞和NK细胞上表达，将PVRIG作为新型抑制受体靶标可能在调节肿瘤中的T细胞功能中起关键作用。
与正常邻近组织相比，PVRL2在肿瘤组织中的表达增强
由于PD-L1表达已被证明有助于预测对PD-1抑制剂的反应，我们检测了PVRL2的表达是否与人类癌症组织中其同源受体PVRIG的表达相伴。使用我们经过验证可用于IHC的PVRL2抗体(图35A)，我们对由肺癌、结肠癌、皮肤癌、乳腺癌、卵巢/子宫内膜癌和肾癌组织构成的肿瘤微阵列(TMA)进行了染色。除肾之外，PVRL2表达在来自这些器官的大多数正常组织样品中不存在或最低程度地表达。在肿瘤组织中，PVRL2在大量的肺癌、结肠癌、皮肤癌、乳腺癌和卵巢癌/子宫内膜癌样品中被诱导(图28A)。在侵袭前沿的肿瘤细胞和免疫细胞上检测到PVRL2表达(图28B)。为了确定表达PVRL2的特异性免疫细胞亚组，我们对新解离的肿瘤进行了流式细胞术。从多种肿瘤类型的CD45+免疫细胞，尤其是骨髓细胞(例如CD14+肿瘤相关巨噬细胞(TAM)和骨髓DC)和CD45-非免疫细胞上检测到PVRL2的表达(图28C，D)。在淋巴细胞上未检测到PVRL2的表达(数据未显示)。CD45-细胞和从结肠、肺、肾、子宫内膜和卵巢肿瘤分离的TAM上PVRL2表达的比较显示与从相同供体的匹配正常邻近组织(NAT)分离的细胞相比，显著诱导从肿瘤分离的细胞上的PVRL2(图36D)。为了评定哪些肿瘤表达PVRIG和PVRL2两者，我们检查了PVRIG在淋巴细胞上的表达与PVRL2在骨髓和来自多种肿瘤类型的CD45-细胞上的表达相比。在所检查的癌症类型中，子宫内膜癌、肺癌和肾癌具有最高的PVRIGhi淋巴细胞和PVRL2hi TAM或CD45-非免疫细胞盛行率(图28E，图37)。这些数据证明，PVRIG-PVRL2途径在子宫内膜癌、肺癌和肾癌中通过调节T细胞-TAM相互作用和T细胞-肿瘤细胞相互作用在调节抗肿瘤反应中可能特别重要。
与PD-L1相比，PVRL2表达受到差异调节并存在于PD-L1-肿瘤中
由于PVRIG和PD-1可在肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)上共表达，我们还通过染色相同的TMA的连续切片检查在相同的肿瘤上PVRL2和PD-L1的共表达。所有PD-L1阳性肿瘤也都表达PVRL2，表明这2种途径的调节存在一些重叠，并为将PVRIG抑制剂与PD-1/PD-L1抑制剂组合提供了理论基础(图29A)。在PD-L1阴性肿瘤中，各种癌症类型内的大多数这些肿瘤中都检测到PVRL2(图29A)。这表明PVRL2表达在某些肿瘤中比PD-L1更普遍，并且靶向这一途径可能在PD-L1阴性肿瘤中特别有效。据报道，PD-L1由作为适应性耐药模型(25)的一部分的IFN-γ在肿瘤中诱导，我们进一步评定了骨髓衍生的树突状细胞和肿瘤上皮细胞系上各种炎症刺激对PVR、PVRL2和PD-L1表达的调节(图29D)。用促炎信号处理不成熟BM-DC通常导致PVR、PVRL2和PD-L1表达的增加，证明PVR、PVRL2和PD-L1表达在DC成熟后增加。与此相反，用IFN-γ处理上皮细胞增加PD-L1的表达，但对PVRL2的高基线表达没有作用(图29E)。据报道，与PD-L1相比，通过基因组应激、DNA损伤和肿瘤抑制基因(26)(27)的PVRL2进一步支持PVRL2表达的差异调节。总之，这些数据表明PD-L1和PVRL2可以在抗原呈递细胞(例如DC)上共同调节，但可以在上皮细胞上通过IFN-γ进行差异调节。PVRL2在PD-L1阴性肿瘤中的存在表明靶向这一途径可能在对PD-1抑制剂无反应的患者中具有潜在益处。
CHA.7.518.1.H4(S241P)是一种针对PVRIG的高亲和力人类化单克隆抗体，可破坏PVRIG与PVRL2的相互作用
为了检查拮抗人类PVRIG-PVRL2相互作用的功能性结果，我们生成了高亲和力、拮抗性抗PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)，其阻断PVRIG和PVRL2的相互作用。抗体选择性结合异位表达人类PVRIG或食蟹猕猴PVRIG的HEK293细胞，并且还以亚纳摩尔亲和力结合内源性表达PVRIG的Jurkat细胞(图30A)。在生物化学分析中，CHA.7.518.1.H4(S241P)阻断PVRIG Fc与PVRL2+ HEK293细胞的相互作用(图30B)，并且还阻断PVRL2 Fc与PVRIG+ HEK293细胞的结合(图30C)。使用这种抗体，我们在几种T细胞分析中观察到拮抗性抗PVRIG的功能性作用。生成异位表达细胞表面抗CD3抗体和人类PVRL2的人工抗原呈递细胞(aAPC)并在抗PVRIG(CHA.7.518.1.H4(S241P))或同型对照存在下，与原代人类CD4 T细胞共培养。在与CHO抗CD3 aAPC共培养后，在增殖的CD4 T细胞上诱导PVRIG表达(图38A)。用CHA.7.518.1.H4(S241P)拮抗PVRIG增强了来自多个供体的CD4 T细胞的增殖(图30D)。我们还测试了抗PVRIG对源自黑素瘤肿瘤的2种人gp100反应性CD8 T细胞系的影响。在同型对照IgG或抗PVRIG抗体的存在下，将这些T细胞系分别与表达HLA-A2和PVRL2的aAPC共培养(图38B)。如在两个系中观察到的，抗PVRIG使IFN-γ和TNF-α产生增加约20-50％。在剂量反应评定中，CHA.7.518.1.H4(S241P)在多个分析中显示个位数纳米摩尔EC50值(图38C，D)。这些数据共同证明，用CHA.7.518.1.H4(S241P)拮抗PVRIG-PVRL2相互作用导致T细胞活化增加。
CHA.7.518.1.H4(S241P)与TIGIT或PD-1抑制剂组合导致T细胞功能的协同增强。
PVRIG和TIGIT阻断的组合协同增加T细胞-树突状细胞共培养分析中的CD4 T细胞功能(15)，表明该途径在调节T细胞-APC相互作用中的作用。尚未报道PVRIG和TIGIT阻断对肿瘤细胞共培养环境中的CD8 T细胞的影响。由于我们的肿瘤表达谱证明PVRL2在CD45-免疫细胞上的表达，因此我们进一步使用2个T细胞分析系统探索靶向这一途径在T细胞-肿瘤细胞共培养物的效果。我们首先在抗PVRIG、抗TIGIT或同型对照抗体的存在下，单独或组合地进行2个gp100肿瘤抗原特异性CD8 T细胞系与黑素瘤细胞系MEL624的共培养。MEL624细胞表达PVR和PVLR2，TIL-209和TIL-463均表达PVRIG、TIGIT和PD-1(图30F)。在TIL-209上，我们观察到仅抗PVRIG或抗TIGIT不增加IFN-γ，并且抗PVRIG和抗TIGIT的组合协同增加IFN-γ产生(图30G)。在TIL-463上，我们观察到抗PVRIG或抗TIGIT适度地增加IFN-γ产生，并且抗PVRIG和抗TIGIT的组合相加地增加IFN-γ(图30G)。在另外的分析系统中，我们利用CMVpp65反应性CD8 T细胞作为模型系统来研究人类T细胞反应。在CMVpp65(495-503)存在下扩增HLA-A2+CMVpp65 CD8 T细胞，并且在第10天观察到PVRIG、TIGIT和PD-1的表达(图30F)。PVRIG在CMVpp65特异性CD8 T细胞上表达，其量级与在人类癌症样品中观察到的类似(图27)。作为靶细胞，我们鉴定了PD-L1hi(Panc05.04)和PD-L1lo(Colo205)HLA-A2+癌细胞系，其均表达相似量的PVR和PVRL2(图30F)。我们接下来在存在对PVRIG、TIGIT和/或PD-1的阻断抗体的情况下进行CMVpp65反应性T细胞与用pp65(495-503)肽脉冲的HLA-A2+肿瘤细胞系的共培养。我们观察到抗PVRIG Ab在与Panc05.04细胞的共培养中使IFN-γ增加约50％，并且在与Colo205的共培养中最小化(图30H)。抗TIGIT与抗PVRIG Ab的组合协同增加了两种靶细胞系上的IFN-γ产生，与仅PD-1抗体相比导致IFN-γ的更大增加(图30H)。与单个抗体相比，抗PVRIG和抗PD-1的组合还导致IFN-γ产生的协同增加(图30I)。总之，这些数据表明组合PVRIG和TIGIT或PVRIG和PD1阻断在与肿瘤细胞相互作用时增加人类CD8 T细胞活化的有效协同作用。
PVRIG缺乏导致T细胞增殖增加和肿瘤生长减少
尽管已报道了小鼠PVRIG的序列和其与小鼠PVRL2的相互作用，但小鼠PVRIG的表达谱和免疫调节活性尚不清楚。我们首先分析了NK、NKT和T细胞中的mPVRIG RNA表达和转录物(图31A)。活化的小鼠CD8 T细胞具有升高的PVRIG转录物，其与TIGIT相比具有延迟的诱导动力学(图31B)。我们通过表面等离子共振(SPR)和在几种分析定向中进行的ELISA证实重组mPVRIG结合mPVRL2蛋白(图39A-D)。我们还观察到mPVRIG和mPVR之间的相互作用，尽管亲和力比与mPVRL2的相互作用小约10倍(图39E)。为确定PVR或PVRL2是否是mPVRIG的主要配体，我们测试了小鼠PVRIG Fc与表达PVR和PVRL2的B16F10细胞的结合(数据未显示)。PVRIG Fc显示出与B16F10细胞的剂量依赖性结合，其在B16F10细胞中PVRL2 siRNA敲低后完全消除(图39F)。相比之下，PVR敲低后PVRIG Fc融合蛋白的结合略微但一致地降低(图39E)，表明在mPVRIG和mPVR之间发生非常弱的相互作用。总之，这些结果证明，在小鼠中，PVRL2是PVRIG的主要配体，如在人类的情况下。
为了描述PVRIG在免疫反应中的作用，我们生成了PVRIG缺陷型(-/-)小鼠(图40)。PVRIG-/-小鼠以预期的孟德尔比率出生，直到10月龄也没有表现出明显的表型，并且当与野生型小鼠相比时，8周龄时具有相似的白细胞细胞性(外周和淋巴组织)(图41)。野生型(WT)CD8 T细胞和NK细胞表达PVRIG，并且在PVRIG-/-细胞上未检测到PVRIG的表达(图31C)。为了检查PVRIG在调节小鼠T细胞反应中的作用，我们在2个分析系统中检测了WT和PVRIG-/- T细胞的增殖。在可溶性PVRL2 Fc或对照Fc蛋白的存在下，用固定化的抗CD3活化WT或PVRIG-/-T细胞。可溶性PVRL2 Fc显著抑制WT CD4+ T细胞增殖但不抑制PVRIG-/- CD4+ T细胞增殖(图31D)，表明PVRIG-/-细胞缺乏抑制信号。为了评估小鼠PVRIG在CD8+ T细胞与肿瘤细胞相互作用中的作用，将PVRIG-/-小鼠培育成pmel TCR转基因小鼠，其表达特异于gp10025-33的转基因TCR(28)。将活化的PVRIG-/-或WT Pmel CD8+ T细胞与内源性表达PVRL2的B16-Db/gp100黑素瘤肿瘤细胞共培养(数据未显示)并评估活化和效应功能。与WT细胞相比，PVRIG-/-pmel CD8+ T细胞显示增强的脱粒和效应细胞因子(IFN-γ和TNF-α)的产生(图31E)。这些数据表明小鼠PVRIG在与PVRL2+肿瘤靶细胞共培养时抑制肿瘤特异性T细胞的活化和效应功能。
我们接下来研究了PVRIG缺陷对MC38同基因模型中肿瘤生长的影响。与WT小鼠相比，PVRIG-/-小鼠显示出显著减少的肿瘤生长(图32A-B)。此外，与抗PD-L1治疗的WT小鼠或用同型对照治疗的PVRIG-/-小鼠相比，在第14天开始的PD-L1阻断之后，PVRIG-/-小鼠显示额外的抗肿瘤反应，反映显著(p＝0.052)肿瘤生长抑制(图32C，D)。与减少的肿瘤生长一致，与抗PD-L1治疗的野生型小鼠以及同型治疗的PVRIG-/-小鼠相比，抗PD-L1治疗的PVRIG-/-小鼠显示离体刺激后，IFN-γ+TNF-α+效应CD8 T细胞的显著增加(图32E)。此外，在与抗PD-L1治疗的野生型小鼠以及同型治疗的PVRIG-/-小鼠相比时，抗PD-L1治疗的PVRIG-/-小鼠也具有升高数量的产生效应细胞因子的CD8+肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)(图32F)。来自从实验中途收获的肿瘤(第18天；小鼠接受2个剂量的抗PD-L1或同型对照)的CD45+免疫细胞的转录组分析表明，相对于其野生型对应物，抗PD-L1治疗的PVRIG缺陷型小鼠中TIL数量和细胞毒性TIL的基因标志显著增强(图32G-H)。与其它组相比，在PVRIG-/-+抗PD-L1组中观察到T细胞介导的基因(GRZB，IFN-γ)的显著变化(补充图42)。总之，这些数据证明，PVRIG缺陷，并且尤其是当与PD-L1阻断结合，导致体内T细胞活化增加和肿瘤生长减少。
抗mPVRIG抗体与PD-1抗体或TIGIT缺乏组合抑制肿瘤生长
在证明PVRIG的遗传缺陷导致肿瘤生长减少后，我们接下来的目的是证明抗体介导的PVRIG-PVRL2相互作用的抑制，并且尤其是与PD1或TIGIT抑制剂组合，可以提高抗肿瘤免疫力，如我们的人体外数据已经证明的。为了评定这一点，我们生成了一种高亲和力、拮抗性抗mPVRIG抗体。通过FACS测定的抗mPVRIG mAb的亲和力评定显示亚纳摩尔Kd(在HEK293 mPVRIG上0.33nM，在D10.G4.1细胞上0.39nM)，类似于CHA.7.518.1.H4(S241P)(图39F-G)。进一步证实了抗体的特异性，因为在mPVRIG敲低后大部分与D10.G4.1细胞的结合被消除(图39H)。通过抑制mPVRIG Fc与B16F10的结合以及mPVRL2Fc与过表达mPVRIG的HEK293细胞的结合，测试抗mPVRIG破坏mPVRIG-mPVRL2相互作用(图33A)。在两种分析形式中均观察到抗mPVRIG抗体完全阻断PVRIG-PVRL2相互作用(图33A，图39I)，证明了拮抗性抗mPVRIG抗体。接下来，我们在同基因CT26皮下结肠肿瘤模型中测试mPVRIG阻断的体内功效。与相应的脾或引流淋巴结亚组相比，PVRIG表达在肿瘤微环境中的NK和T细胞上升高(图33B)。用抗mPVRIG阻断mAb作为单一疗法治疗荷瘤小鼠未能减少肿瘤生长(数据未显示)。然而，抗PVRIG和抗PD-L1mAb的组合有效地延迟了CT26肿瘤生长(图33C)并且显著增加了处理小鼠的存活率，具有40％的完全反应者率(图33D)。与我们的人类T细胞分析数据一致，这些数据表明PD-1和PVRIG抑制剂的组合可以减少肿瘤生长。
我们还测试了消除PVRIG和TIGIT信号传导在调节抗肿瘤反应中的作用。对于这些研究，我们测试了抗mPVRIG抗体在接种B16F10/Db-hmgp100黑素瘤细胞的WT或TIGIT-/-小鼠中的功效。与同型处理相比，用抗mPVRIG阻断mAb处理荷瘤WT小鼠具有较小的作用(第11天为17％TGI，端点第18天为8％TGI)。与WT对照组相比，TIGIT缺失对肿瘤生长的影响也很小(第11天为17％TGI，端点为13％TGI)。然而，当TIGIT缺失与抗PVRIG mAb处理组合时，观察到显著的肿瘤生长抑制(第11天为63％，端点为49％TGI(图33E，F)。根据肿瘤生长抑制，与WT对照组相比，用抗PVRIG mAb 407处理的TIGIT-/-小鼠表现出增加的存活率，然而，在这种浸润性快速生长的肿瘤模型中未实现统计学显著性(数据未显示)。总之，这些数据证明了PVRIG抑制剂与PD1或TIGIT抑制剂的协同活性，并且符合我们的人类功能数据，提供了用PD1或TIGIT抑制剂临床测试CHA.7.518.1.H4(S241P)的理论基础。
讨论
尽管靶向免疫T细胞检查点(如CTLA4和PD-1)的抗体已经增加了癌症患者的存活率，但是大多数癌症患者仍然没有显示出临床益处。对此的一个可能原因是存在抑制T细胞抗肿瘤免疫力的额外T细胞调节剂。在这里，我们阐明了PVRIG在调节效应T细胞功能中的作用，并证明PVRIG拮抗作用增加T细胞抗肿瘤反应并减少肿瘤生长。
PVRIG是nectin和nectin样家族的新成员，属于家族中几种已知的免疫调节受体。理解这一家族内受体的相互作用对于理解PVRIG的相关性和作用机制至关重要。在这些受体中，DNAM、TIGIT和CD96在共享相同配体PVR和PVRL2方面与PVRIG最密切相关。DNAM与PVR和PVRL2结合，向淋巴细胞递送共刺激信号。据报道，TIGIT与PVR结合，与PVRL2结合较弱。我们无法使用ELISA或SPR检测TIGIT和PVRL2之间的相互作用(数据未显示)，表明PVR是TIGIT的主要配体。使用类似的方法，我们和最近的报告检测到PVRL2和PVRIG之间的高亲和力相互作用，表明PVRIG是PVRL2的主要抑制受体。这些数据表明TIGIT和PVRIG在这一轴上包含双信号传导节点，并且需要阻断两者以最大限度地增加这一家族内的T细胞活化。除了与不同配体相互作用外，我们观察到PVRIG在效应或记忆T细胞上具有最高表达，类似于PD-1，而TIGIT在调节性T细胞上具有最高表达。此外，我们观察到与TIGIT相比，PVRIG在T细胞活化后显示晚期诱导。这些数据表明PVRIG在这一家族中具有独特的作用，以高亲和力与PVRL2相互作用，并且在记忆细胞上具有分化表达，并且具有对TIGIT的晚期诱导特征。
我们也在本文中报道PVRIG在使用PVRIG缺陷型小鼠和拮抗性抗PVRIG抗体调节抗肿瘤T细胞反应中的新作用。我们证明小鼠PVRIG在T细胞和NK细胞上表达，在淋巴细胞活化时诱导，并且与外周相比在TME中最高。此外，我们显示PVRIG缺乏导致体外T细胞功能增加和体内肿瘤生长减少。当与抗PD-L1或TIGIT的遗传缺陷组合时，PVRIG的拮抗性抗体减少肿瘤生长，证明PVRIG在调节T细胞反应中的必要作用。这些新颖的数据使用临床前肿瘤模型提供体内概念证据，靶向PVRIG与PD1或TIGIT拮抗作用组合是用于治疗癌症的潜在新疗法。
我们报道了一种高亲和力的抗人类PVRIG抗体，其破坏了我们在临床试验中进行测试的PVRIG和PVRL2的相互作用。为了确定可能为临床试验中的患者选择提供信息的潜在癌症适应症，我们通过FACS和IHC检查了这一轴在人类癌症中的表达谱。对于PVRIG，我们通过FACS观察到PVRIG在CD4和CD8T细胞上的平均表达在子宫内膜癌、肺癌、肾癌和卵巢癌中最高，尽管这种差异没有达到与其它癌症类型的统计学差异，如通过ANOVA与当前样品数量的图基多重比较检验所测定。由于PVRIG在T细胞活化时被诱导并且假设大多数肿瘤浸润性T细胞是抗原经历的，因此中值PVRIG表达在肿瘤样品和癌症类型中相似可能并不令人惊讶。我们观察到PVRIG表达与PD-1和TIGIT表达相关，这表明这3种抑制受体的相互作用在调节抗肿瘤反应中是重要的。在本报告中，我们观察到当CD8 T细胞肿瘤细胞共培养物中PVRIG抗体与TIGIT抗体组合时T细胞功能的协同增加，优于PD-1与PVRIG或TIGIT抑制剂的组合。这些数据以及先前的研究证明了PVRIG和TIGIT在调节DC-T细胞相互作用中的作用，表明这一途径可能参与调节T细胞-APC和T细胞-肿瘤细胞相互作用，并提供靶向PVRIG可以增加抗肿瘤免疫反应的多种机制。
由于PD-L1的表达与PD-1抑制剂的临床反应相关，我们还通过FACS和IHC分析了肿瘤中PVRL2的表达，以评定某些癌症类型是否具有更高的表达。评定解离的肿瘤细胞，我们观察到当与其它肿瘤类型相比时，来自子宫内膜、头颈部、肾、肺和卵巢样品的巨噬细胞上的平均PVRL2表达更高。与其它癌症相比，CD45-非免疫细胞上的平均PVRL2表达在乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肺癌、卵巢癌和前列腺癌中的表达更高。基于PVRIG和PVRL2的表达，我们确定在具有高PVRIG和PVRL2表达的肿瘤中，子宫内膜癌、头颈癌、肺癌、肾癌和卵巢癌的发病率较高，并且这些癌症是可能对这种途径的抑制剂产生反应的潜在癌症。
我们确实观察到PVRL2表达可以通过炎症介质在体外在抗原产生细胞上调节，而癌细胞上的PVRL2表达没有改变。这些数据表明PVRL2在抗原呈递细胞上的表达可以通过炎症调节并且可以是发炎的肿瘤的指示物。实际上，我们确实观察到所有PD-L1+肿瘤也在肿瘤细胞和免疫区室中表达PVRL2。PVRL2在骨髓细胞上的表达可以帮助预测在与PD-1或TIGIT的组合设置中对PVRIG抑制剂的反应，以进一步增强抗肿瘤效果。有趣的是，一部分PD-L1阴性肿瘤也表达PVRL2，主要是在肿瘤细胞上，而不是在免疫细胞上。据报道，PVR和PVRL2在上皮细胞上的表达在通过xyz的肿瘤发生中以及对应激和DNA损伤的反应中被诱导。这些数据与我们的体外发现一致，即在肿瘤细胞上的PVRL2表达调节不依赖于IFN-γ。由于PD-L1在响应IFN-γ的适应性抗性设置中被诱导并且与炎症反应相关，PVRL2在不存在PD-L1的情况下的表达表明PVRL2表达比PD-L1更普遍，并且PVRL2在非发炎的肿瘤中表达。基于以上所述，PVR和PVRL2的存在可能有助于抑制独立于PD-L1的免疫反应，并且PVRIG和TIGIT的抑制剂对于作为PD-L1阴性或无反应者/PD-1抑制剂的进展者的患者尤其重要。
总之，本报告提供了PVRIG生物学的几个新见解，包括表征这个轴在人类癌症中的表达，证明PVRIG/TIGIT在调节CD8-肿瘤细胞相互作用中的突出作用，并且显示PVRIG拮抗作用与PD-1抑制或TIGIT缺乏组合导致肿瘤生长的协同减少。这些数据扩展了我们目前对PVRIG生物学的理解，并为CHA.7.518.1.H4(S241P)(一种高亲和力抗PVRIG抗体)在癌症患者中的临床测试提供了理论基础。
参考文献
1.Hanahan D,Weinberg RA.《癌症的标志(The hallmarks of cancer.)》《细胞(Cell)》2000；100(1):57-70。
2.Hanahan D,Weinberg RA.《癌症的标志：下一代(Hallmarks of cancer:thenext generation)》.《细胞》2011；144(5):646-74doi 10.1016/j.cell.2011.02.013。
3.Galon J,Mlecnik B,Bindea G,Angell HK,Berger A,Lagorce C等人,《针对将‘免疫评分’引入恶性肿瘤的分类中(Towards the introduction of the'Immunoscore'inthe classification of malignant tumours.)》《病理学杂志(J Pathol)》2014；232(2):199-209 doi 10.1002/path.4287。
4.Zitvogel L,Galluzzi L,Smyth MJ,Kroemer G.《常规和靶向抗癌疗法的作用机制：恢复免疫监视(Mechanism of action of conventional and targeted anticancertherapies:reinstating immunosurveillance.)》《免疫力(Immunity)》2013；39(1):74-88doi 10.1016/j.immuni.2013.06.014。
5.Danilova L,Wang H,Sunshine J,Kaunitz GJ,Cottrell TR,Xu H等人《PD-1/PD-L轴表达与黑素瘤和其它实体瘤中的溶细胞活性，突变负荷和预后的关联(Associationof PD-1/PD-L axis expression with cytolytic activity,mutational load,andprognosis in melanoma and other solid tumors.)》《美国国家科学院院刊》2016；113(48):E7769-E77 doi 10.1073/pnas.1607836113。
6.Topalian SL,Taube JM,Anders RA,Pardoll DM.《机制驱动的生物标志物指导癌症疗法中的免疫检查点阻断(Mechanism-driven biomarkers to guide immunecheckpoint blockade in cancer therapy)》.《自然综述癌症(Nat Rev Cancer)》2016；16(5):275-87 doi 10.1038/nrc.2016.36。
7.Zarour HM.《逆转癌症中的T细胞功能障碍和耗竭(Reversing T-cellDysfunction and Exhaustion in Cancer)》.《临床癌症研究(Clin Cancer Res)》2016；22(8):1856-64 doi 10.1158/1078-0432.CCR-15-1849。
8.Pardoll DM.《阻断癌症免疫疗法中的免疫检查点(The blockade of immunecheckpoints in cancer immunotherapy.)》《自然综述癌症》2012；12(4):252-64 doi10.1038/nrc3239。
9.Sharma P,Allison JP.《癌症疗法中的免疫检查点目标：针对具有治愈潜力的组合策略(Immune checkpoint targeting in cancer therapy:toward combinationstrategies with curative potential)》.《细胞》2015；161(2):205-14 doi 10.1016/j.cell.2015.03.030。
10.Cha E,Klinger M,Hou Y,Cummings C,Ribas A,Faham M等人《在癌症患者中抗CTLA-4治疗后，T细胞克隆型稳定性的存活率提高(Improved survival with T cellclonotype stability after anti-CTLA-4treatment in cancer patients.)》《科学转化医学(Sci Transl Med)》2014；6(238):238ra70 doi 10.1126/scitranslmed.3008211。
11.Robert L,Tsoi J,Wang X,Emerson R,Homet B,Chodon T等人,《CTLA4阻断拓宽外周T细胞受体库(CTLA4 blockade broadens the peripheral T-cell receptorrepertoire.)》《临床癌症研究》2014；20(9):2424-32 doi 10.1158/1078-0432.CCR-13-2648。
12.Tumeh PC,Harview CL,Yearley JH,Shintaku IP,Taylor EJ,Robert L等人,《PD-1阻断通过抑制适应性免疫抗性诱导反应(PD-1blockade induces responses byinhibiting adaptive immune resistance.)》《自然》2014；515(7528):568-71 doi10.1038/nature13954。
13.Chan CJ,Andrews DM,Smyth MJ.《在免疫监视和癌症免疫疗法中与nectin和nectin样蛋白相互作用的受体(Receptors that interact with nectin and nectin-like proteins in the immunosurveillance and immunotherapy of cancer)》.《免疫学当前观点(Curr Opin Immunol)》2012；24(2):246-51 doi 10.1016/j.coi.2012.01.009。
14.Martinet L,Smyth MJ.《通过配对受体平衡自然杀伤细胞的活化(Balancingnatural killer cell activation through paired receptors)》.《自然综述免疫学(NatRev Immunol)》2015；15(4):243-54 doi 10.1038/nri3799。
15.Zhu Y,Paniccia A,Schulick AC,Chen W,Koenig MR,Byers JT等人,《鉴定CD112R作为人T细胞的新检查点(Identification of CD112R as a novel checkpointfor human T cells.)》《实验医学杂志(J Exp Med)》2016；213(2):167-76 doi 10.1084/jem.20150785。
16.Bottino C,Castriconi R,Pende D,Rivera P,Nanni M,Carnemolla B等人《鉴定PVR(CD155)和Nectin-2(CD112)作为人DNAM-1(CD226)活化分子的细胞表面配体(Identification of PVR(CD155)and Nectin-2(CD112)as cell surface ligands forthe human DNAM-1(CD226)activating molecule.)》《实验医学杂志》2003；198(4):557-67doi 10.1084/jem.20030788。
17.Yu X,Harden K,Gonzalez LC,Francesco M,Chiang E,Irving B等人《表面蛋白TIGIT通过促进成熟免疫调节树突状细胞的产生来抑制T细胞活化(The surfaceprotein TIGIT suppresses T cell activation by promoting the generation ofmature immunoregulatory dendritic cells.)》《自然-免疫学(Nat Immunol)》2009；10(1):48-57 doi 10.1038/ni.1674。
18.Stanietsky N,Simic H,Arapovic J,Toporik A,Levy O,Novik A等《TIGIT与PVR和PVRL2的相互作用抑制人NK细胞的细胞毒性(The interaction of TIGIT with PVRand PVRL2 inhibits human NK cell cytotoxicity.)》《美国国家科学院院刊》2009；106(42):17858-63doi 10.1073/pnas.0903474106。
19.Johnston RJ,Comps-Agrar L,Hackney J,Yu X,Huseni M,Yang Y等人,《免疫受体TIGIT调节抗肿瘤和抗病毒CD8(+)T细胞效应功能(The immunoreceptor TIGITregulates antitumor and antiviral CD8(+)T cell effector function.)》《癌细胞(Cancer Cell)》2014；26(6):923-37 doi 10.1016/j.ccell.2014.10.018。
20.Zhang B,Zhao W,Li H,Chen Y,Tian H,Li L等人《免疫受体TIGIT通过与CD155相互作用抑制人细胞因子诱导的杀伤细胞的细胞毒性(Immunoreceptor TIGITinhibits the cytotoxicity of human cytokine-induced killer cells byinteracting with CD155.)》《癌症免疫与免疫疗法(Cancer Immunol Immunother)》2016；65(3):305-14 doi 10.1007/s00262-016-1799-4。
21.Chan CJ,Martinet L,Gilfillan S,Souza-Fonseca-Guimaraes F,Chow MT,Town L等人《受体CD96和CD226在调节自然杀伤细胞功能方面彼此相对(The receptorsCD96 and CD226 oppose each other in the regulation of natural killer cellfunctions.)》《自然-免疫学》2014；15(5):431-8 doi 10.1038/ni.2850。
22.Fuchs A,Cella M,Giurisato E,Shaw AS,Colonna M.《前沿：CD96(tactile)通过与脊髓灰质炎病毒受体(CD155)相互作用促进NK细胞-靶细胞粘附(Cutting edge:CD96(tactile)promotes NK cell-target cell adhesion by interacting with thepoliovirus receptor(CD155).)》《免疫学杂志(J Immunol)》2004；172(7):3994-8。
23.Machlenkin A,Uzana R,Frankenburg S,Eisenberg G,Eisenbach L,Pitcovski J等人《通过细胞吞噬作用捕获肿瘤细胞膜有助于检测和分离肿瘤特异性功能性CTL(Capture of tumor cell membranes by trogocytosis facilitates detectionand isolation of tumor-specific functional CTLs.)》《癌症研究》2008；68(6):2006-13doi 10.1158/0008-5472.CAN-07-3119。
24.Ohtani H,Nakajima T,Akari H,Ishida T,Kimura A.《灵长类动物免疫球蛋白超家族基因的分子进化(Molecular evolution of immunoglobulin superfamilygenes in primates.)》《免疫遗传学(Immunogenetics)》2011；63(7):417-28 doi10.1007/s00251-011-0519-7。
25.Taube JM,Anders RA,Young GD,Xu H,Sharma R,McMiller TL等人《在人类黑素细胞病变中炎症反应与B7-h1表达的共定位支持免疫逃逸的适应性抗性机制(Colocalization of inflammatory response with B7-h1 expression in humanmelanocytic lesions supports an adaptive resistance mechanism of immuneescape.)》《科学转化医学》2012；4(127):127ra37 doi 10.1126/scitranslmed.3003689。
26.Cerboni C,Fionda C,Soriani A,Zingoni A,Doria M,Cippitelli M等人《DNA损伤反应：正常,感染和癌细胞中NKG2D和DNAM-1配体表达调控的常见途径(The DNADamage Response:A Common Pathway in the Regulation of NKG2D and DNAM-1LigandExpression in Normal,Infected,and Cancer Cells.)》《免疫学前沿(Front Immunol)》2014；4:508 doi 10.3389/fimmu.2013.00508。
27.de Andrade LF,Smyth MJ,Martinet L.《DNAM-1控制自然杀伤细胞通过nectin和nectin样蛋白起作用(DNAM-1control of natural killer cells functionsthrough nectin and nectin-like proteins)》.《免疫学和细胞生物学(Immunol CellBiol)》2014；92(3):237-44 doi 10.1038/icb.2013.95。
28.Overwijk WW,Tsung A,Irvine KR,Parkhurst MR,Goletz TJ,Tsung K等人《gp100/pmel17是鼠肿瘤排斥抗原：使用高亲和力，改变的肽配体诱导“自身”反应性的杀肿瘤T细胞(gp100/pmel 17is a murine tumor rejection antigen:induction of"self"-reactive,tumoricidal T cells using high-affinity,altered peptide ligand.)》《实验医学杂志》1998；188(2):277-86.
实例6：肿瘤细胞杀伤分析
通过与人类CMV特异性CD8+ T细胞的体外共培养分析评定抗人类TIGIT抗体和CHA.7.518.1.H4(S241P)单独或组合对肿瘤细胞杀伤的作用。所述分析中使用的HLA-A2+靶细胞系是黑素瘤细胞系Mel624，其稳定表达人类PVR和PVRL2；以及胰腺癌细胞系Panc05.04，其表达内源水平的人类PVR和PVRL2。通过慢病毒转导(System Biosciences)用荧光素酶报告基因稳定转导两种肿瘤细胞系。将Mel624和Panc05.04细胞分别用0.0033μg/ml或0.01μg/ml的CMV pp65肽在37℃脉冲1小时。然后洗涤细胞并且以20,000个细胞/孔铺板。将基准抗人类TIGIT抗体和CHA.7.518.1.H4(S241P)组合或与10μg/ml的对照hIgG4同型抗体一起加入培养物中。来自三个不同供体(指定为供体4、供体72和供体234)的人类CMV特异性CD8+ T细胞以100,000个细胞/孔添加。将共培养物在37℃下孵育16小时。孵育后，从孵育箱中取出平板并使其平衡至室温30分钟。将Bio-Glo荧光素酶底物(Promega)加入每个孔中，并且将混合物在室温下避光平衡10分钟。在具有超灵敏发光检测器的EnVision多标记读取器(Perkin Elmer)上定量发光或相对光单位(RLU)。通过[(治疗抗体的RLU-仅培养基的RLU)/仅培养基的RLU]×100计算特异性杀伤百分比。
结果
图43A和B分别显示抗TIGIT抗体和CHA.7.518.1.H4(S241P)处理对Mel624和Panc05.04细胞杀伤的效果。当单独添加到共培养物中时，与同型对照抗体相比，抗TIGIT抗体和CHA.7.518.1.H4(S241P)均诱导肿瘤细胞系的显著T细胞杀伤。对于抗TIGIT抗体，在测试的3个不同CMV反应性供体中，Mel624细胞的特异性杀伤百分比范围为19-41％，Panc05.04细胞的特异性杀伤百分比范围为3-44％。对于CHA.7.518.1.H4(S241P)，Mel624细胞的特异性杀伤百分比范围为16-20％，Panc05.04细胞的特异性杀伤百分比范围为0.21-29％。在一些情况下，在抗TIGIT抗体和CHA.7.518.1.H4(S241P)的组合治疗中观察到对肿瘤细胞杀伤的累加作用。
为了确定抗TIGIT抗体和CHA.7.518.1.H4(S241P)对肿瘤细胞杀伤的作用是否是剂量依赖性的，每种抗体用10点、2倍稀释系列进行分析，抗TIGIT抗体以0.5μg/ml开始，而CHA.7.518.1.H4(S241P)以10μg/ml开始(图44)。当抗TIGIT抗体BM26或CPA.9.086与CHA.7.518.1.H4(S241P)组合时，Mel624杀伤以剂量依赖性方式降低。相比BM26和CHA.7.518.1.H4(S241P)组合的EC50为2.6±1.7nM，CPA.9.086和CHA.7.518.1.H4(S241P)组合观察到更有效的杀伤，EC50为0.40±0.49nM。
实例7：KD的生物物理测量
使用KinExA 3200仪器(Sapidyne Instruments、Boise、ID、USA)在22℃下进行KinExA平衡实验。重组的带His标签的人类TIGIT获自Sino Biologicals(中国北京)并且重构于1×PBS中。在脱气的PBST缓冲液(含0.05％tween 20的PBS)和100μg/mL过滤的BSA和0.02％叠氮化钠中制备用于KinExA分析的所有抗原和抗体样品。使用的二级检测抗体是Alexa Flour 647标记的山羊抗人类IgG(H+L)(Jackson ImmunoResearch Laboratories)，其在上述PBST缓冲液(含有BSA和叠氮化物)中由1×PBS中的0.5mg/mL储备液(pH 7.4)稀释400到700倍。对于每个KinExA实验，将约20μg人类TIGIT稀释到1mL 50mM碳酸钠(pH 9.2)中，将其直接加入50mg二氢唑酮珠(Ultralink Support,Thermo Scientific,Rockford,IL,USA)中并且在4℃下摇动过夜。摇动后，用含有10mg/mL BSA的1M Tris缓冲液(pH 8.5)冲洗珠粒一次，并在室温下在相同缓冲液中摇动一小时。将偶联的珠粒加入KinExA仪器中的珠粒储库中，并用含有0.02％叠氮化钠的1×HBS-N(0.01M Hepes，0.15M NaCl，GEHealthcare)稀释到约30mL，含有0.02％叠氮化钠的1×HBS-N也是KinExA仪器的运行缓冲液。制备后立即使用所有抗原偶联的珠粒。
对于CPA.9.086的KD的两次重复测量(表1)，范围介于957aM-212pM的14个浓度的TIGIT在室温下用2.5pM CPA.9.086和1.8pM CPA.9.086结合位点平衡约72小时。对于CPA.9.083，范围介于478aM-196pM的14个浓度的TIGIT用1.8pM CPA.9.083结合位点平衡约72小时。对于基准抗体BM26 hIgG4的一式两份测量，范围介于9.6fM-3.53nM的14个浓度的TIGIT用20pM BM26结合位点和8.0pM BM26结合位点平衡约72小时。对于CHA.9.547.13，范围介于10.5fM-2.2nM的14个浓度的TIGIT用8pM mAb CHA.9.547.13结合位点平衡约72小时。对于所有实验，流过珠粒包的每个平衡样品的体积范围为4mL到11mL，流速为0.25mL/min。使用KinExA Pro软件(4.2.10版；Sapidyne Instruments)将数据与1:1“标准平衡”结合模型拟合以估计KD并且产生曲线拟合的95％置信区间(CI)。
结果
CPA.9.083和CPA.9.086都以飞摩尔结合亲和力与人类TIGIT结合，而CHA.9.547.13和BM26以皮摩尔亲和力结合。因此，CPA.9.083和CPA.9.086以所测试的四种不同抗体的最高亲和力与人类TIGIT结合。
表1：由KinExA测定的抗人类TIGIT hIgG4抗体的KD测量值
抗体 K<sub>D</sub>±95％CI(n＝1) K<sub>D</sub>±95％CI(n＝2)
CHA.9.547.13 18.8±5.8pM 未测定
CPA.9.083 694±277fM 未测定
CPA.9.086 553±230fM 665±378fM
BM26 8.2±2.8pM 11.2±3.6pM
实例8：靶向免疫检查点的新型治疗抗体CPA.9.086的研发和功能表征
背景：TIGIT是一种在淋巴细胞上高表达的共抑制受体，包括效应和调节CD4+ T细胞(Treg)、效应CD8+ T细胞和NK细胞，可渗入不同类型的肿瘤。TIGIT与其报道的配体脊髓灰质炎病毒受体(PVR)和PVR样蛋白(PVRL2和PVRL3)的结合直接抑制淋巴细胞活化。PVR也在肿瘤中广泛表达，表明TIGIT-PVR信号轴可能是癌症的主要免疫逃逸机制。我们在此报告靶向TIGIT的治疗抗体CPA.9.086的生物物理和功能表征。我们还证明了TIGIT的共同阻断和新的检查点抑制剂PVRIG增强T细胞反应。
材料和方法：进行人噬菌体展示和小鼠杂交瘤抗体发现活动以产生治疗性抗TIGIT抗体。评估所得抗体以高亲和力结合重组和细胞表面表达的人类TIGIT的能力。还检查了抗体与食蟹猕猴和小鼠TIGIT的交叉反应性。以高亲和力与人类TIGIT结合并与食蟹猕猴TIGIT交叉反应的抗体亚组进一步表征其阻断TIGIT和PVR之间相互作用的能力。筛选阻断抗体在体外单独或与抗PVRIG抗体CHA.7.518.1.H4(S241P)组合增强抗原特异性T细胞活化的能力。
结果：我们鉴定出以高飞摩尔亲和力与人类TIGIT结合的先导抗体CPA.9.086。抗体以比测试的基准抗体更高的亲和力与人类CD8+ T细胞内源性表达的TIGIT结合，并且还与食蟹猕猴和小鼠TIGIT交叉反应。当测试体外活性时，CPA.9.086通过CMV特异性CD8+ T细胞增强细胞因子分泌和肿瘤细胞杀伤，其具有相较于测试的基准抗体优异或相当的效力。CPA.9.086与抗PD1抗体或CHA.7.518.1.H4(S241P)的组合导致增强的CMV特异性CD8+ T细胞活性。此外，我们证明与外周血相比，TIGIT主要在来自实体瘤的Treg和效应CD8+ T细胞上表达，表明这些群体可能优先被CPA.9.086靶向。
结论：我们描述了目前处于临床前研发的极高亲和力的拮抗性TIGIT抗体CPA.9.086的研发。我们假设CPA.9.086的飞摩尔亲和力可使得患者的给药降低和频率降低。CPA.9.086可单独或与其它检查点抗体组合增强人类T细胞活化。因此，我们的数据证明了靶向TIGIT、PD1和PVRIG用于治疗癌症的效用。
实例9：对人类癌症中的TIGIT/PVRIG轴进行分析以支持共同治疗的适应症选择和生物标志物
背景：PVRIG和TIGIT被Compugen的Predictive Discovery Platform鉴定为免疫抑制受体，并据报道抑制了抗肿瘤活性。我们正在寻求针对PVRIG(例如CHA7.518.1.H4(S241P))和TIGIT(例如CPA.9.083.H4(S241P))的拮抗抗体的临床研发。在这里，我们分析了原代人类癌症组织和免疫细胞，以表征TIGIT/PVRIG轴上的表达，以支持这些抗体的适应症选择和组合策略。
方法：根据阻断PVRIG和TIGIT与其同源配体(分别为PVRL2和PVR)相互作用的能力，鉴定CHA7.518.1.H4(S241P)和CPA.9.083.H4(S241P)，并且在与肿瘤细胞系的共培养物中筛选其增强抗原特异性CD8 T细胞活化的能力。进行了免疫组织化学和流式细胞术以评定解离的膀胱癌、乳腺癌、结直肠癌、头颈癌、肺癌、肾癌、卵巢癌、前列腺癌和胃癌中受体/配体的表达。
结果：在检查的癌症中，与正常邻近组织相比，PVRIG和PVRL2表达在子宫内膜癌、肺癌、肾癌、卵巢癌和头颈癌中最高。从解离的肿瘤，对T TIL和NK TIL检测PVRIG表达而在CD45-细胞和骨髓细胞中检测PVRL2表达。对PVRIG、TIGIT和PD1的共表达分析表明，PVRIG与TIGIT和PD1共表达，并且PVRIG+TIGIT+PD1+细胞占CD8TIL的大部分。与PD-L1相比，PVRL2表达在几种癌症类型中更为普遍，并且在PD-L1阴性样品中检测到PVRL2的表达。在体外，CHA7.518.1.H4(S241P)与PD1抑制剂或CPA.9.083.H4(S241P)的组合可增强CD8细胞因子产生和细胞毒性活性，其中CHA7.518.1.H4(S241P)、CPA.9.083.H4(S241P)和PD-1抗体的三联组合产生功能活性的最大增加。CHA7.518.1.H4(S241P)对CD8 T细胞的PVRIG阻断反应诱导了几种免疫受体。总之，这些数据支持CHA7.518.1.H4(S241P)和CPA.9.083.H4(S241P)的适应症选择和组合策略以及可能作为反应指标的潜在生物标志物。
结论：总而言之，我们证明了PVRIG和PVRL2在人类癌症的肿瘤微环境中被诱导，并且CHA7.518.1.H4(S241P)以单一疗法或与靶向TIGIT和PD-1的抗体的双联或三联疗法具有作为癌症治疗剂的潜力。这些数据凸显了这种组合方法扩增免疫检查点抑制剂反应性癌症患者群体(包括对PD-1抑制剂无反应的患者)的潜力。
实例10：PVRIG表达与T细胞耗竭相关并且与TIGIT协同抑制抗肿瘤反应
摘要
通过采用独特的计算发现平台，我们确定了一个新的检查点受体家族，这一家族由2种nectin家族TIGIT和PVRIG构成。PVRIG和TIGIT都在T细胞活化后表达，但在T细胞亚组之间的相对表达和表达动力学方面存在差异。PVRIG与PVRL2结合，而TIGIT与几个配体结合，其中我们观察到PVR是TIGIT的主要功能性配体。PVRIG的独特表达谱和独特的高亲和力PVRIG-PVRL2相互作用表明，PVRIG在调节免疫力方面具有独特的作用。使用新的PVRIG-/-小鼠，我们观察到在临床前模型中，PVRIG的遗传缺陷导致T细胞反应增加和肿瘤生长减少，证明了靶向癌症中的这种途径的潜力。为了进一步定义PVRIG拮抗剂的临床领域，我们询问了TIGIT/PVRIG和PD-1轴在人类肿瘤样品中的表达。在所检查的人类癌症中，肿瘤衍生T细胞上的PVRIG和TIGIT表达在子宫内膜癌、肺癌、肾癌和卵巢癌中最高。对PVRIG、TIGIT和PD1的共表达分析表明，PVRIG与TIGIT和PD1相关并且共表达，并且PVRIG+TIGIT+PD1+细胞占CD8肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的大部分。有趣的是，CD8+ TIL上的PVRIG而非TIGIT表达与耗竭的EomeshiT-betlo表型有关。PVR、PVRL2和PD-L1在相对表达水平上也表现出组织特异性差异，子宫内膜和卵巢肿瘤相对于PVR或PD-L1具有更高的PVRL2表达比例。与PD-1阻断相比，用抗PVRIG(CHA7.518.1.H4(S241P))和抗TIGIT(CPA.9.083.H4(S241P))拮抗抗体培养原代人类TIL可将T细胞功能增强到相似或更高的水平。参见图54到60。
CHA7.518.1.H4(S241P)和CPA.9.083.H4(S241P)靶向NECTIN和NECTIN家族中的PVRIG和TIIGIT：结论
PVRIG和TIGIT是非冗余检查点受体，并且是治疗癌症的有前景的靶标。
在PVRL2高于PVR的肿瘤中，PVRIG/PVRL2相互作用可能更占主导地位，并且需要直接靶向PVRIG。
实例11：新的临床前数据证明了PVRIG途径在免疫肿瘤学中的独特特征以及CHA7.518.1.H4(S241P)在治疗多种实体瘤中的潜力
数据进一步加强了CHA7.518.1.H4(S241P)临床研发计划和生物标记策略的理论基础
在GLP毒性研究中，高剂量显示CHA7.518.1.H4(S241P)是安全的
提供了新的临床前数据，证明了PVRIG途径在免疫肿瘤学中的独特功能以及CHA7.518.1.H4(S241P)的潜力，所述CHA7.518.1.H4(S241P)是靶向PVRIG的一流治疗抗体候选物，可治疗多种实体瘤。在2018年1月16日到20日举行的Keystone Symposia专题讨论会A3：T细胞功能障碍、癌症和感染中提交的数据(实例9和相关附图中提供)证明了PVRIG/TIGIT轴可能在免疫肿瘤学中占主导地位并且支持公司的临床研发计划和以单一疗法和与CPA.9.083.H4(S241P)的组合的CHA7.518.1.H4(S241P)的生物标志物策略。
题为“PVRIG表达与T细胞耗竭有关并与TIGIT协同抑制抗肿瘤反应”的海报(海报第2028号)包括显示PVRIG配体PVRL2表达在以下几种肿瘤类型中比起TIGIT的配体PVR的表达更占优势的数据：肺、乳房、子宫内膜和卵巢。这些结果表明，PVRIG可能是表达高表达PVRL2的肿瘤患者人群中的主要检查点，其中许多患者对PD-1抑制剂无反应。因此，这些患者作为单一治疗对CHA7.518.1.H4(S241P)反应的可能性可能增加。
另外，表达研究表明，PVRIG和TIGIT和其相应配体通常在上文所列的肿瘤类型以及肾癌和头颈癌中表达，这表明在两种途径都可操作的患者人群中，为了充分刺激抗肿瘤免疫反应，可能需要TIGIT和PVRIG的阻断。此外，数据还表明，在多种肿瘤类型中发现的耗竭的TIL在很大程度上共表达了三重三个检查点TIGIT、PD-1和PVRIG，进一步支持了三联组合在这类患者人群中的相关性。
我们对PVRIG-TIGIT轴以及每个轴组件之间的相互作用的日益了解，也揭示了PVRIG/PVRL2途径在从小鼠过渡到人类的过程中的进化，从而导致小鼠体内活性较低的途径。我们的数据清楚地证明，与这一途径有关的小鼠生物学低估了这一途径可能对抗肿瘤免疫力的人类影响，这表明CHA7.518.1.H4(S241P)的治疗作用可能比对临床前研究中所见的影响更大。
“我们的临床前研究证明，当我们准备开始我们的临床1b期临床试验时，PVRIG途径的潜在优势和其与TIGIT和PD-1途径的相互作用，再加上表达谱，提供了生物学理论基础来支持我们的临床方法来测试CHA7.518.1.H4(S241P)作为单一疗法以及双联和三联组合疗法。在保留所有参与者的试验设计的同时，我们的生物标志物策略将受这些表达谱的驱动，以丰富最有可能对CHA7.518.1.H4(S241P)作出反应的患者。”Compugen的首席执行官说道。“CHA7.518.1.H4(S241P)的GLP毒性研究结果也令我们感到鼓舞，这表明它在高剂量下是安全的。我们的数据使我们相信，PVRIG途径和我们一流的治疗性抗体CHA7.518.1.H4(S241P)可能具有重要的临床价值，可以作为新的癌症免疫疗法的基础，满足对目前的免疫检查点抑制剂治疗无反应或难治的癌症患者群体的需求。”
关于CHA7.518.1.H4(S241P)和CPA.9.083.H4(S241P)
CHA7.518.1.H4(S241P)是一种人类化杂交瘤抗体，可与CompRIGgen发现的新型B7/CD28样免疫检查点靶候选物PVRIG以高亲和力结合，表明这一靶标与PVRL2的相互作用受阻。CHA7.518.1.H4(S241P)对PVRIG的阻断作用已证明可有效，可再现地增强T细胞活化作用，这与在肿瘤微环境中活化T细胞产生抗肿瘤免疫反应的期望作用机制一致。另外，CHA7.518.1.H4(S241P)与拮抗剂抗PD-1抗体组合已证明对人类T细胞刺激具有协同作用，表明这些组合具有进一步增强针对肿瘤的免疫反应的潜力。
研发了靶向TIGIT的Compugen抗体CPA.9.083.H4(S241P)以用于与CHA7.518.1.H4(S241P)组合使用。临床前数据强有力地支持了轴的两个负共刺激臂TIGIT和PVRIG的双重阻断，这导致T细胞对抗原刺激的反应更加牢固，因此可能导致增强的抗肿瘤免疫反应。
实例12：三联组合治疗的体内功效和存活率
理论基础和目标
这一实例提供了关于小鼠TIGIT、PVRIG和PD-L1阻断剂的组合是否可以显著增强同基因小鼠肿瘤模型中的肿瘤生长抑制(TGI)和存活率。
方案
动物
5周年龄的雌性小鼠购自查尔斯河实验室(River Laboratories)。在研究开始前，将小鼠饲养在Compugen USA动物设施中，随意提供食物和水，并且使其适应至少6天。所有研究都由Compugen USA(每个南旧金山)机构动物护理和使用委员会批准。
同基因小鼠肿瘤模型
将5×105个CT26结肠癌(ATCC)细胞皮下接种(s.c.)到雌性Balb/c小鼠的右胁腹，并且生长长达8天。将测量为30-60mm3的肿瘤的小鼠随机(随机分组的当天指定为第0天)分成3组，每组10只小鼠。动物接受200μL腹膜内(i.p.)注射的小鼠IgG1(mIgG1)同型对照抗体(称为Synagis)、抗TIGIT mIgG1和抗PVRIG mIgG1抗体的双联组合或抗TIGIT mIgG1、抗PVRIG mIgG1和抗PD-L1 mIgG1抗体的三联组合。抗TIGIT mIgG1抗体是CPA.9.086的嵌合版本，其含有CPA.9.086的人类可变重链和轻链以及mIgG1恒定区。从第8天开始，每周3次，持续2周，以固定剂量的10mg/kg抗TIGIT、10mg/kg抗PVRIG和次佳剂量的3mg/kg的抗PD-L1抗体施用抗体。肿瘤生长通过卡尺测量长度(L)和宽度(W)来确定；其中肿瘤大小由公式(L xW2)/2计算。肿瘤大小不允许超过2000mm3，这被指定为研究终点，随后将小鼠处死。
统计分析
使用prism软件进行重复测量的双向ANOVA，随后进行针对所选择的组对的重复测量的双向ANOVA。通过比较在所有研究动物存活的最后一天测量的肿瘤体积来进行肿瘤生长测量的分析。通过对数秩Mantel-Cox检验确定无肿瘤小鼠百分比的统计学差异。
结果和摘要
在这项研究中，研究了阻断三种不同的免疫检查点途径TIGIT、PVRIG和PD-L1对小鼠TGI和存活的影响。使用小鼠结肠癌CT26模型，相比于用同型对照抗体给药的小鼠，抗TIGIT mIgG1与抗PVRIG mIgG1的组合产生小但显著的TGI(在第25天TGI为20.7％)。当将这三种抗体组合时，TGI在第25天增加到58.3％，这与双联组合相比在统计学上有效并且显著有效(第25天双向ANOVA的p<0.001)。尽管到研究结束时(第28天)，没有小鼠是无肿瘤(CR)的，但是与双联组合相比，三联组合的增强功效与存活率增加相关。三联阻断证明总存活率显著增强，研究终点(第28天)的存活率达到90％。除了本文报道的抗肿瘤功效外，所有观察到的组中的体重都无明显变化(数据未显示)。总之，三联组合的耐受性良好，并且与单独TIGIT和PVRIG阻断的双联组合相比，产生体内结肠癌的优异的抗肿瘤作用。参见图61。

Claims (13)

1.一种治疗患者的癌症的方法，其包含：
a)提供来自所述患者的活检，其包含肿瘤细胞；
b)测量所述活检中的PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的频率；
c)如果与用所用抗体的相关同型对照抗体染色相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的所述频率高于1％，那么施用包含抗TIGIT抗体、抗PVRIG抗体和抗PD-1抗体的三联组合疗法；以及
d)如果与用所用所述抗体的相关同型对照抗体染色相同肿瘤细胞相比，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞的所述频率低于1％，那么施用包含抗TIGIT抗体和抗PVRIG抗体的双联组合疗法。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗TIGIT抗体是选自本文所述的任何抗TIGIT抗体的抗体，包括图3中所述的那些抗体中的任一种。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗PVRIG抗体是选自本文所述的任何抗PVRIG抗体的抗体，包括图5和/或图63中所述的那些抗体中的任一种。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗PD-1抗体是选自本文所述的任何抗PD-1抗体的抗体，包括图7中所述的那些抗体中的任一种。
5.根据权利要求1至4所述的方法，其中所述抗TIGIT抗体是选自CPA.9.083.H4(S241P)、CPA.9.086.H4(S241P)、CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.9.547.13.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
6.根据权利要求1至5所述的方法，其中所述抗PVRIG抗体是选自CHA.7.518.1.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)中的至少一种的抗体。
7.根据权利要求1至6所述的方法，其中所述抗PD-1抗体是选自帕博利珠单抗(pembrolizumab)、西米普利单抗(cemiplimab)和纳武单抗(nivolumab)中的至少一种的抗体。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述双联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述三联组合疗法选自施用CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、帕博利珠单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、纳武单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CHA.9.547.13.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.518.1.H4(S241P)；CPA.9.083.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CPA.9.086.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；CHA.9.547.7.H4(S241P、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)；和CHA.9.547.13.H4(S241P)、西米普利单抗和CHA.7.538.1.2.H4(S241P)。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述抗体同时施用。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述抗体依序施用。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：前列腺癌、肝癌(HCC)、结直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌、胃(stomach/gastric)癌、宫颈癌、头颈癌、甲状腺癌、睾丸癌、尿路上皮癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌(鳞状和基底细胞癌)、神经胶质瘤、肾癌(RCC)、淋巴瘤(NHL或HL)、急性骨髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、间皮瘤、食道癌、默克细胞癌(Merkel Cells cancer)、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：三阴性乳腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、默克细胞癌、高MSI癌、KRAS突变肿瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤和骨髓增生异常综合症(MDS)。
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WO (1) WO2018220446A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021180205A1 (zh) * 2020-03-13 2021-09-16 江苏恒瑞医药股份有限公司 Pvrig结合蛋白及其医药用途

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3617232A1 (en) * 2016-08-17 2020-03-04 Compugen Ltd. Anti-tigit antibodies, anti-pvrig antibodies and combinations thereof
EP3548071A4 (en) * 2016-11-30 2020-07-15 OncoMed Pharmaceuticals, Inc. METHOD FOR TREATING CANCER WITH TIGIT-BINDING ACTIVE SUBSTANCES
EP3634995A4 (en) 2017-06-05 2021-06-09 Janssen Biotech, Inc. ANTIBODIES BINDING SPECIFICALLY TO PD-1 AND THEIR METHODS OF USE
CN109970856B (zh) 2017-12-27 2022-08-23 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
WO2019232484A1 (en) * 2018-06-01 2019-12-05 Compugen Ltd Anti-pvrig/anti-tigit bispecific antibodies and methods of use
TWI756621B (zh) * 2019-01-25 2022-03-01 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 新型雙特異性抗體分子以及同時結合pd-l1和lag-3的雙特異性抗體
EP3955925A4 (en) 2019-04-18 2023-03-22 QLSF Biotherapeutics Inc. HUMANIZED ANTI-PD-L1 ANTIBODIES
AU2020298324A1 (en) * 2019-06-21 2022-01-27 Single Cell Technology, Inc. Anti-TIGIT antibodies
CN114746116A (zh) * 2019-11-15 2022-07-12 表面免疫肿瘤学公司 用于免疫疗法的组合物和方法
CN113563470B (zh) * 2020-04-29 2023-02-10 广州昂科免疫生物技术有限公司 结合tigit抗原的抗体及其制备方法与应用
CN114507284B (zh) * 2020-05-09 2023-05-26 华博生物医药技术（上海）有限公司 抗tigit的抗体、其制备方法和应用
CN115666724A (zh) * 2020-05-26 2023-01-31 瑞泽恩制药公司 通过施用pd-1抑制剂抗体西米普利单抗来治疗宫颈癌的方法
EP4168118A1 (en) 2020-06-18 2023-04-26 Genentech, Inc. Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists
WO2021263115A1 (en) * 2020-06-26 2021-12-30 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Compositions and methods for treating cancer, overcoming pd-1/pd-l1 blockade resistance, and determining resistance to checkpoint inhibitor treatment
TW202216778A (zh) 2020-07-15 2022-05-01 美商安進公司 Ｔｉｇｉｔ及ｃｄ１１２ｒ阻斷
US20230365680A1 (en) * 2020-09-30 2023-11-16 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations, anti-tigit antibodies, and anti-pd-1 antibodies
WO2022165275A2 (en) * 2021-01-28 2022-08-04 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1-antibodies
WO2022165266A1 (en) * 2021-01-28 2022-08-04 Compugen Ltd. Anti-pvrig antibodies formulations and uses thereof
WO2023010094A2 (en) 2021-07-28 2023-02-02 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
TW202328195A (zh) 2021-09-15 2023-07-16 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 特異性結合ｐｄ－１的蛋白及其醫藥用途
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
WO2023063842A1 (ru) * 2021-10-12 2023-04-20 Общество с ограниченной ответственностью "Пальмира Биофарма" Нуклеотидная последовательность, кодирующая слитый белок
WO2023064958A1 (en) * 2021-10-15 2023-04-20 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations, anti-tigit antibodies, and anti-pd-1 antibodies
WO2023137161A1 (en) * 2022-01-14 2023-07-20 Amgen Inc. Triple blockade of tigit, cd112r, and pd-l1
WO2023178192A1 (en) 2022-03-15 2023-09-21 Compugen Ltd. Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2024026496A1 (en) * 2022-07-28 2024-02-01 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1 antibodies

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104602707A (zh) * 2012-06-06 2015-05-06 昂考梅德药品有限公司 调节hippo途径的结合剂及其应用
WO2016106302A1 (en) * 2014-12-23 2016-06-30 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to tigit

Family Cites Families (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
DE68925966T2 (de) 1988-12-22 1996-08-29 Kirin Amgen Inc Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
ES2206447T3 (es) 1991-06-14 2004-05-16 Genentech, Inc. Anticuerpo humanizado para heregulina.
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
JP3720353B2 (ja) 1992-12-04 2005-11-24 メディカル リサーチ カウンシル 多価および多重特異性の結合タンパク質、それらの製造および使用
JPH08511420A (ja) 1993-06-16 1996-12-03 セルテック・セラピューテイクス・リミテッド 抗 体
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US7368531B2 (en) 1997-03-07 2008-05-06 Human Genome Sciences, Inc. Human secreted proteins
WO1998048032A2 (en) 1997-04-21 1998-10-29 Donlar Corporation POLY-(α-L-ASPARTIC ACID), POLY-(α-L-GLUTAMIC ACID) AND COPOLYMERS OF L-ASP AND L-GLU, METHOD FOR THEIR PRODUCTION AND THEIR USE
US20040002117A1 (en) 1998-02-12 2004-01-01 Hogan Patrick G. Specific inhibitors of NFAT activation by calcineurin and their use in treating immune-related diseases
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
AU3657899A (en) 1998-04-20 1999-11-08 James E. Bailey Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
HUP0104865A3 (en) 1999-01-15 2004-07-28 Genentech Inc Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
CA2363684A1 (en) 1999-03-05 2000-09-08 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human secretory proteins
EP2275540B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
US20030224379A1 (en) 2000-01-21 2003-12-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
US7449443B2 (en) 2000-03-23 2008-11-11 California Institute Of Technology Method for stabilization of proteins using non-natural amino acids
US6586207B2 (en) 2000-05-26 2003-07-01 California Institute Of Technology Overexpression of aminoacyl-tRNA synthetases for efficient production of engineered proteins containing amino acid analogues
CA2446458A1 (en) 2001-05-09 2002-11-14 Yale University Toll/interleukin-1 receptor adaptor protein (tirap)
ES2326964T3 (es) 2001-10-25 2009-10-22 Genentech, Inc. Composiciones de glicoproteina.
AU2003248370A1 (en) 2002-02-27 2003-09-09 California Institute Of Technology Computational method for designing enzymes for incorporation of amino acid analogs into proteins
US20040110704A1 (en) 2002-04-09 2004-06-10 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells of which genome is modified
JP5401001B2 (ja) 2002-09-11 2014-01-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 免疫関連疾患の治療のための新規組成物と方法
WO2004030615A2 (en) 2002-10-02 2004-04-15 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
AU2003290432A1 (en) 2002-12-26 2004-07-22 Asahi Kasei Pharma Corporation T cell activating gene
BRPI0403964B8 (pt) 2003-04-04 2021-05-25 Genentech Inc formulações líquidas estáveis, artigo manufaturado e uso dessas formulações para o tratamento de disfunção mediada por ige
WO2005019258A2 (en) 2003-08-11 2005-03-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
SG143252A1 (en) 2003-10-09 2008-06-27 Ambrx Inc Polymer derivatives
US7288638B2 (en) 2003-10-10 2007-10-30 Bristol-Myers Squibb Company Fully human antibodies against human 4-1BB
AU2005211362B2 (en) 2004-02-02 2008-03-13 Ambrx, Inc. Modified human interferon polypeptides and their uses
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US7622265B2 (en) 2005-02-22 2009-11-24 Genentech, Inc. Methods and compositions for modulating prostasin
EP1866339B8 (en) 2005-03-25 2021-12-01 GITR, Inc. Gitr binding molecules and uses therefor
WO2006124667A2 (en) 2005-05-12 2006-11-23 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for modulating immune responses
AU2007240491A1 (en) 2006-04-13 2007-11-01 Zymogenetics, Inc. Tetramerizing polypeptides and methods of use
EP2007806A2 (en) 2006-04-13 2008-12-31 ZymoGenetics, Inc. Tetramerizing polypeptides and methods of use
US20090318376A1 (en) 2006-06-15 2009-12-24 Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology High Throughput Screening Method of Binding Inhibitor Between caspase3 and XIAP and Binding Inhibitor Screened Thereby
US8586006B2 (en) 2006-08-09 2013-11-19 Institute For Systems Biology Organ-specific proteins and methods of their use
MX2009003126A (es) 2006-10-06 2009-04-06 Takeda Pharmaceutical Agente para prevenir/tratar el cancer.
AU2008282863A1 (en) 2007-07-31 2009-02-05 Merck Sharp & Dohme Corp. IGF-1R specific antibodies useful in the detection and diagnosis of cellular proliferative disorders
US20120082659A1 (en) 2007-10-02 2012-04-05 Hartmut Land Methods And Compositions Related To Synergistic Responses To Oncogenic Mutations
SG10201402815VA (en) 2008-04-09 2014-09-26 Genentech Inc Novel compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US20110236903A1 (en) 2008-12-04 2011-09-29 Mcclelland Michael Materials and methods for determining diagnosis and prognosis of prostate cancer
SI2376535T1 (sl) 2008-12-09 2017-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Protitelesa anti-pd-l1 in njihova uporaba za izboljšanje funkcije celic t
LT2398498T (lt) 2009-02-17 2019-01-10 Ucb Biopharma Sprl Antikūno molekulės, pasižyminčios specifiškumu žmogaus ox40
US8431530B2 (en) 2009-06-12 2013-04-30 Morehouse School Of Medicine Compositions and methods for treating aids or cancer by inhibiting the secretion of microparticles
WO2011109637A1 (en) 2010-03-03 2011-09-09 Koo Foundation Sun Yat-Sen Cancer Center Methods for classifying and treating breast cancers
BR112012026227A2 (pt) 2010-04-13 2020-08-04 Celldex Therapeutics, Inc. anticorpo monoclonal humano ou humanizado, molécula biespecífica, vetor de expressão, célula transformada, composição, e, usos de um anticorpo
US20120213771A1 (en) 2010-04-13 2012-08-23 Celldex Therapeutics Inc. Antibodies that bind human cd27 and uses thereof
US20140045915A1 (en) 2010-08-31 2014-02-13 The General Hospital Corporation Cancer-related biological materials in microvesicles
KR101527300B1 (ko) 2010-09-09 2015-06-09 화이자 인코포레이티드 4-1ｂｂ 결합 분자
US8962804B2 (en) 2010-10-08 2015-02-24 City Of Hope Meditopes and meditope-binding antibodies and uses thereof
WO2012129488A2 (en) 2011-03-23 2012-09-27 Virginia Commonwealth University Gene signatures associated with rejection or recurrence of cancer
EP2710147A1 (en) 2011-05-18 2014-03-26 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn Molecular analysis of acute myeloid leukemia
AU2012272662A1 (en) 2011-06-22 2014-01-16 Oncocyte Corporation Methods and compositions for the treatment and diagnosis of cancer
WO2013006490A2 (en) 2011-07-01 2013-01-10 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to tim3
KR101981873B1 (ko) 2011-11-28 2019-05-23 메르크 파텐트 게엠베하 항-ｐｄ-ｌ1 항체 및 그의 용도
CN103073644B (zh) 2012-12-31 2014-03-12 中国科学技术大学 特异性抗小鼠tigit的单克隆抗体及其制备方法、鉴定及应用
RS61400B1 (sr) 2013-05-02 2021-02-26 Anaptysbio Inc Antitela usmerena protiv programirane smrti-1 (pd-1)
KR20160030936A (ko) 2013-07-16 2016-03-21 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 tigit 억제제를 사용한 암을 치료하는 방법
JP6623353B2 (ja) 2013-09-13 2019-12-25 ベイジーン スウィッツァーランド ゲーエムベーハー 抗ｐｄ−１抗体並びにその治療及び診断のための使用
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
US9713364B2 (en) 2014-02-14 2017-07-25 Alyssa Ashley Simmons Foot habiliment with easily interchangeable outer
JP6652557B2 (ja) * 2014-05-30 2020-02-26 ヴェンタナ メディカル システムズ， インク． Ｐｄ−ｌ１について染色された腫瘍組織の改善されたスコア化のための多重アッセイ
WO2016011264A1 (en) 2014-07-16 2016-01-21 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using tigit inhibitors and anti-cancer agents
IL250583B (en) 2014-08-19 2022-07-01 Merck Sharp & Dohme Anti-tigit antibodies
EP3221346B1 (en) 2014-11-21 2020-09-02 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
US10550173B2 (en) 2015-02-19 2020-02-04 Compugen, Ltd. PVRIG polypeptides and methods of treatment
CN107580500B (zh) 2015-02-19 2023-05-30 康姆普根有限公司 抗pvrig抗体和使用方法
US9873741B2 (en) 2015-03-06 2018-01-23 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind TIM3
EP3268037B1 (en) 2015-03-09 2022-08-31 Celldex Therapeutics, Inc. Cd27 agonists
TWI715587B (zh) 2015-05-28 2021-01-11 美商安可美德藥物股份有限公司 Ｔｉｇｉｔ結合劑和彼之用途
US11078278B2 (en) 2015-05-29 2021-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of renal cell carcinoma
JO3620B1 (ar) 2015-08-05 2020-08-27 Amgen Res Munich Gmbh مثبطات نقطة فحص مناعية للاستخدام في علاج سرطانات محمولة عبر الدم
US10766957B2 (en) 2015-08-14 2020-09-08 Merck Sharp & Dohme Corp Anti-TIGIT antibodies
EA201890630A1 (ru) 2015-09-01 2018-10-31 Эйдженус Инк. Антитела против pd-1 и способы их применения
AU2016315892B2 (en) 2015-09-02 2023-06-15 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Compositions and methods for modulating T-cell mediated immune response
ES2924071T3 (es) 2015-09-02 2022-10-04 Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd Anticuerpos específicos para inmunoglobulina de células T humanas y dominio ITIM (TIGIT)
EP3349792A1 (en) 2015-09-14 2018-07-25 Compass Therapeutics LLC Compositions and methods for treating cancer via antagonism of the cd155/tigit pathway and tgf-
CR20220186A (es) 2015-09-25 2022-07-07 Genentech Inc ANTICUERPOS ANTI-TIGIT Y MÉTODOS DE USO (divisional 2018-0225)
CN108368176B (zh) 2015-10-01 2022-06-07 波滕扎治疗公司 抗tigit抗原结合蛋白及其使用方法
BR112018008904A2 (pt) * 2015-11-03 2018-11-27 Janssen Biotech Inc anticorpos que se ligam especificamente a tim-3 e seus usos
ES2954153T3 (es) 2015-12-22 2023-11-20 Regeneron Pharma Combinación de anticuerpos anti-PD-1 y anticuerpos biespecíficos anti-CD20/anti-CD3 para tratar el cáncer
WO2017152088A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 JN Biosciences, LLC Antibodies to tigit
MA44783A (fr) 2016-04-25 2019-03-06 Medimmune Llc Compositions comprenant une co-formulation d'anticorps anti-pd-l1 et anti-ctla-4
WO2018017864A2 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Pvrig-binding agents and uses thereof
EP3617232A1 (en) * 2016-08-17 2020-03-04 Compugen Ltd. Anti-tigit antibodies, anti-pvrig antibodies and combinations thereof

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104602707A (zh) * 2012-06-06 2015-05-06 昂考梅德药品有限公司 调节hippo途径的结合剂及其应用
WO2016106302A1 (en) * 2014-12-23 2016-06-30 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to tigit

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
OFER LEVY等: "Discovery and development of COM701, a therapeutic antibody targeting the novel immune checkpoint PVRIG", 《CANCER RES》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021180205A1 (zh) * 2020-03-13 2021-09-16 江苏恒瑞医药股份有限公司 Pvrig结合蛋白及其医药用途

Also Published As

Publication number Publication date
IL271011A (en) 2020-01-30
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