CN111110650B - 一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法 - Google Patents

一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111110650B
CN111110650B CN201911142899.XA CN201911142899A CN111110650B CN 111110650 B CN111110650 B CN 111110650B CN 201911142899 A CN201911142899 A CN 201911142899A CN 111110650 B CN111110650 B CN 111110650B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pet
peptide
pcl
mepeg
cooh
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201911142899.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN111110650A (zh
Inventor
杨根生
纪旭刚
郭钫元
杨庆良
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University of Technology ZJUT
Original Assignee
Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University of Technology ZJUT filed Critical Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority to CN201911142899.XA priority Critical patent/CN111110650B/zh
Publication of CN111110650A publication Critical patent/CN111110650A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111110650B publication Critical patent/CN111110650B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/12—Ketones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/593—Polyesters, e.g. PLGA or polylactide-co-glycolide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5192—Processes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/02—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds
    • C08G63/06—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds derived from hydroxycarboxylic acids
    • C08G63/08—Lactones or lactides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/68—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen
    • C08G63/685—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen containing nitrogen
    • C08G63/6852—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen containing nitrogen derived from hydroxy carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/331—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明属于药物高分子载体制备和药物制剂技术领域，公开了一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法。包括如下步骤：1)两亲性聚酯PET‑PCL‑Peptide的制备；2)MePEG‑COOH的制备；3)姜黄素与PET‑PCL‑Peptide加入至丙酮溶解形成油相，表面活性剂溶于水形成水相，将油相滴入水相，搅拌制备纳米粒；4)将3)制得的纳米粒溶液与一定浓度MePEG‑COOH溶液混合搅拌，得到平均粒径130～200nm，多分散指数(PDI)小于0.30，包封率大于70％的姜黄素‑纳米粒。该类纳米给药载体可作为一种载姜黄素缓释载体系统，采用亲水性外层MePEG‑COOH物理包裹亲脂性PET‑CPL‑Peptide内层成粒，使纳米粒具有靶向性强、生物利用度高、毒副作用小、稳定性强、提高姜黄素溶解性等优点，适用于静脉注射等多种给药方式。

Description

一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法
技术领域
本发明属于药物高分子载体制备和药物制剂技术领域，具体涉及一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法。
背景技术
癌症是目前全球危害性最大的疾病之一，严重制约着社会经济的发展，威胁着人类的生活，被称为新世纪人类健康的第一杀手。因此，寻找高疗效、低毒性的药物及载药体系成为各领域的研究和关注的热点，对于攻克肿瘤类疾病具有重大意义。
姜黄素(Curcumin)是提取自姜科、天南星科的植物根茎部分的一种化学成分。其中，姜黄含量约占3％～6％，是一种具有二酮的色素，是植物界较为稀有的一种二酮类化合物。有关医学研究发现，姜黄素具有降血脂、抗肿瘤、抗炎、利胆、抗氧化等作用。但是姜黄素的低溶解度、体外易氧化、体内易代谢等缺点，使其生物利用度低，从而限制了姜黄素在临床中的应用。因此，对姜黄素的新型载药体系投入研究，改进姜黄素的自身缺点，能够大幅推进姜黄素的临床应用进程。
纳米粒(Nanoparticles)广义上是指微粒直径在10～1000nm，以天然或合成的类脂材料为载体，将药物包裹或夹嵌于类脂核中制成的固体胶粒给药系统。在药剂学领域，纳米粒可分为纳米载体、纳米药物两部分，纳米载体指有分散或溶解药物的介于10～1000nm的纳米载药体系；纳米药物指直接将原料药物加工成10～1000nm的纳米粒子。纳米粒可采用低毒性、高生物相容性、生物可降解的固态天然或合成的类脂材料做为设计载体，将药物吸附或包裹于脂质膜中制成纳米给药系统，具有可以控制药物释放、避免药物降解或泄露以及良好的靶向性等优点。有研究报道，纳米粒体系可作为基因转移和药物的载体，通过将药物、DNA和蛋白质等分子包裹于纳米粒之中，最终实现安全有效的药物和基因治疗。
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMP)因需要钙离子、锌离子等金属离子作为激活因子而得名，是细胞外基质降解过程中不可缺少的一类肽链内切酶家族，广泛存在于动植物体内。MMP参与人体内多种生理及病理过程，包括组织生长、器官发育以及癌细胞的浸润转移、心肌梗塞等。因此，用MMP特异性剪切肽对两亲性高聚物载体进行修饰，可实现姜黄素的包载并且在肿瘤部位靶向释放，起到提高药效的目的。
两亲性嵌段聚合物是指由较长的亲水性链段及疏水性链段组成的高分子聚合物，也称为高分子表面活性剂。两亲性多臂星型聚合物可实现较高的药物包载能力、生物相容性和生物可降解性，且可通过对聚合物基团的修饰使其获得如受体靶向性等功能，从而避免药物被体内脏器和免疫细胞清除，并降低药物对正常细胞的杀伤力，提高用药安全性。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术问题的不足，提供一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法，所述方法是采用物理包裹法使亲水外层包裹亲脂性纳米粒内层，制备得到所述载药纳米粒。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法，包括如下步骤：
(一)两亲性聚酯PET-PCL-Peptide的制备：
①PET-PCL的制备：称取270～300mg(2mmol)季戊四醇、13～20g(120mmol)ε-己内酯于100mL三口烧瓶中搅拌至溶解，在氮气保护下，加入100～120μg(0.3mol)辛酸亚锡混合，升温至140℃匀速搅拌反应72h；反应结束，将反应物趁热溶于20mL二氯甲烷后，逐滴滴加到200mL乙醚中，沉淀完全，过滤收集沉淀，经甲醇重结晶纯化二次，室温下真空干燥24h至恒重，得到亲酯性四链高聚物PET-PCL；
②PET-PCL-Peptide的制备：精密称取一定量Peptide((ACP)-GPLGIAGQr9-(ACP))、4-二甲氨基吡啶(DMAP)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于20mL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，在氮气保护下，冰浴活化2h，再加入①产物PET-PCL，氮气保护下，室温匀速搅拌反应72h，得粗产物溶液A；
产物A纯化方法为：将粗产物溶液A，置于分子MW为14000的透析袋中，用透析夹两端封口后置于500ml蒸馏水中，转速100r/min，室温透析120h；透析结束后将透析袋中液体收集，真空冷冻干燥24h至恒重，即得纯化产物PET-PCL-Peptide；
所述Peptide((ACP)-GPLGIAGQr9-(ACP))、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和PET-PCL的投料量的摩尔比为1：(5～40)：(5～40)：(0.5～2)，优选为1：10：10：1。
步骤②中所述Peptide((ACP)-GPLGIAGQr9-(ACP))通过强耀生物有限公司购获得(含量为98.69％)；
本发明中，步骤(一)制得的两亲性聚酯PET-PCL-Peptide通过GPC分析计算平均分子量和多分散系数(PDI)，并称重计算收率；
GPC条件：流动相：四氢呋喃(1ml/min)；检测温度：35℃；聚合物用于GPC检测浓度为30mg/ml；进样量：50μL；柱型号：HP Phenogel guard column attached to a Phenogellinear(2)5μGPC column；
所得两亲性聚酯PET-PCL-Peptide分子量范围在8385～13545，其多分散系数(PDI)小于1.5。
(二)MePEG-COOH的制备：
MePEG-COOH的制备：取一定量聚乙二醇单甲醚MePEG1900和丁二酸酐加入50mL的三口烧瓶中，加入20mL二恶烷室温搅拌直到全部溶解；保持氮气流通，快速加入0.5mL吡啶、0.1200g 4-二甲氨基吡啶DMAP，密封后室温反应24h；反应结束后将产物转移到25ml的恒压滴液漏斗中，逐滴滴加至250ml的冰乙醚，使沉淀充分，抽滤，将产物置于40℃真空干燥箱干燥24h至恒重，保存备用；
所述聚乙二醇单甲醚MePEG1900和丁二酸酐的摩尔比为1：(3-6)，优选为1：3；
(三)将姜黄素、步骤(一)制得的PET-PCL-Peptide溶于丙酮中，形成油相；将表面活性剂溶于水中，形成水相；将所得油相滴加到水相中，搅拌0.5～8h，收集滤液经真空干燥除去有机溶剂、6000rpm离心10分钟，所得上清液即为酶敏感型两亲性聚酯PET-PCL-Peptide载药纳米粒的溶液，再将上述溶液按一定比例滴加到步骤(二)制得的MePEG-COOH溶液中室温搅拌0.5～8h，即为所述酶敏感型两亲性聚酯MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide的载药纳米粒溶液；
所述姜黄素浓度为0.8～1.2mg/mL，优选为1.0mg/mL；
所述姜黄素与PET-PCL-Peptide的质量比值为1：(5～10)，优选为1：7.5；
所述MePEG-COOH的溶液浓度为5～20mg/mL，优选为10mg/mL；
所述两亲性聚酯MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide的分子量为8385～13545，优选为MW13452；
所述表面活性剂选自吐温-85、聚乙烯醇(PVA)、泊洛沙姆-188(P-188)、十二烷基磺酸钠，优选为泊洛沙姆-188(P-188)；
所述两亲性聚酯PET-PCL-Peptide载药纳米粒溶液与MePEG-COOH的体积比为1：(0.5～2)，优选为1：0.5；
所述油相滴加到水相后搅拌时间优选0.5h；所述PET-PCL-Peptide载药纳米粒溶液与MePEG-COOH溶液混合后搅拌时间优选0.5h；
步骤(三)中，所述姜黄素可通过常规途径商购获得。
最终所得两亲性聚酯MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide载药纳米粒的溶液通过粒径仪测定纳米粒粒径和多分布系数(PDI)，HPLC计算溶液中姜黄素含量，并计算包封率(EE)。
Figure BDA0002281434600000041
W1：纳米粒溶液中总姜黄素质量；
W2：纳米粒溶液经15000r/min离心后，上清液中所含姜黄素质量。
本发明制得的两亲性聚酯MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide载药纳米粒平均粒径130～200nm，多分散指数(PDI)小于0.30，包封率大于70％。
相对于现有技术，本发明的有益效果在于：所述酶敏感型两亲性聚酯MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide载药纳米粒由于酶切肽的存在具有良好的特异性靶向，从而降低药物毒副作用；亲水外层MePEG-COOH可避免纳米粒被体内网状内皮系统或巨释系统的被动靶向清除体外，从而增长载体在血液中停留的时间，改善药代动力学，并且该亲水外层使用物理包裹法将亲脂性纳米粒包在内层，减少了有机试剂使用，比化学接枝法更加绿色环保，制得的纳米粒粒径更小并且大大提高了纳米粒的体内稳定性；亲脂片段PET-PCL可提高姜黄素在水中的溶解性，提高其生物利用度。
附图说明
图1：PET-PCL-Peptide的合成路线；
图2：不同体系下保存时间对纳米粒稳定性的影响。
具体实施方式
下面结合附图，并通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
PET-PCL的制备：称取275mg(2mmol)季戊四醇、15g(120mmol)ε-己内酯于100mL三口烧瓶中搅拌至溶解，在氮气保护下，加入114μg(0.3mol)辛酸亚锡混合，升温至140℃匀速搅拌反应72h；反应结束，将反应物趁热溶于20mL二氯甲烷后，逐滴滴加到200mL乙醚中，沉淀完全，过滤收集沉淀，经甲醇重结晶纯化二次，室温下真空干燥24h至恒重，得到亲酯性四链高聚物PET-PCL。
PET-PCL-Peptide合成：
实施例1
精密称取Peptide ACP-GPLGIAGQr9-ACP(0.043mmol，100.44mg)、DMAP(0.43mmol，52.42mg)和EDC(0.43mmol，81.25mg)溶解于20mL DMF。在氮气保护下，冰浴活化2h，再加入PET-PCL(0.043mmol，507.76mg)，氮气保护下，室温匀速搅拌反应72h，得粗产物溶液A。将粗产物溶液A，置于分子MW为14000的透析袋中，用透析夹两端封口后置于500ml蒸馏水中。转速100r/min，室温透析120h。透析结束后将透析袋中液体收集，真空冷冻干燥24h至恒重，即得纯化产物PET-PCL-Peptide 427.32mg。
经GPC平均分子量为13260.10，PDI为1.25，最终收率为71.17％。
实施例2
精密称取Peptide ACP-GPLGIAGQr9-ACP(0.043mmol，100.09mg)、DMAP(0.21mmol，26.37mg)和EDC(0.21mmol，41.50mg)溶解于20mL DMF。在氮气保护下，冰浴活化2h，再加入PET-PCL(0.086mmol，1002.44mg)，氮气保护下，室温匀速搅拌反应72h，得粗产物溶液A。将粗产物溶液A，置于分子MW为14000的透析袋中，用透析夹两端封口。置于500ml蒸馏水中。转速100r/min，室温透析120h。透析结束后将透析袋中液体收集，真空冷冻干燥24h至恒重，即得纯化产物PET-PCL-Peptide 304.67mg。
经GPC平均分子量为8385.70，PDI为1.44，最终收率为50.67％。
实施例3
精密称取Peptide ACP-GPLGIAGQr9-ACP(0.043mmol，100.24mg)、DMAP(1.72mmol，209.68mg)和EDC(1.72mmol，325.40mg)溶解于20mL DMF。在氮气保护下，冰浴活化2h，再加入PET-CL(0.021mmol，252.68mg)，氮气保护下，室温匀速搅拌反应72h，得粗产物溶液A。将粗产物溶液A，置于分子MW为14000的透析袋中，用透析夹两端封口。置于500ml蒸馏水中。转速100r/min，室温透析120h。透析结束后将透析袋中液体收集，真空冷冻干燥24h至恒重，即得纯化产物PET-PCL-Peptide398.46mg。
经GPC平均分子量为13545.20，PDI为1.05，最终收率为66.33％
MePEG-COOH的制备：
实施例4
取1.9873g(1mmol)聚乙二醇单甲醚MePEG1900和0.3120g(3mmol)丁二酸酐至50mL的三口烧瓶中，加入20mL吡啶搅拌直到全部溶解。保持氮气流通，快速加入20μL三乙胺、0.1180g DMAP，密封后室温反应24h。将产物转移到25ml的恒压滴液漏斗中，逐滴滴加到250ml的冰乙醚，使沉淀充分，抽滤。将产物置于40℃真空干燥箱干燥24h至恒重，最终制得0.6775g MePEG-COOH。
经NMR核磁氢谱检测确定产物为MePEG-COOH，最终产率为35.66％。
实施例5
取1.9445g(1mmol)聚乙二醇单甲醚MePEG1900和0.6012g(6mmol)丁二酸酐至50mL的三口烧瓶中，加入20mL吡啶搅拌直到全部溶解。保持氮气流通，快速加入20μL三乙胺、0.1235g DMAP，密封后室温反应24h。将产物转移到25ml的恒压滴液漏斗中，逐滴滴加到250ml的冰乙醚，使沉淀充分，抽滤。将产物置于40℃真空干燥箱干燥24h至恒重，最终制得0.8477g MePEG-COOH。
经NMR核磁氢谱检测确定产物为MePEG-COOH，最终产率为44.62％。
实施例6
取1.9105g(1mmol)聚乙二醇单甲醚MePEG1900和0.3301g(3mmol)丁二酸酐至50mL的三口烧瓶中，加入20mL二恶烷搅拌直到全部溶解。保持氮气流通，快速加入0.5mL吡啶、0.1202g DMAP，密封后室温反应24h。将产物转移到25ml的恒压滴液漏斗中，逐滴滴加到250ml的冰乙醚，使沉淀充分，抽滤。将产物置于40℃真空干燥箱干燥24h至恒重，最终制得1.5480g MePEG-COOH。
经NMR核磁氢谱检测确定产物为MePEG-COOH，最终产率为81.47％。
实施例7
取1.9096g(1mmol)聚乙二醇单甲醚MePEG1900和0.6701g(6mmol)丁二酸酐至50mL的三口烧瓶中，加入20mL二恶烷搅拌直到全部溶解。保持氮气流通，快速加入0.5mL吡啶、0.1266g DMAP，密封后室温反应24h。将产物转移到25ml的恒压滴液漏斗中，逐滴滴加到250ml的冰乙醚，使沉淀充分，抽滤。将产物置于40℃真空干燥箱干燥24h至恒重，最终制得1.0861g MePEG-COOH。
经NMR核磁氢谱检测确定产物为MePEG-COOH，最终产率为57.16％。
酶敏感型两亲性聚酯MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide姜黄素纳米粒制备：
考查姜黄素浓度对纳米粒成粒影响：
将姜黄素8.0、10.0、12.0mg分别用丙酮溶剂定容至10mL容量瓶，配制成不同浓度的姜黄素有机溶液，保存备用；按照实施例1方法制得的PET-PCL-Peptide 20.0mg溶于2mL姜黄素丙酮溶剂中，形成油相；将10.0mg表面活性剂P-188溶于10mL水中，形成水相；将所得油相滴加到水相中，搅拌0.5h，真空干燥除去有机溶剂，6000r/min离心10min，除去未包封的姜黄素，收集上清液即为PET-PCL-Peptide姜黄素纳米粒溶液；取1mL制得的纳米粒溶液，逐滴滴加至10mg/mL，0.5mL按实施例6制得的MePEG-COOH水溶液中，搅拌0.5h，即为MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide姜黄素纳米粒溶液；
结果见Table1
Table1姜黄素浓度对纳米粒成粒影响
Figure BDA0002281434600000081
优选姜黄素浓度1.0mg/ml。
实施例9
考查姜黄素/PET-PCL-Peptide比值对纳米粒成粒影响。
将姜黄素10.0mg用丙酮溶剂定容至10mL容量瓶，配制成1.0mg/mL有机溶液，保存备用；按照实施例1方法制得的PET-PCL-Peptide 10.0mg、15.0mg、20.0mg分别溶于2mL姜黄素丙酮溶剂中，形成油相；将10.0mg表面活性剂P-188溶于10mL水中，形成水相；将所得油相滴加到水相中，搅拌4h，真空干燥除去有机溶剂，6000r/min离心10min，除去未包封的姜黄素，收集上清液即为PET-PCL-Peptide姜黄素纳米粒溶液；取1mL制得的纳米粒溶液，逐滴滴加至10mg/mL，0.5mL按实施例6制得的MePEG-COOH水溶液中，搅拌4h，即为MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide姜黄素纳米粒溶液；
结果见Table2
Table2姜黄素/PET-PCL-Peptide比值对纳米粒成粒影响
Figure BDA0002281434600000082
优选姜黄素/PET-PCL-Peptide比值为1：7.5。
实施例10
考察不同类型PEG对纳米粒成粒影响
将姜黄素10.0mg用丙酮溶剂定容至10mL容量瓶，配制成1.0mg/mL有机溶液，保存备用；按照实施例1方法制得的PET-PCL-Peptide 15.0mg溶于2mL姜黄素丙酮溶剂中，形成油相；将10.0mg表面活性剂P-188溶于10mL水中，形成水相；将所得油相滴加到水相中，搅拌0.5h，真空干燥除去有机溶剂，6000r/min离心10min，除去未包封的姜黄素，收集上清液即为PET-PCL-Peptide姜黄素纳米粒溶液；取1mL制得的纳米粒溶液，分别逐滴滴加至10mg/mL，0.5mL MePEG-COOH、MePEG1900、PEG2000、PEG4000、PEG10000水溶液中，搅拌8h，即为所述姜黄素纳米粒溶液；
结果见Table3
Table3不同类型PEG对纳米粒成粒影响
Figure BDA0002281434600000091
优选的PEG类型为MePEG-COOH。
实施例11
考查MePEG-COOH浓度对纳米粒成粒影响。
将姜黄素10.0mg用丙酮溶剂定容至10mL容量瓶，配制成1.0mg/mL有机溶液，保存备用；按照实施例1方法制得的PET-PCL-Peptide 15.0mg溶于2mL姜黄素丙酮溶剂中，形成油相；将10.0mg表面活性剂P-188溶于10mL水中，形成水相；将所得油相滴加到水相中，搅拌8h，真空干燥除去有机溶剂，6000r/min离心10min，除去未包封的姜黄素，收集上清液即为PET-PCL-Peptide姜黄素纳米粒溶液；分别取1mL制得的纳米粒溶液，逐滴滴加至5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL，0.5mL按实施例6制得的MePEG-COOH水溶液中，搅拌0.5h，即为MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide姜黄素纳米粒溶液；
结果见Table4
Table4 MePEG-COOH浓度对纳米粒成粒影响
Figure BDA0002281434600000101
优选MePEG-COOH浓度为10mg/mL。
实施例12
考查PET-PCL-Peptide载药纳米粒溶液/MePEG-COOH体积比对纳米粒成粒影响。
将姜黄素10.0mg用丙酮溶剂定容至10mL容量瓶，配制成1.0mg/mL有机溶液，保存备用；按照实施例1方法制得的PET-PCL-Peptide 15.0mg溶于2mL姜黄素丙酮溶剂中，形成油相；将10.0mg表面活性剂P-188溶于10mL水中，形成水相；将所得油相滴加到水相中，搅拌0.5h，真空干燥除去有机溶剂，6000r/min离心10min，除去未包封的姜黄素，收集上清液即为PET-PCL-Peptide姜黄素纳米粒溶液；分别取1mL制得的纳米粒溶液，逐滴滴加至10mg/mL，0.5mL、1mL、2mL按实施例6制得的MePEG-COOH水溶液中，搅拌0.5h，即为MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide姜黄素纳米粒溶液；
结果见Table5
Table5 PET-PCL-Peptide载药纳米粒溶液/MePEG-COOH体积比对纳米粒成粒影响
Figure BDA0002281434600000102
优选体积比为PET-PCL-Peptide/MePEG-COOH＝1：0.5。
实施例13
考查纳米粒在不同体系下保存时间对稳定性的影响
将姜黄素10.0mg用丙酮溶剂定容至10mL容量瓶，配制成1.0mg/mL有机溶液，保存备用；按照实施例1方法制得的PET-PCL-Peptide 15.0mg溶于2mL姜黄素丙酮溶剂中，形成油相；将10.0mg表面活性剂P-188溶于10mL水中，形成水相；将所得油相滴加到水相中，搅拌0.5h，真空干燥除去有机溶剂，6000r/min离心10min，除去未包封的姜黄素，收集上清液即为PET-PCL-Peptide姜黄素纳米粒溶液；取1mL制得的纳米粒溶液，逐滴滴加至10mg/mL，0.5mL按实施例6制得的MePEG-COOH水溶液中，搅拌0.5h，即为MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide姜黄素纳米粒溶液；分别取100μL所制MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide姜黄素纳米粒溶液加入到900μL含10％胎牛血清(FBS)的高糖细胞培养基(DMEM)、pH 7.4PBS溶液、纯水体系中；
不同体系下保存时间对纳米粒稳定性的影响结果见图2。
以上所述的实施例只是本发明的较佳方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

Claims (9)

1.一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）MePEG-COOH及PET-PCL-Peptide单体的制备：
①聚乙二醇单甲醚MePEG1900与丁二酸酐室温下用适量二恶烷溶解，加适量吡啶及4-二甲氨基吡啶，在氮气保护条件下，室温反应24h，纯化得到产物MePEG-COOH；
②季戊四醇和ε-己内酯搅拌至溶解，加入适量辛酸亚锡，氮气保护下升温至140℃反应72h，纯化得到PET-PCL单体；
③Peptide、4-二甲氨基吡啶、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，在氮气保护下冰浴活化2h，再加入②产物PET-PCL，在氮气保护下，室温反应72h，纯化得到产物PET-PCL-Peptide；所述Peptide为(ACP)-GPLGIAGQr9-(ACP)；
所述聚乙二醇单甲醚MePEG1900与丁二酸酐的摩尔比为1：（3~6）；
所述Peptide、4-二甲氨基吡啶、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC）和PET-PCL的投料量的摩尔比为1：（5~40）：（5~40）：（0.5~2）；
2）MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide载药纳米粒的制备：
④姜黄素、步骤1）制得的酶敏感型两亲性聚酯PET-PCL-Peptide溶于丙酮中，做为油相；表面活性剂溶于水中，做为水相；将所得油相滴加到水相中，搅拌一定时间后真空抽滤，收集滤液为PET-PCL-Peptide纳米粒溶液；
⑤取一定量④制得的纳米粒溶液，按一定比例滴加至①制得的MePEG-COOH溶液中，室温下搅拌一定时间，得到酶敏感型两亲性聚酯MePEG-COOH/PET-PCL-Peptide载药纳米粒；
所述姜黄素浓度为0.8~1.2 mg/mL；
所述姜黄素与PET-PCL-Peptide的质量比值为1：（5~10）；
所述MePEG-COOH的溶液浓度为5~20mg/mL；
所述PET-PCL-Peptide纳米粒溶液与MePEG-COOH的体积比为1：（0.5~2）；
所述表面活性剂为吐温-85、聚乙烯醇、泊洛沙姆-188或十二烷基磺酸钠；
所述④中搅拌时间为0.5~8h；
所述⑤中搅拌时间为0.5~8h。
2.根据权利要求1所述一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤1）中所述聚乙二醇单甲醚MePEG1900与丁二酸酐的摩尔比为1：3。
3.根据权利要求1所述一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤1）中所述Peptide、4-二甲氨基吡啶、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐和PET-PCL的投料量的摩尔比为1：10：10：1。
4.根据权利要求1所述一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤2）中所述姜黄素与PET-PCL-Peptide的质量比值为1：7.5。
5.根据权利要求1所述一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤2）中所述MePEG-COOH的溶液浓度为10 mg/mL。
6.根据权利要求1所述一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤2）中所述姜黄素浓度1.0 mg/mL。
7.根据权利要求1所述一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤2）中所述两亲性聚酯PET-PCL-Peptide载药纳米粒溶液与MePEG-COOH的体积比为1：0.5。
8.根据权利要求1所述一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤2）中所述表面活性剂为泊洛沙姆-188。
9.根据权利要求1所述一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤2）中所述④中搅拌时间为0.5h，所述⑤中搅拌时间为0.5h。
CN201911142899.XA 2019-11-20 2019-11-20 一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法 Active CN111110650B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911142899.XA CN111110650B (zh) 2019-11-20 2019-11-20 一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911142899.XA CN111110650B (zh) 2019-11-20 2019-11-20 一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111110650A CN111110650A (zh) 2020-05-08
CN111110650B true CN111110650B (zh) 2022-09-20

Family

ID=70495914

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911142899.XA Active CN111110650B (zh) 2019-11-20 2019-11-20 一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111110650B (zh)

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101940792B (zh) * 2010-09-30 2012-01-04 中国医学科学院生物医学工程研究所 PCL-b-PEG-b-PCL载疏水性药物聚合物囊泡及制备方法及用途
CN102085177B (zh) * 2011-01-12 2012-11-07 武汉理工大学 一种可还原降解纳米载药胶束及其制备方法
CN102423302A (zh) * 2011-11-21 2012-04-25 中国药科大学 载鬼臼苦素纳米胶束制剂和冻干制剂及其制备方法
CN104414976B (zh) * 2013-09-06 2017-08-15 济南大学 一种姜黄素纳米粒及其制备方法
CN107049990B (zh) * 2017-06-12 2020-02-21 浙江工业大学 一种聚三己内酯-丙三酸给药纳米粒的微通道制备方法
CN107243002B (zh) * 2017-06-12 2020-04-24 浙江工业大学 一种聚四己内酯-季戊四醇给药纳米粒的制备方法
CN107744515A (zh) * 2017-08-14 2018-03-02 浙江工业大学 一种具有酶靶向性和缓控释特性的给药纳米粒的制备方法
CN107744503B (zh) * 2017-08-14 2020-04-07 浙江工业大学 酶敏感性两亲性聚酯MePEG-Peptide-PER-CL给药纳米粒的制备方法
CN107744514B (zh) * 2017-08-14 2020-06-30 浙江工业大学 一种具有酶靶向性的星状给药纳米粒的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN111110650A (zh) 2020-05-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112121029B (zh) 一种仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统及其制备方法
Zhang et al. Preparation of chitosan-polyaspartic acid-5-fluorouracil nanoparticles and its anti-carcinoma effect on tumor growth in nude mice
CN111621024B (zh) 快速氧化/还原双重响应性含双硒键的嵌段共聚物的制备方法
CN112933052A (zh) 改善肿瘤缺氧微环境并增强免疫治疗的纳米递药系统
CN113018450B (zh) 一种具有肿瘤细胞和肿瘤相关成纤维细胞双靶向功能的药物载体、制备方法及应用
CN114767655B (zh) 一种两性离子功能化的生物可降解口服纳米载药系统及应用
CN113264906A (zh) 多西他赛二聚体小分子前药及其自组装纳米粒的构建
CN108339124B (zh) 一种双级脑靶向聚合物胶束递药系统的制备方法和应用
CN110624113A (zh) 一种靶向聚乙二醇纳米粒子药物载体的超声制备方法与应用
CN108524529B (zh) 基于两性离子及叶酸靶向的酸敏感性阿霉素前药及其制备方法与应用
Yadav et al. Chondroitin sulphate decorated nanoparticulate carriers of 5-fluorouracil: development and in vitro characterization
CN107693505B (zh) 一种油水双溶性ros敏感纳米粒及其制备方法
CN111821469A (zh) 归巢靶向rsgrvsn肽修饰的聚乙二醇-聚多巴胺-普鲁士蓝复合纳米粒子及制备方法
CN114652699B (zh) 一种尺寸转变型纳米递药载体及其制备方法和应用
CN111110650B (zh) 一种酶敏感型两亲性聚酯载药纳米粒的制备方法
CN109662956B (zh) 一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒的应用
CN107744503B (zh) 酶敏感性两亲性聚酯MePEG-Peptide-PER-CL给药纳米粒的制备方法
CN111714457B (zh) 载小分子药物的碳酸酯聚合物囊泡及其制备方法与应用
CN101632834A (zh) 疏水药物肿瘤靶向传递的磁性纳米载体及其制备方法
CN111671917B (zh) 一种石蒜碱纳米粒、其制备方法及应用
CN109395086B (zh) 一种氧化石墨烯基复合纳米药物载体及其制备方法
CN110721319B (zh) 同时键合喜树碱和阿霉素的聚磷酸酯前药及前药纳米粒子的制备方法
CN111333749A (zh) 一种聚环氧丙烷-海藻酸钠水凝胶的制备和应用
CN105616340B (zh) 一种负载10-羟基喜树碱的超分子水凝胶体系及其制备方法
CN115040510B (zh) β-拉帕醌和替莫唑胺在制备治疗或抑制胶质母细胞瘤药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant