CN110664754B - 一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束及其制备方法 - Google Patents

一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物医用材料技术领域，公开了一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束的制备方法，包括分别将N‑羧基‑L‑谷氨酸‑环内酸酐和N‑羧基‑D‑谷氨酸‑环内酸酐酰卤化，再与二甲双胍缩合反应；将缩合反应得到的N‑(N，N‑二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)‑N‑羧基‑L‑谷氨酸‑环内酸酐和N‑(N，N‑二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)‑N‑羧基‑D‑谷氨酸‑环内酸酐与N‑羧基‑L‑谷氨酸‑环内酸酐、N‑羧基‑D‑谷氨酸‑环内酸酐进行嵌段共聚，然后加入PEG4000、抗肿瘤药物并混合均匀，用滤膜挤出。本发明制备方法制备得到的纳米胶束结构稳定，有较高的包封率和载药率，且释放药物速率较缓慢。

Description

一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物医用材料技术领域，尤其涉及一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束及其制备方法。
背景技术
高分子药物输送系统是指将高分子载体用于包载、吸附或者化学连接药物，运用药物载体本身的选择性分布以及理化性质等特点，将药物输送到病灶部位，通过扩散等方式使药物能缓慢地释放出来，从而达到安全有效地治疗疾病的目的。但生物相容性、生物降解性和安全性制约了部分药用高分子材料的使用，开发安全的且具有新型功能的高分子材料一直是药剂学研究的热点领域。氨基酸是生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。选用一种或多种氨基酸合成聚合物能在体内酶的作用下降解为氨基酸，生物相容性好，且安全无毒，聚氨基酸的研究已受到广泛的关注。采用天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸等制备聚氨基酸是一类低毒、生物相容性好、容易被机体吸收、代谢的生物降解高分子，在医药领域如药物控释、人造皮肤等方面具有广泛的应用。目前聚氨基酸作为药物载体的研究主要集中在聚氨基酸-药物偶联物、聚氨基酸复合载体、氨基酸共聚物几个方面:聚氨基酸与药物通过化学键形成偶联物，在体内酸性环境及酶的作用下化学键断裂释放药物，达到缓释、靶向的作用，并且可以降低药物的毒性；聚氨基酸与其他高分子材料形成复合载体以克服单一材料的不足以及实现新的功能；氨基酸共聚物亦可形成两亲性材料作为药物载体，以提高药物溶解性能，延长体内循环时间和实现靶向目的。但是，现有的聚氨基酸药物载体仍然存在包封率低，药物半衰期较短等缺陷。
发明内容
本发明的目的是提供一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束及其制备方法，制备的纳米胶束结构稳定，有较高的包封率和载药率。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束及其制备方法，包括以下步骤：
1)将N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中冰浴下加入SOCl2，酰卤化反应4～24h，反应结束后减压蒸馏去除未反应的SOCl2，再加入DMF、三乙胺和二甲双胍室温反应4～24h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐；
2)将N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中冰浴下加入SOCl2，酰卤化反应4～24h，反应结束后减压蒸馏去除未反应的SOCl2，再加入DMF、三乙胺和二甲双胍室温反应4～24h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐；
3)将N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐与催化剂混合构成反应体系，经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中于20～100℃聚合反应1～6h，再加入N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应2～6h，再加入N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应2～6h，再加入N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应1～6h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物；
4)将聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物与PEG4000在PBS溶液中混合，加入抗肿瘤药物，高速均质，用孔径为200nm的滤膜挤出，得聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束。
优选的，所述步骤1)中各反应物的加入比例为：每1gN-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐加入3～5ml SOCl2，20～50ml DMF，5～10ml三乙胺，0.5～0.8g二甲双胍。
优选的，所述步骤2)中各反应物的组成比例：每1g N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐加入3～5ml SOCl2，20～50ml DMF，5～10ml三乙胺，0.5～0.8g二甲双胍。
优选的，步骤3)中所述催化剂为Co(PMe3)4，其中Me为甲基。
优选的，步骤3)中所述N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐、N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐、N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐、N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐和催化剂的质量比为(0.05～0.2):(0.02～0.05):(0.02～0.05):(0.05～0.2):0.5。
优选的，步骤4)中所述抗肿瘤药物为紫杉醇、阿霉素和鬼臼毒素的一种。
优选的，步骤4)中所述组分聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物在PBS溶液中的浓度为0.005～0.01g/ml，聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物、PEG4000和抗肿瘤药物质量比为1:(0.8～1.5):(0.2～0.8)。
本发明还提供了一种上述制备方法制备得到的聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束。
与现有技术相比，本发明提供了一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束及其制备方法，具有以下有益效果：
(1)采用双联抗肿瘤药物，且以不同的方式结合到胶束中，二甲双胍接枝在聚谷氨酸上，另一种抗肿瘤药物采用物理包载方式，避免了传统的两药采用物理共包载模式造成的药物间相互影响，提高了药物的包封率。
(2)利用二甲双胍的氨基与聚谷氨酸上的羧基形成酰胺键，能够将聚谷氨酸的负电性中和，成为中性分子，消除了分子内静电斥力，能够使聚谷氨酸链相互缠绕。
(3)利用聚谷氨酸的分子的立体选择性能够形成立构结构，在立构区内形成分子内非极性晶区，即形成疏水核心能够包载脂溶性药物，提高了脂溶性药物的包封率。
(4)二甲双胍的胍基与聚谷氨酸上的羰基能够形成分子内氢键，能够进一步稳定疏水核心，使包载药物不易溢漏，延长了胶束在体的半衰期。
(5)制备的胶束外层为聚L-谷氨酸和聚D-谷氨酸，两者互为光学对映体，分子结构高度契合，在中性溶液中带有非常强的负电荷，进一步保证了胶束结构的稳定性，进一步延长了胶束在体的半衰期。
附图说明
图1是实施例1所制备的聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束电镜图；
图2是实施例1-3与对比例1-3制备得到的纳米胶束的药物体外释放曲线图。
具体实施方式
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为了进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的限制。
本发明所有原料，对其来源没有特别限制，在市场上购买的或按照本领域技术人员熟知的常规方法制备的即可。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束及其制备方法进行详细描述。
实施例1
一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束的制备方法，包括如下步骤：
(1)将1gN-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中冰浴下加入4ml SOCl2，酰卤化反应12h，反应结束后减压蒸馏去除未反应的SOCl2，再加入35mlDMF、8ml三乙胺和0.7g二甲双胍室温反应12h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐；
(2)将1g N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中冰浴下加入4ml SOCl2，酰卤化反应12h，反应结束后减压蒸馏去除未反应的SOCl2，再加入35mlDMF、8ml三乙胺和0.7g二甲双胍室温反应12h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐；
(3)将0.1g N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐与0.5g Co(PMe3)4混合构成反应体系，经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中于80℃聚合反应4h，再加入0.04g N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应4h，再加入0.04g N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应4h，再加入0.1g N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应4h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物；
(4)将0.1g聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物与0.1g PEG4000在15ml PBS溶液中混合，加入0.06g紫杉醇，高速均质，用孔径为200nm的滤膜挤出，得聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束。
实施例2
一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束的制备方法，包括如下步骤：
(1)将1gN-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中冰浴下加入3ml SOCl2，酰卤化反应4h，反应结束后减压蒸馏去除未反应的SOCl2，再加入20ml DMF、5ml三乙胺和0.5g二甲双胍室温反应4h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐；
(2)将1g N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中冰浴下加入3ml SOCl2，酰卤化反应4h，反应结束后减压蒸馏去除未反应的SOCl2，再加入20ml DMF、5ml三乙胺和0.5g二甲双胍室温反应4h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐；
(3)将0.05g N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐与0.5g Co(PMe3)4混合构成反应体系，经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中于20℃聚合反应1h，再加入0.02g N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应2h，再加入0.02g N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应2h，再加入0.05g N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应1h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物；
(4)将0.1g聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物与0.08g PEG4000在10ml PBS溶液中混合，加入0.02g阿霉素，高速均质，用孔径为200nm的滤膜挤出，得聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束。
实施例3
一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束的制备方法，包括如下步骤：
(1)将1gN-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中冰浴下加入5ml SOCl2，酰卤化反应24h，反应结束后减压蒸馏去除未反应的SOCl2，再加入50mlDMF、10ml三乙胺和0.8g二甲双胍室温反应24h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐；
(2)将1g N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中冰浴下加入5ml SOCl2，酰卤化反应24h，反应结束后减压蒸馏去除未反应的SOCl2，再加入50mlDMF、10ml三乙胺和0.8g二甲双胍室温反应24h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐；
(3)将0.2g N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐与0.5g Co(PMe3)4混合构成反应体系，经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中于100℃聚合反应6h，再加入0.05gN-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应6h，再加入0.05g N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应6h，再加入0.2g N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应6h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物；
(4)将0.1g聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物与0.15g PEG4000在20ml PBS溶液中混合，加入0.08g鬼臼毒素，高速均质，用孔径为200nm的滤膜挤出，得聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束。
对比例1
一种聚谷氨酸接枝二甲双胍纳米胶束的制备方法，包括如下步骤：
(1)将1gN-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中冰浴下加入4ml SOCl2，酰卤化反应12h，反应结束后减压蒸馏去除未反应的SOCl2，再加入35mlDMF、8ml三乙胺和0.7g二甲双胍室温反应12h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐；
(2)将0.1g N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐与0.5g Co(PMe3)4混合构成反应体系，经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中于80℃聚合反应4h，再加入0.04g N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应4h，再加入0.1g N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应4h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到聚L-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物；
(3)将0.1g聚L-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物与0.1g PEG4000在15ml PBS溶液中混合，加入0.06g紫杉醇，高速均质，用孔径为200nm的滤膜挤出，得聚谷氨酸接枝二甲双胍纳米胶束。
对比例2
一种聚谷氨酸接枝二甲双胍纳米胶束的制备方法，包括如下步骤：
(1)将1g N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐与0.5g Co(PMe3)4混合构成反应体系，经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中于80℃聚合反应4h，再加入0.4g N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应4h，再加入0.4g N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应4h，再加入1gN-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应4h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到聚DL-谷氨酸嵌段共聚物；
(2)将1g聚DL-谷氨酸嵌段共聚物经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中冰浴下加入4ml SOCl2，酰卤化反应12h，反应结束后减压蒸馏去除未反应的SOCl2，再加入35ml DMF、8ml三乙胺和0.7g二甲双胍室温反应12h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物；
(3)将0.1g聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物与0.1g PEG4000在15ml PBS溶液中混合，加入0.06g紫杉醇，高速均质，用孔径为200nm的滤膜挤出，得聚谷氨酸接枝二甲双胍纳米胶束。
对比例3
一种聚谷氨酸接枝二甲双胍纳米胶束的制备方法，包括如下步骤：
(1)将1gN-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中冰浴下加入4ml SOCl2，酰卤化反应12h，反应结束后减压蒸馏去除未反应的SOCl2，再加入35mlDMF、8ml三乙胺和0.7g二甲双胍室温反应12h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐；
(2)将0.1g N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐与0.5g Co(PMe3)4混合构成反应体系，经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中于80℃聚合反应4h，再加入0.04g N-(N，N-二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应4h，再加入0.1gN-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应4h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物；
(3)将0.1g聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物与0.1g PEG4000在15ml PBS溶液中混合，加入0.06g紫杉醇，高速均质，用孔径为200nm的滤膜挤出，得聚谷氨酸接枝二甲双胍纳米胶束。
包封率的测定
包封率的测定方法：取1ml胶束材料，装入透析袋中，加入10ml PBS缓冲液，充分搅拌后，15000r/min离心30min，取上清用HPLC法分别测定紫杉醇、阿霉素或鬼臼毒素的含量。
其中，紫杉醇HPLC检测方法如下：
色谱柱采用Inersil ODS-3C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈:水，流速比为60:40，流速为1mL/min，柱温30℃，检测波长为227nm，进样量为20μl。
阿霉素HPLC检测方法如下：
色谱柱采用Inersil ODS-3C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇：乙腈：0.02mol/L磷酸二氢铵-冰醋酸，流速比为52:5:43，流速为1mL/min，柱温30℃，荧光检测器：波长：EX＝246nm，EM＝555nm，进样量为20μl。
鬼臼毒素HPLC检测方法如下：
色谱柱采用Inersil ODS-3C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈:0.1％(v/v)磷酸溶液，流速比为40:60，流速为1mL/min，柱温30℃，检测波长为280nm，进样量为20μl。
采用如下公式计算实施例1-3和对比例1-3提供的纳米胶束的药物包封率，结果如表1所示：
Figure BDA0002259028800000041
其中W总为制备1ml材料时所加入的紫杉醇、阿霉素或鬼臼毒素的量；W上清为离心后上清液中的紫杉醇、阿霉素或鬼臼毒素质量，即未被包载的紫杉醇、阿霉素或鬼臼毒素质量。
表1实施例与对比例制备材料的药物包封率
包封率(％)
实施例1 88％
实施例2 78％
实施例3 83％
对比例1 34％
对比例2 41％
对比例3 29％
从表1可知，本发明所制备的材料其包封率都明显高于对比例，说明本发明制备方法能够大大提高材料的吸附载药性能，可能是由于双联抗肿瘤药物以不同的方式结合到胶束中，防止传统的两药采用物理共包载模式造成的药物间相互影响，提高了药物的包封率。同时，利用二甲双胍的氨基与聚谷氨酸上的羧基形成酰胺键，能够将聚谷氨酸的负电性中和，成为中性分子，消除了分子内静电斥力，能够使聚谷氨酸链相互缠绕并利用聚谷氨酸的分子立体选择性构筑立构结构，在立构区内形成分子内非极性晶区，即形成疏水核心能够包载脂溶性药物，提高了脂溶性药物的包封率。
巨噬细胞摄取实验
吸取1mL小鼠巨噬细胞(RAW264.7)悬液(4×105个细胞)分别与100μl实施例及对比例材料混合，在37℃分别孵育1h、2h、4h、8h，每10min振摇1次，使细胞-胶束材料混合均匀。将混合液置冰浴中以终止细胞吞噬作用后，1500r/min离心5min，细胞沉淀经PBS缓冲液洗涤(3次，每次0.5mL)后破碎细胞测定胞内紫杉醇、阿霉素或鬼臼毒素的含量，计算巨噬细胞对材料的摄取百分率。
按如下公式计算实施例1-3和对比例1-3提供的纳米胶束的摄取百分率，结果如表2所示：
Figure BDA0002259028800000051
其中WC为细胞内所含紫杉醇、阿霉素或鬼臼毒素的质量；WD为100μl胶束材料中所包载紫杉醇、阿霉素或鬼臼毒素的质量。
表2实施例和对比例材料巨噬细胞摄取实验结果
Figure BDA0002259028800000052
从表2可知，与对比例相比，本发明实施例制备的三种胶束材料均可显著减少巨噬细胞摄取(P＜0.01)，主要是由于二甲双胍的胍基与聚谷氨酸上的羰基能够形成分子内氢键，能够稳定疏水核心，使包载药物不易溢漏，延长了胶束在体的半衰期；同时制备的胶束外层为聚L-谷氨酸和聚D-谷氨酸，两者互为光学对映体，分子结构高度契合，在中性溶液中带有非常强的负电荷，进一步保证了胶束结构的稳定性，进一步延长了胶束在体的半衰期。
体外释放曲线测定方法：
取材料1ml实施例及对比例胶束材料，装入透析袋放入1LPBS缓冲液中，在37℃恒温水浴中，低速振荡进行释放实验。设置取样时间点为，1h，3h，6h，10h，1d，2d，4d，7d，在指定时间点取5ml样品溶液，20000r/min离心10min，取上清液用HPLC法分别测量释放出来紫杉醇、阿霉素或鬼臼毒素的含量，测定结果如图2所示。
由图2可知，对比例的材料药物的体外释放速率均较快；而本发明制备的材料突释效应很小，药物的释放速率基本符合线性规律，且释放速率很小，表明材料构建时的立构非极性区很好的存储了疏水抗肿瘤药物，控释效果较好，这有利于减小药物的毒副作用。
本发明提供了一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束的制备方法的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。

Claims (8)

1.一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）将N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中冰浴下加入SOCl2，酰卤化反应4~24h，反应结束后减压蒸馏去除未反应的SOCl2，再加入DMF、三乙胺和二甲双胍室温反应4~24h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到N-（N，N-二甲基氨基甲酰胺基）氨基甲酰胺基-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐；
2）将N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中冰浴下加入SOCl2，酰卤化反应4~24h，反应结束后减压蒸馏去除未反应的SOCl2，再加入DMF、三乙胺和二甲双胍室温反应4~24h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到N-（N，N-二甲基氨基甲酰胺基）氨基甲酰胺基-N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐；
3）将N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐与催化剂混合构成反应体系，经液氮冷却后抽真空，在氮气氛围中于20~100℃聚合反应1~6h，再加入N-（N，N-二甲基氨基甲酰胺基）氨基甲酰胺基-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应2~6h，再加入N-（N，N-二甲基氨基甲酰胺基）氨基甲酰胺基-N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应2~6h，再加入N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐继续聚合反应1~6h，反应产物经沉淀处理后过滤，干燥后得到聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物；
4）将聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物与PEG4000在PBS溶液中混合，加入抗肿瘤药物，高速均质，用孔径为200nm的滤膜挤出，得聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中各反应物的加入比例为：每1g N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐加入3~5ml SOCl2，20~50ml DMF，5~10ml 三乙胺，0.5~0.8g 二甲双胍。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2）中各反应物的组成比例：每1g N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐加入3~5ml SOCl2，20~50ml DMF，5~10ml 三乙胺，0.5~0.8g 二甲双胍。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3）中所述催化剂为Co(PMe3)4。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3）中所述N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐、N-（N，N-二甲基氨基甲酰胺基）氨基甲酰胺基-N-羧基-L-谷氨酸-环内酸酐、N-（N，N-二甲基氨基甲酰胺基）氨基甲酰胺基-N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐、N-羧基-D-谷氨酸-环内酸酐和催化剂的质量比为（0.05~0.2）:（0.02~0.05）:（0.02~0.05）:（0.05~0.2）:0.5。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4）中所述抗肿瘤药物为紫杉醇、阿霉素和鬼臼毒素的一种。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4）中所述聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物在PBS溶液中的浓度为0.005~0.01g/ml，聚DL-谷氨酸-二甲双胍嵌段共聚物、PEG4000和抗肿瘤药物质量比为1:（0.8~1.5）:（0.2~0.8）。
8.一种根据权利要求1~7任意一项所述的制备方法制备得到的聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束。
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