CN110711245A - 提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药,其包括:蒲公英多糖15‑18份、大豆多肽粉8‑10份、胶原蛋白粉8‑10份、枸杞5‑8份、紫贻贝提取物12‑18份、螺旋藻粉10‑15份、蜂胶3‑5份、核桃仁8‑10份、大枣3‑5份、西洋参发酵粉2‑3份、黄芪3‑5份、黄精3‑5份、人参提取物0.8‑1份、复合B族维生素0.2‑0.3份、水苏糖5‑8份。其通过富含紫贻贝多糖和小分子肽等活性成分的紫贻贝提取物、高皂苷含量的西洋参提取物与其他含有增强免疫力成分的组分合理复配使用,以达到提高机体免疫力、缓解疲劳的效果。
Description
技术领域
本发明涉及药品开发领域。更具体地说,本发明涉及一种提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药及制备方法。
背景技术
现代社会的竞争加剧,节奏加快,现代人长期处于紧张的生活环境,工作压力大及过度疲劳,加上不正常的生活饮食习惯,造成免疫力普遍减弱并导致内分泌、神经系统、消化系统失调,免疫力逐渐降低。
免疫力是指机体抵抗外来侵袭,维护体内环境稳定性的能力。免疫力是人体自身的防御机制,是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等),处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞,以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力,是人体识别和排除“异己”的生理反应。免疫力低下最直接的表现就是容易生病。因经常患病会加重机体的消耗,所以伴随有体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现,长此以往会导致身体和智力发育不良,还易诱发重大疾病。
疲劳为一个主观感觉症状,是指一种倦怠、精力不够或周身精疲力竭的感觉。脑力疲劳是一种缺乏动机与警觉的主观感觉,表现为头脑昏沉,做事不易集中注意力甚至思考困难,健忘,欲望下降,工作中易出错,工作效率下降等。体力疲劳是感觉到肌肉缺乏能量或力量,常表现为进行一定的体力活动后容易疲劳,或疲劳不易消失,甚至不同程度地影响日常生活及工作。
疲劳的存在,可产生一系列的临床症状:体力和精力或心理负荷过重所导致的精神困倦、体力不支、心中烦躁、肌肉酸痛、腰背疼痛、胸部不适、头昏脑胀、头痛失眠、烦躁易怒、抑郁焦虑,思想难集中、健忘、性功能减退等,最终会影响人们的日常生活、工作和学习。而免疫力下降之后,又使“疲劳综合症”更加突出和恶化,从而形成一个恶性循环。
目前,现有技术中提高免疫力、缓解疲劳,除调整日常生活习惯之外,可以补充微量元素、维生素等进行辅助,或者服用一些口服类药物。然而这些方法或药物取得的效果差,成分复杂,成本高,服用后往往还会出现耐药性等诸多副作用。
发明内容
为解决上述技术问题,本发明提供了一种提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药及其制备方法,其通过富含紫贻贝多糖和小分子肽等活性成分的紫贻贝提取物、高皂苷含量的西洋参提取物与其他含有增强免疫力成分的组分合理复配使用,以达到提高机体免疫力、缓解疲劳的效果。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点,提供了一种提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药,按重量份计,其包括:蒲公英多糖15-18份、大豆多肽粉8-10份、胶原蛋白粉8-10份、枸杞5-8份、紫贻贝提取物12-18份、螺旋藻粉10-15份、蜂胶3-5份、核桃仁8-10份、大枣3-5份、西洋参发酵粉2-3份、黄芪3-5份、黄精3-5份、人参提取物0.8-1份、复合B族维生素0.2-0.3份、水苏糖5-8份。
优选的,所述紫贻贝提取物的制备方法包括如下步骤:
S11、将紫贻贝进行清洗、脱壳、采肉、去足丝;绞碎后冷冻干燥,再粉碎,以获得紫贻贝冻干粉;
S12、按重量份计,在反应釜中加入紫贻贝冻干粉20-25份、去离子水150-200份,获得酶解原料,再对所述酶解原料进行酶解处理;
所述酶解处理过程包括:
(4)酶解1:将所述酶解原料温度升至20-25℃,再对所述酶解原料进行降温处理,使其按照15℃/min的速率降至-45℃,降至-45℃后维持1min,再对所述酶解原料进行升温处理,使其按照10℃/min的速率升至20-25℃;升至20-25℃后,在所述酶解原料中加入其重量1%的碱性蛋白酶,调节酶解原料pH至7.0-9.0以及调节酶解原料温度至50-60℃,反应5-8h;
将经碱性蛋白酶处理的酶解原料温度调节至40-55℃,加入第一复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后调节pH至6.0-6.5,同时对加入第一复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后的酶解原料进行第一脉冲磁场处理和第一紫外辐射处理,处理时间为10-12h,以获得第一酶解体系;
按重量比计,酶解原料:第一复合酶:壳聚糖:半胱氨酸:亚硫酸钠=1:0.05:0.02:0.03:0.02,所述第一复合酶由磷脂酶、木瓜蛋白酶、风味酶组成,且按重量比计,磷脂酶:木瓜蛋白酶:风味酶=1:0.5:0.5;所述第一脉冲磁场处理为:采用磁场强度为2.5-3.5T的脉冲磁场对所述酶解原料进行20-30个脉冲处理;所述第一紫外辐射处理为:采用波长为180-280nm、功率为40W的紫外灯对酶解原料处理40-60min;
(5)酶解2:将所述第一酶解体系温度调整至20-25℃,再对所述第一酶解体系进行降温处理,使其按照10℃/min的速率降至-45℃,降至-45℃后维持0.5min,再对所述第一酶解第一酶解体系进行升温处理,使其按照10℃/min的速率升至20-25℃;升至20-25℃后,在所述第一酶解体系中加入其重量0.5%的酸性蛋白酶,调节第一酶解体系pH至4.0-6.0以及调节第一酶解体系温度至40-50℃,反应3-4h;
将经酸性蛋白酶处理的第一酶解体系温度调节至40-55℃,加入第二复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后调节pH至6.0-6.5,同时对加入第二复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后的第一酶解体系进行第二脉冲磁场处理和第二紫外辐射处理,处理时间为8-10h,以获得第二酶解体系;
按重量比计,第一酶解体系:第二复合酶:壳聚糖:半胱氨酸:亚硫酸钠=1:0.03:0.02:0.02:0.02,所述第二复合酶由磷脂酶、木瓜蛋白酶、风味酶组成,且按重量比计,磷脂酶:木瓜蛋白酶:风味酶=1:1:0.8;所述第二脉冲磁场处理为:采用磁场强度为2.0-3.0T的脉冲磁场对所述第一酶解体系进行10-12个脉冲处理;所述第二紫外辐射处理为:采用波长为280-320nm、功率为40W的紫外灯对第一酶解体系处理30-40min;
(6)酶解3:将所述第二酶解体系温度调整40-55℃,再对所述第二酶解体系进行降温处理,使其按照5℃/min的速率降至-45℃,降至-45℃后维持0.5min,再对所述第二酶解体系进行升温处理,使其按照10℃/min的速率升至20-25℃;升至20-25℃后,在所述第二酶解体系中加入其重量0.2%的中性蛋白酶,调节第二酶解体系pH至6.0-7.0以及调节第二酶解体系温度至50-60℃,反应1-2h;
将经中性蛋白酶处理的第二酶解体系温度调节至40-55℃,加入第三复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后调节pH至6.0-6.5,同时对加入第三复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后的第二酶解体系进行第三脉冲磁场处理和第三紫外辐射处理,处理时间为8-10h,以获得第三酶解体系;
按重量比计,第二酶解液:第三复合酶:壳聚糖:半胱氨酸:亚硫酸钠=1:0.02:0.01:0.02:0.02,所述第三复合酶由磷脂酶、木瓜蛋白酶、风味酶组成,且按重量比计,磷脂酶:木瓜蛋白酶:风味酶=1:1.2:1.2;所述第三脉冲磁场处理为:采用磁场强度为1.8-2.0T的脉冲磁场对所述酶解原料进行5-8个脉冲处理;所述第三紫外辐射处理为:采用波长为320-400nm、功率为40W的紫外灯对第二酶解体系处理20-30min;
S13、待酶解完成后,对获得的第三酶解体系升温至90℃,维持10min,以完成灭酶活过程,获得紫贻贝粗提体系;
S14、在紫贻贝粗提体系中按其重量的3%加入活性炭,搅拌均匀,在55℃下保温60-90min后离心,去沉渣后得到紫贻贝提取物清液;所述紫贻贝提取物清液在过滤压力0.25-0.35MPa下经硅藻土过滤,以获得紫贻贝粗提液;再在所述紫贻贝粗提液中按其重量3%加入活性炭,静置45-60min,然后离心,去沉渣后获得紫贻贝精提液;
S15、将步骤S14中的紫贻贝精提液经过微滤陶瓷膜进行过滤,操作温度控制在55-65℃,以获得微滤膜透过液;再将微滤膜透过液经过卷式超滤膜进行过滤,操作温度控制在55-65℃,以获得超滤膜透过液;再将超滤膜截留液经过卷式高压反渗透膜进行浓缩,除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质,控制操作温度在35-40℃,以得到紫贻贝提取物浓缩液;
S16、通过真空冷冻干燥方法对紫贻贝提取物浓缩液进行干燥,以获得紫贻贝提取物。
优选的,酶解1和/或酶解2和/或酶解3中,进行脉冲磁场处理和紫外辐射处理的同时进行超声处理,超声功率为100-200W,超声处理时间为10-15min。
优选的,所述西洋参提取物的提取方法包括:
S21、将黑曲霉菌种以及啤酒酵母分别接种于独立的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上,再分别放入霉菌培养箱中,均于28-35℃条件下活化48-72h,以获得活化的黑曲霉菌种以及啤酒酵母;采用配制好的第一液体培养基培养活化的黑曲霉菌种,以获得液态黑曲霉种子液,以及采用配制好的第二液体培养基培养活化的啤酒酵母,以获得液态啤酒酵母种子液;再将所述液态黑曲霉种子液接种到发酵罐中的第一发酵培养基内进行扩大培养,扩大培养温度30-35℃,转速500-800rpm,培养时间为1-2d,以获得黑曲霉孢子悬浮液;以及将所述液态啤酒酵母种子液接种到发酵罐中的第二发酵培养基内进行扩大培养,扩大培养温度30-40℃,转速400-600rpm,培养时间为1-2d,以获得啤酒酵母悬浮液;
S22、按重量份计,在反应釜中加入经粉碎的西洋参40-50份、去离子水80-100份、黑曲霉孢子悬浮液35-45份、啤酒酵母悬浮液10-15份、第三发酵培养基30-35份,以获得发酵体系,并调节所述发酵体系的pH至6.8-7.0;
对所述发酵体系进行三阶段的发酵处理:
第一发酵阶段处理中,发酵温度为25-35℃,并在转速300-400rpm条件下对发酵体系进行搅拌,同时对发酵体系进行第一光照处理和第一磁场处理,处理时间为1-2d;所述第一光照处理为:采用光强为25-30μmol.m-2.s-1的红光以及光强为30-35μmol.m-2.s-1的蓝光照射发酵体系,照射处理时间为40-60min;所述第一磁场处理为:采用50Hz、磁场强度为0.4-0.8mT的交变磁场对发酵体系进行磁场处理,磁场处理时间为40-60min;
第二发酵阶段处理中,发酵温度为25-35℃,并在转速500-600rpm条件下对发酵体系进行搅拌,同时对发酵体系进行第二光照处理和第二磁场处理,处理时间为1-2d;所述第二光照处理为:采用光强为20-24μmol.m-2.s-1的红光以及光强为24-28μmol.m-2.s-1的蓝光照射发酵体系,照射处理时间为30-40min;所述第二磁场处理为;采用50Hz、磁场强度为0.35-0.65mT的交变磁场对发酵体系进行磁场处理,磁场处理时间为30-40min;
第三发酵阶段处理中,发酵温度为25-35℃,并在转速300-400rpm条件下对发酵体系进行搅拌,同时对发酵体系进行第三光照处理和第三磁场处理,处理时间为1-2d;所述第三光照处理为:采用光强为16-20μmol.m-2.s-1的红光以及光强为20-22μmol.m-2.s-1的蓝光照射发酵体系,照射处理时间为20-30min;所述第三磁场处理为:采用50Hz、磁场强度为0.25-0.55mT的交变磁场对发酵体系进行磁场处理,磁场处理时间为20-30min;
S23、将经步骤S22中发酵处理的发酵体系溶液置于微波加热器中,所述微波加热器的压强为0.1-0.3个大气压,微波功率为800-850w,加热40-45min;
以及S24、将经步骤S23处理得到的溶液进行加压浓缩,使其体积缩小至原来体积的25-30%降温至20-25℃后过滤分离得到水相和固相;固相用去离子水溶解,再经活性炭脱色、真空干燥以及粉碎过筛后得到西洋参发酵粉。
优选的,所述步骤S12中,每天对接种到第一发酵培养基中的液态黑曲霉种子液进行超声处理,且超声处理频率为20-40Khz,处理时间为30min。
优选的,其特征在于,所述步骤S21中,按重量比计,第一液体培养基包括:茶多酚1%、蔗糖1.5%、葡萄糖2.5%、麦芽提取物5%、CoCl.6H2O 0.1%、CuSO4.5H2O 0.05%、FeNaEDTA 2%、H3BO30.25%、Na2MoO4.2H2O 0.15%、ZnSO4.7H2O 0.1%、MgSO4 0.1%、KNO30.1%、MnSO4.H2O 0.2%、去离子水86.95%。
优选的,所述步骤S21中,按重量比计,第二液体培养基包括:麦芽汁35%、葡萄糖10%、蛋白胨15%、ZnSO4.7H2O 0.1%、CH3COONa 0.15%、MgSO4 0.1%、K2HPO4·3H2O0.1%、MnSO4.H2O 0.2%、去离子水44.35%。
优选的,所述步骤S21中,按重量比计,所述第一发酵培养基包括:番茄汁10%、可溶性淀粉2%、蔗糖2%、葡萄糖2%、玉米粉2.5%、FeSO4.7H2O 0.1%、MgSO4 0.05%、KNO30.05%、CuCl2.2H2O 0.1%、(NH4)6Mo7O24.7H2O 0.15%、MnSO4.H2O 0.1%、去离子水80.95%。
优选的,所述步骤S21中,按重量比计,所述第二发酵培养基包括:豆芽汁15%、蛋白胨10%、玉米粉8%、葡萄糖10%、NaCl 0.5%、MgSO4 0.05%、K2HPO4·3H2O 0.15%、MnSO4.H2O 0.2%、去离子水56.1%。
还提供一种提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药的制备方法,其包括:
S100、将所述枸杞、核桃仁、大枣、黄芪、黄精均进行粉碎,且均过120-150目筛;
S200、按权利要求1中的组分用量称取各组分,充分混匀,将混匀后的混合物置于真空干燥器内干燥,使混合物含水量为3-5%;
S300、制备空心胶囊,按重量百分比计,所述空心胶囊由如下重量百分比的原料制成:羟丙甲纤维素30-32%、果胶8-10%、表面活性剂0.4-0.5%、助凝剂2-3%、着色剂0.03-0.05%、甘氨酸0.03-0.05%、二氧化钛2-3%、甘油0.2-0.4%、无水乙醇10-12%、半胱氨酸1-1.5%、余量为水;
所述空心胶囊的制备方法包括:
(5)称取上述对应比例的空心胶囊制备原料,先在溶胶罐内加入水,加热至85-90℃后加入对应比例的羟丙甲纤维素和果胶,以获得初始胶液,且对所述初始胶液进行超声处理及抽真空处理,所述超声处理频率为100-110kHZ,所述抽真空处理的真空度为-0.05—-0.08Mpa,且超声处理及抽真空处理过程中于80-100转/min条件下对初始胶液进行搅拌;
(6)将初始胶液冷却至52±1℃温度,保温、静置8小时;再降温至32±1℃,于50-80转/min搅拌条件下加入对应比例的表面活性剂、甘氨酸、甘油、无水乙醇、半胱氨酸,继续搅拌均匀,以获得胶囊胶液;
(7)在所述胶囊胶液中加入对应比例的着色剂和二氧化钛,搅拌均匀后,于温度为52℃条件下蘸胶,且于24℃条件下定型,以获得胶囊胚体;
(8)将所述胶囊胚体进行干燥,使其含水量为3-5%;再对所述胶囊胚体进行脱模、切割,以获得所述空心胶囊;
S400、将步骤S200中的原料填充至所述空心胶囊中,即得所述提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药。
本发明至少包括以下有益效果:
本发明采用反复急速升温、降温以及多阶段酶解、紫外辐射、脉冲磁场处理方式破坏紫贻贝细胞膜结构使其细胞内部的紫贻贝多糖、小分子肽等活性成分充分析出,有利于人体吸收;采用黑曲霉菌种以及啤酒酵母作为发酵菌种,充分破坏其细胞壁结构,使其内容物可充分析出,同时结合光照和磁场处理促进黑曲霉菌种以及啤酒酵母的生长,进一步提高西洋参提取物中的皂苷含量,两者在通过与其他含有增强免疫力成分的组分合理复配使用,以达到提高机体免疫力、缓解疲劳的效果。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现,部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实例对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解,本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
需要说明的是,下述实施方案中所述试验方法,如无特殊说明,均为常规方法,所述试剂和材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得。
<实施例1>
按重量份计,本实施例中的提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药包括:蒲公英多糖15份、大豆多肽粉8份、胶原蛋白粉8份、枸杞5份、紫贻贝提取物12份、螺旋藻粉10份、蜂胶3份、核桃仁8份、大枣3份、西洋参发酵粉2份、黄芪3份、黄精3份、人参提取物0.8份、复合B族维生素0.2份、水苏糖5份。所述复合B族维生素为维生素B1、B12、B3、B6中的一种或多种。
紫贻贝(Mytilus edulis Linnaeus)俗称海虹,属软体动物门,广泛分布于我国辽宁、山东、浙江等省沿海。紫贻贝资源丰富,肉味鲜美,营养价值高,素有“海洋鸡蛋”之称,并且紫贻贝多糖具有抗凝血、抗肿瘤、免疫功能调节等生物活性。因此,本实施例中提供了一种紫贻贝提取物的制备方法,其包括如下步骤:
S11、将紫贻贝进行清洗、脱壳、采肉、去足丝;绞碎后冷冻干燥,再粉碎,以获得紫贻贝冻干粉;
S12、按重量份计,在反应釜中加入紫贻贝冻干粉20-25份(优选22份)、去离子水150-200份(优选180份),获得酶解原料,再对所述酶解原料进行酶解处理;
所述酶解处理过程包括:
(7)酶解1:将所述酶解原料温度升至20-25℃,再对所述酶解原料进行降温处理,使其按照15℃/min的速率降至-45℃,降至-45℃后维持1min,再对所述酶解原料进行升温处理,使其按照10℃/min的速率升至20-25℃;升至20-25℃后,在所述酶解原料中加入其重量1%的碱性蛋白酶,调节酶解原料pH至7.0-9.0(优选8.0)以及调节酶解原料温度至50-60℃(优选55℃),反应5-8h(优选6h);
将经碱性蛋白酶处理的酶解原料温度调节至40-55℃(优选50℃),加入第一复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后调节pH至6.0-6.5,同时对加入第一复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后的酶解原料进行第一脉冲磁场处理和第一紫外辐射处理,处理时间为10-12h(优选11h),以获得第一酶解体系;
按重量比计,酶解原料:第一复合酶:壳聚糖:半胱氨酸:亚硫酸钠=1:0.05:0.02:0.03:0.02,所述第一复合酶由磷脂酶、木瓜蛋白酶、风味酶组成,且按重量比计,磷脂酶:木瓜蛋白酶:风味酶=1:0.5:0.5;所述第一脉冲磁场处理为:采用磁场强度为2.5-3.5T(优选为3.0T)的脉冲磁场对所述酶解原料进行20-30个(优选25个)脉冲处理;所述第一紫外辐射处理为:采用波长为180-280nm、功率为40W的紫外灯对酶解原料处理40-60min(优选50min);
(8)酶解2:将所述第一酶解体系温度调整至20-25℃,再对所述第一酶解体系进行降温处理,使其按照10℃/min的速率降至-45℃,降至-45℃后维持0.5min,再对所述第一酶解第一酶解体系进行升温处理,使其按照10℃/min的速率升至20-25℃;升至20-25℃后,在所述第一酶解体系中加入其重量0.5%的酸性蛋白酶,调节第一酶解体系pH至4.0-6.0(优选8.0)以及调节第一酶解体系温度至40-50℃(优选45℃),反应3-4h(优选3.5h);
将经酸性蛋白酶处理的第一酶解体系温度调节至40-55℃(优选50℃),加入第二复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后调节pH至6.0-6.5,同时对加入第二复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后的第一酶解体系进行第二脉冲磁场处理和第二紫外辐射处理,处理时间为8-10h(优选9h),以获得第二酶解体系;
按重量比计,第一酶解体系:第二复合酶:壳聚糖:半胱氨酸:亚硫酸钠=1:0.03:0.02:0.02:0.02,所述第二复合酶由磷脂酶、木瓜蛋白酶、风味酶组成,且按重量比计,磷脂酶:木瓜蛋白酶:风味酶=1:1:0.8;所述第二脉冲磁场处理为:采用磁场强度为2.0-3.0T(优选2.5T)的脉冲磁场对所述第一酶解体系进行10-12个(优选11个)脉冲处理;所述第二紫外辐射处理为:采用波长为280-320nm、功率为40W的紫外灯对第一酶解体系处理30-40min(优选35min);
(9)酶解3:将所述第二酶解体系温度调整40-55℃(优选50℃),再对所述第二酶解体系进行降温处理,使其按照5℃/min的速率降至-45℃,降至-45℃后维持0.5min,再对所述第二酶解体系进行升温处理,使其按照10℃/min的速率升至20-25℃;升至20-25℃后,在所述第二酶解体系中加入其重量0.2%的中性蛋白酶,调节第二酶解体系pH至6.0-7.0(优选6.5)以及调节第二酶解体系温度至50-60℃(优选55℃),反应1-2h(优选1.5h);
将经中性蛋白酶处理的第二酶解体系温度调节至40-55℃(优选50℃),加入第三复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后调节pH至6.0-6.5,同时对加入第三复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后的第二酶解体系进行第三脉冲磁场处理和第三紫外辐射处理,处理时间为8-10h(优选9),以获得第三酶解体系;
按重量比计,第二酶解液:第三复合酶:壳聚糖:半胱氨酸:亚硫酸钠=1:0.02:0.01:0.02:0.02,所述第三复合酶由磷脂酶、木瓜蛋白酶、风味酶组成,且按重量比计,磷脂酶:木瓜蛋白酶:风味酶=1:1.2:1.2;所述第三脉冲磁场处理为:采用磁场强度为1.8-2.0T(优选1.9T)的脉冲磁场对所述酶解原料进行5-8个(优选6个)脉冲处理;所述第三紫外辐射处理为:采用波长为320-400nm、功率为40W的紫外灯对第二酶解体系处理处理20-30min(优选25min);
上述步骤中,通过急速降温至-45℃使得细胞膜内部产生冰晶,以刺穿细胞膜结构,再急速升温至20-25℃融化冰晶,如此反复可使得细胞膜结构在短时间内急速受到温度冲击而产生结构上的破坏,促使其内容物析出,各种蛋白酶、风味酶进一步对析出的大分子蛋白质进行水解,以形成容易被机体吸收的小分子肽和氨基酸,此外壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠均可以改变细胞膜透性,磷脂酶可通过水解蛋白质影响细胞膜结构,紫外辐射可对细胞膜进行氧化,脉冲磁场也可影响细胞膜结构,使得细胞膜上形成穿孔,上述各种因素均能改变紫贻贝细胞膜的透性,促使其内部的紫贻贝多糖和蛋白质等析出,使其更容易被人体吸收利用,以此增加机体免疫力,缓解疲劳;
S13、待酶解完成后,对获得的第三酶解体系升温至90℃,维持10min,以完成灭酶活过程,获得紫贻贝粗提体系;
S14、在紫贻贝粗提体系中按其重量的3%加入活性炭,搅拌均匀,在55℃下保温60-90min(优选80min)后离心,去沉渣后得到紫贻贝提取物清液;所述紫贻贝提取物清液在过滤压力0.25-0.35MPa下经硅藻土过滤,以获得紫贻贝粗提液;再在所述紫贻贝粗提液中按其重量3%加入活性炭,静置45-60min,然后离心,去沉渣后获得紫贻贝精提液;
S15、将步骤S14中的紫贻贝精提液经过微滤陶瓷膜进行过滤,操作温度控制在55-65℃,以获得微滤膜透过液;再将微滤膜透过液经过卷式超滤膜进行过滤,操作温度控制在55-65℃,以获得超滤膜透过液;再将超滤膜截留液经过卷式高压反渗透膜进行浓缩,除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质,控制操作温度在35-40℃,以得到紫贻贝提取物浓缩液;
S16、通过真空冷冻干燥方法对紫贻贝提取物浓缩液进行干燥,以获得紫贻贝提取物。
优选的,酶解1和/或酶解2和/或酶解3中,进行脉冲磁场处理和紫外辐射处理的同时进行超声处理,超声功率为100-200W(优选为150W),超声处理时间为10-15min,以此通过结合超声处理方式进一步提高活性成本的得率。
西洋参中的皂苷可以有效增强中枢神经,达到静心凝神、消除疲劳、增强记忆力等作用,可适用于失眠、烦躁、记忆力衰退及老年痴呆等症状。由此,本实施例提供了一种西洋参发酵粉的制备方法,其包括如下步骤:
S21、将黑曲霉菌种以及啤酒酵母分别接种于独立的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上,再分别放入培养箱中,均于28-35℃(优选32℃)条件下活化48-72h(优选60h),以获得活化的黑曲霉菌种以及啤酒酵母;采用配制好的第一液体培养基培养活化的黑曲霉菌种,以获得液态黑曲霉种子液,以及采用配制好的第二液体培养基培养活化的啤酒酵母,以获得液态啤酒酵母种子液;再将所述液态黑曲霉种子液接种到发酵罐中的第一发酵培养基内进行扩大培养,扩大培养温度30-35℃(优选32℃),转速500-800rpm条件下搅拌,培养时间为1-2d,以获得黑曲霉孢子悬浮液;以及将所述液态啤酒酵母种子液接种到发酵罐中的第二发酵培养基内进行扩大培养,扩大培养温度30-40℃(优选35℃),转速400-600rpm条件下搅拌,培养时间为1-2d,以获得啤酒酵母悬浮液;
其中,所述步骤S11中,按重量比计,第一液体培养基包括:茶多酚1%、蔗糖1.5%、葡萄糖2.5%、麦芽提取物5%、CoCl.6H2O 0.1%、CuSO4.5H2O 0.05%、FeNaEDTA 2%、H3BO30.25%、Na2MoO4.2H2O 0.15%、ZnSO4.7H2O 0.1%、MgSO4 0.1%、KNO3 0.1%、MnSO4.H2O0.2%、去离子水86.95%;
所述步骤S11中,按重量比计,第二液体培养基包括:麦芽汁35%、葡萄糖10%、蛋白胨15%、ZnSO4.7H2O 0.1%、CH3COONa 0.15%、MgSO4 0.1%、K2HPO4·3H2O 0.1%、MnSO4.H2O 0.2%、去离子水44.35%;
按重量比计,所述第一发酵培养基包括:番茄汁10%、可溶性淀粉2%、蔗糖2%、葡萄糖2%、玉米粉2.5%、FeSO4.7H2O 0.1%、MgSO4 0.05%、KNO3 0.05%、CuCl2.2H2O 0.1%、(NH4)6Mo7O24.7H2O 0.15%、MnSO4.H2O 0.1%、去离子水80.95%;
按重量比计,所述第二发酵培养基包括:豆芽汁15%、蛋白胨10%、玉米粉8%、葡萄糖10%、NaCl 0.5%、MgSO4 0.05%、K2HPO4·3H2O 0.15%、MnSO4.H2O 0.2%、去离子水56.1%;
S22、按重量份计,在反应釜中加入经粉碎的西洋参40-50份(优选45份)、去离子水200-400份(优选300份)、黑曲霉孢子悬浮液20-30份(优选25份)、啤酒酵母悬浮液10-15份(优选2份)、第三发酵培养基20-25份(优选22份),以获得发酵体系,并调节所述发酵体系的pH至6.8-7.0;其中,按重量比计,所述第三发酵培养基包括:麦芽糊精3%、豆粕粉4.5%、木糖5%、酵母膏1%、La(NO3)3.6H2O 0.05%、纤维素酶0.15%、无水乙醇3%、果胶酶0.15%、MgSO4 0.05%、K2HPO4·3H2O 0.1%、NH4NO3 0.15%、MnSO4.H2O 0.1%、去离子水82.75%;
对所述发酵体系进行三阶段的发酵处理:
第一发酵阶段处理中,发酵温度为25-35℃(优选32℃),并在转速300-400rpm条件下对发酵体系进行搅拌,同时对发酵体系进行第一光照处理和第一磁场处理,处理时间为1-2d;所述第一光照处理为:采用光强为25-30μmol.m-2.s-1(优选28μmol.m-2.s-1)的红光以及光强为30-35μmol.m-2.s-1(优选32μmol.m-2.s-1)的蓝光照射发酵体系,照射处理时间为40-60min(优选50min);所述第一磁场处理为:采用50Hz、磁场强度为0.4-0.8mT(优选0.6mT)的交变磁场对发酵体系进行磁场处理,磁场处理时间为40-60min(优选50min);
第二发酵阶段处理中,发酵温度为25-35℃(优选32℃),并在转速500-600rpm条件下对发酵体系进行搅拌,同时对发酵体系进行第二光照处理和第二磁场处理,处理时间为1-2d;所述第二光照处理为:采用光强为20-24μmol.m-2.s-1(优选22μmol.m-2.s-1)的红光以及光强为24-28μmol.m-2.s-1(优选25μmol.m-2.s-1)的蓝光照射发酵体系,照射处理时间为30-40min(优选35min);所述第二磁场处理为;采用50Hz、磁场强度为0.35-0.65mT(优选0.5mT)的交变磁场对发酵体系进行磁场处理,磁场处理时间为30-40min(优选35min);
第三发酵阶段处理中,发酵温度为25-35℃(优选32℃),并在转速300-400rpm条件下对发酵体系进行搅拌,同时对发酵体系进行第三光照处理和第三磁场处理,处理时间为1-2d;所述第三光照处理为:采用光强为16-20μmol.m-2.s-1(优选18μmol.m-2.s-1)的红光以及光强为20-22μmol.m-2.s-1(优选21μmol.m-2.s-1)的蓝光照射发酵体系,照射处理时间为20-30min(优选25min);所述第三磁场处理为:采用50Hz、磁场强度为0.25-0.55mT(优选0.4mT)的交变磁场对发酵体系进行磁场处理,磁场处理时间为20-30min(优选25min);
黑曲霉菌种和啤酒酵母均可通过产生纤维素酶来破坏细胞壁结构。因此本步骤中采用黑曲霉菌种和啤酒酵母作为发酵菌种,分别用特定的培养基活化、扩大培养后在对西洋参原料进行三阶段发酵。进一步的,三阶段发酵处理中,红光以及蓝光也能通过调节细胞质膜的通透性来促进其同化作用,并提高酶活,交变磁场则通过细胞膜上钙离子的释放来促进黑曲霉和啤酒酵母的生长,进一步提高纤维素酶的产量和活力。同时,为避免红光、蓝光以及交变磁场长期在恒定数值而对黑曲霉和啤酒酵母的生长产生不良影响,每一发酵阶段红光、蓝光的光强、交变磁场的强度均逐步递减,由此保证黑曲霉和啤酒酵母始终处于较强的生长活力中,以此持续高效产生高活力纤维素酶,进一步提高西洋参提取物中活性成分(如皂苷等)的含量;
S23、将经步骤S22中发酵处理的发酵体系溶液置于微波加热器中,所述微波加热器的压强为0.1-0.3个大气压,微波功率为800-850W,加热40-45min;
以及S24、将经步骤S23处理得到的溶液进行加压浓缩,使其体积缩小至原来体积的10-20%降温至常温后过滤分离得到水相和固相;固相用去离子水溶解,再经活性炭脱色、真空干燥以及粉碎过筛后得到西洋参发酵粉。
<实施例2>
本实施例与实施例1的不同之处仅在于,按重量份计,本实施例中的提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药由以下组分组成:蒲公英多糖18份、大豆多肽粉10份、胶原蛋白粉10份、枸杞8份、紫贻贝提取物18份、螺旋藻粉15份、蜂胶5份、核桃仁10份、大枣5份、西洋参发酵粉3份、黄芪5份、黄精5份、人参提取物1份、复合B族维生素0.3份、水苏糖8份。
<实施例3>
本实施例与实施例1的不同之处仅在于,按重量份计,本实施例中的提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药由以下组分组成:蒲公英多糖16份、大豆多肽粉9份、胶原蛋白粉9份、枸杞7份、紫贻贝提取物15份、螺旋藻粉13份、蜂胶4份、核桃仁9份、大枣4份、西洋参发酵粉2.5份、黄芪4份、黄精4份、人参提取物0.9份、复合B族维生素0.25份、水苏糖7份。
<紫贻贝提取物检测>
先以紫贻贝干粉作为原料,将原料先用碱液调节pH值至8.0-10.0得混合液;再将混合液温度升至45℃搅拌预热,按原料质量的3%加入蛋白酶进行酶解,酶解温度为45℃,酶解时间2小时;将所得酶解产物经灭酶处理,得酶解液;将酶解液置于高压罐中,在120℃下先加压到0.3Mpa,并保持15min;采用超滤膜截留上述高压罐中的酶解液;对经超滤后的酶解液进行干燥,以获得作为对比例1的紫贻贝提取物。再将其与通过本发明实施例1-3中的制备方法获得的紫贻贝提取物进行检测,获得如表1所示的紫贻贝提取物多肽分子量大小及分布范围;以及表2所示的游离氨基酸的种类和含量,以及表3所示的多糖含量和蛋白含量。
表1紫贻贝提取物多肽分子量大小及分布范围
从表1中可以看出,本发明的紫贻贝提取物制备方法中,可通过各种蛋白酶以及风味酶等多种酶类的协同作用,进一步可将大分子蛋白质分解为更容易被胃肠吸收的小分子多肽和氨基酸,由此提高机体免疫力,缓解疲劳。其中,本发明制备获得的紫贻贝提取物中,蛋白肽平均分子量约为800Da,其中1000Da以下的多肽占82%,500Da以下的多肽占44%,由此可便于人体胃肠快速、高效吸收,使其充分发挥其功效。
表2紫贻贝提取物游离氨基酸的种类和含量
从表2中可以看出,与对比例1相比,本发明制备的紫贻贝提取物中,通过各种蛋白酶以及风味酶等多种酶类的充分水解,其能检出18种氨基酸,且每种的含量均有显著增加。
表3紫贻贝提取物多糖含量和蛋白含量
多糖(%) | 蛋白(%) | |
对比例1 | 45.11±2.13 | 4.15±0.91 |
实施例1 | 80.11±1.01 | 7.59±0.19 |
实施例2 | 81.65±2.33 | 7.28±1.12 |
实施例3 | 81.47±2.14 | 7.07±0.93 |
从表3中可以看出,本发明的紫贻贝提取物制备方法中,通过充分酶解,与对比例1相比,其多糖和蛋白含量均有显著提高,而多糖和蛋白质、氨基酸等均是用于提高免疫力,缓解身体疲劳的活性成分。
<西洋参发酵粉检测>
先以西洋参为原料,经粉碎后备用;采用纤维素酶对西洋参进行酶解,获得西洋参酶解液,然后对西洋参酶解液进行灭活处理,过筛备用;以西洋参酶解液、碳源、氮源和水配制发酵培养基,然后接种米曲霉菌培养液,在40-50℃下发酵2-3天,得到酵素液;对所得的酵素液进行过滤,所得上清液浓缩,获得作为对比例2的西洋参提取物。再将其与通过实施例1-3中的方法制备获得的西洋参提取物进行检测,以获得人参皂苷总皂苷含以及不同类型人参皂苷(Rg1、Rg2、Rg3、Rb1、Rh1、Rh2、Re、Rf)含量,其结果如表4所示。
表4人参皂苷总皂苷量以及不同类型人参皂苷含量
从表4中可以看出,通过本发明的方法制备的西洋参提取物中,皂苷总量约为对比例2的2.3倍,且其中Rg1、Rg2、Rg3、Rb1、Rh1、Rh2、Re、Rf这几种人参皂苷的含量相对对比例1而言也由及其显著的增长,由此说明本发明中将黑曲霉菌种和啤酒酵母作为发酵菌种,同时结合特殊的三阶段发酵工艺,可极大提高纤维素酶的产量和活力,进一步提高西洋参提取物中活性成分(如皂苷等)的含量。
<实施例4>
本实施例还提供了一种实施例1-3之一中所述提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药的制备方法,其包括:
S100、将枸杞、核桃仁、大枣、黄芪、黄精均进行粉碎,且均过120-150目筛;
S200、按实施例1-3之一中的组分用量称取各组分,充分混匀,将混匀后的混合物置于真空干燥器内干燥,使混合物含水量为3-5%(优选4%);
S300、制备空心胶囊,按重量百分比计,所述空心胶囊由如下重量百分比的原料制成:羟丙甲纤维素30-35%(优选32%)、低酰胺结冷胶5-8%(优选7%)、表面活性剂0.3-0.5%(优选0.4%)、助凝剂2-3%(优选2.5%)、着色剂0.02-0.03%(优选0.025%)、柠檬酸0.03-0.04%(优选0.035%)、二氧化钛2-3%(优选2.5%)、聚乙二醇0.2-0.3%(优选0.25%)、无水乙醇12-15%(优选13%)、抗氧剂1-2%(优选1.5%)、余量为水;
所述空心胶囊的制备方法包括:
(1)称取上述对应比例的空心胶囊制备原料,先在溶胶罐内加入水,加热至85-90℃后加入对应比例的羟丙甲纤维素和果胶,以获得初始胶液,且对所述初始胶液进行超声处理及抽真空处理,所述超声处理频率为100-110kHZ,所述抽真空处理的真空度为-0.05—-0.08Mpa(优选为-0.07Mpa),且超声处理及抽真空处理过程中于80-100转/min条件下对初始胶液进行搅拌;
(2)将初始胶液冷却至52±1℃温度,保温、静置8小时;再降温至32±1℃,于50-80转/min搅拌条件下加入对应比例的表面活性剂、甘氨酸、甘油、无水乙醇、半胱氨酸,继续搅拌均匀,以获得胶囊胶液;
(3)在所述胶囊胶液中加入对应比例的着色剂和二氧化钛,搅拌均匀后,于温度为52℃条件下蘸胶,且于24℃条件下定型,以获得胶囊胚体;
(4)将所述胶囊胚体进行干燥,使其含水量为3-5%(优选4%);再对所述胶囊胚体进行脱模、切割,以获得所述空心胶囊;
S400、将步骤S200中的原料填充至所述空心胶囊中,即得所述提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药。
<提高免疫力功效评价试验>
实验选取1月龄雌性小鼠,按体重分为4组,每组20只。本发明的活性多糖复方植物药(以下均为“活性多糖复方植物药”)的人体推荐剂量为0.4g/d·kg体重的定型产品,小鼠的等效剂量相当于人体推荐剂量的10倍。分别以人体推荐剂量5倍、10倍和30倍作为低、中、高剂量组。采取灌胃法,每日灌胃一次,对照组灌蒸馏水。各组小鼠连续给予活性多糖复方植物药30天后,测定小鼠胸腺、脾脏质量、碳廓清、吞噬率以及吞噬指数,结果如表5-6所示。
表5活性多糖复方植物药对小鼠胸腺、脾脏质量的影响
小鼠数量 | 胸腺/体重(mg/g) | 脾脏/体重(mg/g) | |
空白对照组 | 20 | 2.42±0.46 | 5.42±0.36 |
实施例1 | 20 | 2.49±0.45 | 5.60±0.37 |
实施例2 | 20 | 2.50±0.47 | 5.61±0.38 |
实施例3 | 20 | 2.53±0.52 | 5.50±0.28 |
从表5中可以看出,服用本发明中的活性多糖复方植物药后,小鼠的胸腺、脾脏质量均未产生显著影响,说明本发明的活性多糖复方植物药在推荐服用剂量内无不良副作用,可安全服用。
表6活性多糖复方植物药对小鼠的碳廓清、吞噬率以及吞噬指数的影响
由表6可见,小鼠服用本发明的活性多糖复方植物药30天后,与对照组相比,各剂量组对碳廓清指数无显著性差异(p>0.05),但低、中、高剂量组的吞噬率和吞噬率均显著高于空白对照组(P<0.05),由此说明本发明中的活性多糖复方植物药可显著增强机体的免疫能力。
<抗疲劳功效评价试验>
受试对象:参加篮球赛赛事集训期间的男、女篮球队员,共60人。两组队员为期6周的高强度训练,每天6小时。随机分为四组,队员平时训练、生活情况无差异。实验组运动员集训前期每天在早餐后及睡前各服用一粒本发明中的活性多糖复方植物药,第4周开始每天在午餐后加服一粒本发明实施例1-3中的活性多糖复方植物药,至训练结束,共6周,对照组运动员服用安慰剂。检测实验前后受试对象血乳酸和肌酸激酶的变化情况,其结果如表7所示。
表7受试对象血乳酸和肌酸激酶的变化
人数 | 血乳酸(mmol/L) | 肌酸激酶(U/L) | |
空白对照组 | 15 | 1.6±0.15 | 125.6±8.8 |
实施例1 | 15 | 0.90±0.17 | 99.6±7.8 |
实施例2 | 15 | 0.88±0.17 | 97.6±7.6 |
实施例3 | 15 | 0.92±0.16 | 98.6±7.8 |
从表7中可以看出,服用本发明实施例1-3中的活性多糖复方植物药后,受试对象血乳酸和肌酸激酶相比空白对照组均有显著下降,其分别最多下降45%和22.3%,由此说明本发明中的活性多糖复方植物药具有明显的抗疲劳、增强体力的效果。
需要说明的是,上述实施例1至4中的技术特征可进行任意组合,且组合而成的技术方案均属于本发明的保护范围。
综上所述,本发明采用反复急速升温、降温以及多阶段酶解、紫外辐射、脉冲磁场处理方式破坏紫贻贝细胞膜结构使其细胞内部的紫贻贝多糖、小分子肽等活性成分充分析出,有利于人体吸收;采用黑曲霉菌种以及啤酒酵母作为发酵菌种,充分破坏其细胞壁结构,使其内容物可充分析出,同时结合光照和磁场处理促进黑曲霉菌种以及啤酒酵母的生长,进一步提高西洋参提取物中的皂苷含量,两者在通过与其他含有增强免疫力成分的组分合理复配使用,以达到提高机体免疫力、缓解疲劳的效果。
这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
尽管本发明的实施方案已公开如上,但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用,它完全可以被适用于各种适合本发明的领域,对于熟悉本领域的人员而言,可容易地实现另外的修改,因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下,本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实例。
Claims (10)
1.提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药,其特征在于,按重量份计,其包括:蒲公英多糖15-18份、大豆多肽粉8-10份、胶原蛋白粉8-10份、枸杞5-8份、紫贻贝提取物12-18份、螺旋藻粉10-15份、蜂胶3-5份、核桃仁8-10份、大枣3-5份、西洋参发酵粉2-3份、黄芪3-5份、黄精3-5份、人参提取物0.8-1份、复合B族维生素0.2-0.3份、水苏糖5-8份。
2.如权利要求1所述的活性多糖复方植物药,其特征在于,所述紫贻贝提取物的制备方法包括如下步骤:
S11、将紫贻贝进行清洗、脱壳、采肉、去足丝;绞碎后冷冻干燥,再粉碎,以获得紫贻贝冻干粉;
S12、按重量份计,在反应釜中加入紫贻贝冻干粉20-25份、去离子水150-200份,获得酶解原料,再对所述酶解原料进行酶解处理;
所述酶解处理过程包括:
(1)酶解1:将所述酶解原料温度升至20-25℃,再对所述酶解原料进行降温处理,使其按照15℃/min的速率降至-45℃,降至-45℃后维持1min,再对所述酶解原料进行升温处理,使其按照10℃/min的速率升至20-25℃;升至20-25℃后,在所述酶解原料中加入其重量1%的碱性蛋白酶,调节酶解原料pH至7.0-9.0以及调节酶解原料温度至50-60℃,反应5-8h;
将经碱性蛋白酶处理的酶解原料温度调节至40-55℃,加入第一复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后调节pH至6.0-6.5,同时对加入第一复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后的酶解原料进行第一脉冲磁场处理和第一紫外辐射处理,处理时间为10-12h,以获得第一酶解体系;
按重量比计,酶解原料:第一复合酶:壳聚糖:半胱氨酸:亚硫酸钠=1:0.05:0.02:0.03:0.02,所述第一复合酶由磷脂酶、木瓜蛋白酶、风味酶组成,且按重量比计,磷脂酶:木瓜蛋白酶:风味酶=1:0.5:0.5;所述第一脉冲磁场处理为:采用磁场强度为2.5-3.5T的脉冲磁场对所述酶解原料进行20-30个脉冲处理;所述第一紫外辐射处理为:采用波长为180-280nm、功率为40W的紫外灯对酶解原料处理40-60min;
(2)酶解2:将所述第一酶解体系温度调整至20-25℃,再对所述第一酶解体系进行降温处理,使其按照10℃/min的速率降至-45℃,降至-45℃后维持0.5min,再对所述第一酶解第一酶解体系进行升温处理,使其按照10℃/min的速率升至20-25℃;升至20-25℃后,在所述第一酶解体系中加入其重量0.5%的酸性蛋白酶,调节第一酶解体系pH至4.0-6.0以及调节第一酶解体系温度至40-50℃,反应3-4h;
将经酸性蛋白酶处理的第一酶解体系温度调节至40-55℃,加入第二复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后调节pH至6.0-6.5,同时对加入第二复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后的第一酶解体系进行第二脉冲磁场处理和第二紫外辐射处理,处理时间为8-10h,以获得第二酶解体系;
按重量比计,第一酶解体系:第二复合酶:壳聚糖:半胱氨酸:亚硫酸钠=1:0.03:0.02:0.02:0.02,所述第二复合酶由磷脂酶、木瓜蛋白酶、风味酶组成,且按重量比计,磷脂酶:木瓜蛋白酶:风味酶=1:1:0.8;所述第二脉冲磁场处理为:采用磁场强度为2.0-3.0T的脉冲磁场对所述第一酶解体系进行10-12个脉冲处理;所述第二紫外辐射处理为:采用波长为280-320nm、功率为40W的紫外灯对第一酶解体系处理30-40min;
(3)酶解3:将所述第二酶解体系温度调整40-55℃,再对所述第二酶解体系进行降温处理,使其按照5℃/min的速率降至-45℃,降至-45℃后维持0.5min,再对所述第二酶解体系进行升温处理,使其按照10℃/min的速率升至20-25℃;升至20-25℃后,在所述第二酶解体系中加入其重量0.2%的中性蛋白酶,调节第二酶解体系pH至6.0-7.0以及调节第二酶解体系温度至50-60℃,反应1-2h;
将经中性蛋白酶处理的第二酶解体系温度调节至40-55℃,加入第三复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后调节pH至6.0-6.5,同时对加入第三复合酶、壳聚糖、半胱氨酸以及亚硫酸钠后的第二酶解体系进行第三脉冲磁场处理和第三紫外辐射处理,处理时间为8-10h,以获得第三酶解体系;
按重量比计,第二酶解液:第三复合酶:壳聚糖:半胱氨酸:亚硫酸钠=1:0.02:0.01:0.02:0.02,所述第三复合酶由磷脂酶、木瓜蛋白酶、风味酶组成,且按重量比计,磷脂酶:木瓜蛋白酶:风味酶=1:1.2:1.2;所述第三脉冲磁场处理为:采用磁场强度为1.8-2.0T的脉冲磁场对所述酶解原料进行5-8个脉冲处理;所述第三紫外辐射处理为:采用波长为320-400nm、功率为40W的紫外灯对第二酶解体系处理20-30min;
S13、待酶解完成后,对获得的第三酶解体系升温至90℃,维持10min,以完成灭酶活过程,获得紫贻贝粗提体系;
S14、在紫贻贝粗提体系中按其重量的3%加入活性炭,搅拌均匀,在55℃下保温60-90min后离心,去沉渣后得到紫贻贝提取物清液;所述紫贻贝提取物清液在过滤压力0.25-0.35MPa下经硅藻土过滤,以获得紫贻贝粗提液;再在所述紫贻贝粗提液中按其重量3%加入活性炭,静置45-60min,然后离心,去沉渣后获得紫贻贝精提液;
S15、将步骤S14中的紫贻贝精提液经过微滤陶瓷膜进行过滤,操作温度控制在55-65℃,以获得微滤膜透过液;再将微滤膜透过液经过卷式超滤膜进行过滤,操作温度控制在55-65℃,以获得超滤膜透过液;再将超滤膜截留液经过卷式高压反渗透膜进行浓缩,除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质,控制操作温度在35-40℃,以得到紫贻贝提取物浓缩液;
S16、通过真空冷冻干燥方法对紫贻贝提取物浓缩液进行干燥,以获得紫贻贝提取物。
3.如权利要求2所述的活性多糖复方植物药,其特征在于,酶解1和/或酶解2和/或酶解3中,进行脉冲磁场处理和紫外辐射处理的同时进行超声处理,超声功率为100-200W,超声处理时间为10-15min。
4.如权利要求1所述的活性多糖复方植物药,其特征在于,所述西洋参提取物的提取方法包括:
S21、将黑曲霉菌种以及啤酒酵母分别接种于独立的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上,再分别放入霉菌培养箱中,均于28-35℃条件下活化48-72h,以获得活化的黑曲霉菌种以及啤酒酵母;采用配制好的第一液体培养基培养活化的黑曲霉菌种,以获得液态黑曲霉种子液,以及采用配制好的第二液体培养基培养活化的啤酒酵母,以获得液态啤酒酵母种子液;再将所述液态黑曲霉种子液接种到发酵罐中的第一发酵培养基内进行扩大培养,扩大培养温度30-35℃,转速500-800rpm,培养时间为1-2d,以获得黑曲霉孢子悬浮液;以及将所述液态啤酒酵母种子液接种到发酵罐中的第二发酵培养基内进行扩大培养,扩大培养温度30-40℃,转速400-600rpm,培养时间为1-2d,以获得啤酒酵母悬浮液;
S22、按重量份计,在反应釜中加入经粉碎的西洋参40-50份、去离子水80-100份、黑曲霉孢子悬浮液35-45份、啤酒酵母悬浮液10-15份、第三发酵培养基30-35份,以获得发酵体系,并调节所述发酵体系的pH至6.8-7.0;
对所述发酵体系进行三阶段的发酵处理:
第一发酵阶段处理中,发酵温度为25-35℃,并在转速300-400rpm条件下对发酵体系进行搅拌,同时对发酵体系进行第一光照处理和第一磁场处理,处理时间为1-2d;所述第一光照处理为:采用光强为25-30μmol.m-2.s-1的红光以及光强为30-35μmol.m-2.s-1的蓝光照射发酵体系,照射处理时间为40-60min;所述第一磁场处理为:采用50Hz、磁场强度为0.4-0.8mT的交变磁场对发酵体系进行磁场处理,磁场处理时间为40-60min;
第二发酵阶段处理中,发酵温度为25-35℃,并在转速500-600rpm条件下对发酵体系进行搅拌,同时对发酵体系进行第二光照处理和第二磁场处理,处理时间为1-2d;所述第二光照处理为:采用光强为20-24μmol.m-2.s-1的红光以及光强为24-28μmol.m-2.s-1的蓝光照射发酵体系,照射处理时间为30-40min;所述第二磁场处理为;采用50Hz、磁场强度为0.35-0.65mT的交变磁场对发酵体系进行磁场处理,磁场处理时间为30-40min;
第三发酵阶段处理中,发酵温度为25-35℃,并在转速300-400rpm条件下对发酵体系进行搅拌,同时对发酵体系进行第三光照处理和第三磁场处理,处理时间为1-2d;所述第三光照处理为:采用光强为16-20μmol.m-2.s-1的红光以及光强为20-22μmol.m-2.s-1的蓝光照射发酵体系,照射处理时间为20-30min;所述第三磁场处理为:采用50Hz、磁场强度为0.25-0.55mT的交变磁场对发酵体系进行磁场处理,磁场处理时间为20-30min;
S23、将经步骤S22中发酵处理的发酵体系溶液置于微波加热器中,所述微波加热器的压强为0.1-0.3个大气压,微波功率为800-850w,加热40-45min;
以及S24、将经步骤S23处理得到的溶液进行加压浓缩,使其体积缩小至原来体积的25-30%降温至20-25℃后过滤分离得到水相和固相;固相用去离子水溶解,再经活性炭脱色、真空干燥以及粉碎过筛后得到西洋参发酵粉。
5.如权利要求4所述的活性多糖复方植物药,其特征在于,所述步骤S12中,每天对接种到第一发酵培养基中的液态黑曲霉种子液进行超声处理,且超声处理频率为20-40Khz,处理时间为30min。
6.如权利要求4所述的活性多糖复方植物药,其特征在于,其特征在于,所述步骤S21中,按重量比计,第一液体培养基包括:茶多酚1%、蔗糖1.5%、葡萄糖2.5%、麦芽提取物5%、CoCl.6H2O 0.1%、CuSO4.5H2O 0.05%、FeNaEDTA 2%、H3BO30.25%、Na2MoO4.2H2O0.15%、ZnSO4.7H2O 0.1%、MgSO4 0.1%、KNO3 0.1%、MnSO4.H2O 0.2%、去离子水86.95%。
7.如权利要求4所述的活性多糖复方植物药,其特征在于,所述步骤S21中,按重量比计,第二液体培养基包括:麦芽汁35%、葡萄糖10%、蛋白胨15%、ZnSO4.7H2O 0.1%、CH3COONa 0.15%、MgSO4 0.1%、K2HPO4·3H2O 0.1%、MnSO4.H2O 0.2%、去离子水44.35%。
8.如权利要求4所述的活性多糖复方植物药,其特征在于,所述步骤S21中,按重量比计,所述第一发酵培养基包括:番茄汁10%、可溶性淀粉2%、蔗糖2%、葡萄糖2%、玉米粉2.5%、FeSO4.7H2O 0.1%、MgSO4 0.05%、KNO3 0.05%、CuCl2.2H2O 0.1%、(NH4)6Mo7O24.7H2O 0.15%、MnSO4.H2O 0.1%、去离子水80.95%。
9.如权利要求4所述的活性多糖复方植物药,其特征在于,所述步骤S21中,按重量比计,所述第二发酵培养基包括:豆芽汁15%、蛋白胨10%、玉米粉8%、葡萄糖10%、NaCl0.5%、MgSO4 0.05%、K2HPO4·3H2O 0.15%、MnSO4.H2O 0.2%、去离子水56.1%。
10.一种提高免疫力及抗疲劳的活性多糖复方植物药的制备方法,其特征在于,包括:
S100、将所述枸杞、核桃仁、大枣、黄芪、黄精均进行粉碎,且均过120-150目筛;
S200、按权利要求1中的组分用量称取各组分,充分混匀,将混匀后的混合物置于真空干燥器内干燥,使混合物含水量为3-5%;
S300、制备空心胶囊,按重量百分比计,所述空心胶囊由如下重量百分比的原料制成:羟丙甲纤维素30-32%、果胶8-10%、表面活性剂0.4-0.5%、助凝剂2-3%、着色剂0.03-0.05%、甘氨酸0.03-0.05%、二氧化钛2-3%、甘油0.2-0.4%、无水乙醇10-12%、半胱氨酸1-1.5%、余量为水;
所述空心胶囊的制备方法包括:
(1)称取上述对应比例的空心胶囊制备原料,先在溶胶罐内加入水,加热至85-90℃后加入对应比例的羟丙甲纤维素和果胶,以获得初始胶液,且对所述初始胶液进行超声处理及抽真空处理,所述超声处理频率为100-110kHZ,所述抽真空处理的真空度为-0.05—-0.08Mpa,且超声处理及抽真空处理过程中于80-100转/min条件下对初始胶液进行搅拌;
(2)将初始胶液冷却至52±1℃温度,保温、静置8小时;再降温至32±1℃,于50-80转/min搅拌条件下加入对应比例的表面活性剂、甘氨酸、甘油、无水乙醇、半胱氨酸,继续搅拌均匀,以获得胶囊胶液;
(3)在所述胶囊胶液中加入对应比例的着色剂和二氧化钛,搅拌均匀后,于温度为52℃条件下蘸胶,且于24℃条件下定型,以获得胶囊胚体;
(4)将所述胶囊胚体进行干燥,使其含水量为3-5%;再对所述胶囊胚体进行脱模、切割,以获得所述空心胶囊;
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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