CN110760464A - 一种植物乳杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种植物乳杆菌及其应用，所述植物乳杆菌于2019年7月22日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.18260。该植物乳杆菌CGMCC No.18260的生长能力强，产酸能力强，具有很强的耐酸和耐盐能力，降解亚硝酸盐能力强。另外该菌具有很强的β‑葡萄糖苷酶活性，将该菌接种发酵能大幅提高剁辣椒和泡菜中游离态多酚和黄酮的含量，提高其抗氧化性，同时降低了剁辣椒和泡菜中的亚硝酸盐含量。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，更具体地，涉及一种植物乳杆菌及其应用。
背景技术
我国是蔬菜生产大国，一年四季均有丰富的蔬菜原料。在我国不同地域，有着丰富多样的传统发酵蔬菜，代表性的发酵蔬菜有四川泡菜、榨菜、东北酸菜、湖南剁辣椒、发酵芥菜等，这些发酵蔬菜因其独特的色、香、味越来越受到广大消费者的喜爱，已经成为人们日常生活中佐餐的必需品。
发酵蔬菜是指经过发酵的可以长期储藏的蔬菜，是我国传统发酵食品的典型代表之一。在蔬菜自然发酵过程中，蔬菜表面附着的乳酸菌利用其生成的代谢产物以及形成的低氧环境，使其成为发酵过程中的优势菌。同时乳酸菌发酵产生的醇、醛、酮和有机酸等物质，赋予了发酵蔬菜柔和的酸味和香气。因此，发酵蔬菜品质的形成与乳酸菌在发酵过程中的生长代谢作用有着重要的关系。
我国传统发酵蔬菜品种繁多，其中蕴含着丰富多样的乳酸菌，可为益生菌的筛选提供强大的菌种库，为我国传统发酵食品中微生物资源的开发利用奠定坚实的基础。
我国是辣椒最大的生产国，辣椒的初加工主要有干制、腌制、油制、泡渍等。其中腌制辣椒就包括剁辣椒、泡辣椒、辣椒酱等发酵辣椒产品。自然发酵辣椒主要是利用其天然辣椒表面附着的乳酸菌进行的发酵，经过乳酸发酵以后，其味酸辣、可口，并且具有开胃的功能。
剁辣椒的传统加工方法是利用乳酸菌的自然发酵和食盐保存作用进行加工处理，目前剁辣椒加工企业普遍采用超过20％以上的高盐腌制辣椒的方法进行加工，这样虽然可保留辣椒的色泽、辣味和脆度，但是产品没有发酵辣椒特有的风味和香气，而且加工食用前要经过脱盐处理，这样增加了生产成本，同时造成了环境的污染。因此，选用发酵性能优良的乳酸菌进行辣椒的接种发酵，成为提高发酵辣椒品质的重要途径。
目前已从自然发酵剁辣椒中分离出产酸快、高效降解亚硝酸盐的乳酸菌，并成功应用于发酵蔬菜的生产，但对于提高剁辣椒多酚黄酮等活性成分的含量、提高剁辣椒抗氧化性的研究还较为缺乏。因此筛选功能型乳酸菌，提高剁辣椒等发酵蔬菜的抗氧化作用等功能特性成为传统发酵食品未来绿色健康制造的重要方向。
发明内容
基于此，针对现有技术中用于发酵蔬菜的菌缺乏抗氧化作用的技术问题，提供一种植物乳杆菌。
本发明的第一方面提供了一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，所述植物乳杆菌在2019年7月22日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.18260，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
在一些实施方式中，所述植物乳杆菌具有β-葡萄糖苷酶活性。
在一些实施方式中，所述β-葡萄糖苷酶活性包括胞内和胞外的β- 葡萄糖苷酶活性。
本发明的第二方面提供了一种上述任一项实施方式中所述的植物乳杆菌在食品发酵中的用途。
在一些实施方式中，所述食品发酵为剁辣椒和/或白菜泡菜。
在一些实施方式中，所述剁辣椒的制备方法包括如下步骤：配料、接种和发酵，得到所述剁辣椒；按重量百分百比计算，所述配料的原料组成为：鲜碎辣椒95～100％，大蒜籽0～5％，生姜0～3％，食盐7～10％，氯化钙0.05～0.1％，白酒0.5％；其中，所述接种采用所述植物乳杆菌。
本发明的第三方面提供了一种组合物，所述组合物包括上述任一项实施方式中所述的植物乳杆菌，所述组合物为发酵剂。
本发明的第四方面还提供了一种上述实施方式中所述的发酵剂在制备剁辣椒和/或白菜泡菜中的用途。
在一些实施方式中，所述剁辣椒的制备方法包括如下步骤：配料、接种和发酵，得到所述剁辣椒；按重量百分百比计算，所述配料的原料组成为：鲜碎辣椒95～100％，大蒜籽0～5％，生姜0～3％，食盐7～ 10％，氯化钙0.05～0.1％，白酒0.5％；其中，所述接种采用所述发酵剂接种。
在一些实施方式中，所述发酵剂为干粉。
在一些实施方式中，所述发酵剂为菌悬液。
在一些实施方式中，所述白菜泡菜或剁辣椒采用所述干粉发酵，其添加量为106～108CFU/g。
在一些实施方式中，所述白菜泡菜或剁辣椒采用菌悬液发酵，按体积分数计算，其添加量为3～5％。
本发明的第五方面还提供了一种上述实施方式中所述的发酵剂的制备方法，包括如下步骤：
S1、菌株活化：从保存斜面挑取菌苔接种于装有MRS液体培养基的试管中，37℃静置培养24h，然后取少量菌液再接种于MRS液体培养基中，37℃静置培养18h，以此活化三次，得到活化的菌液；
S2、扩培：将活化的菌液接种于装有MRS液体培养基的三角瓶中，三角瓶中的菌种接种量为105CFU/mL，37℃静置培养24h；
S3、菌体收集：将三角瓶中培养后的菌液置于离心管中，10000rpm 离心10分钟，无菌条件下弃上清，得到菌体；
S4、获得发酵剂：将获得的菌体冷冻干燥成干粉发酵剂。
本发明的第六方面还提供了一种上述实施方式中所述的发酵剂的制备方法，包括如下步骤：
S1、菌株活化：从保存斜面挑取菌苔接种于装有MRS液体培养基的试管中，37℃静置培养24h，然后取少量菌液再接种于MRS液体培养基中，37℃静置培养18h，以此活化三次，得到活化的菌液；
S2、扩培：将活化的菌液接种于装有MRS液体培养基的三角瓶中，三角瓶中的菌种接种量为105CFU/mL，37℃静置培养24h；
S3、菌体收集：将三角瓶中培养后的菌液置于离心管中，10000rpm 离心10分钟，无菌条件下弃上清，得到菌体；
S4、获得发酵剂：将得到的菌体用无菌生理盐水洗涤后，再调整至菌体中细胞数为106～108CFU/mL后得到菌悬液发酵剂。
MRS琼脂培养基为：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸三铵2g，葡萄糖20g，乙酸钠5g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，吐温801mL，琼脂15g，蒸馏水1L，pH值6.3～6.5。
本发明相对现有技术，具有如下有益效果：该植物乳杆菌CGMCC No.18260的生长能力强，产酸能力强，具有很强的耐酸和耐盐能力，降解亚硝酸盐能力强，将该菌接种发酵能大幅提高辣椒中游离态多酚和黄酮的含量，提高了剁辣椒的抗氧化性，同时降低了剁辣椒中的亚硝酸盐含量。
附图说明
图1为本发明的植物乳杆菌的菌落形态图；
图2为本发明的植物乳杆菌XN-8的生长曲线；
图3为本发明的植物乳杆菌XN-8的对8％NaCl的耐受能力；
图4为本发明的植物乳杆菌XN-8的对pH＝5的耐受能力。
具体实施方式
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
本发明的第一方面提供了一种植物乳杆菌，所述植物乳杆菌在 2019年7月22日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.18260；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
在一些实施方式中，所述植物乳杆菌具有β-葡萄糖苷酶活性。
在一些实施方式中，所述β-葡萄糖苷酶活性包括胞内和胞外的β- 葡萄糖苷酶活性。
本发明的第二方面提供了一种上述任一项实施方式中所述的植物乳杆菌发酵剂在食品发酵中的用途。
在一些实施方式中，所述食品发酵为剁辣椒和/或白菜泡菜。
在一些实施方式中，所述剁辣椒的制备方法包括如下步骤：配料、接种和发酵，得到所述剁辣椒；按重量百分百比计算，所述配料的原料组成为：鲜碎辣椒95～100％，大蒜籽0～5％，生姜0～3％，食盐7～ 10％，氯化钙0.05～0.1％，白酒0.5％；其中，所述接种采用所述发酵剂接种。
在一些实施方式中，所述发酵剂为干粉。
在一些实施方式中，所述发酵剂为菌悬液。
在一些实施方式中，所述白菜泡菜或剁辣椒采用所述干粉发酵，其添加量为106～108CFU/g。
在一些实施方式中，所述白菜泡菜或剁辣椒采用菌悬液发酵，按体积分数计算，其添加量为3～5％。
本发明的第三方面还提供了一种上述实施方式中所述的发酵剂的制备方法，包括如下步骤：
S1、菌株活化：从保存斜面挑取菌苔接种于装有MRS液体培养基的试管中，37℃静置培养24h，然后取少量菌液再接种于MRS液体培养基中，37℃静置培养18h，以此活化三次，得到活化的菌液；
S2、扩培：将活化的菌液接种于装有MRS液体培养基的三角瓶中，三角瓶中的菌种接种量为105CFU/mL，37℃静置培养24h；
S3、菌体收集：将三角瓶中培养后的菌液置于离心管中，10000rpm 离心10min，无菌条件下弃上清，得到菌体；
S4、获得发酵剂：将获得的菌体冷冻干燥成干粉发酵剂。
本发明的第四方面还提供了一种上述实施方式中所述的发酵剂的制备方法，包括如下步骤：
S1、菌株活化：从保存斜面挑取菌苔接种于装有MRS液体培养基的试管中，37℃静置培养24h，然后取少量菌液再接种于MRS液体培养基中，37℃静置培养18h，以此活化三次，得到活化的菌液；
S2、扩培：将活化的菌液接种于装有MRS液体培养基的三角瓶中，三角瓶中的菌种接种量为105CFU/mL，37℃静置培养24h；
S3、菌体收集：将三角瓶中培养后的菌液置于离心管中，10000rpm 离心10min，无菌条件下弃上清，得到菌体；
S4、获得发酵剂：将得到的菌体用无菌生理盐水洗涤后，再调整至菌体中细胞数为106～108CFU/mL后得到菌悬液发酵剂。
MRS琼脂培养基为：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸三铵2g，葡萄糖20g，乙酸钠5g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，吐温801mL，琼脂15g，蒸馏水1L，pH值6.3～6.5。
本发明相对现有技术，具有如下有益效果：该植物乳杆菌CGMCC No.18260的生长能力强，产酸能力强，具有很强的耐酸和耐盐能力，降解亚硝酸盐能力强。同时该菌具有很强的β-葡萄糖苷酶活性，将该菌接种发酵能大幅提高辣椒中游离态多酚和黄酮的含量，提高了剁辣椒的抗氧化性，同时降低了剁辣椒中的亚硝酸盐含量。
实施例1
(1)菌株的分离
样品来自湖南省农家自制的发酵剁辣椒样品，加入225mL无菌生理盐水，剧烈震荡20min。采用梯度稀释法，取103～106倍稀释液涂布于MRS琼脂培养基平板上，37℃厌氧培养48h。挑取菌落大、生长快的菌株进一步进行分离纯化。
(2)菌株的初筛
将分离纯化后的菌株接种至MRS液体培养基中，37℃活化菌株24 h，再按1％的接种量接种活化后菌液至MRS液体培养基中，37℃培养24h，测定菌液在600nm的波长下的吸光度值。同时用pH计测定发酵液pH值，比较各菌株产酸能力，如表1所示。
表1分离菌株的产酸能力
| 菌株名 | 最终pH | 菌株名 | 最终pH |
| XN-1 | 4.42 | XN-24 | 5.07 |
| XN-3 | 4.15 | XN-26 | 4.12 |
| XN-6 | 4.08 | XN-29 | 4.34 |
| XN-8 | 4.05 | XN-32 | 4.55 |
| XN-11 | 4.86 | XN-34 | 4.10 |
| XN-13 | 4.36 | XN-36 | 4.38 |
| XN-15 | 4.18 | XN-37 | 4.30 |
| XN-16 | 4.10 | XN-40 | 4.56 |
| XN-19 | 4.64 | XN-42 | 4.20 |
| XN-21 | 4.15 | XN-45 | 4.42 |
将生长较快和产酸能力强的菌株接种于MRS液体培养基中，37℃培养活化24h。将活化后的菌株，以2％接种量接种于含有150μg/mL NaNO2的MRS培养液中，37℃培养48h，将培养后菌液6000rpm离心10min，取上清液，采用盐酸奈乙二胺法测定培养液中残留的亚硝酸盐含量。计算菌株发酵前后MRS培养液中NaNO2含量减少量，如表2所示。
表2分离菌株降解亚硝酸盐能力
| 菌株名 | NaNO<sub>2</sub>降解率 | 菌株名 | NaNO<sub>2</sub>降解率 |
| XN-1 | 93.6％ | XN-24 | 88.5％ |
| XN-3 | 99.0％ | XN-26 | 97.2％ |
| XN-6 | 94.4％ | XN-29 | 87.2％ |
| XN-8 | 99.6％ | XN-32 | 92.4％ |
| XN-11 | 89.5％ | XN-34 | 98.6％ |
| XN-13 | 94.6％ | XN-36 | 94.3％ |
| XN-15 | 97.8％ | XN-37 | 97.6％ |
| XN-16 | 99.2％ | XN-40 | 94.2％ |
| XN-19 | 95.5％ | XN-42 | 97.2％ |
| XN-21 | 94.5％ | XN-45 | 94.5％ |
(3)菌株的复筛
将亚硝酸盐降解率在95％以上的菌株，采用接种至MRS液体培养基中，37℃活化菌株12h，再按1％的接种量接种活化后菌液至MRS 液体培养基中，37℃培养24h。将培养后菌液6000rpm离心10min，取上清液，以对-硝基β-D-葡萄糖苷(pNPG)为底物，利用分光光度法测定发酵上清液中β-葡萄糖苷酶的活力(胞外酶)。剩余菌体沉淀加入无菌生理盐水，冰浴条件下将菌体进行超声波破碎，6000rpm离心10 min，取上清液，测定β-葡萄糖苷酶的活力(胞内酶)。单位(U)定义为在该条件下，每min催化生成1μmol的pNP所需的酶量，如表3所示。
表3分离菌株β-葡萄糖苷酶的活力(U)
| 菌株名 | 胞内酶 | 胞外酶 | 菌株名 | 胞内酶 | 胞外酶 |
| XN-3 | 76±1.83 | 0.186±0.01 | XN-26 | 54±1.32 | 8.314±0.12 |
| XN-8 | 105±3.56 | 20.245±0.04 | XN-34 | 35±1.28 | 0.135±0.02 |
| XN-15 | 56±0.86 | 0.362±0.02 | XN-37 | 68±1.48 | 18.360±0.04 |
| XN-16 | 32±1.04 | 0.305±0.01 | XN-42 | 78±1.69 | 0.189±0.02 |
| XN-19 | 12±0.88 | 0.145±0.02 |
(4)菌株的鉴定
通过菌株的初筛和复筛，得到一株菌命名为XN-8。参见图1，菌落呈白色、镜检呈短杆状，革兰氏阳性、无鞭毛，同型发酵、发酵葡萄糖不产气，发酵核糖时产生乙酸和乳酸，不产生吲哚，硫化氢产生阴性，凝固酶阴性，氨基酸脱羧酶阴性，具有亚硝酸盐还原酶。
通过16S rDNA的PCR扩增产物进行测序，测序结果见序列表，登录NCBI网站，进行Blast序列比对，结果显示菌株XN-8与植物乳杆菌的16S rDNA同源性达99％以上，可以鉴定该菌为植物乳杆菌。对该菌进行全基因组进行二代测序，发现该菌基因组中编码糖苷酶的基因共有63个，表明该菌具有很强的碳水化合物代谢能力。
(5)菌株的生长特性
将活化后的植物乳杆菌XN-8按1％接种量介入MRS液体培养基中，37℃培养活化24h，每隔3h测定菌液再600nm的吸光度，同时测定菌液的pH，得到的生长曲线如图2所示。结果表明，植物乳杆菌 XN-8在MRS培养基中生长较快，在3h左右进入对数期，12h进入稳定期。
(6)菌株的耐盐能力
将植物乳杆菌XN-8活化后按1％接种量接种于含8％NaCl的MRS 培养液中，37℃培养，每隔2h测定菌液在600nm的吸光度值。以培养时间为横坐标，菌液的吸光度值为纵坐标，绘制曲线。从图3可以看出，植物乳杆菌XN-8在含8％NaCl的MRS培养基中生长较快，有较强的耐盐能力。
(7)菌株的耐酸能力
将植物乳杆菌XN-8活化后按1％接种量接种于pH＝5的MRS培养液中，37℃培养，每隔2h测定菌液在600nm的吸光度值。以培养时间为横坐标，菌液的吸光度值为纵坐标，绘制曲线，从图4可以看出，植物乳杆菌XN-8在pH＝5的MRS培养基中生长较快，有较强的耐酸能力。
(8)菌悬液的制备
将植物乳杆菌XN-8接种至MRS液体培养基，37℃活化12h，重复活化一次。将活化菌液按1％的接种量接种MRS液体培养基中，37℃恒温培养24h，稀释平板法测定菌液的菌落数。根据测定得到的菌落数，将培养后的菌液离心、去上清，加入无菌生理盐水，调整细胞数为106～8CFU/mL，4℃冰箱备用。
实施例2植物乳杆菌XN-8发酵剁辣椒
(1)分别将所有用具(砧板、菜刀、不锈钢盆、汤匙、筷子和坛子)沸水浴10min杀菌，烘干备用；
(2)将红线椒、生姜、大蒜去蒂、去皮和洗净，自然风干后剁碎备用；
(3)剁辣椒配方(质量百分比)：辣椒95～100％；大蒜籽0～5％；生姜0～3％；食盐7～10％；氯化钙0.05～0.1％，白酒0.5％；
(4)植物乳杆菌XN-8接种量：以未接种发酵的剁辣椒作为对照，将XN-8活菌数为106～8CFU/mL的菌悬液按照接种量3～5％(v/m) 接种于剁辣椒中(以β-葡萄糖苷酶活力较低的植物乳杆菌XN-19作为对照)，密封，室温发酵7～21天，发酵得到的剁辣椒,。经过测定，接种发酵剁辣椒产品风味独特，口感鲜香嫩脆，其亚硝酸盐含量为0.6 mg/L，而自然发酵剁辣椒的亚硝酸盐含量为1.3mg/L，参见表4。
表4发酵剁辣椒的亚硝酸盐含量
| 自然发酵 | 植物乳杆菌XN-19 | 植物乳杆菌XN-8 | |
| 亚硝酸盐含量(mg/L) | 1.3±0.005 | 0.8±0.003 | 0.6±0.002 |
(5)通过对剁辣椒中总多酚和黄酮含量的测定，结果表明自然发酵剁辣椒中的总多酚含量从发酵前的1.879±0.088提高到发酵后的 2.106±0.032mg/g(干重)，而接种XN-8发酵剁辣椒中的总多酚含量则提高到2.832±0.055mg/g(干重)，这与自然发酵剁辣椒结果存在显著差异(p<0.05)；自然发酵剁辣椒的总黄酮含量从发酵前的0.568±0.079 提高到发酵后的0.832±0.018mg/g(干重)，而接种发酵剁辣椒含量则提高到1.754±0.042mg/g(干重)，这与自然发酵及接种XN-19的泡菜结果存在显著差异(p<0.05)，参见表5。
表5不同发酵方式剁辣椒发酵前后总多酚与总黄酮含量比较
注：同一行内小写字母不同表示不同发酵方式之间存在显著性差异。
(6)自然发酵剁辣椒甲醇提取物对DPPH自由基的清除率从发酵前的63.267±0.453％提高到75.320±1.754％(p<0.01)，总抗氧化能力从发酵前389.180±2.890μg/g提高到发酵后的534.672±4.604μg/g (p<0.01)，而接种XN-8发酵剁辣椒的甲醇提取物对DPPH自由基的清除率则提高到93.130±1.629％(p<0.01)，总抗氧化能力则提高到743.372±4.822μg/g(p<0.01)，这与自然发酵及接种XN-19的剁辣椒结果存在极显著差异(p<0.01)，参见表6；
表6不同发酵方式剁辣椒发酵前后抗氧化能力变化
注：同一行内小写字母不同表示不同发酵方式之间存在显著性差异
(7)通过液相色谱法，对接种XN-8发酵剁辣椒发酵前后几种多酚黄酮的含量进行了测定，结果表明，接种XN-8发酵大幅提高了剁辣椒中没食子酸、咖啡酸、芦丁的含量。没食子酸的含量从1.037±0.014 μg/g提高到4.857±0.046μg/g(p<0.01)，咖啡酸的含量从38.367±1.402 μg/g提高到85.453±3.213μg/g(p<0.01)，芦丁的含量从18.532±0.786 μg/g提高到87.478±1.729μg/g(p<0.01)，上述多酚黄酮的结果与自然发酵和接种XN-19的剁辣椒测定结果存在显著差异(p<0.05)。表明植物乳杆菌XN-8所合成的β-葡萄糖苷酶能快速分解辣椒等蔬菜中多酚和黄酮苷元，促进多酚和黄酮的合成，参见表7。
表7不同发酵方式剁辣椒发酵前后几种多酚黄酮含量变化
注：同一行内小写字母不同表示不同发酵方式之间存在显著性差异
(8)测定发酵辣椒前后的辣椒素类物质含量，结果表明自然发酵剁辣椒中辣椒素含量从发酵前的83.201±0.380μg/g提高到发酵后的 92.605μg/g，而接种发酵剁辣椒中的辣椒素含量则提高到 126.346±1.832μg/g，这与自然发酵剁辣椒的结果存在极显著差异(p<0.01)。
(9)分析接种发酵剁辣椒中的总黄酮和总多酚含量与抗氧化指标之间的相关性，发现总黄酮含量与DPPH清除率和总抗氧化能力呈正相关(P≤0.05)，其相关系数分别为0.942与0.920，总多酚含量与DPPH 清除率和总抗氧化能力的相关系数分别为0.935与0.948。
实施例3植物乳杆菌XN-8发酵白菜泡菜
(1)分别将所有用具(砧板、菜刀、不锈钢盆、汤匙、筷子和坛子)沸水浴10min杀菌，烘干备用；
(2)将无菌水煮沸后，加入7～9％的食盐，自然冷却后倒入发酵坛中；
(3)将新鲜白菜洗净，沥干多余水分，切成长度和宽度分别为5*3 cm的小块装入坛子中；
(3)泡菜配方(占白菜质量百分比)：白糖1～3％；大蒜籽1～3％；
(4)植物乳杆菌XN-8接种量：将活菌数为106～8CFU/mL的菌悬液按照接种量3～5％接种于泡白菜中(以β-葡萄糖苷酶活力较低的植物乳杆菌XN-19作为对照)，密封，室温发酵7天。经过测定，接种发酵产品的亚硝酸盐含量在1.1～1.3mg/L，产品风味独特，口感鲜香嫩脆，而自然发酵泡菜发酵7天的亚硝酸盐含量为1.8mg/，高于接种发酵泡菜；
(5)通过总多酚和黄酮含量的测定，结果表明自然发酵泡菜中多酚含量从发酵前的3.026±0.132mg/g(干重)提高到发酵后4.087±0.405 mg/g(干重)(p<0.05)，总黄酮含量从发酵前的0.275±0.001mg/g(干重)提高发酵后0.282±0.001mg/g(干重)，而接种XN-8发酵泡白菜中的总多酚含量则提高到发酵后4.802±0.346mg/g(干重)(p<0.01)，总黄酮则提高到发酵后的0.354±0.002mg/g(干重)，这与自然发酵及接种XN-19的泡菜结果存在显著差异(p<0.05)，参见表8；
表8不同发酵方式泡菜发酵前后总多酚与总黄酮含量比较
注：同一行内小写字母不同表示不同发酵方式之间存在显著性差异。
(6)自然发酵泡菜的甲醇提取物对DPPH自由基的清除率从发酵前的70.301±0.352％提高到76.502±2.540％，总抗氧化能力从发酵前的 62.403±2.821μg/g(干重)提高到发酵后的67.562±4.452μg/g(干重) (干重)。而接种XN-8发酵泡菜对DPPH自由基的清除率提高到 83.502±2.540％，总抗氧化能力则提高到72.562±4.452μg/g(干重)，这与自然发酵及接种XN-19的泡菜结果存在显著差异(p<0.05)，参见表 9；
表9不同发酵方式泡菜发酵前后抗氧化能力变化
注：同一行内小写字母不同表示不同发酵方式之间存在显著性差异
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
序列表
<110> 湖南农业大学
<120> 一种植物乳杆菌及其应用
<141> 2019-11-07
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1452
<212> DNA
<213> Lactobacillus plantarum
<400> 1
gggggtgcta taatgcagtc gaacgaactc tggtattgat tggtgcttgc atcatgattt 60
acatttgagt gagtggcgaa ctggtgagta acacgtggga aacctgccca gaagcggggg 120
ataacacctg gaaacagatg ctaataccgc ataacaactt ggaccgcatg gtccgagttt 180
gaaagatggc ttcggctatc acttttggat ggtcccgcgg cgtattagct agatggtggg 240
gtaacggctc accatggcaa tgatacgtag ccgacctgag agggtaatcg gccacattgg 300
gactgagaca cggcccaaac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cacaatggac 360
gaaagtctga tggagcaacg ccgcgtgagt gaagaagggt ttcggctcgt aaaactctgt 420
tgttaaagaa gaacatatct gagagtaact gttcaggtat tgacggtatt taaccagaaa 480
gccacggcta actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta ggtggcaagc gttgtccgga 540
tttattgggc gtaaagcgag cgcaggcggt tttttaagtc tgatgtgaaa gccttcggct 600
caaccgaaga agtgcatcgg aaactgggaa acttgagtgc agaagaggac agtggaactc 660
catgtgtagc ggtgaaatgc gtagatatat ggaagaacac cagtggcgaa ggcggctgtc 720
tggtctgtaa ctgacgctga ggctcgaaag tatgggtagc aaacaggatt agataccctg 780
gtagtccata ccgtaaacga tgaatgctaa gtgttggagg gtttccgccc ttcagtgctg 840
cagctaacgc attaagcatt ccgcctgggg agtacggccg caaggctgaa actcaaagga 900
attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagct acgcgaagaa 960
ccttaccagg tcttgacata ctatgcaaat ctaagagatt agacgttccc ttcggggaca 1020
tggatacagg tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc 1080
gcaacgagcg caacccttat tatcagttgc cagcattaag ttgggcactc tggtgagact 1140
gccggtgaca aaccggagga aggtggggat gacgtcaaat catcatgccc cttatgacct 1200
gggctacaca cgtgctacaa tggatggtac aacgagttgc gaactcgcga gagtaagcta 1260
atctcttaaa gccattctca gttcggattg taggctgcaa ctcgcctaca tgaagtcgga 1320
atcgctagta atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac 1380
cgcccgtcac accatgagag tttgtaacac ccaaagtcgg tggggtaacc ttttaggaac 1440
cagccgcgta ag 1452
Claims (10)
1.一种植物乳杆菌，其特征在于，所述植物乳杆菌于2019年7月22日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.18260。
2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌，其特征在于，所述植物乳杆菌具有β-葡萄糖苷酶活性。
3.根据权利要求2所述的植物乳杆菌，其特征在于，所述β-葡萄糖苷酶活性包括胞内和胞外的β-葡萄糖苷酶活性。
4.一种如权利要求1～3任一项所述的植物乳杆菌在食品发酵中的用途。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述食品发酵为剁辣椒和/或白菜泡菜。
6.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1～3任一项所述植物乳杆菌，所述组合物为发酵剂。
7.一种如权利要求6所述的发酵剂在制备剁辣椒和/或白菜泡菜中的用途。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述剁辣椒的制备方法包括如下步骤：配料、接种和发酵，得到所述剁辣椒；按重量百分百比计算，所述配料的原料组成为：鲜碎辣椒95～100％，大蒜籽0～5％，生姜0～3％，食盐7～10％，氯化钙0.05～0.1％，白酒0.5％；其中，所述接种采用所述发酵剂接种。
9.一种如权利要求6所述的发酵剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、菌株活化：从保存斜面挑取菌苔接种于装有MRS液体培养基的试管中，37℃静置培养24h，然后取少量菌液再接种于MRS液体培养基中，37℃静置培养18h，以此活化三次，得到活化的菌液；
S2、扩培：将活化的菌液接种于装有MRS液体培养基的三角瓶中，三角瓶中的菌种接种量为105CFU/mL，37℃静置培养24h；
S3、菌体收集：将三角瓶中培养后的菌液置于离心管中，10000rpm离心10min，无菌条件下弃上清，得到菌体；
S4、获得发酵剂：将得到的菌体用无菌生理盐水洗涤后，再调整菌体细胞数至106～108CFU/mL后得到菌悬液发酵剂。
10.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述白菜泡菜或剁辣椒采用菌悬液接种发酵，按体积分数计算，其添加量为3～5％。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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