CN112080498A - 靶向PLK1的siRNA及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 - Google Patents
靶向PLK1的siRNA及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112080498A CN112080498A CN201910509844.1A CN201910509844A CN112080498A CN 112080498 A CN112080498 A CN 112080498A CN 201910509844 A CN201910509844 A CN 201910509844A CN 112080498 A CN112080498 A CN 112080498A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nucleic acid
- acid molecule
- sequence
- stranded nucleic
- molecule shown
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/11—Protein-serine/threonine kinases (2.7.11)
- C12Y207/11021—Polo kinase (2.7.11.21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了靶向PLK1的siRNA及其在制备肿瘤治疗药物中的应用。本发明要求保护一种核酸分子或其进行化学修饰后得到的核酸分子，所述核酸分子为PLK1‑446、PLK1‑1744、PLK1‑1177、PLK1‑1583、PLK1‑400、PLK1‑821或PLK1‑1483。本发明还保护所述核酸分子在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a)、(b)或(c)：(a)抑制癌细胞增殖；(b)治疗癌症；(c)抑制PLK1基因表达。本发明提供了靶向PLK1基因的非化学修饰及化学修饰核酸分子，对癌症具有较好的治疗效果，为临床治疗癌症奠定了基础，具有重大的应用推广价值。
Description
技术领域
本发明属于生物技术和治疗领域，具体涉及靶向PLK1的siRNA及其在制备肿瘤治疗药物中的应用。
背景技术
Plk1(Polo-like Kinase 1)属于Polo样激酶家族，是一类广泛存在于真核细胞中的丝氨酸/苏氨酸激酶。PLK1基因可通过其激酶活性与多种底物相互作用，调节细胞有丝分裂、胞质分裂、DNA损伤应答、发育等过程。PLK1被证明是一种肿瘤驱动基因，其过表达及突变通常会不同程度引起肿瘤等相关疾病。在多种肿瘤包括乳腺癌发生发展过程中，PLK1基因起着非常重要的作用。抑制PLK1能够控制肿瘤细胞增殖，从而减缓肿瘤生长。目前并没有针对PLK1靶向治疗的药物，因此，开发针对PLK1基因靶点的药物尤为迫切。
siRNA是一类小RNA序列，通常是20-25nt的双链RNA。siRNA可以通过结合靶基因的编码区(CDS)，引起mRNA水平的降解，导致蛋白翻译受阻。大量的研究表明，siRNA可以作用于多种靶基因，从而治疗该基因引起的各类疾病。
发明内容
本发明的目的是提供靶向PLK1的siRNA及其在制备肿瘤治疗药物中的应用。
本发明首先保护如下核酸分子：PLK1-446、PLK1-1744、PLK1-1177、PLK1-1583、PLK1-400、PLK1-821或PLK1-1483；
所述PLK1-446由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成；
所述PLK1-1744由序列3所示的单链核酸分子和序列4所示的单链核酸分子形成；
所述PLK1-1177由序列5所示的单链核酸分子和序列6所示的单链核酸分子形成；
所述PLK1-1583由序列7所示的单链核酸分子和序列8所示的单链核酸分子形成；
所述PLK1-400由序列9所示的单链核酸分子和序列10所示的单链核酸分子形成；
所述PLK1-821由序列11所示的单链核酸分子和序列12所示的单链核酸分子形成；
所述PLK1-1483由序列13所示的单链核酸分子和序列14所示的单链核酸分子形成。
本发明还保护上述核酸分子的衍生物，所述衍生物为如下(1)或(2)或(3)或(4)：
(1)将上述核酸分子删除或增加一个或几个核苷酸，得到的与所述核酸分子具有相同功能的核酸分子的衍生物；
(2)将上述核酸分子进行核苷酸取代或修饰，得到的与所述核酸分子具有相同功能的核酸分子的衍生物；
(3)将上述核酸分子的骨架改造为硫代磷酸酯骨架，得到的与所述核酸分子具有相同功能的核酸分子的衍生物；
(4)将上述核酸分子连接信号分子和/或活性分子和/或功能基团，得到的与所述核酸分子具有相同功能的核酸分子的衍生物。
进一步的，所述删除或增加一个或几个核苷酸为删除或增加不超过5个核苷酸；
所述修饰可为2'OME修饰和/或2'F修饰和/或LNA修饰和/或胆固醇修饰。
更进一步的，所述衍生物为P446-1、P446-2、P446-4、P446-5、P446-6、P446-7、P446-10、P446-11、P446-12、P446-13、P446-14、P446-15、PLK1-446-LNA、P446-3、P446-8、PLK1-1177-LNA或PLK1-1744-LNA；
所述P446-1由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-2由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'氟代核糖核苷酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-4由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-5由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-6由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'氟代核糖核苷酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-7由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第9位核苷酸、第11至13位核苷酸和第15位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸；
所述P446-10由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列2所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸；
所述P446-11由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列2所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-12由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述序列2所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-13由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'氟代核糖核苷酸，且所述序列2所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-14由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第9位核苷酸、第11至13位核苷酸和第15位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述序列2所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸；
所述P446-15由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、第9位核苷酸、第11至13位核苷酸、第15位核苷酸，所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述序列2所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述PLK1-446-LNA由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子中的所有碱基U均为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端进行胆固醇修饰；
所述P446-3由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸；
所述P446-8由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子第9位核苷酸、第11位核苷酸和第15位核苷酸均为锁核酸；
所述PLK1-1744-LNA由序列3所示的单链核酸分子和序列4所示的单链核酸分子形成，且所述序列3所示的单链核酸分子中的所有碱基U均为锁核酸，且所述序列3所示的单链核酸分子5’末端进行胆固醇修饰；
所述PLK1-1177-LNA由序列5所示的单链核酸分子和序列6所示的单链核酸分子形成，且所述序列5所示的单链核酸分子中的所有碱基U均为锁核酸，且所述序列5所示的单链核酸分子5’末端进行胆固醇修饰。
本发明还保护一种产品，所述产品含有上述核酸分子或上述衍生物；所述产品的功能为如下(a)或(b)或(c)：
(a)抑制癌细胞增殖；
(b)治疗癌症；
(c)抑制PLK1基因表达。
上述核酸分子或上述衍生物在制备产品中的应用也属于本发明的保护范围；所述产品的功能为如下(a)或(b)或(c)：
(a)抑制癌细胞增殖；
(b)治疗癌症；
(c)抑制PLK1基因表达。
上述核酸分子或上述衍生物在如下(a)或(b)或(c)中的应用也属于本发明的保护范围：
(a)抑制癌细胞增殖；
(b)治疗癌症；
(c)抑制PLK1基因表达。
本发明最后还保护成套核酸分子，所述成套核酸分子包括核酸分子1-核酸分子15中的至少一种；
每个核酸分子均由正义链和反义链形成，且每个核酸分子的正义链序列和反义链序列均相同；
所述核酸分子1正义链5’末端第1至3位核苷酸、反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子2正义链5’末端第1至3位核苷酸、反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'氟代核糖核苷酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子3正义链第7位核苷酸为锁核酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子4正义链第7位核苷酸为锁核酸，且所述正义链5’末端第1至3位核苷酸、反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子5正义链第7位核苷酸为锁核酸，且所述正义链5’末端第1至3位核苷酸、反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'氟代核糖核苷酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子6正义链5’末端第9位核苷酸、第11至13位核苷酸和第15位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸；
所述核酸分子7反义链第7位核苷酸为锁核酸；
所述核酸分子8反义链第7位核苷酸为锁核酸，且正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子9正义链5’末端第1至3位核苷酸、反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述反义链第7位核苷酸为锁核酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子10正义链5’末端第1至3位核苷酸、反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'氟代核糖核苷酸，且所述反义链第7位核苷酸为锁核酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子11正义链5’末端第9位核苷酸、第11至13位核苷酸和第15位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且反义链第7位核苷酸为锁核酸；
所述核酸分子12正义链5’末端第1至3位核苷酸、第9位核苷酸、第11至13位核苷酸、第15位核苷酸，反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述反义链第7位核苷酸为锁核酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子13正义链中的所有碱基U均为锁核酸，且所述正义链5’末端进行胆固醇修饰；
所述核酸分子14正义链第7位核苷酸为锁核酸；
所述核酸分子15正义链第9位核苷酸、第11位核苷酸和第15位核苷酸均为锁核酸。
进一步的，所述成套核酸分子由核酸分子1-核酸分子15组成。
更进一步的，所述成套核酸分子由核酸分子1-核酸分子13组成。
上述成套核酸分子中，所述成套核酸分子为成套siRNA分子；所述siRNA分子可为靶向任一基因的siRNA。
在本发明的一个具体实施例中，所述靶基因为PLK1基因；所述siRNA分子为靶向PLK1基因的siRNA分子。所述正义链可为序列1所示的单链核酸分子；所述反义链可为序列2所示的单链核酸分子。或，所述正义链可为序列3所示的单链核酸分子；所述反义链可为序列4所示的单链核酸分子。或，所述正义链可为序列5所示的单链核酸分子；所述反义链可为序列6所示的单链核酸分子。或，所述正义链可为序列7所示的单链核酸分子；所述反义链可为序列7所示的单链核酸分子。或，所述正义链可为序列9所示的单链核酸分子；所述反义链可为序列10所示的单链核酸分子。所述正义链可为序列11所示的单链核酸分子；所述反义链可为序列12所示的单链核酸分子。所述正义链可为序列13所示的单链核酸分子；所述反义链可为序列14所示的单链核酸分子。
上述成套核酸分子在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(d)或(e)或(f)：
(d)抑制癌细胞增殖；
(e)治疗癌症；
(f)抑制靶基因(如PLK1基因)表达。
上述产品或应用中，所述癌症可为乳腺癌或宫颈癌。
所述癌细胞为人乳腺癌细胞或人宫颈癌细胞。所述人乳腺癌细胞具体可为MDA-MB231细胞；所述人宫颈癌细胞具体可为HELA细胞。
上述产品或应用中，所述产品为药物。
本发明提供了靶向PLK1基因的非修饰核酸分子及修饰核酸分子。通过实验证明：本发明的核酸分子对癌症，尤其是乳腺癌和宫颈癌具有较好的治疗效果，为临床治疗癌症奠定了基础，具有重大的应用推广价值。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。如无特殊说明，各个核苷酸均为未进行修饰的常规核苷酸，各个核苷酸间均为常规磷酸酯键。如无特殊说明，实施例中的PBS缓冲液均为pH7.4的PBS缓冲液。
实施例1、siRNA的制备及双荧光素酶试验
一、siRNA的制备
本实施例所涉及的siRNA为PLK1-581、PLK1-832、PLK1-941、PLK1-1045、PLK1-1432、PLK1-1744、PLK1-1177、PLK1-752、PLK1-1404、PLK1-873、PLK1-1463、PLK1-622、PLK1-665、PLK1-457、PLK1-821、PLK1-400、PLK1-1567、PLK1-446、PLK1-1583、PLK1-1298、PLK1-1483、PLK1-1381、NC、PC。每个siRNA均由正义链和反义链退火形成，每个siRNA的正义链和反义链的序列如表1所示。
表1、针对PLK1的非修饰siRNA序列
二、重组质粒的制备
本实施例中所使用的重组质粒1是在psiCHECK2质粒(promega)的XhoI和NotI酶切位点之间插入序列表的序列15所示的双链DNA分子后得到的。
本实施例中所使用的重组质粒2是在psiCHECK2质粒(promega)的XhoI和NotI酶切位点之间插入序列表的序列16所示的双链DNA分子后得到的。
三、双荧光素酶试验
1、在10cm直径的细胞盘中采用DMEM培养液培养293A细胞至80-90％融合，弃除培养上清，用PBS缓冲液(pH7.4)洗涤细胞。
2、完成步骤1后，在所述细胞盘中加入1ml Trypsin-EDTA溶液(Gibco)，混匀后，小心吸弃上清，37℃静置1分钟。
3、完成步骤2后，在所述细胞盘中加入2ml完全培养基(含10％胎牛血清的DMEM培养液)，吹打使细胞形成单细胞悬液。
4、取步骤3得到的细胞悬液，接种至24孔板(每孔1×105个细胞)，37℃培养12小时。
5、将待测siRNA用DEPC-H2O溶解，得到siRNA浓度为20μM的siRNA溶液。待测siRNA为表1所示的针对PLK1的非修饰siRNA序列。每种siRNA设置3个复孔。
6、在一个1.5ml EP管中加入重组质粒1或重组质粒2、步骤5得到的siRNA溶液和DMEM培养液(表1中siRNA序列号小于900的siRNA使用重组质粒1，siRNA序列号大于或等于900的siRNA使用的重组质粒2)，混匀，得到100μl混合液甲(混合液甲中含40ng重组质粒，siRNA浓度为1nM)；在另一个EP管中加入99μl DMEM培养液和1μl转染试剂lipo2000(Invitrogen)，混匀并静置5min，得到100μl混合液乙；将上述两个混合液混匀，得到200μl混合液，室温静置20min，即为转染混合物。
7、取完成步骤4的24孔板，吸弃上清，每孔加入300μl DMEM培养液，静置20min后每孔加入200μl步骤6制备的转染混合物，37℃培养5小时。
8、取完成步骤7的24孔板，吸弃上清，用PBS缓冲液漂洗，然后加入DMEM培养液，37℃培养24小时。
9、采用Dual-Luciferase Reporter Assay System(promega，E1960)检测双荧光素酶。具体步骤如下：
(1)取完成步骤8的24孔板，吸弃上清，用PBS缓冲液清洗细胞。
(2)完成步骤(1)后，每孔加入125μl 1×PLB裂解缓冲液，室温轻缓晃动培养板，裂解15min。
(3)将步骤(2)得到的裂解产物转移至离心管中，3000rpm离心3min，收集上清液。
(4)取30μl步骤(3)得到的上清液，加至白色96孔板中，加入底物，在荧光显微镜下进行检测(promega)。
双荧光素酶活性检测结果如表2所示(荧光酶活性值小于1，说明该siRNA有抑制效果，数值越小，表示抑制效果越好)。从表中可以看出：PLK1-446、PLK1-1744、PLK1-1177、PLK1-1583、PLK1-400、PLK1-821、PLK1-1483均具有抑制效果，其中PLK1-446抑制效果最佳。
表2、双荧光素酶活性检测结果
注：荧光酶活性值为三次结果的平均值
实施例2、siRNA的制备及其对乳腺癌细胞中PLK1RNA水平的影响
一、siRNA的制备
本实施例所涉及的siRNA分为两组：
第一组为表1中的negative control(NC)、positive control(PC)以及PLK1-446-LNA、PLK1-1177-LNA和PLK1-1744-LNA。PLK1-446-LNA、PLK1-1177-LNA和PLK1-1744-LNA的具体修饰情况如下：
PLK1-446-LNA由正义链5'-GGAGAAGAUGUCCAUGGAATT-3'(下划线所示的碱基U均为锁核酸且5’末端进行胆固醇修饰)和反义链5'-UUCCAUGGACAUCUUCUCCCU-3'形成。
PLK1-1177-LNA由正义链5'-CCCUCACAGUCCUCAAUAATT(下划线所示的碱基U均为锁核酸且5’末端进行胆固醇修饰)和反义链5'-UUAUUGAGGACUGUGAGGGTT-3'形成。
PLK1-1744-LNA由正义链5'-GCAGCGUGCAGAUCAACUUTT-3'(下划线所示的碱基U均为锁核酸且5’末端进行胆固醇修饰)和反义链5'-AAGUUGAUCUGCACGCUGCTT-3'形成。
第二组为表3中的PLK1-446的14种修饰序列(P446-1、P446-2、P446-3、P446-4、P446-5、P446-6、P446-7、P446-8、P446-10、P446-11、P446-12、P446-13、P446-14和P446-15)和1条非修饰序列(P446-9)，以及表1中的NC和PC。
表3、PLK1-446的修饰序列
注：加粗大写字体表示2'OME修饰，加粗大写字体和斜体表示2'F修饰，加粗大写字体、斜体加下划线表示LNA修饰，加粗小写字体s表示PS硫代连接。
P446-1由正义链
和反义链
形成。加粗大写字体标注的9个核苷酸(即正义链的5’末端的第1至3位核苷酸，反义链的5’末端的第1至3位核苷酸和3’末端的第1至3位核苷酸)均为2'-O-甲基核糖核苷酸。加粗小写字体s表示正义链5’末端的连续3个磷酸酯键、反义链5’末端的连续3个磷酸酯键和3’末端的连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键。
P446-2由正义链
和反义链
形成。加粗大写字体和斜体标注的9个核苷酸(即正义链的5’末端的第1至3位核苷酸，反义链的5’末端的第1至3位核苷酸和3’末端的第1至3位核苷酸)均为2'氟代核糖核苷酸。加粗小写字体s表示正义链5’末端的连续3个磷酸酯键、反义链5’末端的连续3个磷酸酯键和3’末端的连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键。
P446-3由正义链
和反义链5'-UUCCAUGGACAUCUUCUCCCU-3'形成。加粗大写字体、斜体加下划线标注的核苷酸为锁核酸。
P446-4由正义链
和反义链5'-UsUsCCAUGGACAUCUUCUCCsCsU-3'形成。加粗大写字体、斜体加下划线标注的核苷酸为锁核酸。加粗小写字体s表示正义链5’末端的连续3个磷酸酯键、反义链5’末端的连续3个磷酸酯键和3’末端的连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键。
P446-5由正义链
和反义链
形成。加粗大写字体、斜体加下划线标注的核苷酸为锁核酸。加粗大写字体标注的9个核苷酸(即正义链的5’末端的第1至3位核苷酸，反义链的5’末端的第1至3位核苷酸和3’末端的第1至3位核苷酸)均为2'-O-甲基核糖核苷酸。加粗小写字体s表示正义链5’末端的连续3个磷酸酯键、反义链5’末端的连续3个磷酸酯键和3’末端的连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键。
P446-6由正义链
和反义链
形成。加粗大写字体、斜体加下划线标注的核苷酸为锁核酸。加粗大写字体和斜体标注的9个核苷酸(即正义链的5’末端的第1至3位核苷酸，反义链的5’末端的第1至3位核苷酸和3’末端的第1至3位核苷酸)均为2'氟代核糖核苷酸。加粗小写字体s表示正义链5’末端的连续3个磷酸酯键、反义链5’末端的连续3个磷酸酯键和3’末端的连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键。
P446-7由正义链
和反义链5'-UUCCAUGGACAUCUUCUCCCU-3'形成。加粗大写字体标注的5个核苷酸(即正义链的5’末端的第9个核苷酸、第11至13位核苷酸和第15个核苷酸)均为2'-O-甲基核糖核苷酸。
P446-8由正义链
和反义链5'-UUCCAUGGACAUCUUCUCCCU-3'形成。加粗大写字体、斜体加下划线标注的3个核苷酸(即正义链的5’末端的第9个核苷酸、第11个核苷酸和第15个核苷酸)均为锁核酸。
P446-9由正义链5'-GGAGAAGAUGUCCAUGGAATT-3'和反义链5'-UUCCAUGGACAUCUUCUCCCU-3'形成。
P446-10由正义链5'-GGAGAAGAUGUCCAUGGAATT-3'和反义链
形成。加粗大写字体、斜体加下划线标注的核苷酸为锁核酸。
P446-11由正义链5'-GSGSAGAAGAUGUCCAUGGAATT-3'和反义链
形成。加粗大写字体、斜体加下划线标注的核苷酸为锁核酸。加粗小写字体s表示正义链5’末端的连续3个磷酸酯键、反义链5’末端的连续3个磷酸酯键和3’末端的连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键。
P446-12由正义链
和反义链
形成。加粗大写字体、斜体加下划线标注的核苷酸为锁核酸。加粗大写字体标注的9个核苷酸(即正义链的5’末端的第1至3位核苷酸，反义链的5’末端的第1至3位核苷酸和3’末端的第1至3位核苷酸)均为2'-O-甲基核糖核苷酸。加粗小写字体s表示正义链5’末端的连续3个磷酸酯键、反义链5’末端的连续3个磷酸酯键和3’末端的连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键。
P446-13由正义链
和反义链
形成。加粗大写字体、斜体加下划线标注的核苷酸为锁核酸。加粗大写字体和斜体标注的9个核苷酸(即正义链的5’末端的第1至3位核苷酸，反义链的5’末端的第1至3位核苷酸和3’末端的第1至3位核苷酸)均为2'氟代核糖核苷酸。加粗小写字体s表示正义链5’末端的连续3个磷酸酯键、反义链5’末端的连续3个磷酸酯键和3’末端的连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键。
P446-14由正义链
和反义链
形成。加粗大写字体标注的5个核苷酸(即正义链的5’末端的第9个核苷酸、第11至13位核苷酸和第15个核苷酸)均为2'-O-甲基核糖核苷酸。加粗大写字体、斜体加下划线标注的核苷酸为锁核酸。
P446-15由正义链
和反义链
形成。加粗大写字体标注的14个核苷酸(即正义链的5’末端的第1至3位核苷酸、第9个核苷酸、第11至13位核苷酸、第15个核苷酸，反义链的5’末端的第1至3位核苷酸和3’末端的第1至3位核苷酸)均为2'-O-甲基核糖核苷酸。加粗大写字体、斜体加下划线标注的核苷酸为锁核酸。加粗小写字体s表示正义链5’末端的连续3个磷酸酯键、反义链5’末端的连续3个磷酸酯键和3’末端的连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键。
二、siRNA对乳腺癌细胞中PLK1RNA水平的影响
1、在10cm直径的细胞盘中采用DMEM培养液培养人乳腺癌细胞MDA-MB231(购自中国科学院细胞库)至80-90％融合，弃除培养上清，用PBS缓冲液洗涤细胞。
2、完成步骤1后，在所述细胞盘中加入1ml Trypsin-EDTA溶液，混匀后，小心吸弃上清，37℃静置1分钟。
3、完成步骤2后，在所述细胞盘中加入2ml完全培养基，吹打使细胞形成单细胞悬液。
4、取步骤3得到的细胞悬液，接种至24孔板(每孔1×105个细胞)，37℃培养12小时。
5、将待测siRNA用DEPC-H2O溶解，得到siRNA溶液。待测siRNA为步骤一中的两组siRNA，每种siRNA设置3个复孔。
6、在一个1.5ml EP管中加入步骤5得到的siRNA溶液和DMEM培养液，混匀，得到100μl混合液甲(混合液甲中siRNA浓度为20nM或200nM)；在另一个EP管中加入99μl DMEM培养液和1μl转染试剂lipo2000，混匀并静置5min，得到100μl混合液乙；将上述两个混合液混匀，得到200μl混合液，室温静置20min，即为转染混合物(PLK1siRNA终浓度为10nM或100nM)。
7、取完成步骤4的24孔板，吸弃上清，每孔加入300μl DMEM培养液，静置20min后每孔加入200μl步骤6制备的转染混合物，37℃培养5小时。
8、取完成步骤7的24孔板，吸弃上清，用PBS缓冲液漂洗，然后加入DMEM培养液，37℃培养24小时。
9、取完成步骤8的24孔板，收集细胞，提取总RNA。总RNA进行反转录得到cDNA。以cDNA为模板，采用GAPDH基因为内参基因，通过实时定量PCR检测PLK1基因的相对表达量。
用于检测PLK1基因的引物对序列如下：
homo-PLK1-F1：CGACTTCGTGTTCGTGGTG；
homo-PLK1-R1：CCCGTCATATTCGACTTTGGT。
用于检测GAPDH基因的引物对序列如下：
GAPDH-F：CATGAGAAGTATGACAACAGCCT；
GAPDH-R：AGTCCTTCCACGATACCAAAGT。
第一组待测siRNA的检测结果如表4所示，待测siRNA对于MDA-MB231细胞的内源PLK1基因表达均具有显著抑制作用。第二组待测siRNA的检测结果如表5所示。除了P446-3和P446-8，待测siRNA对于MDA-MB231细胞的内源PLK1基因表达均具有显著抑制作用。
表4、PLK1siRNA对PLK1mRNA表达的影响
| SiRNA序列 | mRNA表达量 |
| NC | 1 |
| PC | 0.753 |
| PLK1-446-LNA | 0.117 |
| PLK1-1177-LNA | 0.413 |
| PLK1-1744-LNA | 0.152 |
注：mRNA表达量为3次实验结果的均值
表5、修饰PLK1siRNA对PLK1mRNA表达的影响
注：mRNA表达量为3次实验结果的均值
实施例3、CCK8细胞增殖试验
1、取人乳腺癌细胞MDA-MB231或人宫颈癌HELA细胞(购自中国科学院细胞库)，用PBS缓冲液洗涤，然后用Trypsin-EDTA溶液37℃处理3分钟，然后用完全培养基悬浮，得到单细胞悬液。
2、取步骤1得到的细胞悬液，接种至96孔板(每孔3×103个细胞)，37℃培养12小时。
3、将待测siRNA用DEPC-H2O溶解，得到siRNA溶液。
待测siRNA为实施例2中的NC、P446-4、P446-5、P446-9、P446-11、P446-12、P446-15。每种siRNA设置3个复孔。
4、在一个1.5ml EP管中加入步骤3得到的siRNA溶液和DMEM培养液，混匀，得到100μl混合液甲(混合液甲中siRNA浓度为200nM)；在另一个EP管中加入99μl DMEM培养液和1μl转染试剂lipo2000，混匀并静置5min，得到100μl混合液乙；将上述两个混合液混匀，得到200μl混合液，室温静置20min，即为转染混合物。
5、取完成步骤2的96孔板，吸弃上清，每孔加入100μl步骤4制备的转染混合物，37℃培养48小时。
6、完成步骤5后，取所述96孔板，每孔加入100μl DMEM培养液和10μl CCK8溶液，避光培养2小时，采用酶标仪检测450nm波长OD值。
结果如表6所示(数值越小，抑制细胞增殖作用越强)。结果表明，PLK1-siRNA能够抑制MDA-MB231细胞和HELA细胞的增殖。
表6、PLK1-siRNA序列对肿瘤细胞增殖的影响
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。
序列表
<110>苏州吉玛基因股份有限公司 苏州吉诺瑞生物科技有限公司
<120>靶向PLK1的siRNA及其在制备肿瘤治疗药物中的应用
<160>16
<170>PatentIn version 3.5
<210>1
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>1
ggagaagaug uccauggaat t 21
<210>2
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>2
uuccauggac aucuucuccc u 21
<210>3
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>3
gcagcgugca gaucaacuut t 21
<210>4
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>4
aaguugaucu gcacgcugct t 21
<210>5
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>5
cccucacagu ccucaauaat t 21
<210>6
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>6
uuauugagga cugugagggt t 21
<210>7
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>7
gaagaucacc cuccuuaaat t 21
<210>8
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>8
uuuaaggagg gugaucuucu u 21
<210>9
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>9
cgggcaagau ugugccuaat t 21
<210>10
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>10
uuaggcacaa ucuugcccgc g 21
<210>11
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>11
cgaggugcug agcaagaaat t 21
<210>12
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>12
uuucuugcuc agcaccucgg g 21
<210>13
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>13
gccucauccu cuacaaugat t 21
<210>14
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>14
ucauuguaga ggaugaggcg u 21
<210>15
<211>899
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>15
atgagtgctg cagtgactgc agggaagctg gcacgggcac cggccgaccc tgggaaagcc 60
ggggtccccg gagttgcagc tcccggagct ccggcggcgg ctccaccggc gaaagagatc 120
ccggaggtcc tagtggaccc acgcagccgg cggcgctatg tgcggggccg ctttttgggc 180
aagggcggct ttgccaagtg cttcgagatc tcggacgcgg acaccaagga ggtgttcgcg 240
ggcaagattg tgcctaagtc tctgctgctc aagccgcacc agagggagaa gatgtccatg 300
gaaatatcca ttcaccgcag cctcgcccac cagcacgtcg taggattcca cggctttttc 360
gaggacaacg acttcgtgtt cgtggtgttg gagctctgcc gccggaggtc tctcctggag 420
ctgcacaaga ggaggaaagc cctgactgag cctgaggccc gatactacct acggcaaatt 480
gtgcttggct gccagtacct gcaccgaaac cgagttattc atcgagacct caagctgggc 540
aaccttttcc tgaatgaaga tctggaggtg aaaatagggg attttggact ggcaaccaaa 600
gtcgaatatg acggggagag gaagaagacc ctgtgtggga ctcctaatta catagctccc 660
gaggtgctga gcaagaaagg gcacagtttc gaggtggatg tgtggtccat tgggtgtatc 720
atgtatacct tgttagtggg caaaccacct tttgagactt cttgcctaaa agagacctac 780
ctccggatca agaagaatga atacagtatt cccaagcaca tcaaccccgt ggccgcctcc 840
ctcatccaga agatgcttca gacagatccc actgcccgcc caaccattaa cgagctgct 899
<210>16
<211>913
<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)
<400>16
taatgacgag ttctttactt ctggctatat ccctgcccgt ctccccatca cctgcctgac 60
cattccacca aggttttcga ttgctcccag cagcctggac cccagcaacc ggaagcccct 120
cacagtcctc aataaaggct tggagaaccc cctgcctgag cgtccccggg aaaaagaaga 180
accagtggtt cgagagacag gtgaggtggt cgactgccac ctcagtgaca tgctgcagca 240
gctgcacagt gtcaatgcct ccaagccctc ggagcgtggg ctggtcaggc aagaggaggc 300
tgaggatcct gcctgcatcc ccatcttctg ggtcagcaag tgggtggact attcggacaa 360
gtacggcctt gggtatcagc tctgtgataa cagcgtgggg gtgctcttca atgactcaac 420
acgcctcatc ctctacaatg atggtgacag cctgcagtac atagagcgtg acggcactga 480
gtcctacctc accgtgagtt cccatcccaa ctccttgatg aagaagatca ccctccttaa 540
atatttccgc aattacatga gcgagcactt gctgaaggca ggtgccaaca tcacgccgcg 600
cgaaggtgat gagctcgccc ggctgcccta cctacggacc tggttccgca cccgcagcgc 660
catcatcctg cacctcagca acggcagcgt gcagatcaac ttcttccagg atcacaccaa 720
gctcatcttg tgcccactga tggcagccgt gacctacatc gacgagaagc gggacttccg 780
cacataccgc ctgagtctcc tggaggagta cggctgctgc aaggagctgg ccagccggct 840
ccgctacgcc cgcactatgg tggacaagct gctgagctca cgctcggcca gcaaccgtct 900
caaggcctcc taa 913
Claims (10)
1.核酸分子，为PLK1-446、PLK1-1744、PLK1-1177、PLK1-1583、PLK1-400、PLK1-821或PLK1-1483；
所述PLK1-446由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成；
所述PLK1-1744由序列3所示的单链核酸分子和序列4所示的单链核酸分子形成；
所述PLK1-1177由序列5所示的单链核酸分子和序列6所示的单链核酸分子形成；
所述PLK1-1583由序列7所示的单链核酸分子和序列8所示的单链核酸分子形成；
所述PLK1-400由序列9所示的单链核酸分子和序列10所示的单链核酸分子形成；
所述PLK1-821由序列11所示的单链核酸分子和序列12所示的单链核酸分子形成；
所述PLK1-1483由序列13所示的单链核酸分子和序列14所示的单链核酸分子形成。
2.权利要求1所述的核酸分子的衍生物，为如下(1)或(2)或(3)或(4)：
(1)将权利要求1所述的核酸分子删除或增加一个或几个核苷酸，得到的与所述核酸分子具有相同功能的核酸分子的衍生物；
(2)将权利要求1所述的核酸分子进行核苷酸取代或修饰，得到的与所述核酸分子具有相同功能的核酸分子的衍生物；
(3)将权利要求1所述的核酸分子的骨架改造为硫代磷酸酯骨架，得到的与所述核酸分子具有相同功能的核酸分子的衍生物；
(4)将权利要求1所述的核酸分子连接信号分子和/或活性分子和/或功能基团，得到的与所述核酸分子具有相同功能的核酸分子的衍生物。
3.根据权利要求2所述的衍生物，其特征在于：所述衍生物为P446-1、P446-2、P446-4、P446-5、P446-6、P446-7、P446-10、P446-11、P446-12、P446-13、P446-14、P446-15、PLK1-446-LNA、P446-3、P446-8、PLK1-1177-LNA或PLK1-1744-LNA；
所述P446-1由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-2由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'氟代核糖核苷酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-4由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-5由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-6由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'氟代核糖核苷酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-7由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第9位核苷酸、第11至13位核苷酸和第15位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸；
所述P446-10由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列2所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸；
所述P446-11由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列2所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-12由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述序列2所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-13由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'氟代核糖核苷酸，且所述序列2所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述P446-14由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第9位核苷酸、第11至13位核苷酸和第15位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述序列2所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸；
所述P446-15由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸、第9位核苷酸、第11至13位核苷酸、第15位核苷酸，所述序列2所示的单链核酸分子5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述序列2所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键、所述序列2所示的单链核酸分子5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述PLK1-446-LNA由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子中的所有碱基U均为锁核酸，且所述序列1所示的单链核酸分子5’末端进行胆固醇修饰；
所述P446-3由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子第7位核苷酸为锁核酸；
所述P446-8由序列1所示的单链核酸分子和序列2所示的单链核酸分子形成，且所述序列1所示的单链核酸分子第9位核苷酸、第11位核苷酸和第15位核苷酸均为锁核酸；
所述PLK1-1744-LNA由序列3所示的单链核酸分子和序列4所示的单链核酸分子形成，且所述序列3所示的单链核酸分子中的所有碱基U均为锁核酸，且所述序列3所示的单链核酸分子5’末端进行胆固醇修饰；
所述PLK1-1177-LNA由序列5所示的单链核酸分子和序列6所示的单链核酸分子形成，且所述序列5所示的单链核酸分子中的所有碱基U均为锁核酸，且所述序列5所示的单链核酸分子5’末端进行胆固醇修饰。
4.一种产品，其含有权利要求1所述核酸分子或权利要求2或3所述的衍生物；所述产品的功能为如下(a)或(b)或(c)：
(a)抑制癌细胞增殖；
(b)治疗癌症；
(c)抑制PLK1基因表达。
5.权利要求1所述核酸分子或权利要求2或3所述的衍生物在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a)或(b)或(c)：
(a)抑制癌细胞增殖；
(b)治疗癌症；
(c)抑制PLK1基因表达。
6.权利要求1所述的核酸分子或权利要求2或3所述的衍生物在如下(a)或(b)或(c)中的应用：
(a)抑制癌细胞增殖；
(b)治疗癌症；
(c)抑制PLK1基因表达。
7.成套核酸分子，所述成套核酸分子包括核酸分子1-核酸分子15中的至少一种；
每个核酸分子均由正义链和反义链形成，且每个核酸分子的正义链序列和反义链序列均相同；
所述核酸分子1正义链5’末端第1至3位核苷酸、反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子2正义链5’末端第1至3位核苷酸、反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'氟代核糖核苷酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子3正义链第7位核苷酸为锁核酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子4正义链第7位核苷酸为锁核酸，且所述正义链5’末端第1至3位核苷酸、反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子5正义链第7位核苷酸为锁核酸，且所述正义链5’末端第1至3位核苷酸、反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'氟代核糖核苷酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子6正义链5’末端第9位核苷酸、第11至13位核苷酸和第15位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸；
所述核酸分子7反义链第7位核苷酸为锁核酸；
所述核酸分子8反义链第7位核苷酸为锁核酸，且正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子9正义链5’末端第1至3位核苷酸、反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述反义链第7位核苷酸为锁核酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子10正义链5’末端第1至3位核苷酸、反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'氟代核糖核苷酸，且所述反义链第7位核苷酸为锁核酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子11正义链5’末端第9位核苷酸、第11至13位核苷酸和第15位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且反义链第7位核苷酸为锁核酸；
所述核酸分子12正义链5’末端第1至3位核苷酸、第9位核苷酸、第11至13位核苷酸、第15位核苷酸，反义链5’末端第1至3位核苷酸和3’末端第1至3位核苷酸均为2'-O-甲基核糖核苷酸，且所述反义链第7位核苷酸为锁核酸，且所述正义链5’末端连续3个磷酸酯键、所述反义链5’末端连续3个磷酸酯键和3’末端连续3个磷酸酯键均为硫代磷酸酯键；
所述核酸分子13正义链中的所有碱基U均为锁核酸，且所述正义链5’末端进行胆固醇修饰；
所述核酸分子14正义链第7位核苷酸为锁核酸；
所述核酸分子15正义链第9位核苷酸、第11位核苷酸和第15位核苷酸均为锁核酸。
8.权利要求7所述的成套核酸分子在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(d)或(e)或(f)：
(d)抑制癌细胞增殖；
(e)治疗癌症；
(f)抑制靶基因表达。
9.根据权利要求4所述的产品或权利要求5或6或8所述的应用，其特征在于：所述癌症为乳腺癌或宫颈癌。
10.根据权利要求4所述的产品或权利要求5或6或8所述的应用，其特征在于：所述癌细胞为人乳腺癌细胞或人宫颈癌细胞；
或，所述人乳腺癌细胞为MDA-MB231细胞；
或，所述人宫颈癌细胞为HELA细胞。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910509844.1A CN112080498A (zh) | 2019-06-13 | 2019-06-13 | 靶向PLK1的siRNA及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910509844.1A CN112080498A (zh) | 2019-06-13 | 2019-06-13 | 靶向PLK1的siRNA及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112080498A true CN112080498A (zh) | 2020-12-15 |
Family
ID=73733231
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910509844.1A Pending CN112080498A (zh) | 2019-06-13 | 2019-06-13 | 靶向PLK1的siRNA及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112080498A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116478997A (zh) * | 2023-06-06 | 2023-07-25 | 苏州吉玛基因股份有限公司 | 用于抑制FGL1的siRNA及其修饰物与应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108866058A (zh) * | 2018-07-12 | 2018-11-23 | 苏州吉玛基因股份有限公司 | 靶向KRAS的siRNA及其在制备胰腺癌治疗药物中的应用 |
-
2019
- 2019-06-13 CN CN201910509844.1A patent/CN112080498A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108866058A (zh) * | 2018-07-12 | 2018-11-23 | 苏州吉玛基因股份有限公司 | 靶向KRAS的siRNA及其在制备胰腺癌治疗药物中的应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| YOSHIYUKI HATTORI等: "Evaluation of in vitro and in vivo therapeutic antitumor efficacy of transduction of polo-like kinase 1 and heat shock transcription factor 1 small interfering RNA", 《EXP THER MED》 * |
| 倪国华等: "RNAi沉默Polo-like kinase-1基因表达对大肠癌细胞端粒酶活性的影响", 《复旦学报(医学版)》 * |
| 孙青等: "化学修饰小干扰RNA研究进展", 《河南外科学杂志》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116478997A (zh) * | 2023-06-06 | 2023-07-25 | 苏州吉玛基因股份有限公司 | 用于抑制FGL1的siRNA及其修饰物与应用 |
| CN116478997B (zh) * | 2023-06-06 | 2023-12-29 | 苏州吉玛基因股份有限公司 | 用于抑制FGL1的siRNA及其修饰物与应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wang et al. | Regulation of intronic polyadenylation by PCF11 impacts mRNA expression of long genes | |
| CN107454843B (zh) | 包含微小核糖核酸作为活性成分的用于治疗癌症的药物组合物 | |
| EP3222723B1 (en) | Development of universal cancer drugs and vaccines | |
| Liang et al. | IncRNA AK017368 promotes proliferation and suppresses differentiation of myoblasts in skeletal muscle development by attenuating the function of miR‐30c | |
| EP2077326A1 (en) | Novel nucleic acid | |
| US9783811B2 (en) | Inducible gene expression composition for using eukaryotic pol-2 promoter-driven transcription in prokaryotes and the applications thereof | |
| US20100151470A1 (en) | Methods and compositions for locating snp heterozygosity for allele specific diagnosis and therapy | |
| US9422559B2 (en) | Production and utilization of a novel anti-cancer drug in therapy | |
| US20210024915A1 (en) | Method for activating p21 gene expression | |
| Dong et al. | Non‐coding RNAs in cardiomyocyte proliferation and cardiac regeneration: dissecting their therapeutic values | |
| CN108866058B (zh) | 靶向KRAS的siRNA及其在制备胰腺癌治疗药物中的应用 | |
| CN112080498A (zh) | 靶向PLK1的siRNA及其在制备肿瘤治疗药物中的应用 | |
| CN107693535A (zh) | 一种microRNA的应用 | |
| WO2011111715A1 (ja) | 細胞周期を制御する核酸 | |
| KR101325186B1 (ko) | 이중가닥 ｍｉＲＮＡ를 유효성분으로 포함하는 항암제 | |
| EP1668144B1 (en) | Nucleotide sequences promoting the trans-membrane transport of nucleic acids | |
| US20180208928A1 (en) | Tools and methods using mirna 182, 96 and/or 183 for treating pathologies | |
| US20220298512A1 (en) | Sirna sequences targeting the expression of human genes jak1 or jak3 for a therapeutic use | |
| WO2022260719A1 (en) | Novel rna composition and production method for use in ips cell generation | |
| CN111575381A (zh) | 生物标志物的新用途 | |
| CN111560437A (zh) | 用于预测口腔鳞癌的生物标志物及其在治疗中的应用 | |
| Huichalaf et al. | Regulation of the promoter of CUG triplet repeat binding protein, Cugbp1, during myogenesis | |
| KR102240833B1 (ko) | let-7 억제제가 도입된 엑소좀을 이용한 골분화 억제방법 | |
| JP7364198B2 (ja) | ｉＰＳ細胞の生成に使用される新規ＲＮＡ組成物およびその製造方法 | |
| 奥村翔 | Development of antisense oligonucleotides for suppressing breast cancer cell proliferation and the system for evaluating drug response of cardiomyocytes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20201215 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |