CN110678549B - 一种激活p21基因表达的方法 - Google Patents
一种激活p21基因表达的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110678549B CN110678549B CN201980002538.7A CN201980002538A CN110678549B CN 110678549 B CN110678549 B CN 110678549B CN 201980002538 A CN201980002538 A CN 201980002538A CN 110678549 B CN110678549 B CN 110678549B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- artificial sequence
- rna
- dna
- nucleic acid
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1135—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against oncogenes or tumor suppressor genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
- A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
- C12N2310/113—Antisense targeting other non-coding nucleic acids, e.g. antagomirs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/332—Abasic residue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
- C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/10—Applications; Uses in screening processes
- C12N2320/11—Applications; Uses in screening processes for the determination of target sites, i.e. of active nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2330/00—Production
- C12N2330/30—Production chemically synthesised
Abstract
本发明提供了一种由正义寡核苷酸链和反义寡核苷酸链组成的激活或上调人p21基因表达的小激活RNA，其所述正义核酸链或反义核酸链与人p21基因启动子靶基因序列中的任一长度为16‑35个核苷酸的连续片段具有75％以上的同源性，其中人p21基因的靶序列选自由SEQ ID NO：5、6、7、8、9、10、11、12所示的序列组成的组。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学领域，具体涉及利用靶向基因启动子序列的双链小RNA正向调控基因表达。
背景技术
双链小核酸分子包括化学合成的寡核糖核苷酸如小激活RNA(saRNA)和天然存在的寡核糖核苷酸如微小核糖核苷酸(miRNA)已被证明能够以序列特异性的方式靶向蛋白编码基因的调控序列如启动子序列而在转录和表观遗传水平正向调控基因的表达水平，这种现象被称为RNA激活(RNAa)(Li，Okino et al.(2006)Proc Natl Acad Sci U S A 103：17337-17342；Janowski，Younger et al.(2007)Nat Chem Biol3：166-173；Place，Li etal.(2008)Proc Natl Acad Sci U S A 105：1608-1613；Huang，Place et al.(2012)Nucleic Acids Res40：1695-1707；Li(2017)Adv Exp Med Biol983：1-20)。研究表明RNA激活是从秀丽隐杆线虫到人的进化保守的内源性分子机制(Huang，Qin et al.(2010)PLoSOne5：e8848；Seth，Shirayama et al.(2013)Dev Cell 27：656-663；Turner，Jiao et al.(2014)Cell Cycle 13：772-781)。
如何安全和选择性增强人体细胞内源性基因或者蛋白质表达仍然是基因治疗领域的一个巨大挑战。传统的基于病毒基因治疗系统具有其固有的缺陷，包括有可能改变宿主基因组及引起免疫反应等副作用。而RNA激活具有能够激活内源基因表达而不改变基因组的优点，代表了一种激活内源性基因表达的新策略，在疾病治疗方面具有巨大的应用价值。
p21WAF1/CIP1(也称CDKN1A，下称p21)基因为细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂，是一个重要的肿瘤抑制基因(Harper，Adami et al.(1993)Cell 75：805-816；Fang，Igarashi et al.(1999)Oncogene 18：2789-2797)。研究表明，异位载体过表达p21或者通过激活内源性p21的转录可以有效抑制肿瘤细胞和在体肿瘤的生长(Harper，Adami et al.(1993)Cell 75：805-816；Eastham，Hall et al.(1995)Cancer Res 55：5151-5155；Wu，Bellas et al.(1998)J Exp Med 187：1671-1679；Harrington，Spitzweg et al.(2001)JUrol 166：1220-1233)。因此，靶向激活p21基因的方法有可能在诸多疾病例如癌症的治疗上有广泛应用价值。
发明内容
本发明提供了一种一种小激活RNA，其特征在于，所述小激活RNA中的一条链与SEQID NO：5、6、7、8、9、10、11、12所示的序列中的任一长度为16-35个核苷酸的连续片段具有至少75％的同源性或互补性，所述小激活RNA通过靶向人p21基因启动子序列激活或上调p21基因的表达。。
在本发明的实施例中，所述人p21基因的靶基因选自由SEQ ID NO：5-12所示的序列组成的组，其中，所述人p21基因启动子序列分别位于距离转录起始位点(transcriptionstart site，TSS)上游-893～-801bp(SEQ ID NO：5)、-717～-632bp(SEQ ID NO：6)、-585～-551bp(SEQ ID NO：7)、-554～-504bp(SEQ ID NO：8)、-514～-485bp(SEQ ID NO：9)、-442～-405bp(SEQ ID NO：10)、-352～-313bp(SEQ ID NO：11)、-325～-260bp(SEQ ID NO：12)。
在一个实施例中，所述小激活RNA包含正义核酸链和反义核酸链，所述正义核酸链和反义核酸链含有互补区域，互补区域能形成双链核酸结构，其中的正义核酸链或反义核酸链与人p21基因启动子序列中的任一长度为16-35个核苷酸的连续片段具有75％以上、80％以上、90％以上、95％以上、99％以上或100％的同源性。
在一个实施例中，如前所述所述正义核酸链和反义核酸链存在于两条不同的核酸链上；所述正义核酸链和反义核酸链存在于同一条核酸链上，为发夹型单链核酸分子，其中正义核酸链和反义核酸链的互补区域形成双链核酸结构。
在一个具体实施例中，所述小激活RNA中的至少一条链具有长度为0至6个核苷酸的3’突出端；所述小激活RNA中的两条链都具有长度为2-3个核苷酸的3’突出端。
在一个实施例中，所述正义核酸链或反义核酸链的长度为16-35个核苷酸，例如16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、或35个核苷酸。
在一个具体实施例中，所述正义核酸链或反义核酸链与SEQ ID NO：13-30、35-46、59-62、67-74、77-80、85-96、103-108、111-118、121-132、139-140、147-180、185-186、189-190、195-198、201-202、209-212、215-218、225-240、243-246、249-258、261-262、265-270、275-280、283-300、303-308、317-320、323-324、329-348、351-352、357-358、361-366、371-392、399-400、405-412、415-416、419-424、429-432、439-442、447-450、453-458、463-468所示序列具有至少75％例如80％、85％、90％、95％、99％、100％的同源性。
在一个具体实施例中，所述正义核酸链或反义核酸链序列如SEQ ID NO：13-30、35-46、59-62、67-74、77-80、85-96、103-108、111-118、121-132、139-140、147-180、185-186、189-190、195-198、201-202、209-212、215-218、225-240、243-246、249-258、261-262、265-270、275-280、283-300、303-308、317-320、323-324、329-348、351-352、357-358、361-366、371-392、399-400、405-412、415-416、419-424、429-432、439-442、447-450、453-458、463-468任一核苷酸序列所示。
本发明还提供了一种如前任一项所述的小激活RNA的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)以靶基因启动子序列为模板，选取包含19个碱基的序列作为靶位点；2)合成与步骤1)所得靶位点序列75％以上的同源性的RNA序列，得到正义寡核苷酸链；3)序列与步骤2)得到的正义寡核苷酸链互补；4)将步骤2)得到的正义寡核苷酸链与步骤3)得到的反义寡核苷酸链以相同的摩尔数在RNA退火缓冲液中混合、加热，然后自然冷却至室温，即得到双链的小激活RNA；其中人p21基因启动子序列选自由SEQ ID NO：5、6、7、8、9、、10、11、12所示的序列组成的组。
在一个实施例中，所述小激活RNA中的至少一个核苷酸为化学修饰的核苷酸，所述化学修饰为如下修饰中的至少一种：
(1)对所述小激活RNA的核苷酸序列中连接核苷酸的磷酸二酯键的修饰；
(2)对所述小激活RNA的核苷酸序列中的核糖的2’-OH的修饰；
(3)对所述小激活RNA的核苷酸序列中的碱基的修饰；
(4)所述小激活核酸分子的核苷酸序列中的至少一个核苷酸为锁核酸。
在一个实施例中，所述激活或上调p21基因的表达为上调至少10％，例如15％、20％、30％、40％、50％、80％、100％、200％以上。
本发明还提供了小激活RNA在制备用于激活或上调p21基因在细胞中表达的制剂中的应用。所述的小激活RNA被直接导入所述细胞中，或者是在编码该小激活RNA的核苷酸序列导入细胞后在细胞中产生的。所述细胞是哺乳动物细胞，优选为人类细胞，更优选为人类肿瘤细胞。该人类细胞可以是分离的人细胞系，也可以存在于人体中。
在一个实施例中，所述的人体是患有由p21蛋白表达不足引发的肿瘤患者，并且所述小激活核酸分子被施用以有效量以实现对肿瘤的治疗，所述肿瘤优选为膀胱癌、前列腺癌、肝癌或结直肠癌。
又一方面，本发明还提供一种分离的p21基因小激活RNA靶位点，其中所述靶位点为选自SEQ ID No 5-12的任一条序列上的任意连续16-35个核苷酸序列。
再一方面，本发明公开了一种激活或上调人p21基因在细胞中表达的方法，其中所述方法包括向受试者或细胞施予如前任一项所述的小激活RNA。所述小激活RNA可以被直接导入细胞中，也可以是在编码该小激活RNA的核苷酸序列导入细胞后在细胞中产生的。所述的细胞是哺乳动物细胞，优选为人类细胞，更优选为人类肿瘤细胞，再优选为人膀胱癌、前列腺癌、肝癌或结直肠癌细胞。
本发明进一步公开了一种包含如前所述的小激活RNA和药学上可接受的载体的组合物。其中，药学上可接受的载体为脂质体、高分子聚合物或多肽。
本发明还公开了如前所述的小激活RNA或如前所述的组合物在制备用于激活或上调p21基因表达的药物中的应用，优选为在制备抗肿瘤或良性增殖性病变中的药物中的应用，更优选地，所述肿瘤为膀胱癌、前列腺癌、肝癌或结直肠癌。
附图说明
图1示出p21基因启动子序列，从转录起始位点(TSS)上游-1000bp至TSS下游3bp。TSS由弯曲的箭头表示。
图2示出筛选p21基因启动子上的小激活RNA热点区域。针对图1所示p21启动子序列设计并化学合成439个双链RNA分子，分别转染至PC3人前列腺癌细胞。72小时后用QuantiGene 2.0方法分析p21基因mRNA水平。(A)439个双链RNA分子(X轴)分别所致的p21mRNA水平相对于对照处理的倍数变化(Y轴)。X轴上的双链RNA分子按照它们相对于p21基因的TSS的位置(从最上游的RAG-898到最下游的RAG-177)进行排序。图示中标出了8个热点(hotspot)区域(浅灰色长方形框)。(B)对(A)的数据按照每个双链RNA分子诱导p21 mRNA表达改变的倍数大小从低到高进行排序。(A)和(B)中的虚线表示2倍诱导。图3示出热点区1至8的双链RNA分子对p21基因的激活作用。
图4示出采用RT-qPCR方法分析p21基因mRNA水平，以验证QuantiGene 2.0的实验结果。(A)将439个双链RNA分子按照它们诱导p21 mRNA表达的活性大小分成四个区域(组)，从每组中随机挑选5个双链RNA分子，分别以10nM的浓度转染至PC3细胞。72小时后，提取细胞总RNA、在反转录后采用RT-qPCR方法分析p21基因mRNA水平。(B)QuantiGene 2.0(X轴)和RT-qPCR(Y轴)方法检测双链RNA分子诱导的p21基因相对mRNA水平的相关性。
图5示出小激活RNA诱导p21 mRNA表达和抑制KU-7细胞增殖的作用。所示3个小激活RNA分别以10nM转染KU-7细胞72小时。(A)RT-qPCR分析p21基因mRNA表达水平。(B)CCK-8方法评估细胞活力。saRNA处理组细胞的活力表示为相对于对照处理组(Mock)细胞活力的百分比。(C)转染结束时具代表性的细胞图像(100×)。
图6示出小激活RNA诱导p21 mRNA表达和抑制HCT116细胞增殖的作用。所示3个小激活RNA分别以10nM转染HCT116细胞72小时。(A)RT-qPCR分析p21基因mRNA表达水平。(B)CCK-8方法评估细胞活力，saRNA处理组细胞的活力表示为相对于对照处理组(Mock)细胞活力的百分比。(C)转染结束时具代表性的细胞图像(100×)。
图7示出小激活RNA诱导p21 mRNA表达和抑制HepG2细胞增殖的作用。所示3个小激活RNA分别以10nM转染HepG2细胞72小时。(A)RT-qPCR分析p21基因mRNA表达水平。(B)CCK-8方法评估细胞活力，saRNA处理组细胞的活力表示为相对于对照处理组(Mock)细胞活力的百分比。(C)转染结束时具代表性的细胞图像(100×)。
具体实施方式
下面将通过具体描述，对本发明作进一步的说明。
除非另有限定，本文中所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解相同的含义。
本申请中，单数形式“一个”、“该”包括复数对象，除非上下文另外清楚规定。
定义
如本文所用的术语“互补”是指两条寡核苷酸链彼此形成碱基对的能力。碱基对通常由反向平行的寡核苷酸链中的核苷酸单元之间的氢键形成。互补寡核苷酸链可以Watson-Crick方式碱基配对(例如，A-T，A-U，C-G)，或以允许形成双链体的任何其他方式(例如Hoogsteen型或者反向Hoogsteen型碱基配对)进行碱基配对。“100％配对”或“完全互补”是指具有100％的互补性，即两条链的核苷酸单元全部互相氢键结合。
完全互补或100％配对是指双链寡核苷酸分子的双链区中来自第一条寡核苷酸链的每个核苷酸单元可以与第二条寡核苷酸链形成氢键而没有“错配”的情况。不完全互补是指两条链的核苷酸单元不能全部互相氢键结合的情况。例如，对于两条双链区为20个核苷酸长度的寡核苷酸链，如果每条链上只有两个碱基对可以彼此氢键结合，则寡核苷酸链展现出10％的互补性。在同一实例中，如果每条链上的18个碱基对可以彼此氢键结合，则寡核苷酸链展现出90％的互补性。基本互补性是指约79％，约80％，约85％，约90％，约95％以上的互补性。
如本文所用的术语“寡核苷酸”是指核苷酸的聚合物，并且包括但不限于DNA、RNA、或DNA/RNA杂交体的单链或双链分子，包括规则地和不规则地交替的脱氧核糖基部分和核糖基部分的寡核苷酸链，以及这些种类的寡核苷酸的修饰和以天然存在的或非天然存在的骨架。
如本文所用的术语“寡核糖核苷酸”是指包含两个或更多个经修饰或未经修饰的核糖核苷酸和/或其类似物的寡核苷酸。
如本文所用的术语“寡核苷酸链”和“寡核苷酸序列”可互换，是指50个以下碱基的短链核苷酸的总称(核苷酸可以为脱氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA)。在本发明中，寡核苷酸链的长度可以是17至30个核苷酸的任一长度。
如本文所用的术语“基因”是指编码一条多肽链或转录一条功能RNA所需的全部核苷酸序列。“基因”可以是对于宿主细胞而言内源的或完全或部分重组的基因(例如，由于引入编码启动子的外源寡核苷酸和编码序列或将邻近内源编码序列的异源启动子导入宿主细胞)。例如，术语“基因”包括可以由外显子和内含子组成的核酸序列。编码蛋白质的序列是，例如，包含在起始密码子和终止密码子之间的开放阅读框中的外显子内的序列，如本文所用，“基因”可以指包括例如基因调控序列例如启动子，增强子和本领域已知的控制另一基因的转录，表达或活性的所有其他序列，无论另一基因是否包含编码序列或非编码序列。在一种情况下，例如，“基因”可以用于描述包含调控序列例如启动子或增强子的功能性核酸。重组基因的表达可以通过一种或多种异源调节序列来控制。
如本文所用的术语“靶基因”可以是天然存在于生物体中的核酸序列、转基因、病毒或细菌序列、染色体或染色体外和/或瞬时或稳定转染或掺入细胞和/或其染色质。靶基因可以为蛋白质编码基因，也可为非蛋白编码基因(例如微小RNA基因、长链非编码RNA基因)。靶基因通常含有启动子序列，设计与启动子序列具有同一性(也称同源性)的小激活RNA可以实现对靶基因的正性调控，表现为靶基因表达的上调。“靶基因启动子序列”是指靶基因的非编码序列，在本发明中涉及“与靶基因启动子序列互补”中靶基因启动子序列是指该序列的编码链，亦称非模板链，即为与该基因编码序列为同一序列的核酸序列。“靶点序列”是指靶基因启动子序列中小激活RNA的正义寡核苷酸链或反义寡核苷酸与之同源或互补的序列片段。
如本文所用，术语“正义链”、“正义寡核苷酸链”可互换，小激活RNA的正义寡核苷酸链是指小激活RNA双链体中含与靶基因的启动子序列的编码链具有同一性的第一核糖核酸链。
如本文所用，术语“反义链”、“反义寡核苷酸链”可互换，小激活RNA的反义寡核苷酸链是指小激活RNA双链体中与正义寡核苷酸链互补的第二核糖核酸链。
如本文所用的术语“编码链”是指靶基因中不能进行转录的那一条DNA链，该链的核苷酸序列与转录生成的RNA的序列一致(在RNA中是以U取代了DNA中的T)。本发明中所述的靶基因启动子双链DNA序列的编码链是指与靶基因DNA编码链在同一条DNA链上的启动子序列。
如本文所用的术语“模板链”是指靶基因的双链DNA中与编码链互补的另一条链，可作为模板转录为RNA的那条链，该链与转录的RNA碱基互补(A-U，G-C)。在转录过程中，RNA聚合酶与模板链结合，并沿着模板链的3′→5′方向移动，按照5′→3′方向催化RNA的合成。本发明中所述的靶基因启动子双链DNA序列的模板链是指与靶基因DNA模板链在同一条DNA链上的启动子序列。
如本文所用的术语“启动子”是指不编码蛋白质的核酸序列，通过与蛋白质编码或RNA编码核酸序列在位置上关联而对它们的转录发挥调控作用。通常，真核启动子包含100-5,000个碱基对，尽管此长度范围并不意味着限制本文所用的术语“启动子”。虽然启动子序列一般位于蛋白质编码或者RNA编码序列的5′端，但有些情况下启动子序列也存在于外显子及内含子序列中。
如本文所用的术语“转录起始位点”是指在基因的模板链上标志转录起始的核苷酸。转录起始位点可出现于启动子区的模板链上。一个基因可以有多于一个的转录起始位点。
如本文所用的术语“同一性”或“同源性”是指小激活RNA的其中一条寡核苷酸链(正义链或者反义链)与靶基因的启动子序列的某一区域的编码链或者模板链存在至少75％的相似性。
如本文所用的术语“突出”、“overhang”、“悬垂”可互换，是指寡核苷酸链末端(5′或3′)非碱基配对核苷酸，其是由延伸超出双链寡核苷酸内的其中一条链的另一条链产生的。延伸超出双链体3′和/或5′端的单链区域被称为突出。
如本文所用，术语“基因激活”或“激活基因”可互换，是指通过测量基因转录水平、mRNA水平、蛋白水平、酶活性、甲基化状态、染色质状态或构型、翻译水平、或其在细胞或生物系统中的活性或状态来测定某一核酸转录、翻译或表达或活性的增加。这些活动或状态可以直接或间接的测定。此外，“基因激活”、“激活基因”是指与核酸序列相关的活性增加，而不管发生这种激活的机制如何，例如其作为调节序列发挥调控作用、被转录成RNA，被翻译为蛋白质并增加蛋白质的表达。
如本文所用，术语“小激活RNA”、“saRNA”、“小激活核酸分子”可互换，是指能够促进基因表达的核糖核酸分子，并且可以由包含与靶基因的非编码核酸序列(例如启动子、增强子等)具有序列同一性的核糖核苷酸序列的第一核糖核酸链(反义链，也称反义寡核苷酸链)和包含与第一链互补的核苷酸序列的第二核糖核酸链(正义链，也称有义链或正义寡核苷酸链)组成，其中所述第一链和第二链形成双链体。小激活RNA也可以由合成的或者载体表达的可形成双链区发卡结构的单链RNA分子组成，其中第一区域包含与基因的启动子靶序列具有序列同一性的核酸序列，第二区域包含的核酸序列与第一区域互补。小激活RNA分子的双链体区域长度通常为约10至约50个碱基对、约12个至约48个碱基对、约14个至约46个碱基对、约16个至约44个碱基对、约18个至约42个碱基对、约20个和约40个碱基对、约22个和约38个碱基对、约24个和约36个碱基对、约26个和约34个碱基对、约28个和约32个碱基对、通常约10个、约15个、约20、约25、约30、约35、约40、约45、约50个碱基对。此外，术语“saRNA”和“小激活RNA”、“小激活核酸分子”还含有除核糖核苷酸部分之外的核酸，包括但不限于修饰的核苷酸或类似物。
如本文所用，术语“热点”是指长度至少为30bp的基因启动子区域，在这些区域，呈现出功能性小激活核酸分子靶点的聚集，即靶向这些热点区域的小激活核酸分子至少60％能够诱导靶基因mRNA表达达到1.5倍或以上。
如本文所用，术语“p21”是指p21WAF1/CIP1基因，也称CDKN1A基因，是一种细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂，也是一个重要的肿瘤抑制基因，有时也称为“靶基因”。过表达p21或者通过激活内源性p21的转录可以有效抑制肿瘤细胞和在体肿瘤的生长。
如本文所用，术语“合成”是指寡核苷酸的合成方式，包括任何能够合成RNA的方式，例如化学合成、体外转录、载体表达等。本发明提供的小激活核酸分子的制备方法包括序列设计和序列合成。所述小激活核酸分子序列的合成可以采用化学合成的方法，或者委托专门从事核酸合成的生物技术公司合成。一般来说，所述化学合成的方法包括以下四个过程：(1)寡聚核糖核苷酸的合成；(2)脱保护；(3)纯化分离；(4)脱盐及退火。例如，本发明所述双链RNA分子例如saRNA化学合成的具体步骤如下：
(1)寡聚核糖核苷酸的合成
在自动DNA/RNA合成仪(例如，Applied Biosystems EXPEDITE8909)上设定合成1微摩尔的RNA，同时设定每个循环的偶联时间为10-15分钟，起始物为固相连接的5’-O-对二甲氧基三苯甲基-胸苷支持物，第一个循环在固相支持物上连接一个碱基，然后在第n次(19≥n≥2)循环中，在第n-1次循环所连接的碱基上连接一个碱基，重复此循环直至完成全部核酸序列的合成。
(2)脱保护
将连接有saRNA的固相支持物加入到试管中，并在此试管中加入1毫升的乙醇/氨水溶液(体积比为1∶3)，然后密封，置于25-70℃温箱中，孵育2-30小时，过滤含有saRNA的固相支持物的溶液并收集滤液，用双蒸水淋洗固相支持物2次(每次1毫升)并收集滤液，合并收集洗脱液，在真空条件下干燥1-12小时。然后，加入1毫升四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M)，室温放置4-12小时，再加入2毫升正丁醇，高速离心收集沉淀即得到saRNA单链的粗产物。
(3)纯化分离
将得到的saRNA的粗产物溶解于2毫升浓度为1摩尔/毫升的乙酸铵水溶液中，然后通过高压液相色谱反相C18柱进行分离，得到纯化的saRNA单链产物。
(4)脱盐及退火
用体积排阻凝胶过滤法去除盐份，将正义链和反义链的寡聚核糖核酸单链按相同摩尔比混合在1-2毫升的缓冲液中(10mM Tris，pH＝7.5-8.0，50mM NaCl)，将此溶液加热至95℃，然后缓缓将此溶液冷却至室温，得到含有saRNA的溶液。
材料和方法
细胞培养和转染
细胞系RT4、KU-7、T24、J82、TCCSUP和HT-1197培养在改良的McCoy′s 5A培养基(Gibco)中；细胞系5637、PC3和Bel-7402培养在RPMI1640培养基(Gibco)中；UM-UC-3细胞系培养在基础培养基(Gibco)中。所有培养基含有10％小牛血清(Sigma-Aldrich)和1％青霉素/链霉素(Gibco)。细胞在5％CO2，37℃条件下培养。依照制造商的说明，使用RNAiMax(Invitrogen，Carlsbad，CA)以10nM(除非另有说明)浓度转染实验中设计的双链RNA分子。
RNA分离和反转录聚合酶链式反应
细胞以2-3×105个细胞/孔接种在6孔板中，反向转染寡核苷酸双链体。使用RNeasy Plus Mini试剂盒(Qiagen)，按照其说明书提取细胞总RNA。使用含有gDNA Eraser(Takara，Shlga，Japan)的PrimeScript RT试剂盒将RNA(1μg)反转录为cDNA。qPCR采用ABI7500Fast Real-time PCR System(Applied Biosystems)和SYBR Premix Ex Taq II(Takara，Shlga，Japan)试剂，反应条件为：95℃ 3秒，60℃ 30秒，扩增40个循环。以GAPDH为内参。所有引物序列列于表1中。
表1.qRT-PCR分析的引物序列
细胞增殖测定
将细胞以2-4×103个细胞/孔铺板于96孔板中，培养过夜，转染寡核苷酸双链体。转染三天后，使用CCK8(Dojindo)，依照其说明书进行细胞增殖检测。实验步骤简述如下：将10μL CCK8溶液加入到每孔中，37℃孵育1小时，后使用酶标仪测定450nm处吸光值。
QuantiGene 2.0分析
将细胞铺板于96孔板中并转染寡核苷酸双链体，转染72小时后，使用QuantiGene2.0试剂盒(AffyMetrix)定量检测目的基因mRNA水平。QuantiGene 2.0试剂盒是基于杂交技术的方法，使用基因特异性探针直接定量mRNA水平。实验步骤简述如下：添加裂解液以裂解转染后的细胞，细胞裂解物加样至包有CDKN1A(p21)和HPRT1(管家基因)探针的捕获孔板中，55℃杂交过夜。为了增强杂交信号，在100μL相应的缓冲液(Quantigene 2.0试剂盒提供)中顺次与2.0PreAMP，2.0AMP和2.0Lable Probe杂交。所有杂交均在50-55℃震荡1小时。最后一步洗涤后，加入2.0Substrate并在室温下孵育5分钟。然后使用Infinite 200PRO读板仪(Tecan，瑞士)检测光信号。
统计分析
结果表示为平均值±标准偏差。使用GraphPad Prism软件(GraphPad Software)进行单因素方差分析，后进行Tukey′s t检验以进行统计分析。统计学显著性的标准设定为*p＜0.05，**p＜0.01和***p＜0.001。
实施例
通过以下实施例进一步说明本发明。提供实施例仅用于说明目的，并且不应被解释为以任何方式限制本发明的范围或内容。
实施例1：筛选靶向p21基因启动子区的功能性小激活RNA(saRNA)
为了筛选能够激活p21基因表达的功能性小激活RNA，从UCSC Genome数据库中检索获得p21基因的1kb启动子序列(图1)。从转录起始位点(TSS)上游-1 kb处开始选定大小为19bp的靶点，通过每次移动1bp的方式，向TSS位点移动，获得总共982个靶点序列。对靶点序列进行过滤处理，以排除GC含量高于65％或低于35％，和含有5个或者多于5个的连续同一核苷酸的靶点序列。过滤后，剩余439个靶点序列作为候选进入筛选过程。基于这些候选序列，化学合成相应的双链双链RNA分子。其中，该实验中使用的双链RNA分子的正义和反义链的长度均为21个核苷酸，所述双链RNA分子例如双链saRNA的第一核糖核酸链(正义链)的5’区域的19个核苷酸与启动子靶点序列具有100％的同一性，其3’末端含有dTdT突出；第二核糖核酸链的5’区域的19个核苷酸与第一核糖核酸链的3’区域序列的19个核苷酸完全互补，其3’末端含有dTdT突出。
将前述双链RNA分子以10nM的终浓度转染至PC3前列腺癌细胞，72小时后，使用QuantiGene 2.0试剂盒检测p21基因mRNA水平。计算每个双链RNA分子相对于空白对照处理的p21 mRNA水平的倍数变化并绘制在图2中。该研究中所有双链RNA分子所引起的p21基因mRNA的倍数变化涵盖从0.66(抑制)至8.12(诱导)的范围(图2B)。有361个(82.2％)双链RNA分子诱导p21表达1.01至8.12倍；74个(16.9％)双链RNA分子表现出抑制作用(0.99至0.66倍)；4个双链RNA分子(0.9％)对p21基因mRNA水平无影响(1.0倍)。
在被筛选的439个双链RNA分子中，132个双链RNA分子(30.1％)能够诱导p21 mRNA至少2倍；229个(52.4％)双链RNA分子诱导p21 mRNA至少1.5倍，这些诱导p21 mRNA表达上升10％以上双链RNA分子为saRNA，即具有功能的saRNA。这些具有功能的saRNA分散在整个p21启动子区域。然而，在8个游离的区域呈现功能性小激活RNA的聚集，这些区域被称为“热点”。热点区域的定义为一个区域内含有至少10个对应的小激活RNA，其中，至少60％的小激活RNA能够诱导p21mRNA表达达到1.5倍或以上(图2A和图3)。热点1至8的靶序列及对应的小激活RNA序列分别在表2和表3中列出。
表2 p21启动子热点区域靶序列
表3位于p21启动子热点区域的经设计的双链RNA分子
这些热点包括热点区域1，相应的靶序列为p21启动子序列的-893bp至-801bp，序列如SEQ ID NO：93所示，在这个区域发现有44个具有功能的saRNA(表3、图3A)，分别为RAG-834、RAG-845、RAG-892、RAG-846、RAG-821、RAG-884、RAG-864、RAG-843、RAG-854、RAG-844、RAG-887、RAG-838、RAG-858、RAG-835、RAG-876、RAG-870、RAG-853、RAG-881、RAG-828、RAG-872、RAG-841、RAG-831、RAG-829、RAG-820、RAG-822、RAG-868、RAG-849、RAG-862、RAG-865、RAG-893、RAG-848、RAG-824、RAG-866、RAG-840、RAG-875.、RAG-880、RAG-871、RAG-888、RAG-885、RAG-894、RAG-833、RAG-825、RAG-889、RAG-823；
热点区域2(表3、图3B)相应的靶序列为p21启动子序列的-717至-632bp，序列如SEQ ID NO：94所示，在这个区域发现31个具有功能的saRNA，分别为RAG-693、RAG-692、RAG-688、RAG-696、RAG-694、RAG-687、RAG-691、RAG-690、RAG-689、RAG-682、RAG-686、RAG-662、RAG-695、RAG-654、RAG-658、RAG-685、RAG-704、RAG-714、RAG-705、RAG-661、RAG-656、RAG-698、RAG-697、RAG-657、RAG-715、RAG-652、RAG-651、RAG-650、RAG-716、RAG-717、RAG-711；
热点3(表3、图3C)，相应的靶序列为p21启动子序列的-585bp至-551bp，序列如SEQID NO：95所示，在这个区域发现其包含9个具有功能的saRNA，分别为RAG-580、RAG-577、RAG-569、RAG-576、RAG-570、RAG-574、RAG-585、RAG-579、RAG-584；
热点4(表3、图3D)，相应的靶序列为p21启动子序列的-554bp至-505bp，序列如SEQID NO：96所示，在这个区域发现包含17个具有功能的saRNA，分别为RAG-524、RAG-553、RAG-537、RAG-526、RAG-554、RAG-523、RAG-534、RAG-543、RAG-525、RAG-535、RAG-546、RAG-545、RAG-542、RAG-531、RAG-522、RAG-529、RAG-552；
热点5(表3、图3E)，相应的靶序列为p21启动子序列的-514bp至-485bp，序列如SEQID NO：97所示，在这个区域发现包含9个具有功能的saRNA，分别是RAG-503、RAG-504、RAG-505、RAG-506、RAG-507、RAG-508、RAG-509、RAG-510、RAG-511、RAG-512、RAG-513、RAG-514；
热点6(表3、图3F)，相应的靶序列为p21启动子序列的-442bp至-405bp，序列如SEQID NO：98所示，在这个区域发现包含12个具有功能的saRNA，分别是RAG-427、RAG-430、RAG-431、RAG-423、RAG-425、RAG-433、RAG-435、RAG-434、RAG-439、RAG-426、RAG-428、RAG-442；
热点7(表3、图3G)，相应的靶序列为p21启动子序列的-352bp至-313bp，序列如SEQID NO：99所示，在这个区域发现包含13个具有功能的saRNA，分别是RAG-335、RAG-351、RAG-352、RAG-331、RAG-344、RAG-342、RAG-341、RAG-333、RAG-345、RAG-346、RAG-336、RAG-332、RAG-343；
热点8(表3、图3H)，相应的靶序列为p21启动子序列的-325bp至-260bp，序列如SEQID NO：100所示，在这个区域发现包含18个具有功能的saRNA，分别是RAG-294、RAG-285、RAG-286、RAG-292、RAG-291、RAG-284、RAG-279、RAG-280、RAG-325、RAG-293、RAG-322、RAG-321、RAG-281、RAG-289、RAG-278、RAG-283、RAG-282、RAG-295。
为验证QuantiGene 2.0检测结果，将439个双链RNA分子按照激活p21 mRNA表达的活性大小分成四个组(bin)，从每组中随机挑选5个双链RNA分子，分别以10nM的浓度转染至PC3细胞。72小时后，提取细胞总RNA、反转录后采用RT-qPCR方法分析p21基因mRNA水平。两种方法所揭示的p21基因mRNA表达水平显示出显著的相关性(R2＝0.82)(图4)。QuantiGene2.0方法所得的所有功能性saRNA均可通过RT-qPCR方法验证为真实的功能性小激活RNA，其中一些功能性saRNA在RT-qPCR分析中显示出更强的p21mRNA表达诱导(表4)。
表4.对QuantiGene 2.0方法的验证
综上，上述数据表明，p21启动子区的许多特定位点可以用作saRNA靶点序列以诱导p21表达，其中一些区域更具有敏感性，其对应的saRNA有更大的可能性激活p21表达。
实施例2：saRNA诱导p21基因mRNA表达并抑制癌细胞增殖
为了进一步评估p21 saRNA诱导p21基因mRNA表达和抑制癌细胞增殖的作用，通过QuantiGene 2.0筛选的saRNA(RAG1-431、RAG1-553、RAG1-688)转染到癌细胞系KU-7(膀胱癌)、HCT116(结肠癌)和HepG2(肝细胞癌)。结果显示，在上述所有细胞系中，saRNA均可诱导至少两倍的p21基因mRNA表达水平，并抑制细胞增殖，揭示了saRNA介导的p21诱导所产生的功效。具体而言，将RAG1-431、RAG1-553、RAG1-688分别转染KU7细胞，分别诱导p21 mRNA表达14.0、36.9和31.9倍，并产生相对于空白处理的存活率为71.7％、60.7％、67.4％(图5)。将RAG1-431、RAG1-553、RAG1-688分别转染HCT116细胞，分别诱导p21 mRNA表达2.3、3.5、和2.4倍，并产生相对于空白处理的存活率为45.3％、22.5％、38.5％(图6)。将RAG1-431、RAG1-553、RAG1-688分别转染HepG2细胞，分别诱导p21 mRNA表达2.2、3.3、和2.0倍，并产生相对空白处理的存活率为76.7％、64.9％、79.9％(图7)。
通过引用并入
本文引用的每个专利文献和科学文献的全部公开内容通过引用并入本文用于所有目的。
等效
本发明可以在不脱离其基本特征的情况下以其他具体形式实施。因此，前述实施例被认为是说明性的，而不是对本文所述的本发明的限制。本发明的范围由所附权利要求书而不是由前述说明书表示，并且意在将落入权利要求书的等同物的含义和范围内的所有改变包括在其中。
序列表
<110> 中美瑞康核酸技术（南通）研究院有限公司
<120> 一种激活p21基因表达的方法
<130> AJ2349PCT1901CN
<150> CN201810316672.1
<151> 2018-04-10
<160> 468
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atcaccatct tccaggagcg a 21
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ttctccatgg tggtgaagac g 21
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ggaagaccat gtggacctgt 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ggattagggc ttcctcttgg 20
<210> 5
<211> 92
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 5
ggctatgtgg ggagtattca ggagacagac aactcactcg tcaaatcctc cccttcctgg 60
ccaacaaagc tgctgcaacc acagggattt ct 92
<210> 6
<211> 86
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 6
ggtagtctct ccaattccct ccttcccgga agcatgtgac aatcaacaac tttgtatact 60
taagttcagt ggacctcaat ttcctc 86
<210> 7
<211> 35
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 7
ctttgttggg gtgtctaggt gctccaggtg cttct 35
<210> 8
<211> 51
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 8
ttctgggaga ggtgacctag tgagggatca gtgggaatag aggtgatatt g 51
<210> 9
<211> 30
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 9
aggtgatatt gtggggcttt tctggaaatt 30
<210> 10
<211> 38
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 10
attaatgtca tcctcctgat cttttcagct gcattggg 38
<210> 11
<211> 40
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 11
tctaacagtg ctgtgtcctc ctggagagtg ccaactcatt 40
<210> 12
<211> 66
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 12
gtgccaactc attctccaag taaaaaaagc cagatttgtg gctcacttcg tggggaaatg 60
tgtcca 66
<210> 13
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
ucguggggaa auguguccat t 21
<210> 14
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
uggacacauu uccccacgat t 21
<210> 15
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
uucgugggga aaugugucct t 21
<210> 16
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
ggacacauuu ccccacgaat t 21
<210> 17
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
cuucgugggg aaauguguct t 21
<210> 18
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
gacacauuuc cccacgaagt t 21
<210> 19
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
acuucguggg gaaaugugut t 21
<210> 20
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
acacauuucc ccacgaagut t 21
<210> 21
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
cacuucgugg ggaaaugugt t 21
<210> 22
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
cacauuuccc cacgaagugt t 21
<210> 23
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
ucacuucgug gggaaaugut t 21
<210> 24
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
acauuucccc acgaagugat t 21
<210> 25
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
cucacuucgu ggggaaaugt t 21
<210> 26
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
cauuucccca cgaagugagt t 21
<210> 27
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
gcucacuucg uggggaaaut t 21
<210> 28
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
auuuccccac gaagugagct t 21
<210> 29
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
ggcucacuuc guggggaaat t 21
<210> 30
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
uuuccccacg aagugagcct t 21
<210> 31
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
uggcucacuu cguggggaat t 21
<210> 32
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
uuccccacga agugagccat t 21
<210> 33
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
guggcucacu ucguggggat t 21
<210> 34
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
uccccacgaa gugagccact t 21
<210> 35
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
uguggcucac uucguggggt t 21
<210> 36
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
ccccacgaag ugagccacat t 21
<210> 37
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
uuuguggcuc acuucguggt t 21
<210> 38
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
ccacgaagug agccacaaat t 21
<210> 39
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
auuuguggcu cacuucgugt t 21
<210> 40
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
cacgaaguga gccacaaaut t 21
<210> 41
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
gauuuguggc ucacuucgut t 21
<210> 42
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
acgaagugag ccacaaauct t 21
<210> 43
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
agauuugugg cucacuucgt t 21
<210> 44
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
cgaagugagc cacaaaucut t 21
<210> 45
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
cagauuugug gcucacuuct t 21
<210> 46
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
gaagugagcc acaaaucugt t 21
<210> 47
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
ccagauuugu ggcucacuut t 21
<210> 48
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
aagugagcca caaaucuggt t 21
<210> 49
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
gccagauuug uggcucacut t 21
<210> 50
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
agugagccac aaaucuggct t 21
<210> 51
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
agccagauuu guggcucact t 21
<210> 52
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
gugagccaca aaucuggcut t 21
<210> 53
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
aagccagauu uguggcucat t 21
<210> 54
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
ugagccacaa aucuggcuut t 21
<210> 55
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
aaagccagau uuguggcuct t 21
<210> 56
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
gagccacaaa ucuggcuuut t 21
<210> 57
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
aaaagccaga uuuguggcut t 21
<210> 58
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
agccacaaau cuggcuuuut t 21
<210> 59
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
caacucauuc uccaaguaat t 21
<210> 60
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
uuacuuggag aaugaguugt t 21
<210> 61
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
ccaacucauu cuccaaguat t 21
<210> 62
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
uacuuggaga augaguuggt t 21
<210> 63
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
gccaacucau ucuccaagut t 21
<210> 64
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
acuuggagaa ugaguuggct t 21
<210> 65
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
ugccaacuca uucuccaagt t 21
<210> 66
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
cuuggagaau gaguuggcat t 21
<210> 67
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
gugccaacuc auucuccaat t 21
<210> 68
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
uuggagaaug aguuggcact t 21
<210> 69
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
uggagagugc caacucauut t 21
<210> 70
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
aaugaguugg cacucuccat t 21
<210> 71
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
cuggagagug ccaacucaut t 21
<210> 72
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
augaguuggc acucuccagt t 21
<210> 73
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
ccuggagagu gccaacucat t 21
<210> 74
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
ugaguuggca cucuccaggt t 21
<210> 75
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
uccuggagag ugccaacuct t 21
<210> 76
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 76
gaguuggcac ucuccaggat t 21
<210> 77
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 77
cuccuggaga gugccaacut t 21
<210> 78
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 78
aguuggcacu cuccaggagt t 21
<210> 79
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 79
ccuccuggag agugccaact t 21
<210> 80
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 80
guuggcacuc uccaggaggt t 21
<210> 81
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 81
uccuccugga gagugccaat t 21
<210> 82
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 82
uuggcacucu ccaggaggat t 21
<210> 83
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 83
guccuccugg agagugccat t 21
<210> 84
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 84
uggcacucuc caggaggact t 21
<210> 85
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 85
uguguccucc uggagagugt t 21
<210> 86
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 86
cacucuccag gaggacacat t 21
<210> 87
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 87
cuguguccuc cuggagagut t 21
<210> 88
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 88
acucuccagg aggacacagt t 21
<210> 89
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 89
gcuguguccu ccuggagagt t 21
<210> 90
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 90
cucuccagga ggacacagct t 21
<210> 91
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 91
ugcugugucc uccuggagat t 21
<210> 92
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 92
ucuccaggag gacacagcat t 21
<210> 93
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 93
gugcuguguc cuccuggagt t 21
<210> 94
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 94
cuccaggagg acacagcact t 21
<210> 95
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 95
agugcugugu ccuccuggat t 21
<210> 96
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 96
uccaggagga cacagcacut t 21
<210> 97
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 97
acagugcugu guccuccugt t 21
<210> 98
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 98
caggaggaca cagcacugut t 21
<210> 99
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 99
aacagugcug uguccuccut t 21
<210> 100
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 100
aggaggacac agcacuguut t 21
<210> 101
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 101
uaacagugcu guguccucct t 21
<210> 102
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 102
ggaggacaca gcacuguuat t 21
<210> 103
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 103
cuaacagugc uguguccuct t 21
<210> 104
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 104
gaggacacag cacuguuagt t 21
<210> 105
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 105
ucuaacagug cuguguccut t 21
<210> 106
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 106
aggacacagc acuguuagat t 21
<210> 107
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 107
ucuuuucagc ugcauugggt t 21
<210> 108
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 108
cccaaugcag cugaaaagat t 21
<210> 109
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 109
aucuuuucag cugcauuggt t 21
<210> 110
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 110
ccaaugcagc ugaaaagaut t 21
<210> 111
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 111
gaucuuuuca gcugcauugt t 21
<210> 112
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 112
caaugcagcu gaaaagauct t 21
<210> 113
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 113
ugaucuuuuc agcugcauut t 21
<210> 114
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 114
aaugcagcug aaaagaucat t 21
<210> 115
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 115
cugaucuuuu cagcugcaut t 21
<210> 116
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 116
augcagcuga aaagaucagt t 21
<210> 117
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 117
ccugaucuuu ucagcugcat t 21
<210> 118
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 118
ugcagcugaa aagaucaggt t 21
<210> 119
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 119
uccugaucuu uucagcugct t 21
<210> 120
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 120
gcagcugaaa agaucaggat t 21
<210> 121
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 121
cuccugaucu uuucagcugt t 21
<210> 122
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 122
cagcugaaaa gaucaggagt t 21
<210> 123
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 123
ccuccugauc uuuucagcut t 21
<210> 124
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 124
agcugaaaag aucaggaggt t 21
<210> 125
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 125
uccuccugau cuuuucagct t 21
<210> 126
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 126
gcugaaaaga ucaggaggat t 21
<210> 127
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 127
auccuccuga ucuuuucagt t 21
<210> 128
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 128
cugaaaagau caggaggaut t 21
<210> 129
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 129
cauccuccug aucuuuucat t 21
<210> 130
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 130
ugaaaagauc aggaggaugt t 21
<210> 131
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 131
ucauccuccu gaucuuuuct t 21
<210> 132
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 132
gaaaagauca ggaggaugat t 21
<210> 133
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 133
gucauccucc ugaucuuuut t 21
<210> 134
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 134
aaaagaucag gaggaugact t 21
<210> 135
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 135
ugucauccuc cugaucuuut t 21
<210> 136
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 136
aaagaucagg aggaugacat t 21
<210> 137
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 137
augucauccu ccugaucuut t 21
<210> 138
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 138
aagaucagga ggaugacaut t 21
<210> 139
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 139
aaugucaucc uccugaucut t 21
<210> 140
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 140
agaucaggag gaugacauut t 21
<210> 141
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 141
uaaugucauc cuccugauct t 21
<210> 142
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 142
gaucaggagg augacauuat t 21
<210> 143
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 143
uuaaugucau ccuccugaut t 21
<210> 144
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 144
aucaggagga ugacauuaat t 21
<210> 145
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 145
auuaauguca uccuccugat t 21
<210> 146
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 146
ucaggaggau gacauuaaut t 21
<210> 147
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 147
uggggcuuuu cuggaaauut t 21
<210> 148
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 148
aauuuccaga aaagccccat t 21
<210> 149
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 149
guggggcuuu ucuggaaaut t 21
<210> 150
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 150
auuuccagaa aagccccact t 21
<210> 151
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 151
uguggggcuu uucuggaaat t 21
<210> 152
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 152
uuuccagaaa agccccacat t 21
<210> 153
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 153
uuguggggcu uuucuggaat t 21
<210> 154
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 154
uuccagaaaa gccccacaat t 21
<210> 155
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 155
auuguggggc uuuucuggat t 21
<210> 156
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 156
uccagaaaag ccccacaaut t 21
<210> 157
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 157
uauugugggg cuuuucuggt t 21
<210> 158
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 158
ccagaaaagc cccacaauat t 21
<210> 159
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 159
auauuguggg gcuuuucugt t 21
<210> 160
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 160
cagaaaagcc ccacaauaut t 21
<210> 161
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 161
gauauugugg ggcuuuucut t 21
<210> 162
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 162
agaaaagccc cacaauauct t 21
<210> 164
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 164
ugauauugug gggcuuuuct t 21
<210> 165
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 165
gaaaagcccc acaauaucat t 21
<210> 166
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 166
gugauauugu ggggcuuuut t 21
<210> 167
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 167
aaaagcccca caauaucact t 21
<210> 168
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 168
ggugauauug uggggcuuut t 21
<210> 169
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 169
aaagccccac aauaucacct t 21
<210> 170
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 170
aggugauauu guggggcuut t 21
<210> 171
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 171
aagccccaca auaucaccut t 21
<210> 171
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 171
gggaauagag gugauauugt t 21
<210> 172
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 172
caauaucacc ucuauuccct t 21
<210> 173
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 173
ugggaauaga ggugauauut t 21
<210> 174
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 174
aauaucaccu cuauucccat t 21
<210> 175
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 175
gugggaauag aggugauaut t 21
<210> 176
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 176
auaucaccuc uauucccact t 21
<210> 177
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 177
agugggaaua gaggugauat t 21
<210> 178
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 178
uaucaccucu auucccacut t 21
<210> 179
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 179
cagugggaau agaggugaut t 21
<210> 180
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 180
aucaccucua uucccacugt t 21
<210> 181
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 181
ucagugggaa uagaggugat t 21
<210> 182
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 182
ucaccucuau ucccacugat t 21
<210> 183
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 183
aucaguggga auagaggugt t 21
<210> 184
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 184
caccucuauu cccacugaut t 21
<210> 185
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 185
gaucaguggg aauagaggut t 21
<210> 186
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 186
accucuauuc ccacugauct t 21
<210> 187
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 187
ggaucagugg gaauagaggt t 21
<210> 188
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 188
ccucuauucc cacugaucct t 21
<210> 189
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 189
gggaucagug ggaauagagt t 21
<210> 190
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 190
cucuauuccc acugauccct t 21
<210> 191
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 191
agggaucagu gggaauagat t 21
<210> 192
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 192
ucuauuccca cugaucccut t 21
<210> 193
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 193
gagggaucag ugggaauagt t 21
<210> 194
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 194
cuauucccac ugaucccuct t 21
<210> 195
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 195
ugagggauca gugggaauat t 21
<210> 196
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 196
uauucccacu gaucccucat t 21
<210> 197
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 197
gugagggauc agugggaaut t 21
<210> 198
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 198
auucccacug aucccucact t 21
<210> 199
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 199
agugagggau cagugggaat t 21
<210> 200
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 200
uucccacuga ucccucacut t 21
<210> 201
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 201
uagugaggga ucagugggat t 21
<210> 202
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 202
ucccacugau cccucacuat t 21
<210> 203
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 203
cuagugaggg aucagugggt t 21
<210> 204
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 204
cccacugauc ccucacuagt t 21
<210> 205
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 205
accuagugag ggaucagugt t 21
<210> 206
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 206
cacugauccc ucacuaggut t 21
<210> 207
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 207
gaccuaguga gggaucagut t 21
<210> 208
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 208
acugaucccu cacuagguct t 21
<210> 209
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 209
ugaccuagug agggaucagt t 21
<210> 210
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 210
cugaucccuc acuaggucat t 21
<210> 211
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 211
gugaccuagu gagggaucat t 21
<210> 212
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 212
ugaucccuca cuaggucact t 21
<210> 213
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 213
ggugaccuag ugagggauct t 21
<210> 214
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 214
gaucccucac uaggucacct t 21
<210> 215
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 215
aggugaccua gugagggaut t 21
<210> 216
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 216
aucccucacu aggucaccut t 21
<210> 217
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 217
gaggugaccu agugagggat t 21
<210> 218
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 218
ucccucacua ggucaccuct t 21
<210> 219
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 219
ggagagguga ccuagugagt t 21
<210> 220
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 220
cucacuaggu caccucucct t 21
<210> 221
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 221
gggagaggug accuagugat t 21
<210> 222
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 222
ucacuagguc accucuccct t 21
<210> 223
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 223
ugggagaggu gaccuagugt t 21
<210> 224
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 224
cacuagguca ccucucccat t 21
<210> 225
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 225
cugggagagg ugaccuagut t 21
<210> 226
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 226
acuaggucac cucucccagt t 21
<210> 227
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 227
ucugggagag gugaccuagt t 21
<210> 228
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 228
cuaggucacc ucucccagat t 21
<210> 229
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 229
uucugggaga ggugaccuat t 21
<210> 230
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 230
uaggucaccu cucccagaat t 21
<210> 231
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 231
aggugcucca ggugcuucut t 21
<210> 232
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 232
agaagcaccu ggagcaccut t 21
<210> 233
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 233
uaggugcucc aggugcuuct t 21
<210> 234
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 234
gaagcaccug gagcaccuat t 21
<210> 235
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 235
ugucuaggug cuccaggugt t 21
<210> 236
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 236
caccuggagc accuagacat t 21
<210> 237
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 237
ggugucuagg ugcuccaggt t 21
<210> 238
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 238
ccuggagcac cuagacacct t 21
<210> 239
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 239
gggugucuag gugcuccagt t 21
<210> 240
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 240
cuggagcacc uagacaccct t 21
<210> 241
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 241
ggggugucua ggugcuccat t 21
<210> 242
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 242
uggagcaccu agacacccct t 21
<210> 243
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 243
uggggugucu aggugcucct t 21
<210> 244
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 244
ggagcaccua gacaccccat t 21
<210> 245
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 245
uugggguguc uaggugcuct t 21
<210> 246
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 246
gagcaccuag acaccccaat t 21
<210> 247
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 247
uuguuggggu gucuaggugt t 21
<210> 248
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 248
caccuagaca ccccaacaat t 21
<210> 249
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 249
uuuguugggg ugucuaggut t 21
<210> 250
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 250
accuagacac cccaacaaat t 21
<210> 251
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 251
cuuuguuggg gugucuaggt t 21
<210> 252
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 252
ccuagacacc ccaacaaagt t 21
<210> 253
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 253
aguggaccuc aauuuccuct t 21
<210> 254
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 254
gaggaaauug agguccacut t 21
<210> 255
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 255
caguggaccu caauuuccut t 21
<210> 256
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 256
aggaaauuga gguccacugt t 21
<210> 257
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 257
ucaguggacc ucaauuucct t 21
<210> 258
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 258
ggaaauugag guccacugat t 21
<210> 259
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 259
uucaguggac cucaauuuct t 21
<210> 260
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 260
gaaauugagg uccacugaat t 21
<210> 261
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 261
guucagugga ccucaauuut t 21
<210> 262
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 262
aaauugaggu ccacugaact t 21
<210> 263
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 263
aguucagugg accucaauut t 21
<210> 264
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 264
aauugagguc cacugaacut t 21
<210> 265
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 265
aaguucagug gaccucaaut t 21
<210> 266
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 266
auugaggucc acugaacuut t 21
<210> 267
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 267
uaaguucagu ggaccucaat t 21
<210> 268
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 268
uugaggucca cugaacuuat t 21
<210> 269
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 269
uuaaguucag uggaccucat t 21
<210> 270
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 270
ugagguccac ugaacuuaat t 21
<210> 271
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 271
cuuaaguuca guggaccuct t 21
<210> 272
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 272
gagguccacu gaacuuaagt t 21
<210> 273
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 273
acuuaaguuc aguggaccut t 21
<210> 274
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 274
agguccacug aacuuaagut t 21
<210> 275
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 275
uacuuaaguu caguggacct t 21
<210> 276
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 276
gguccacuga acuuaaguat t 21
<210> 277
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 277
auacuuaagu ucaguggact t 21
<210> 278
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 278
guccacugaa cuuaaguaut t 21
<210> 279
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 279
gugacaauca acaacuuugt t 21
<210> 280
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 280
caaaguuguu gauugucact t 21
<210> 281
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 281
caugugacaa ucaacaacut t 21
<210> 282
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 282
aguuguugau ugucacaugt t 21
<210> 283
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 283
gcaugugaca aucaacaact t 21
<210> 284
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 284
guuguugauu gucacaugct t 21
<210> 285
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 285
agcaugugac aaucaacaat t 21
<210> 286
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 286
uuguugauug ucacaugcut t 21
<210> 287
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 287
aagcauguga caaucaacat t 21
<210> 288
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 288
uguugauugu cacaugcuut t 21
<210> 289
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 289
gaagcaugug acaaucaact t 21
<210> 290
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 290
guugauuguc acaugcuuct t 21
<210> 291
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 291
ggaagcaugu gacaaucaat t 21
<210> 292
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 292
uugauuguca caugcuucct t 21
<210> 293
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 293
cggaagcaug ugacaaucat t 21
<210> 294
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 294
ugauugucac augcuuccgt t 21
<210> 295
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 295
ccggaagcau gugacaauct t 21
<210> 296
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 296
gauugucaca ugcuuccggt t 21
<210> 297
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 297
cccggaagca ugugacaaut t 21
<210> 298
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 298
auugucacau gcuuccgggt t 21
<210> 299
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 299
ucccggaagc augugacaat t 21
<210> 300
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 300
uugucacaug cuuccgggat t 21
<210> 301
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 301
uucccggaag caugugacat t 21
<210> 302
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 302
ugucacaugc uuccgggaat t 21
<210> 303
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 303
cuucccggaa gcaugugact t 21
<210> 304
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 304
gucacaugcu uccgggaagt t 21
<210> 305
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 305
ccuucccgga agcaugugat t 21
<210> 306
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 306
ucacaugcuu ccgggaaggt t 21
<210> 307
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 307
uccuucccgg aagcaugugt t 21
<210> 308
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 308
cacaugcuuc cgggaaggat t 21
<210> 309
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 309
cuccuucccg gaagcaugut t 21
<210> 310
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 310
acaugcuucc gggaaggagt t 21
<210> 311
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 311
ccuccuuccc ggaagcaugt t 21
<210> 312
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 312
caugcuuccg ggaaggaggt t 21
<210> 313
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 313
cccuccuucc cggaagcaut t 21
<210> 314
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 314
augcuuccgg gaaggagggt t 21
<210> 315
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 315
ucccuccuuc ccggaagcat t 21
<210> 316
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 316
ugcuuccggg aaggagggat t 21
<210> 317
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 317
auucccuccu ucccggaagt t 21
<210> 318
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 318
cuuccgggaa ggagggaaut t 21
<210> 319
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 319
aauucccucc uucccggaat t 21
<210> 320
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 320
uuccgggaag gagggaauut t 21
<210> 321
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 321
ucuccaauuc ccuccuucct t 21
<210> 322
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 322
ggaaggaggg aauuggagat t 21
<210> 323
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 323
cucuccaauu cccuccuuct t 21
<210> 324
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 324
gaaggaggga auuggagagt t 21
<210> 325
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 325
ucucuccaau ucccuccuut t 21
<210> 326
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 326
aaggagggaa uuggagagat t 21
<210> 327
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 327
gucucuccaa uucccuccut t 21
<210> 328
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 328
aggagggaau uggagagact t 21
<210> 329
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 329
agucucucca auucccucct t 21
<210> 330
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 330
ggagggaauu ggagagacut t 21
<210> 331
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 331
uagucucucc aauucccuct t 21
<210> 332
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 332
gagggaauug gagagacuat t 21
<210> 333
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 333
guagucucuc caauucccut t 21
<210> 334
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 334
agggaauugg agagacuact t 21
<210> 335
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 335
gguagucucu ccaauuccct t 21
<210> 336
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 336
gggaauugga gagacuacct t 21
<210> 337
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 337
ugcaaccaca gggauuucut t 21
<210> 338
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 338
agaaaucccu gugguugcat t 21
<210> 339
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 339
cugcaaccac agggauuuct t 21
<210> 340
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 340
gaaaucccug ugguugcagt t 21
<210> 341
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 341
gcugcaacca cagggauuut t 21
<210> 342
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 342
aaaucccugu gguugcagct t 21
<210> 343
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 343
ugcugcaacc acagggauut t 21
<210> 344
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 344
aaucccugug guugcagcat t 21
<210> 345
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 345
cugcugcaac cacagggaut t 21
<210> 346
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 346
aucccugugg uugcagcagt t 21
<210> 347
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 347
gcugcugcaa ccacagggat t 21
<210> 348
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 348
ucccuguggu ugcagcagct t 21
<210> 349
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 349
agcugcugca accacagggt t 21
<210> 350
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 350
cccugugguu gcagcagcut t 21
<210> 351
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 351
aaagcugcug caaccacagt t 21
<210> 352
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 352
cugugguugc agcagcuuut t 21
<210> 353
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 353
caaagcugcu gcaaccacat t 21
<210> 354
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 354
ugugguugca gcagcuuugt t 21
<210> 355
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 355
acaaagcugc ugcaaccact t 21
<210> 356
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 356
gugguugcag cagcuuugut t 21
<210> 357
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 357
aacaaagcug cugcaaccat t 21
<210> 358
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 358
ugguugcagc agcuuuguut t 21
<210> 359
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 359
caacaaagcu gcugcaacct t 21
<210> 360
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 360
gguugcagca gcuuuguugt t 21
<210> 361
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 361
ccaacaaagc ugcugcaact t 21
<210> 362
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 362
guugcagcag cuuuguuggt t 21
<210> 363
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 363
gccaacaaag cugcugcaat t 21
<210> 364
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 364
uugcagcagc uuuguuggct t 21
<210> 365
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 365
ggccaacaaa gcugcugcat t 21
<210> 366
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 366
ugcagcagcu uuguuggcct t 21
<210> 367
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 367
uggccaacaa agcugcugct t 21
<210> 368
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 368
gcagcagcuu uguuggccat t 21
<210> 369
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 369
cuggccaaca aagcugcugt t 21
<210> 370
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 370
cagcagcuuu guuggccagt t 21
<210> 371
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 371
ccuggccaac aaagcugcut t 21
<210> 372
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 372
agcagcuuug uuggccaggt t 21
<210> 373
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 373
uuccuggcca acaaagcugt t 21
<210> 374
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 374
cagcuuuguu ggccaggaat t 21
<210> 375
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 375
cuuccuggcc aacaaagcut t 21
<210> 376
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 376
agcuuuguug gccaggaagt t 21
<210> 377
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 377
cccuuccugg ccaacaaagt t 21
<210> 378
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 378
cuuuguuggc caggaagggt t 21
<210> 379
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 379
ccccuuccug gccaacaaat t 21
<210> 380
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 380
uuuguuggcc aggaaggggt t 21
<210> 381
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 381
uccccuuccu ggccaacaat t 21
<210> 382
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 382
uuguuggcca ggaaggggat t 21
<210> 383
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 383
cuccccuucc uggccaacat t 21
<210> 384
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 384
uguuggccag gaaggggagt t 21
<210> 385
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 385
uccuccccuu ccuggccaat t 21
<210> 386
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 386
uuggccagga aggggaggat t 21
<210> 387
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 387
auccuccccu uccuggccat t 21
<210> 388
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 388
uggccaggaa ggggaggaut t 21
<210> 389
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 389
ucaaauccuc cccuuccugt t 21
<210> 390
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 390
caggaagggg aggauuugat t 21
<210> 391
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 391
gucaaauccu ccccuuccut t 21
<210> 392
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 392
aggaagggga ggauuugact t 21
<210> 393
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 393
cgucaaaucc uccccuucct t 21
<210> 394
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 394
ggaaggggag gauuugacgt t 21
<210> 395
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 395
ucgucaaauc cuccccuuct t 21
<210> 396
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 396
gaaggggagg auuugacgat t 21
<210> 397
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 397
cucgucaaau ccuccccuut t 21
<210> 398
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 398
aaggggagga uuugacgagt t 21
<210> 399
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 399
acucgucaaa uccuccccut t 21
<210> 400
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 400
aggggaggau uugacgagut t 21
<210> 401
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 401
ucacucguca aauccuccct t 21
<210> 402
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 402
gggaggauuu gacgagugat t 21
<210> 403
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 403
cucacucguc aaauccucct t 21
<210> 404
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 404
ggaggauuug acgagugagt t 21
<210> 405
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 405
acucacucgu caaauccuct t 21
<210> 406
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 406
gaggauuuga cgagugagut t 21
<210> 407
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 407
caacucacuc gucaaaucct t 21
<210> 408
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 408
ggauuugacg agugaguugt t 21
<210> 409
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 409
acaacucacu cgucaaauct t 21
<210> 410
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 410
gauuugacga gugaguugut t 21
<210> 411
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 411
gacaacucac ucgucaaaut t 21
<210> 412
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 412
auuugacgag ugaguuguct t 21
<210> 413
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 413
agacaacuca cucgucaaat t 21
<210> 414
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 414
uuugacgagu gaguugucut t 21
<210> 415
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 415
cagacaacuc acucgucaat t 21
<210> 416
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 416
uugacgagug aguugucugt t 21
<210> 417
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 417
acagacaacu cacucgucat t 21
<210> 418
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 418
ugacgaguga guugucugut t 21
<210> 419
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 419
gacagacaac ucacucguct t 21
<210> 420
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 420
gacgagugag uugucuguct t 21
<210> 421
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 421
agacagacaa cucacucgut t 21
<210> 422
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 422
acgagugagu ugucugucut t 21
<210> 423
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 423
gagacagaca acucacucgt t 21
<210> 424
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 424
cgagugaguu gucugucuct t 21
<210> 425
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 425
ggagacagac aacucacuct t 21
<210> 426
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 426
gagugaguug ucugucucct t 21
<210> 427
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 427
aggagacaga caacucacut t 21
<210> 428
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 428
agugaguugu cugucuccut t 21
<210> 429
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 429
caggagacag acaacucact t 21
<210> 430
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 430
gugaguuguc ugucuccugt t 21
<210> 431
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 431
ucaggagaca gacaacucat t 21
<210> 432
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 432
ugaguugucu gucuccugat t 21
<210> 433
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 433
uucaggagac agacaacuct t 21
<210> 434
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 434
gaguugucug ucuccugaat t 21
<210> 435
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 435
auucaggaga cagacaacut t 21
<210> 436
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 436
aguugucugu cuccugaaut t 21
<210> 437
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 437
uauucaggag acagacaact t 21
<210> 438
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 438
guugucuguc uccugaauat t 21
<210> 439
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 439
guauucagga gacagacaat t 21
<210> 440
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 440
uugucugucu ccugaauact t 21
<210> 441
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 441
aguauucagg agacagacat t 21
<210> 442
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 442
ugucugucuc cugaauacut t 21
<210> 443
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 443
gaguauucag gagacagact t 21
<210> 444
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 444
gucugucucc ugaauacuct t 21
<210> 445
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 445
ggaguauuca ggagacagat t 21
<210> 446
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 446
ucugucuccu gaauacucct t 21
<210> 447
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 447
gggaguauuc aggagacagt t 21
<210> 448
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 448
cugucuccug aauacuccct t 21
<210> 449
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 449
ggggaguauu caggagacat t 21
<210> 450
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 450
ugucuccuga auacucccct t 21
<210> 451
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 451
uggggaguau ucaggagact t 21
<210> 452
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 452
gucuccugaa uacuccccat t 21
<210> 453
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 453
guggggagua uucaggagat t 21
<210> 454
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 454
ucuccugaau acuccccact t 21
<210> 455
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 455
uguggggagu auucaggagt t 21
<210> 456
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 456
cuccugaaua cuccccacat t 21
<210> 457
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 457
auguggggag uauucaggat t 21
<210> 458
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 458
uccugaauac uccccacaut t 21
<210> 459
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 459
uaugugggga guauucaggt t 21
<210> 460
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 460
ccugaauacu ccccacauat t 21
<210> 461
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 461
cuaugugggg aguauucagt t 21
<210> 462
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 462
cugaauacuc cccacauagt t 21
<210> 463
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 463
gcuauguggg gaguauucat t 21
<210> 464
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 464
ugaauacucc ccacauagct t 21
<210> 465
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 465
ggcuaugugg ggaguauuct t 21
<210> 466
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 466
gaauacuccc cacauagcct t 21
<210> 467
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 467
gggcuaugug gggaguauut t 21
<210> 468
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 468
aauacucccc acauagccct t 21
Claims (30)
1.一种分离的p21基因小激活RNA靶位点，其中所述靶位点为SEQ ID No:12的第40位至60位中的任意连续19个核苷酸序列。
2.一种小激活RNA，其特征在于，所述小激活RNA靶向权利要求1所述的靶位点，其中所述小激活RNA中靶向所述靶位点的区域与SEQ ID NO:12所示的序列第40位至60位中的任意连续19个核苷酸序列具有100％同源性或互补性，所述小激活RNA通过靶向人p21基因启动子序列激活或上调p21基因的表达。
3.如权利要求2所述的小激活RNA，其中所述小激活RNA包含正义核酸链和反义核酸链，所述正义核酸链和反义核酸链含有互补区域，互补区域能形成双链核酸结构。
4.如权利要求3所述的小激活RNA，其中所述正义核酸链和反义核酸链存在于两条不同的核酸链上。
5.如权利要求3所述的小激活RNA，其中所述正义核酸链和反义核酸链存在于同一条核酸链上，为发夹型单链核酸分子，其中正义核酸链和反义核酸链的互补区域形成双链核酸结构。
6.如权利要求4或5所述的小激活RNA，其中所述小激活RNA中的至少一条链具有长度为0至6个核苷酸的3’突出端。
7.如权利要求6所述的小激活RNA，其中所述小激活RNA中的两条链都具有长度为2-3个核苷酸的3’突出端。
8.如权利要求3所述的小激活RNA，其中所述正义核酸链或反义核酸链的长度为21个核苷酸。
9.如权利要求2所述的小激活RNA，其中所述正义核酸链或反义核酸链序列如SEQ IDNO：25-30任一核苷酸序列所示。
10.如权利要求2所述的小激活RNA，其中所述小激活RNA中的至少一个核苷酸为化学修饰的核苷酸，所述化学修饰为如下修饰中的至少一种：
(1)对所述小激活RNA的核苷酸序列中连接核苷酸的磷酸二酯键的修饰；
(2)对所述小激活RNA的核苷酸序列中的核糖的2’-OH的修饰；
(3)对所述小激活RNA的核苷酸序列中的碱基的修饰；
(4)所述小激活核酸分子的核苷酸序列中的至少一个核苷酸为锁核酸。
11.如权利要求2所述的小激活RNA，所述激活或上调p21基因的表达为上调至少10％。
12.如权利要求1所述的p21基因小激活RNA靶位点或如权利要求2至11任一项所述的小激活RNA在制备用于激活或上调p21基因在细胞中表达的制剂中的应用。
13.如权利要求12所述的应用，其中所述的小激活RNA被直接导入所述细胞中。
14.如权利要求13所述的应用，其中所述的细胞是哺乳动物细胞。
15.如权利要求14所述的应用，其中所述哺乳动物细胞为人类细胞。
16.如权利要求15所述的应用，其中所述人类细胞为人类肿瘤细胞。
17.如权利要求14所述的应用，其中所述的细胞存在于人体中。
18.如权利要求17所述的应用，其中所述的人体是患有由p21蛋白表达不足引发的肿瘤患者，并且所述小激活核酸分子被施用以有效量以实现对肿瘤的治疗。
19.如权利要求18所述的应用，其中所述肿瘤为膀胱癌、前列腺癌、肝癌或结直肠癌。
20.一种非诊断和治疗目的的激活或上调p21基因在细胞中表达的方法，其中所述方法包括向所述细胞施用如权利要求2至11任一项所述的小激活RNA。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述的小激活RNA被直接导入所述细胞中。
22.如权利要求20或21所述的方法，其中所述的细胞是哺乳动物细胞。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述哺乳动物细胞为人类细胞.
24.如权利要求23所述的方法，其中所述人类细胞为人类肿瘤细胞。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述人类肿瘤细胞为人膀胱癌、前列腺癌、肝癌或结直肠癌细胞。
26.一种包含如权利要求2至11任一项所述的小激活RNA和药学上可接受的载体的组合物。
27.如权利要求26所述的组合物，其特征在用于药学上可接受的载体为脂质体、高分子聚合物或多肽。
28.如权利要求1所述的p21基因小激活RNA靶位点或如权利要求2至11任一项小激活RNA或如权利要求26或27所述的组合物在制备用于激活或上调p21基因表达的药物中的应用。
29.如权利要求1所述的p21基因小激活RNA靶位点或如权利要求2至11任一项小激活RNA或如权利要求26或27所述的组合物在制备抗肿瘤或良性增殖性病变中的药物中的应用。
30.如权利要求29所述的应用，其中所述肿瘤为膀胱癌、前列腺癌、肝癌或结直肠癌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110841287.0A CN113584027A (zh) | 2018-04-10 | 2019-04-10 | 一种激活p21基因表达的方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2018103166721 | 2018-04-10 | ||
| CN201810316672 | 2018-04-10 | ||
| PCT/CN2019/082126 WO2019196883A1 (zh) | 2018-04-10 | 2019-04-10 | 一种激活p21基因表达的方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110841287.0A Division CN113584027A (zh) | 2018-04-10 | 2019-04-10 | 一种激活p21基因表达的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110678549A CN110678549A (zh) | 2020-01-10 |
| CN110678549B true CN110678549B (zh) | 2021-06-22 |
Family
ID=68163046
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110841287.0A Pending CN113584027A (zh) | 2018-04-10 | 2019-04-10 | 一种激活p21基因表达的方法 |
| CN201980002538.7A Active CN110678549B (zh) | 2018-04-10 | 2019-04-10 | 一种激活p21基因表达的方法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110841287.0A Pending CN113584027A (zh) | 2018-04-10 | 2019-04-10 | 一种激活p21基因表达的方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20210024915A1 (zh) |
| EP (1) | EP3778893A4 (zh) |
| JP (1) | JP2021520220A (zh) |
| KR (1) | KR20200143428A (zh) |
| CN (2) | CN113584027A (zh) |
| WO (1) | WO2019196883A1 (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116848245A (zh) * | 2021-02-07 | 2023-10-03 | 中美瑞康核酸技术(南通)研究院有限公司 | 用于治疗增殖性玻璃体视网膜病变的双链核酸分子及其应用 |
| EP4289952A1 (en) * | 2021-02-07 | 2023-12-13 | Ractigen Therapeutics | Chemically modified small activating rna |
| WO2022166849A1 (en) * | 2021-02-08 | 2022-08-11 | Ractigen Therapeutics | Multi-valent oligonucleotide agent and methods of use thereof |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2604532C (en) * | 2005-04-15 | 2017-03-07 | The Regents Of The University Of California | Small activating rna molecules and methods of use |
| US9045751B2 (en) * | 2010-04-28 | 2015-06-02 | The Regents Of The University Of California | Modified small activating RNA molecules and methods of use |
| CN102657878B (zh) * | 2012-05-01 | 2014-04-16 | 浙江大学 | Ints6基因小激活rna在制备抗前列腺癌药物中的应用 |
| CN102641508A (zh) * | 2012-05-01 | 2012-08-22 | 浙江大学 | 靶向上调par-4基因小rna在制备抗膀胱癌药物中的应用 |
| WO2016145608A1 (zh) * | 2015-03-17 | 2016-09-22 | 中国医学科学院北京协和医院 | 一种小激活rna及其制备方法和应用 |
| CN106032532A (zh) * | 2015-03-17 | 2016-10-19 | 中国医学科学院北京协和医院 | 一种小激活rna及其制备方法和应用 |
| EP3316894A4 (en) * | 2015-07-02 | 2019-06-19 | City of Hope | COMPOUNDS AND COMPOSITIONS USING PHOSPHOROIDED OLIGODESOXYNUCLEOTIDE AND METHOD OF USE THEREOF |
-
2019
- 2019-04-10 CN CN202110841287.0A patent/CN113584027A/zh active Pending
- 2019-04-10 WO PCT/CN2019/082126 patent/WO2019196883A1/zh unknown
- 2019-04-10 CN CN201980002538.7A patent/CN110678549B/zh active Active
- 2019-04-10 EP EP19785602.4A patent/EP3778893A4/en not_active Withdrawn
- 2019-04-10 KR KR1020207032370A patent/KR20200143428A/ko unknown
- 2019-04-10 JP JP2020555223A patent/JP2021520220A/ja active Pending
- 2019-04-10 US US15/733,357 patent/US20210024915A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2021520220A (ja) | 2021-08-19 |
| WO2019196883A1 (zh) | 2019-10-17 |
| EP3778893A1 (en) | 2021-02-17 |
| KR20200143428A (ko) | 2020-12-23 |
| CN110678549A (zh) | 2020-01-10 |
| CN113584027A (zh) | 2021-11-02 |
| US20210024915A1 (en) | 2021-01-28 |
| EP3778893A4 (en) | 2022-04-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108350489B (zh) | 用于使用rna引导的核酸结合蛋白的分子邻位检测的方法和试剂 | |
| CN110959042B (zh) | 一种新型小激活rna | |
| US20220251578A1 (en) | Genetic elements driving circular rna translation and methods of use | |
| CN110678549B (zh) | 一种激活p21基因表达的方法 | |
| CN114787357A (zh) | 用于编辑靶标rna的添加了功能性区域的反义型指导rna | |
| JPH07500735A (ja) | メッセンジャーｒｎａの同定、単離およびクローニング | |
| WO2015196120A1 (en) | Methods and compositions for detecting polynucleotides and fragments thereof | |
| Hoch et al. | Bacillus subtilis 6S-2 RNA serves as a template for short transcripts in vivo | |
| CN112063622A (zh) | I型ifnar功能缺失的细胞系的构建方法及其应用 | |
| US10196662B2 (en) | Composition for producing microRNA precursors as drugs for enhancing wound healing and production method of the microRNA precursors | |
| WO2010103522A1 (en) | Method for detection of nucleic acid sequences | |
| US20070167388A1 (en) | Nucleotide sequences promoting the trans-membrane transport of nucleic acids | |
| Ringuette et al. | Stimulation of transcription of chromatin by specific small nuclear RNAs | |
| AU2020265062A1 (en) | Oligomeric nucleic acid molecule, and application thereof in acute intermittent porphyria treatment | |
| CN112080498A (zh) | 靶向PLK1的siRNA及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 | |
| KR101873327B1 (ko) | 애기 장대에서 유래한 신규 호밍 엔도뉴클레아제 | |
| US20230220389A1 (en) | Nucleic acid molecule targeting mitf gene and use thereof | |
| CN113444807B (zh) | 一种绵羊脂肪相关的circRNA及其应用 | |
| CN106591311B (zh) | 核酸及其用途 | |
| Piacenti | Tackling neuroblastoma: Development of PNA-based miR-34a mimics |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 40016997 Country of ref document: HK |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20220608 Address after: Unit e595, floor 5, Lecheng Plaza, phase II, biomedical industrial park, 218 Sangtian street, Suzhou area, 215000 China (Jiangsu) pilot Free Trade Zone Patentee after: Kaiji Pharmaceutical Technology (Suzhou) Co.,Ltd. Address before: 226400 building 18, life and Health Industrial Park, Rudong high tech Zone, 888 Zhujiang Road, juegang street, Rudong County, Nantong City, Jiangsu Province Patentee before: Sino-American Ruikang Nucleic Acid Technology (Nantong) Research Institute Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right |