CN110715986A - 保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法 - Google Patents

保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110715986A
CN110715986A CN201910987670.XA CN201910987670A CN110715986A CN 110715986 A CN110715986 A CN 110715986A CN 201910987670 A CN201910987670 A CN 201910987670A CN 110715986 A CN110715986 A CN 110715986A
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
sample
glucosamine hydrochloride
reference substance
health food
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910987670.XA
Other languages
English (en)
Inventor
于荣贤
刘兵
王祖忠
余玉芳
张勇
李建
冯绍坤
李阿姑
熊伟
陈慧
徐丽
程梦
孙小玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SHENZHEN VIGOR HEALTHCARE PRODUCTS CO Ltd
Original Assignee
SHENZHEN VIGOR HEALTHCARE PRODUCTS CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SHENZHEN VIGOR HEALTHCARE PRODUCTS CO Ltd filed Critical SHENZHEN VIGOR HEALTHCARE PRODUCTS CO Ltd
Publication of CN110715986A publication Critical patent/CN110715986A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient

Abstract

本发明公开了一种保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法，属于盐酸氨基葡萄糖的测定技术领域。该方法包括如下步骤：分别配制异硫氰酸苯酯甲醇溶液、缓冲液、冰醋酸水溶液；分别制备对照品溶液、样品溶液；对照品溶液及样品溶液的衍生：将对照品溶液和样品溶液分别进行衍生；测定：色谱条件为：色谱柱：C18，4.6*250mm，5μm；检测波长：254nm；进样体积：10μL；流速：1.0mL/min；柱温：室温；设定梯度洗脱程序；分别将衍生后的对照品溶液和样品溶液注入液相色谱仪，按色谱条件上机分析，记录色谱峰面积，外标法定量。该方法对保健品中的盐酸氨基葡萄糖专属性强、线性良好、重现性好。

Description

保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法
技术领域
本发明属于盐酸氨基葡萄糖的测定技术领域，具体涉及一种保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法。
背景技术
荣格牌密之源胶囊为具有增加骨密度功能的保健食品之一，主要的原辅料为碳酸钙、骨胶原蛋白粉、D-盐酸氨基葡萄糖、酪蛋白磷酸肽，二氧化硅。盐酸氨基葡萄糖和钙为该产品的标志性成分。盐酸氨基葡萄糖学名为2-氨基-2氨基-脱氧-D-葡萄糖盐酸盐，是氨基葡萄糖的一种稳定化合物，它由节肢动物外壳中提取的甲壳素在盐酸溶液中充分水解制得，其前身为药物，用于治疗和预防全身各种关节的骨性关节炎。通过刺激粘多糖的生化合成及增加量骨骼钙质的摄取，提高骨与软骨组织的代谢功能与营养，亦能改善及增强滑膜液的粘稠度，增加滑膜液合成，提供关节润滑功能，可阻断骨关节炎的病理过程，防治疾病进展，改善关节活动功能，缓解关节疼痛，抑制及消退关节变性形成。碳酸钙、骨胶原蛋白粉、酪蛋白磷酸肽与盐酸氨基葡萄糖对增加骨密度的功能起到协同作用。
目前关于盐酸氨基酸葡萄糖的标准测定方法为GB/T 20365-2006《硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量测定》，从标准的适用范围来看，该方法适用于纯物质的测定，且由于盐酸氨基葡萄糖没有很好的发色基团，紫外吸收波长只在190nm～195nm附近，处于末端吸收，因此容易影响测定结果。保健食品较药品成分复杂，含有其他功效成分，用GB/T 20365-2006《硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量测定》测定时，盐酸氨基葡萄糖在C18柱上保留时间很短，且杂峰较多，无法达到目标峰定性和定量的要求。
因此有必要对保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法进行研究。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术的不足，而提供一种保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法，该方法对保健品如荣格牌密之源胶囊中的盐酸氨基葡萄糖专属性强、线性良好、重现性好。
本发明采用如下技术方案：
保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法，包括如下步骤：
步骤一，配制溶液：分别配制异硫氰酸苯酯甲醇溶液、缓冲液、冰醋酸水溶液；
步骤二，制备对照品溶液及供试品溶液：分别制备对照品溶液、样品溶液；
步骤三，对照品溶液及样品溶液的衍生：将对照品溶液和样品溶液分别进行衍生；
步骤四，测定：色谱条件为：
色谱柱：C18，4.6*250mm，5μm；
检测波长：254nm；
进样体积：10μL；
流速：1.0mL/min；
柱温：室温；
设定梯度洗脱程序；
分别将衍生后的对照品溶液和样品溶液注入液相色谱仪，按色谱条件上机分析，记录色谱峰面积，外标法定量。
其中一些实施例中，步骤一中所述配制异硫氰酸苯酯甲醇溶液具体为：准确移取5mL异硫氰酸苯酯至100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀；步骤一中所述配制缓冲液具体为：分别配制0.2mol/L磷酸二氢钠水溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠水溶液，按照一定比例混合，配制成缓冲液；步骤一中所述冰醋酸水溶液的配制具体为：将0.4mL冰醋酸用水稀释至1000ml。
其中一些实施例中，步骤一中配制缓冲液时，将磷酸二氢钠水溶液和磷酸氢二钠水溶液按照体积比5：95的比例混合，配制成pH＝8.3的缓冲液。
其中一些实施例中，步骤二中所述制备对照品溶液具体为：精密称取氨基葡萄糖盐酸盐对照品10mg置于10ml容量瓶中，加水溶剂稀释至刻度，摇匀；步骤二中所述制备样品溶液具体为：取保健食品内容物，称取0.06g样品，精密称定，置于100ml容量瓶中，加水适量，超声提取15min，冷却定容，摇匀，取10ml高速离心，上清液作为供试品。
其中一些实施例中，步骤三中所述对照品溶液及样品溶液的衍生具体为：吸取3ml标准系列溶液、样品溶液置具塞试管中，加入3ml缓冲溶液，3ml异硫氰酸苯酯甲醇溶液，漩涡震荡混匀，水浴加热，冷水冷却至室温；分别加入3ml正己烷，充分振荡，静置或离心；取下层液，过有机微孔滤膜，上机，同时做试剂空白试验。
其中一些实施例中，步骤二中所述离心的速率为4000r/min，离心时间为10min。
其中一些实施例中，步骤三中所述水浴加热具体为80℃水浴加热20min；步骤三中所述静置时间为10min，所述离心为于4000r/min下离心5min；步骤三中所述有机微孔滤膜为0.45μm有机微孔滤膜。
其中一些实施例中，所述保健食品为荣格牌密之源胶囊。
本发明与现有技术相比，其有益效果为：
本发明通过采用柱前衍生法对对照及样品进行预处理，然后用反向高效液相色谱法进行分析。本发明的方法测定保健品如荣格牌密之源胶囊中的盐酸氨基葡萄糖专属性强、线性良好、重现性好，能很好地解决了GB/T 20365-2006《硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量的测定液相色谱法》只适用于盐酸氨基葡萄糖纯物质检测的局限性，适用于如荣格牌密之源胶囊等保健品较复杂样品中盐酸氨基葡萄糖测定的液相(紫外检测器)分析。
明显缩短了分析时间，分析效率提高了3倍，且改进后的检测方法依然符合色谱分析法的要求，目标物质的重复性也符合要求，为目标物质较单一的样品的检测提供了检测基础，具有重要的指导意义。
附图说明
图1为盐酸氨基葡萄糖对照色谱图；
图2为荣格牌密之源胶囊色谱图；
图3为试剂空白色谱图；
图4为骨胶原蛋白粉色谱图；
图5为酪蛋白磷酸肽色谱图；
图6为二氧化肽色谱图；
图7为碳酸钙色谱图；
图8-1为0.05mg/ml标准溶液的色谱图；
图8-2为0.1mg/ml标准溶液的色谱图；
图8-3为0.15mg/ml标准溶液的色谱图；
图8-4为0.2mg/ml标准溶液的色谱图；
图8-5为0.25mg/ml标准溶液的色谱图；
图9为盐酸氨基葡萄糖校准曲线图；
图10-1为对照品衍生化后在室温放置1h后测得的色谱图；
图10-2为对照品衍生化后在室温放置2h后测得的色谱图；
图10-3为对照品衍生化后在室温放置3h后测得的色谱图；
图10-4为对照品衍生化后在室温放置4h后测得的色谱图；
图10-5为对照品衍生化后在室温放置5h后测得的色谱图；
图10-6为对照品衍生化后在室温放置6h后测得的色谱图；
图11-1为采用本发明测定方法测定的对照品001的色谱图；
图11-2为采用本发明测定方法测定的对照品002的色谱图，对照001与对照002为平行进样，一个对照进样两次；
图11-3为采用本发明测定方法测定的样品001的色谱图；
图11-4为采用本发明测定方法测定的样品002的色谱图，样品001与样品002为同一样品的平行进样，即样品001进样两次；
图11-5为采用本发明测定方法测定的样品003的色谱图；
图11-6为采用本发明测定方法测定的样品004的色谱图，样品003与样品004为平行进样，即样品002进样两次；
图12-1为采用GB/T 20365-2006测定的对照品1的色谱图；
图12-2为采用GB/T 20365-2006测定的对照品2的色谱图，对照品1与对照品2为同一对照的平行进样；
图12-3为采用GB/T 20365-2006测定的样品1-1的色谱图；
图12-4为采用GB/T 20365-2006测定的样品1-2的色谱图，样品1-1与样品1-2为同一样品的平行进样。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等效形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法，包括如下步骤：
步骤一，配制溶液：分别配制异硫氰酸苯酯甲醇溶液、缓冲液、冰醋酸水溶液；
步骤二，制备对照品溶液及供试品溶液：分别制备对照品溶液、样品溶液；
步骤三，对照品溶液及样品溶液的衍生：将对照品溶液和样品溶液分别进行衍生；
步骤四，测定：色谱条件为：
色谱柱：C18，4.6*250mm，5μm；
检测波长：254nm；
进样体积：10μL；
流速：1.0mL/min；
柱温：室温；
设定梯度洗脱程序；
分别将衍生后的对照品溶液和样品溶液注入液相色谱仪，按色谱条件上机分析，记录色谱峰面积，外标法定量。
一实施例中，步骤一中所述配制异硫氰酸苯酯甲醇溶液具体为：准确量取5mL异硫氰酸苯酯至100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀；步骤一中所述配制缓冲液具体为：分别配制0.2mol/L磷酸二氢钠水溶液(称取磷酸二氢钠24g加水溶解稀释至1000ml)、0.2mol/L磷酸氢二钠水溶液(称取磷酸氢二钠28.4g加水溶解稀释至1000ml)，按照一定比例混合，配制成缓冲液；步骤一中所述冰醋酸水溶液的配制具体为：将0.4mL冰醋酸用水稀释至1000ml。
一实施例中，步骤一中配制缓冲液时，将磷酸二氢钠水溶液和磷酸氢二钠水溶液按照体积比5：95的比例混合，配制成pH＝8.3的缓冲液，且用氢氧化钠溶液调节pH值。
一实施例中，步骤二中所述制备对照品溶液具体为：精密称取氨基葡萄糖盐酸盐对照品10mg置于10ml容量瓶中，加水溶剂稀释至刻度，摇匀；步骤二中所述制备样品溶液具体为：取保健食品内容物，称取0.06g样品，精密称定，置于100ml容量瓶中，加纯水适量，超声提取15min，冷却定容，摇匀，取10ml高速离心，上清液作为供试品。
一实施例中，步骤三中所述对照品溶液及样品溶液的衍生具体为：吸取3ml标准系列溶液、样品溶液置具塞试管中，加入3ml缓冲溶液，3ml异硫氰酸苯酯甲醇溶液，漩涡震荡混匀，水浴加热，冷水冷却至室温；分别加入3ml正己烷，充分振荡，静置或离心；取下层液，过有机微孔滤膜，上机，同时做试剂空白试验。
一实施例中，步骤二中所述离心的速率为4000r/min，离心时间为10min。
一实施例中，步骤三中所述水浴加热具体为80℃水浴加热20min；步骤三中所述静置时间为10min，所述离心为于4000r/min下离心5min；步骤三中所述有机微孔滤膜为0.45μm有机微孔滤膜。
一实施例中，所述保健食品为荣格牌密之源胶囊。
下面通过一个实施例对本发明做进一步的说明。
实施例1
试验样品：荣格牌密之源胶囊。
试验仪器如下：
电子天平：型号为SQP-34091697，规格为万分之一，厂家为赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；
超声波清洗器：型号为KQ-50B，厂家为昆山市超声仪器有限公司；
电热恒温水浴锅，型号为SH系列，厂家为上杭仪器有限公司；
快速混匀器：型号为XK96-B，厂家为江苏新康医疗器械有限公司；
离心机：型号为80-2，厂家为江苏新康医疗器械有限公司；
高效液相色谱仪(附紫外检测器)：型号为LC-16，厂家为岛津仪器(苏州)有限公司。
试剂及对照品如下：
水：GB/T 6682规定的一级水；
异硫氰酸苯酯：分析纯；
甲醇：色谱纯；
磷酸二氢钠：分析纯；
磷酸氢二钠：分析纯；
氢氧化钠：分析纯；
冰乙酸：分析纯；
正己烷：分析纯
对照品：D-盐酸氨基葡萄糖，中国食品药品检定研究院，纯度100％。
保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法，包括如下步骤：
步骤一，溶液的配制：配制异硫氰酸苯酯甲醇溶液：准确量取5mL异硫氰酸苯酯至100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀。
配制缓冲液：先分别配制0.2mol/L磷酸二氢钠(称取24g至1000ml)及0.2mol/L磷酸氢二钠(28.4g至1000ml)的水溶液，然后按体积V(磷酸二氢钠)：V(磷酸氢二钠)＝5：95的比例混合，配制成pH＝8.3的缓冲液(用氢氧化钠溶液调节pH值)。
配制0.04％冰醋酸：吸取0.4mL冰醋酸稀释至1000ml。
步骤二，对照品溶液及供试品溶液的制备：
对照品溶液的制备：精密称取氨基葡萄糖盐酸盐对照品10mg置于10ml容量瓶中，加水溶剂稀释至刻度，摇匀。
样品溶液的制备：取本品10粒，取出内容物混匀，称取约0.04g～0.08g样品，精密称定，置于100ml容量瓶中，加水适量，超声提取15min，冷却定容，摇匀，取约10ml高速离心10min(4000r/min)，上清液作为供试品，
步骤三：对照品溶液及样品溶液的衍生：精密吸取3ml标准系列溶液、样品溶液置具塞试管中，加入3ml缓冲溶液，3ml异硫氰酸苯酯溶液，漩涡震荡混匀，置80℃水浴加热20min，冷水冷却至室温。分别加入3ml正己烷，充分振荡，静置10min(或4000r/min离心5min)。取下层液，过0.45μm有机微孔滤膜，上机，同时做试剂空白试验。
步骤四，测定：
色谱条件：
色谱柱：C18，4.6*250mm，5μm；检测波长：254nm；进样体积：10μL
流速：1.0mL/min。柱温：室温。
梯度洗脱程序检表1。
表1梯度洗脱程序
Figure BDA0002237204220000071
分别将衍生后的对照品溶液和样品溶液注入液相色谱仪，按色谱条件上机分析，记录色谱峰面积，外标法定量。
结果计算：被测物的含量按式(1)计算
Figure BDA0002237204220000072
式中：
A样：样品峰面积；
A对：对照品峰面积；
M对：对照品质量，mg；
M样：样品质量，mg；
V样：样品稀释倍数，ml；
V对：对照品稀释倍数，ml；
C对含：对照品含量。
计算结果保留三位有效数字。
精密度：在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的1.5％。
对本发明的测定方法进行方法学验证。
1、专属性
按照所述方法，分别对对照品、荣格牌密之源胶囊、试剂空白、骨胶原蛋白粉、酪蛋白磷酸肽、二氧化硅、碳酸钙进行色谱分析，观察目标峰是否能完全分离(分离度≥1.5)，在目标峰处是否有其他原辅料的干扰。色谱图见图1至图7。
从图1至图7可以看出，衍生后盐酸氨基葡萄糖色谱峰分离良好，分离度满足要求，在目标峰附近没有色谱峰干扰，其他原辅料在目标峰处(保留时间8.4min附近)未产生杂质峰，说明该方法用在荣格牌密之源胶囊中盐酸氨基葡萄糖的测定专属性强。
2、线性
对照品溶液的制备：精密称取氨基葡萄糖盐酸盐对照品10mg置于10ml容量瓶中，加水溶剂稀释至刻度，摇匀。此储备液中氨基葡萄糖盐酸盐浓度为1.0mg/ml。分别吸取1.0mg/ml的标准储备溶液0.5ml，1.0ml，1.5ml，2.0ml，2.5ml至10ml容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，配置成浓度为0.05mg/ml，0.1mg/ml，0.15mg/ml，0.2mg/ml，0.25mg/ml的标准溶液。按本申请方法进行衍生化后进行色谱分析，绘制标准曲线，以观察线性。试验图谱见图8-1至图8-5，对应的定量结果见表2至表6，线性结果见图9和表7[定量方法为外标法，函数f(x)＝7.34217e+006x-32988.6，Rr1＝0.9989451，Rr2＝0.9978912，平均RF：7.087568e+006，RFSD：1.588248e+005，RFRSD：2.240893，拟合类型；直线，零点：未过原点；加权回归：无，检测器名：检测器A]。
表2 0.05mg/ml标准溶液的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子 浓度
RT:8.380 8.380 355434 23493 6876 3.897 1.643 0.050
表3 0.1mg/ml标准溶液的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:8.380 8.386 701112 46367 6896 5.603 1.637
表4 0.15mg/ml标准溶液的定量结果
Figure BDA0002237204220000091
表5 0.2mg/ml标准溶液的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子 浓度
RT:8.380 8.451 1416426 92274 6803 5.918 1.640 0.202
表6 0.25mg/ml标准溶液的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子 浓度
RT:8.380 8.483 1833320 118320 6726 6.052 1.641 0.254
表7校准曲线浓度/面积对应关系表
浓度(比) 平均面积 面积
1 0.050 355434.4 355434
2 0.100 701112.3 701112
3 0.150 1035392.6 1035393
4 0.200 1416426.0 1416426
5 0.250 1833320.4 1833320
从图8可以看出盐酸氨基葡萄糖浓度在0.05mg/ml到0.25mg/ml之间校准曲线相关系数达到0.998，线性良好。
3、重现性
按照方法规定由同一操作人员，同一仪器，不同时间(对照品衍生化后在室温放置1h、2h、3h、4h、5h、6h)，对同一样品按本发明所述色谱条件上机测定。试验图谱见图10-1～图10-6，对应的定量结果分见表8至表13，RSD值见表14。
表8对照品衍生化后在室温放置1h的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:8.240 8.240 1178943 79245 6870 6.144 1.647
表9对照品衍生化后在室温放置2h的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:8.240 8.251 1181618 79026 6838 6.121 1.650
表10对照品衍生化后在室温放置3h的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:8.240 8.256 1181789 78758 6779 6.069 1.630
表11对照品衍生化后在室温放置4h的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:8.240 8.264 1182584 78789 6804 6.089 1.631
表12对照品衍生化后在室温放置5h的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:8.240 8.261 1181283 78412 6736 6.103 1.630
表13对照品衍生化后在室温放置6h的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:8.240 8.247 1181685 78520 6728 6.100 1.629
表14盐酸氨基葡萄糖峰面积重现性试验结果
Figure BDA0002237204220000101
从上表14可以看出，按照方法规定由同一操作人员，同一仪器，不同时间(对照品衍生化后在室温放置1h、2h、3h、4h、5h、6h)，对同一样品按本发明所述色谱条件上机测试测得盐酸氨基葡萄糖峰面积的RSD为0.10％，重现性良好。表明衍生物在室温条件下放置6h以内稳定。
4、采用本发明的方法测试荣格牌密之源胶囊中D-盐酸氨基葡萄糖情况
测定样品的图谱见图11-1至图11-6，对应的定量结果见表15至表20。计算结果见表21。
表15对照品001的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:8.395 8.395 547587 36425 7011 5.063 1.711
表16对照品002的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:8.395 8.390 547408 36346 6976 5.062 1.713
表17样品001的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:8.395 8.379 553087 36794 6978 4.949 1.704
表18样品002的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:8.395 8.389 553373 36852 7001 4.964 1.706
表19样品003的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:8.395 8.374 551583 36712 6976 4.845 1.698
表20样品004的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:8.395 8.363 551251 36771 6985 4.796 1.689
表21荣格牌密之源胶囊计算结果
Figure BDA0002237204220000111
由图11-1至图11-6可以看出样品衍生后盐酸氨基葡萄糖色谱峰分离良好，分离度满足要求，在目标峰附近没有色谱峰干扰。由表21可以看出测试结果平行性良好，结合产品投料配比，此结果符合理论投料含量。
5、采用GB/T 20365-2006《硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量测定》测试荣格牌密之源胶囊中D-盐酸氨基葡萄糖情况。
测定样品图谱见图12-1至图12-4，对应的测量结果见表22至表25。
表22对照品1的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:2.571 2.571 685426 113862 3654 -- --
表23对照品2的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:2.571 2.571 697296 116225 3567 -- --
表24样品1-1的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:2.571 2.574 1222370 147033 2965 -- --
表25样品1-2的定量结果
名称 保留时间 面积 高度 理论塔板数 分离度 分离因子
RT:2.571 2.574 1244319 148352 2971 -- --
由图12-1至图12-4可以看出GB/T 20365-2006《硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量测定》比较适用于纯物质的测定，且出峰时间短(即在C18柱上保留效果较差)，对于成分较复杂的物质，图谱无法完全分离开来，不符合色谱分析的要求，即不适用于较复杂样品的分析。
通过以上试验表明，本发明的方法测定荣格牌密之源胶囊中的盐酸氨基葡萄糖专属性强、线性良好、重现性好，能很好地解决了GB/T 20365-2006《硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量的测定液相色谱法》只适用于盐酸氨基葡萄糖纯物质检测的局限性，适用于荣格牌密之源胶囊等保健品较复杂样品中盐酸氨基葡萄糖测定的液相(紫外检测器)分析。
上述实施例对本发明的实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下做出各种变化。

Claims (8)

1.保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，配制溶液：分别配制异硫氰酸苯酯甲醇溶液、缓冲液、冰醋酸水溶液；
步骤二，制备对照品溶液及供试品溶液：分别制备对照品溶液、样品溶液；
步骤三，对照品溶液及样品溶液的衍生：将对照品溶液和样品溶液分别进行衍生；
步骤四，测定：色谱条件为：
色谱柱：C18，4.6*250mm，5μm；
检测波长：254nm；
进样体积：10μL；
流速：1.0mL/min；
柱温：室温；
设定梯度洗脱程序；
分别将衍生后的对照品溶液和样品溶液注入液相色谱仪，按色谱条件上机分析，记录色谱峰面积，外标法定量。
2.根据权利要求1所述的保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法，其特征在于，步骤一中所述配制异硫氰酸苯酯甲醇溶液具体为：准确移取5mL异硫氰酸苯酯至100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀；步骤一中所述配制缓冲液具体为：分别配制0.2mol/L磷酸二氢钠水溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠水溶液，按照一定比例混合，配制成缓冲液；步骤一中所述冰醋酸水溶液的配制具体为：移取0.4mL冰醋酸用水稀释至1000ml。
3.根据权利要求2所述的保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法，其特征在于，步骤一中配制缓冲液时，将磷酸二氢钠水溶液和磷酸氢二钠水溶液按照体积比5：95的比例混合，配制成pH＝8.3的缓冲液。
4.根据权利要求1所述的保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法，其特征在于，步骤二中所述制备对照品溶液具体为：精密称取氨基葡萄糖盐酸盐对照品10mg置于10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；步骤二中所述制备样品溶液具体为：取保健食品内容物，称取0.06g样品，精密称定，置于100ml容量瓶中，加水适量，超声提取15min，冷却定容，摇匀，取10ml高速离心，上清液作为供试品。
5.根据权利要求1所述的保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法，其特征在于，步骤三中所述对照品溶液及样品溶液的衍生具体为：吸取3ml标准系列溶液、样品溶液置具塞试管中，加入3ml缓冲溶液，3ml异硫氰酸苯酯甲醇溶液，漩涡震荡混匀，水浴加热，冷水冷却至室温；分别加入3ml正己烷，充分振荡，静置或离心；取下层液，过有机微孔滤膜，上机，同时做试剂空白试验。
6.根据权利要求4所述的保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法，其特征在于，步骤二中所述离心的速率为4000r/min，离心时间为10min。
7.根据权利要求5所述的保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法，其特征在于，步骤三中所述水浴加热具体为80℃水浴加热20min；步骤三中所述静置时间为10min，所述离心为于4000r/min下离心5min；步骤三中所述有机微孔滤膜为0.45μm有机微孔滤膜。
8.根据权利要求1至7任一项所述的保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法，其特征在于，所述保健食品为荣格牌密之源胶囊。
CN201910987670.XA 2019-09-06 2019-10-17 保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法 Pending CN110715986A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2019108422381 2019-09-06
CN201910842238 2019-09-06

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110715986A true CN110715986A (zh) 2020-01-21

Family

ID=69212768

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910987670.XA Pending CN110715986A (zh) 2019-09-06 2019-10-17 保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110715986A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112816587A (zh) * 2020-12-31 2021-05-18 深圳太太药业有限公司 一种含有活性肽、有机钙的氨糖软骨素制剂中氨糖含量的检测方法
CN115166102A (zh) * 2022-08-11 2022-10-11 中国医学科学院药用植物研究所海南分所 硫酸软骨素和氨基葡萄糖及其衍生物的uplc-pda测定方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102406749A (zh) * 2010-11-22 2012-04-11 九芝堂股份有限公司 一种同时测定驴胶补血制剂中六种氨基酸含量的hplc测定方法
CN104098581A (zh) * 2014-07-17 2014-10-15 苏州大学 来自罗丹明b、二亚乙基三胺和异硫氰酸苯酯的荧光探针及其制备方法和应用
CN106383181A (zh) * 2016-08-27 2017-02-08 河北圣雪大成制药有限责任公司 柱前衍生‑高效液相色谱检测发酵液中缬氨酸含量的方法
CN106706782A (zh) * 2016-12-16 2017-05-24 江苏艾兰得营养品有限公司 一种运用高效液相色谱法测定氨糖含量的方法
CN109239219A (zh) * 2018-09-26 2019-01-18 金花企业(集团)股份有限公司西安金花制药厂 一种转移因子胶囊中多肽的定量检测方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102406749A (zh) * 2010-11-22 2012-04-11 九芝堂股份有限公司 一种同时测定驴胶补血制剂中六种氨基酸含量的hplc测定方法
CN104098581A (zh) * 2014-07-17 2014-10-15 苏州大学 来自罗丹明b、二亚乙基三胺和异硫氰酸苯酯的荧光探针及其制备方法和应用
CN106383181A (zh) * 2016-08-27 2017-02-08 河北圣雪大成制药有限责任公司 柱前衍生‑高效液相色谱检测发酵液中缬氨酸含量的方法
CN106706782A (zh) * 2016-12-16 2017-05-24 江苏艾兰得营养品有限公司 一种运用高效液相色谱法测定氨糖含量的方法
CN109239219A (zh) * 2018-09-26 2019-01-18 金花企业(集团)股份有限公司西安金花制药厂 一种转移因子胶囊中多肽的定量检测方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘利萍 等: "HPLC测定盐酸氨基葡萄糖的柱前衍生化条件的响应面优化", 《营养学报》 *
黄鑫 等: "反相高效液相色谱法测定氨基葡萄糖硫酸盐", 《福建师范大学学报》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112816587A (zh) * 2020-12-31 2021-05-18 深圳太太药业有限公司 一种含有活性肽、有机钙的氨糖软骨素制剂中氨糖含量的检测方法
CN115166102A (zh) * 2022-08-11 2022-10-11 中国医学科学院药用植物研究所海南分所 硫酸软骨素和氨基葡萄糖及其衍生物的uplc-pda测定方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106124429A (zh) 一种饲料可消化碳水化合物总量的仿生消化测定方法
CN103472025B (zh) 紫檀香品质鉴定的方法
CN113702541B (zh) 茯苓药材特征图谱构建方法以及茯苓三萜类成分检测方法
CN111929391A (zh) 用于准确测定人血清中维生素a和e浓度的试剂盒及检测方法
CN110715986A (zh) 保健食品中盐酸氨基葡萄糖的测定方法
CN111896647A (zh) 一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中21种有机酸的试剂盒
CN106124684A (zh) 一种石榴皮止泻散的定性与定量检测方法
CN107941963A (zh) 一种增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法
CN113759037B (zh) 南葶苈子和/或北葶苈子配方颗粒特征图谱及其构建方法和鉴别方法
CN110412142A (zh) 一种检测a40926含量及有关物质的方法
CN113325100B (zh) 一种同时测定多种脂肪酸在血液中含量的方法及其应用
CN109613127A (zh) 一种鉴定痛风性关节炎生物标记物的方法及检测试剂盒
CN113325101B (zh) 一种盐酸氨基葡萄糖制剂在不同介质中溶出度的检测方法
CN111426760B (zh) 一种多索茶碱原料药中基因毒性杂质的测定方法
CN114324647A (zh) 一种同时测定奶粉中维生素k1和k2的方法与应用
CN114689771A (zh) 一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的方法及试剂盒
CN106153792B (zh) 一种香加皮的指纹图谱及其质量检测方法
CN107290468B (zh) 一种液质联用定量检测小儿消食片中槟榔碱含量的方法
CN106596783A (zh) 一种测定大蒜素片中大蒜素含量的方法
CN115656390B (zh) 一种氨酚羟考酮缓释片的含量测定方法
CN111307990A (zh) 一种同时测定人工虎骨粉中胱氨酸和甲硫氨酸含量的方法
CN105929051B (zh) 一种奶粉中肌醇测定方法
CN116026971B (zh) 一种用于人血清和血浆中全谱脂溶性维生素及其代谢物检测的试剂盒及检测方法
CN112858562A (zh) 一种中成药中当归的鉴别方法
Razavi et al. Calcium determination in EDTA treated plasma by colorimetric method and microplate reading format

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200121

RJ01 Rejection of invention patent application after publication