CN112121029B - 一种仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统及其制备方法 - Google Patents

一种仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于制药领域，公开了一种仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统，该纳米递释系统包括由多巴胺和抗肿瘤药物制备得到的多巴胺聚合载药纳米粒、接枝在聚多巴胺表面的仿生肿瘤靶向蛋白或多肽。本发明多巴胺以聚合载药的方式，将药物包裹在聚多巴胺内部，显著提高药物的包封率，具有较高的载药量；随后，仿生肿瘤靶向蛋白或多肽共价接枝到聚多巴胺表面，赋予该纳米递释系统仿生特性和靶向功能。本发明所制备的纳米递释系统具有pH、ROS和光热三重响应快速释药特性，通过肿瘤靶向可实现肿瘤化疗‑光热联合治疗目的，在肿瘤靶向联合治疗方面具有良好的应用前景。

Description

一种仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统及其制备方法
技术领域
本发明属于制药领域，涉及一种纳米药物及其制备方法，具体地，涉及一种仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统及其制备方法。
背景技术
传统的癌症治疗方法主要有手术切除、化学治疗、免疫治疗、放射治疗。其中，化学治疗是指化疗药物通过干扰或者阻断肿瘤细胞的分裂和增殖，从而发挥治疗效果，化疗是临床治疗癌症患者最常用的治疗方案，但是仍存在一定的局限性。化疗对肿瘤细胞杀伤的过程中，由于其不具有特异性，给药后在体内分布较广，往往也会对机体正常快速增殖的细胞如消化道细胞、骨髓造血细胞、免疫细胞造成毒性，从而引起一系列的毒副作用。因此，针对肿瘤微环境的特性设计和研发新的治疗技术或联合传统治疗技术来提高癌症治疗的效果迫在眉睫。
聚多巴胺(Polydopamine，PDA)是天然黑色素中的主要色素，和天然黑色素在光学、电学、磁性以及生物相容性等性质相近，因此被越来越多地研究和应用。目前，聚多巴胺是利用多巴胺在碱性和有氧的条件下自聚合形成的。研究发现，聚多巴胺结构中存在许多的芳香环，因此可通过非共价作用力选择性负载抗肿瘤药物。同时，聚多巴胺结构中有丰富的邻苯二醌基团，可与含有氨基或者巯基等功能分子发生迈克尔加成反应或者席夫碱反应，从而将其他功能分子引入聚多巴胺材料表面，赋予聚多巴胺新的生物功能。
光热治疗(Photothermaltherapy，PTT)是利用具有优异光热转换效率的材料吸收近红外光的光能转换为热能来消融肿瘤的一种治疗手段，与传统的手术治疗、放射治疗和化学治疗相比，光热治疗具有优异的选择性、非侵入性、对正常组织损伤小等优点。聚多巴胺具有较宽的吸收范围，从紫外到近红外均有吸收，且在近红外区域具有较强的吸收，研究表明其光热转换效率可达40％，高于常用的光热材料，并借助其良好生物相容性，被越来越多应用到光热治疗研究中。此外，聚多巴胺结构中存在的氨基和多酚基团，对低pH和高ROS敏感，因此聚多巴胺作为药物递送载体可实现在肿瘤部位的刺激响应释放，提高药物在肿瘤部位的浓度，在减少毒副作用的同时，极大地提高了肿瘤的治疗效果。
目前，聚多巴胺荷载抗肿瘤药物的相关研究主要集中在聚多巴胺纳米粒形成后，再荷载抗肿瘤药物，该方法载药量低，无法实现抗肿瘤药物的高效荷载，且在治疗过程中需多次给药，顺应性差。如徐莉，肖敏，李银萍等人在一种具有靶向光热治疗和可控释药的多重作用纳米材料的制备方法及应用中，先合成聚多巴胺后再进行荷载硼替佐米，结果显示该纳米递释系统药物载药量为10.96％，该载药方式药物和载体的接触面积减少，药物荷载量相对较低。除此之外，现有聚多巴胺的修饰手段主要采用PEG修饰，研究表明在多次应用PEG后，PEG的免疫原性会引起明显的体液免疫反应，具有加速血液清除效应，经过PEG修饰的载体会被吞噬细胞识别和清除，其血液半衰期显著缩短，无法实现药物的高效递送。
因此，需构建一种具有高载药量和肿瘤靶向效果及多种治疗模式相结合的纳米递释系统，来解决上述弊端。构建具有良好靶向性、生物相容性及生物可降解性的、且能实现化学治疗和光热治疗协同治疗的聚多巴胺纳米递释系统，将是聚多巴胺在肿瘤治疗领域方面新的突破。
发明内容
本发明针对现有技术存在的不足，提供一种仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统，该纳米递释系统兼具高载药量和肿瘤靶向功能和仿生特性，同时具备优异的光热转换效率，可用于肿瘤高效光热与化疗的协同治疗。
本发明的具体技术方案如下：
一种仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统，包括由多巴胺和抗肿瘤药物制备得到的多巴胺聚合载药纳米粒、接枝在聚多巴胺表面的仿生肿瘤靶向蛋白或多肽。
所述的抗肿瘤药物为具有芳香结构的抗肿瘤药物，选自阿霉素、喜树碱、姜黄素、棉酚、索拉非尼、硼替佐米、咪喹莫特、雷西莫特、吲哚菁绿中一种或多种。
所述的仿生肿瘤靶向蛋白选自载脂蛋白、转铁蛋白、白蛋白中的一种；所述的仿生肿瘤靶向多肽选自肿瘤归巢肽、细胞穿膜肽、核定位信号肽中的一种。所述的载脂蛋白选自载脂蛋白apoA、载脂蛋白apoB、载脂蛋白apoC、载脂蛋白apoE。所述的肿瘤归巢肽选自iRGD肽、NGR肽、F3肽。所述的细胞穿膜肽选自TAT肽、MPG肽、Pep-1肽。所述的核定位信号肽选自H2B肽、NIN2肽、SWI5肽。
所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统呈致密的类球状，平均粒径为70～200nm。
所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统的载药量为30％～75％，优选为60％～75％。
本发明的另一个目的是提供所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统的制备方法，包括以下步骤：
步骤(1)、以pH8.0～10.0弱碱性缓冲液为溶剂，多巴胺和抗肿瘤药物按照质量比为1:0.5～1:5，多巴胺的终浓度为0.1mg/mL～1mg/mL，在室温、通氧气条件下避光搅拌反应6～72h，多巴胺在有氧以及碱性条件下自发氧化形成聚多巴胺，抗肿瘤药物通过π-π共轭作用包载于聚多巴胺内；
步骤(2)、将步骤(1)得到的反应液装于透析袋中，置于纯水中，在避光条件下透析或离心或凝胶过滤色谱法除去未被包载的抗肿瘤药物后，即得到多巴胺聚合载药纳米粒；
步骤(3)、取步骤(2)制得的多巴胺聚合载药纳米粒溶液，按照多巴胺聚合载药纳米粒和肿瘤靶向蛋白或多肽的质量比为1:1.5～1:3.5将多巴胺聚合载药纳米粒和仿生肿瘤靶向蛋白或多肽混合，调节pH至8.0～10.0，室温避光搅拌12～24h进行接枝反应，仿生肿瘤靶向蛋白或多肽在碱性介质与聚多巴胺醌基反应共价接枝到多巴胺聚合载药纳米粒上；
步骤(4)、步骤(3)制得的反应液采用凝胶过滤色谱法除去未被接枝的仿生肿瘤靶向蛋白或多肽，冷冻干燥，得仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
步骤(1)中，多巴胺和抗肿瘤药物分别配制成溶液，再按照质量比分别将多巴胺溶液、抗肿瘤药物溶液逐滴加入到缓冲液中。
具体的，采用纯水配制10mg/mL的多巴胺溶液，采用DMSO配制20mg/mL的阿霉素溶液，采用乙醇配制10mg/mL的姜黄素溶液，采用甲醇配制10mg/mL的吲哚菁绿溶液，采用氯仿:甲醇(4:1V/V)配制4mg/mL的喜树碱溶液，采用三乙胺:四氢呋喃(1:40V/V)配制2mg/mL的索拉非尼溶液，采用二甲基亚砜配制5mg/mL的咪喹莫特溶液，采用甲醇配制5mg/mL的棉酚溶液，采用二甲基亚砜配制10mg/mL的雷西莫特溶液，采用二甲基亚砜:水(1:10V/V)配制3mg/mL的硼替佐米溶液。
优选的，所述的多巴胺和抗肿瘤药物的质量比为1:2～1:3；所述的多巴胺终浓度0.1～0.2mg/mL。
所述的弱碱性缓冲液为三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(Tris-HCl缓冲液)、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、硼酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-盐酸缓冲液。
优选的，所述的缓冲液的pH＝8.5～9.0。
反应48h后，随着反应时间增加，载药量和包封率趋于饱和，基本没有变化，因此，所述的反应时间优选为12～48h。
步骤(2)中，所述的透析袋的截留分子量为1000～7000Da。所述的离心的转数为13000～18000rpm，离心的时间为30～60min。所述的凝胶过滤色谱法选用葡聚糖凝胶，葡聚糖凝胶型号为SephadexG10、SephadexG25、SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液。
步骤(3)中，根据粒径和接枝率结合纳米递释系统在生理条件下的稳定性，当多巴胺聚合载药纳米粒和仿生肿瘤靶向蛋白或多肽的质量比为1:0.1至1:1时，此时得到的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统在生理条件下不稳定。当两者的比例为1:1.5时，其能够保持良好的生理条件下的稳定性。当多巴胺聚合载药纳米粒和仿生肿瘤靶向蛋白或多肽的质量比为1:2.5时，聚多巴胺上接枝的仿生肿瘤靶向蛋白或多肽达到饱和，当多巴胺聚合载药纳米粒和仿生肿瘤靶向蛋白或多肽的质量比为1:3.5时，仿生肿瘤靶向蛋白或多肽的接枝率并没有显著得提高，因此，所述的多巴胺聚合载药纳米粒和仿生肿瘤靶向蛋白或多肽的质量比选为1:1.5～1:3.5，进一步优选为1:1.5～1:2.5；所述的pH值优选为8.5～10.0；反应时间优选为24h。
多巴胺聚合载药纳米粒和仿生肿瘤靶向蛋白或多肽混合使体系中，阿霉素终浓度为1mg/mL，吲哚菁绿终浓度为0.1～0.15mg/mL，喜树碱或姜黄素或咪喹莫特的终浓度为2mg/mL，棉酚终浓度为3mg/mL，索拉非尼或雷西莫特的终浓度为5mg/mL，
优选的，采用氢氧化钠、碳酸氢钠、Tris-HCl缓冲液调节pH。
本发明所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统在受到活性氧(ROS)刺激时，聚多巴胺结构氧化，促进聚多巴胺内部荷载药物的快速释放。所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统在受到近红外光照射刺激时，聚多巴胺光热转换，促进聚多巴胺内部荷载药物的快速释放。本发明所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统具有pH、活性氧(ROS)和光热多重响应释药特性，以及肿瘤靶向和光热治疗作用，可实现肿瘤高效化疗-光热联合治疗，在肿瘤靶向联合治疗方面具有良好的应用前景。因此，本发明的另一个目的是提供所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统在制备光热与化疗联合治疗肿瘤的药物中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
1.本发明以聚合载药的方式，通过多巴胺和抗肿瘤药物之间的非共价作用力结合，将药物包裹在聚多巴胺内部，显著提高药物的包封率，具有较高的载药量，载药量可高达75％，本发明显著提高了对药物的包封率以及药物的荷载量。
2.本发明仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统中的蛋白或多肽，共价接枝到聚多巴胺表面，赋予该纳米递释系统靶向功能和仿生特性，可以特异性靶向到肿瘤部位，能够促使药物更多得靶向到肿瘤部位，提高肿瘤部位的蓄积浓度，减少毒副作用，提高肿瘤的治疗效果。本发明所选用的聚多巴胺和肿瘤靶向的蛋白或多肽都具有良好的生物相容性，无毒性。
3.本发明仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统能够在肿瘤低pH(pH4.3～5.0)和高ROS(1～10mM)环境以及近红外照射三重条件下，响应性释放药物，保障药物在肿瘤部位的高效释放。聚多巴胺在近红外照射下所产生的热能亦能杀伤肿瘤，解决单一化学治疗效果差，毒副作用大的缺点。利用光热治疗和化学治疗的联合实现对肿瘤细胞的高效杀伤作用，提高肿瘤的治疗效果。
4.本发明仿生多巴胺聚合载药的纳米递释系统能够实现对抗肿瘤药物的高效荷载且其制备方法条件温和、简单易行、周期短，且稳定性和重现性好。
附图说明
图1为包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒的粒径分布图；
图2为包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒(图2a为实施例11)和仿生多巴胺聚合载药的靶向纳米粒(图2b为实施例26)透射电镜图；
图3为不同浓度的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统(实施例26)的升温曲线；
图4为仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统(实施例26)在不同pH条件下的药物释放曲线；
图5为仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统(实施例26)在不同H2O2浓度条件下的药物释放曲线；
图6为仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统(实施例26)在近红外光照射下的药物释放曲线；
图7为仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统的pH，ROS和NIR三重响应药物释放结果；
图8为仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统细胞毒性考察结果；
图9为仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统细胞摄取定量考察结果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，结合实施例对本发明的技术方案作进一步详细的说明。应当理解，此处所述的具体实施例用以解释本发明，并不用于限定本发明的范围。
实施例1
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
用纯水配制10mg/mL的多巴胺溶液，用DMSO配制20mg/mL的阿霉素溶液。按照多巴胺和阿霉素质量比为1:0.5，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为32.3％，包封率为95.7％。
实施例2
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
按照实施例1配制多巴胺溶液、阿霉素溶液，按照多巴胺和阿霉素质量比为1:1，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为47.6％，包封率为90.9％。
对比例1
合成荷载阿霉素的聚多巴胺载药纳米粒
配制10mg/mL的多巴胺溶液，随后逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL，在室温通氧气条件下搅拌反应24h后，采用离心法收集得到聚多巴胺纳米粒。
按照聚多巴胺纳米粒和阿霉素质量比为1:1，将阿霉素溶液逐滴加入到分散在pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中聚多巴胺纳米粒溶液中，在室温条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被荷载的阿霉素，即得到荷载阿霉素的聚多巴胺载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为41.3％，包封率为70.3％。
将实施例2和对比例1进行比较，发现：在同等条件下，当载体和药物的质量比为1:1时，实施例2多巴胺聚合载药纳米粒的载药量比形成聚多巴胺纳米再荷载药物的载药量增加了6.3％，对药物的包封率也显著提高。
实施例3
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒
按照实施例1配制多巴胺溶液、阿霉素溶液，按照多巴胺和阿霉素质量比为1:2，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为63.6％，包封率为87.4％。
实施例4
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
按照实施例1配制多巴胺溶液、阿霉素溶液，按照多巴胺和阿霉素质量比为1:3，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为71.2％，包封率为85.6％。
对比例2
合成荷载阿霉素的聚多巴胺载药纳米粒
配制10mg/mL的多巴胺溶液，随后逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL，在室温通氧气条件下搅拌反应24h后，采用离心法收集得到聚多巴胺纳米粒。
按照聚多巴胺纳米粒和阿霉素质量比为1:3，将阿霉素溶液逐滴加入到分散在pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中聚多巴胺纳米粒溶液中，在室温条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被荷载的阿霉素，即得到荷载阿霉素的聚多巴胺载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为44.9％，包封率为27.2％。
将实施例4和对比例2进行比较，发现：在同等条件下，当载体和药物的质量比为1:3时，多巴胺聚合载药纳米粒的载药量是后者的1.6倍，载药量增加了27.2％。
实施例5
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
按照实施例1配制多巴胺溶液、阿霉素溶液，按照多巴胺和阿霉素质量比为1:5，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析采用透析法除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为74.1％，包封率为57.3％。
实施例6
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
用纯水配制5mg/mL的多巴胺溶液，用DMSO配制10mg/mL的阿霉素溶液。按照多巴胺和阿霉素质量比为1:3，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.1mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为70.7％，包封率为80.5％。
实施例7
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
用纯水配制15mg/mL的多巴胺溶液，用DMSO配制20mg/mL的阿霉素溶液。多巴胺和阿霉素按照质量比为1:3，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.3mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为69.4％，包封率为75.7％。
实施例8
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
用纯水配制25mg/mL的多巴胺溶液，用DMSO配制20mg/mL的阿霉素溶液。按照多巴胺和阿霉素质量比为1:3，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.5mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为67.4％，包封率为68.9％。
实施例9
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
用纯水配制25mg/mL的多巴胺溶液，用DMSO配制20mg/mL的阿霉素溶液。按照多巴胺和阿霉素质量比为1:3，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为1mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为64.5％，包封率为60.5％。
实施例10
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
按照实施例1配制多巴胺溶液、阿霉素溶液，多巴胺和阿霉素按照质量比为1:3，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应6h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药的抗肿瘤纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为68.4％，包封率为72.2％。
实施例11
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
按照实施例1配制多巴胺溶液、阿霉素溶液，按照多巴胺和阿霉素质量比为1:3，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应48h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒(透射电镜图见图2a)，通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为72.1％，包封率为86.1％。
实施例12
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
按照实施例1配制多巴胺溶液、阿霉素溶液，按照多巴胺和阿霉素质量比为1:3，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应72h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为72.3％，包封率为86.5％。
实施例13
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
按照实施例1配制多巴胺溶液、阿霉素溶液，按照多巴胺和阿霉素质量比为1:3，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.0的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为60.6％，包封率为51.3％。
实施例14
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
按照实施例1配制多巴胺溶液、阿霉素溶液，按照多巴胺和阿霉素质量比为1:3，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝9.0的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为72.3％，包封率为86.8％。
实施例15
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
按照实施例1配制多巴胺溶液、阿霉素溶液，按照多巴胺和阿霉素的质量比为1:2，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液中，使得多巴胺最终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为59.7％，包封率为74.2％。
实施例16
合成包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒
按照实施例1配制多巴胺溶液、阿霉素溶液，按照多巴胺和阿霉素的质量比为1:3，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液逐滴加入到pH＝8.5的硼砂-盐酸缓冲液中，使得多巴胺最终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为69.4％，包封率为75.5％。
实施例17
合成包载姜黄素的多巴胺聚合载药纳米粒
用纯水配制10mg/mL的多巴胺溶液，用乙醇配制10mg/mL的姜黄素溶液。
按照多巴胺和姜黄素质量比为1:2，分别将多巴胺溶液、姜黄素溶液逐滴加入到pH＝8.5的硼砂-氢氧化钠缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，18000rpm高速离心20min，水洗沉淀，重复离心3次后除去未被包载的姜黄素，即得到包载姜黄素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过紫外分光光度法测得该纳米粒载药量为62.2％，包封率为82.3％。通过紫外分光光度法测得该纳米粒载药量为62.2％，包封率为82.3％。
实施例18
合成包载喜树碱的多巴胺聚合载药纳米粒
用纯水配制10mg/mL的多巴胺溶液，用氯仿:甲醇(4:1V/V)配制4mg/mL的喜树碱溶液。
按照质多巴胺和喜树碱按量比为1:2，分别将多巴胺溶液、喜树碱溶液逐滴加入到pH＝9.0的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应48h后，采用15000rpm高速离心10min，水洗沉淀，重复离心3次后即得到即得到包载喜树碱的多巴胺聚合载药纳米粒。通过紫外分光光度法测得该纳米粒载药量为63.6％，包封率为87.2％。
实施例19
合成包载索拉非尼的多巴胺聚合载药纳米粒
用纯水配制10mg/mL的多巴胺溶液，用三乙胺:四氢呋喃(1:40V/V)配制2mg/mL的索拉非尼溶液。
按照多巴胺和索拉非尼质量比为1:3，分别将多巴胺溶液、索拉非尼溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的索拉非尼，即得到包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过紫外分光光度法测得该纳米粒载药量为62.6％，包封率为83.7％。
实施例20
合成包载咪喹莫特的多巴胺聚合载药纳米粒
用纯水配制10mg/mL的多巴胺溶液，用二甲基亚砜配制5mg/mL的咪喹莫特溶液。
按照多巴胺和咪喹莫特质量比为1:1，分别将多巴胺溶液、咪喹莫特溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，采用15000rpm高速离心10min，水洗沉淀，重复离心3次后即得到即得到包载咪喹莫特的多巴胺聚合载药纳米粒。通过紫外分光光度法测得该纳米粒载药量为44.8％，包封率为81.2％。
实施例21
合成包载吲哚菁绿的多巴胺聚合载药纳米粒
用纯水配制10mg/mL的多巴胺溶液，用甲醇配制10mg/mL的吲哚菁绿。
按照多巴胺和吲哚菁绿质量比为1:2，分别将多巴胺溶液、吲哚菁绿溶液逐滴加入到pH＝8.5的硼砂-盐酸缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于3500Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的吲哚菁绿，即得到即得到包载吲哚菁绿的多巴胺聚合载药纳米粒。通过荧光分光光度法测得该纳米粒载药量为62.0％，包封率为81.6％。
实施例22
合成包载阿霉素和姜黄素的多巴胺聚合载药纳米粒
用纯水配制10mg/mL的多巴胺溶液，用DMSO配制20mg/mL的阿霉素溶液，用乙醇配制10mg/mL的姜黄素溶液。
按照多巴胺、阿霉素和姜黄素质量比为1:0.5:1，分别将多巴胺溶液、阿霉素溶液、姜黄素溶液逐滴加入到pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中，使得多巴胺终浓度为0.2mg/mL。在室温通氧气条件下避光搅拌反应24h后，装于7000Da透析袋中，置于纯水中，避光透析除去未被包载的阿霉素和姜黄素，即得到即得到包载阿霉素和姜黄素的多巴胺聚合载药纳米粒。通过紫外分光光度法测得阿霉素载药量为30.7％，包封率为88.7％，姜黄素的载药量为46.0％，包封率为85.2％。
实施例23
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与载脂蛋白apoA-I的质量比为1:0.5，将实施例11制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液和载脂蛋白apoA-I水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用NaOH调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)，除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，图1中a为马尔文粒径仪的测量结果，该纳米递释系统粒径为85.3nm。经BCA法测定apoA-I的接枝率为32.8％。
实施例24
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与载脂蛋白apoA-I的质量比为1:1，将实施例11制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液和载脂蛋白apoA-I水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用NaOH调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，图1中b为马尔文粒径仪的测量结果，该纳米递释系统粒径为106.7nm。经BCA法测定apoA-I的接枝率为48.2％。
实施例25
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与载脂蛋白apoA-I的质量比为1:1.5，将实施例11制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液和载脂蛋白apoA-I水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用NaOH调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，图1中c为马尔文粒径仪的测量结果，该纳米递释系统粒径为117.0nm。经BCA法测定apoA-I的接枝率为57.4％。
实施例26
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与载脂蛋白apoA-I的质量比为1:2.5，将实施例11制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液和载脂蛋白apoA-I水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用NaOH调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统(透射电镜图见图2b)。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，图1中d为马尔文粒径仪的测量结果，该纳米递释系统粒径为130.3nm。经BCA法测定apoA-I的接枝率为65.6％。
实施例27
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与载脂蛋白apoA-I的质量比为1:3.5，将实施例11制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液和载脂蛋白apoA-I水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用NaOH调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，图1中e为马尔文粒径仪的测量结果，该纳米递释系统粒径为136.1nm。经BCA法测定apoA-I的接枝率为68.3％。
实施例28
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与载脂蛋白apoA-I的质量比为1:2.5，将实施例11制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液和载脂蛋白apoA-I水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用NaOH调节反应pH＝8.0，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为123.5nm。经BCA法测定apoA-I的接枝率为58.3％。
实施例29
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与载脂蛋白apoA-I的质量比为1:2.5，将实施例11制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液和载脂蛋白apoA-I水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用NaOH调节反应pH＝10.0，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为145.5nm。经BCA法测定apoA-I的接枝率为67.6％。
实施例30
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与载脂蛋白apoA-I的质量比为1:2.5，将实施例11制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液和载脂蛋白apoA-I水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用NaOH调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应12h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为113.5nm。经BCA法测定apoA-I的接枝率为49.6％。
实施例31
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与载脂蛋白apoA-I的质量比为1:0.1，将实施例11制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液和载脂蛋白apoA-I水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用NaOH调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为73.5nm。经BCA法测定apoA-I的接枝率为9.3％。
实施例32
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与载脂蛋白apoA-I的质量比为1:0.3，将实施例10制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液和载脂蛋白apoA-I水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用NaOH调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为81.8nm。经BCA法测定apoA-I的接枝率为26.4％。
实施例33
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载喜树碱的多巴胺聚合载药纳米粒和载脂蛋白apoB的质量比为1:2，将实施例18包载喜树碱的多巴胺聚合载药纳米粒溶液和载脂蛋白apoB水溶液混合，使体系中喜树碱浓度为2mg/mL，采用Na2CO3调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载喜树碱的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为268.5nm，经BCA法测定apoB的接枝率为56.7％。
实施例34
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载吲哚菁绿的多巴胺聚合载药纳米粒和载脂蛋白apoC的质量比为1:2.5，将实施例21制备的包载吲哚菁绿的多巴胺聚合载药纳米粒溶液和载脂蛋白apoC水溶液混合，使体系中吲哚菁绿浓度为0.1mg/mL，采用NaOH调节反应pH＝10.0，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载吲哚菁绿的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为183.6nm，经BCA法测定apoC的接枝率为59.3％。
实施例35
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素和姜黄素的多巴胺聚合载药的纳米粒与转铁蛋白质量比为1:2.5，将实施例22制备的包载阿霉素和姜黄素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液和转铁蛋白水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用NaOH调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载阿霉素和姜黄素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为174.5nm。经BCA法测定转铁蛋白的接枝率为62.4％。
实施例36
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与白蛋白质量比为1:2，将实施例4制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液与白蛋白水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用Na2CO3调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为194.6nm。经BCA法测定白蛋白的接枝率为67.5％。
实施例37
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载喜树碱的多巴胺聚合载药纳米粒和白蛋白的质量比为1:2，将实施例17制备的包载喜树碱的多巴胺聚合载药纳米粒溶液和白蛋白水溶液混合，使体系中喜树碱浓度为2mg/mL，采用Na2CO3调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥后，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为194.6nm。经BCA法测定白蛋白的接枝率为63.9％。
实施例38
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与白蛋白的质量比为1:2，将实施例15制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液与白蛋白水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用NaOH调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG100，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的蛋白，冷冻干燥后即可收集得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为178.3nm。经BCA法测定白蛋白的接枝率为61.2％。
实施例39
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与iRGD肽质量比为1:1.5，将实施例3制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液与iRGD肽水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用Tris-HCl调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG25，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的iRGD多肽，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为122.8nm。经BCA法测iRGD肽的接枝率为57.4％。
实施例40
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与NGR肽质量比为1:1.5，将实施例4制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液与NGR肽水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用Tris-HCl调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG25，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的NGR肽，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为122.8nm。经BCA法测NGR肽的接枝率为50.8％。
实施例41
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载姜黄素的多巴胺聚合载药的纳米粒与TAT肽质量比为1:2，将实施例17制备的包载喜树碱的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液与TAT肽水溶液混合，使体系中姜黄素浓度为2mg/mL，采用Tris-HCl调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法凝胶介质为SephadexG15除去未被接枝的TAT多肽，冷冻干燥，得到包载姜黄素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为133.8nm。经BCA法测TAT肽的接枝率为62.8％。
实施例42
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载喜树碱的多巴胺聚合载药的纳米粒与MPG肽质量比为1:2.5，将实施例18制备的包载喜树碱的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液与MPG肽水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用Tris-HCl调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG15，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的MPG多肽，冷冻干燥，得到包载喜树碱的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为164.8nm。经BCA法测MPG肽的接枝率为64.3％。
实施例43
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与SWI5肽质量比为1:2，将实施例4制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液与SWI5肽水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用Tris-HCl调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG15，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的SWI5肽，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为181.2nm。经BCA法测SWI5肽的接枝率为60.8％。
实施例44
合成仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统
按照包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒与H2B的肽质量比为1:2，将实施例15制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒溶液与H2B肽水溶液混合，使体系中阿霉素浓度为1mg/mL，采用Tris-HCl调节反应pH＝8.5，在室温条件下避光搅拌反应24h；采用凝胶过滤色谱法(葡聚糖凝胶型号为SephadexG15，洗脱液为磷酸盐缓冲液)除去未被接枝的H2B肽，冷冻干燥，得到包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
通过马尔文粒径仪测量本实施例纳米递释系统粒径，该纳米递释系统粒径为133.8nm。经BCA法测H2B肽的接枝率为63.6％。
实施例45
仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统的透射电镜结构表征
采用透射电子显微镜分析实施例11合成的包载阿霉素的多巴胺聚合载药的纳米粒(记为PDA/DOX)和实施例26合成的仿生多巴胺聚合载药的靶向纳米粒(记为apoA-I-PDA/DOX)的形态特征，具体方法如下：用镊子取一片铜网于干净滤纸上，滴加10μL样品溶于于铜网上，自然沉降3-5min后用滤纸吸样品溶液，待铜网完全干燥即可将样品置于TEM下观察拍摄。
实施例11和实施例26所合成的纳米粒结果分别如图2a和图2b所示，结果显示两者均呈类球状结构，且实施例26中可看到纳米球上有蛋白光晕，表明载脂蛋白apoA-I成功接枝在聚多巴胺纳米粒上。
实施例46
仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统的光热升温实验
取实施例26仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统，采用纯水配制成浓度分别为25、50、100、200、400μg/mL的溶液。以纯水为对照组。取1mL溶液于石英皿中，在808nm近红外激光照射器，激光功率为2W/cm2，持续照射600s，通过红外热成像相机记录溶液升温效果，平行三批样品，升温效果如图3所示。
作为对照组的纯水组在近红外激光照射下升温效果并不明显，升高温度仅为2.8±0.14℃。而仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统溶液在近红外光的照射下温度迅速升高，当溶液浓度为25、50、100、200和400μg/mL时，溶液在激光照射600s后净升高的温度分别为8.25±0.215℃、12.60±0.14℃、15.45±0.07℃、22.10±0.14℃、32.80±0.57℃。根据相关的光热治疗的研究表明当温度达到42℃时，需要15-60min可杀死肿瘤细胞，而当温度超过50℃时，仅需要4-6min就能快速的杀死肿瘤细胞，假设机体为37℃，上述样品溶液在激光照射后可上升至光热治疗所需的温度，因此上述光热升温结果表明所制备的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统具有较好的升温效果，随着浓度的升高，溶液升高的温度越高，表明该纳米递释系统可用于肿瘤的光热治疗。
实施例47
仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统的pH响应药物释放实验
取实施例26仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统冻干粉末，采用纯水配成溶液(阿霉素：1mg/mL)；取3份溶液，每份溶液1mL，装于3500Da透析袋中，分别置于20mLpH为7.4、6.8、5.0的PBS溶液中。在37℃摇床中以100rpm/min速度均匀摇晃，在特定的时间点取样并补充相应体积和pH的释放介质，平行三批样品。实验结束后，采用荧光分光光度法计算各pH条件下DOX的累积释放百分率，pH响应释药效果如图4所示。
由结果可见，本发明纳米递释系统具备pH响应释药性质，随着pH7.4到pH5.0，DOX的累积释药百分率由25.1±1.8％增加至50.8±2.6％，表明本发明纳米递释系统能够避免药物的运输过程中药物的渗漏，减少对正常组织的毒副作用，而在pH5.0条件下，聚多巴胺和阿霉素发生质子化，促进包裹在聚多巴胺内药物的释放，能够提高对肿瘤的杀伤效果。
实施例48
仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统的ROS响应药物释放实验
取实施例26仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统冻干粉末，采用纯水配成溶液(阿霉素：1mg/mL)；取3份溶液，每份溶液1mL，装于3500Da透析袋中，分别置于20mLH2O2为0.01、0.1、1mM的PBS(pH7.4)溶液中。在37℃摇床中以100rpm/min速度均匀摇晃，在特定的时间点取样并补充相应体积和H2O2浓度的释放介质，平行三批样品。实验结束后，采用荧光分光光度法计算不同H2O2浓度条件下DOX的累积释放百分率，ROS响应释药效果如图5所示。
由结果可见，本发明纳米递释系统具备ROS响应释药性质，随着H2O2浓度由0.1mM增加至1mM，DOX的累积释药百分率由34.9±1.7％增加至60.5±1.9％，表明本发明纳米递释系统能够保护药物在运输过程中不渗漏，到达肿瘤部位后聚多巴胺发生氧化，促进包裹在聚多巴胺内的药物快速释放，高效发挥治疗效果。
实施例49
仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统的光热响应药物释放实验
取实施例26仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统冻干粉末，采用纯水配成溶液(阿霉素：1mg/mL)；取3份溶液，每份溶液1mL，分别置于20mLpH为7.4、6.8、5.0的PBS溶液中。在37℃摇床中以100rpm/min速度均匀摇晃，在特定的时间点以及在1、4、6、8、12、24h分别给予808nm近红外光，激光功率为2W/cm2，照射10min后取样，并补充响应体积和pH的释放介质，平行三批样品。实验结束后，采用荧光分光光度法计算不同pH联合条件近红外光照射调价下DOX的累积释放百分率，响应释药效果如图6所示。
由结果可见，本发明纳米递释系统具有光热响应释药性质，较实施例41的释药结果，联合近红外光照射后，各pH条件下药物的释药百分率均有明显增加。当pH为7.4联合近红外激光照射时，DOX的累积释药百分率为：45.0±1.8％，而当pH为5.0联合近红外激光照射时，DOX的累积释药百分率为：86.2±1.2％。释药结果表明本发明纳米递释系统具备在近红外光照射下药物的可控释放，可用于肿瘤光热与化疗的联合治疗。
实施例50
仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统的pH，ROS和NIR三重响应药物释放实验
取实施例26仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统冻干粉末，采用纯水配成溶液(阿霉素：1mg/mL)；取3份溶液，每份溶液1mL，分别置于20mLpH为7.4、ROS浓度为0.01mM，pH为6.8、ROS浓度为0.1mM，pH为5.0、ROS浓度为1mM的PBS溶液中。在37℃摇床中以100rpm/min速度均匀摇晃，并在特定的时间点以及在1、4、6、8、12、24h分别给予808nm近红外光，激光功率为2W/cm2，照射10min后取样，并补充响应体积和pH的释放介质，平行三批样品。实验结束后，采用荧光分光光度法计算不同pH联合条件近红外光照射调价下DOX的累积释放百分率，响应释药效果如图7所示。
由结果可见，本发明纳米递释系统具有三重响应快速释药特性，在pH7.4、ROS浓度为0.01mM并联合NIR的条件下，DOX的累积释药百分率为48.04±1.90％。在pH5.0、ROS浓度为1mM并联合NIR的条件下，DOX的累积释放百分率为88.04±2.27％。三重响应释药结果表明，本发明的纳米递释系统具有pH，ROS和NIR三重响应快速释药特性。
实施例51
仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统的细胞毒性实验
通过体外细胞毒性实验考察仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统对肿瘤细胞的杀伤作用，选用4T1乳腺癌细胞作为研究对象。
具体步骤如下：将4T1乳腺癌细胞于含有10％胎牛血清的DMEM高糖培养基中培养，待细胞生长至对数期，采用胰酶进行消化，离心收集细胞，接种于96孔板中，细胞密度约为5×103个/孔，在37℃含5％CO2孵箱中培养过夜后，弃去原有培养基，分别加入100μL不同浓度的游离阿霉素(记为DOX组)，实施例10所制备的包载阿霉素的多巴胺聚合载药纳米粒(记为PDA/DOX组)和实施例26所制备的仿生多巴胺聚合载药纳米粒(记为apoA-I-PDA/DOX组)，DOX组、PDA/DOX组、apoA-I-PDA/DOX组中中均设置6个DOX浓度，分别为0.1、0.5、1、2.5、5、10μg/mL。上述apoA-I-PDA/DOX组同时设定联合近红外激光照射组，激光照射条件为808nm，固定激光功率为2W/cm2，照射10min，并设置空白对照组及阴性对照组，其中空白对照组为无细胞的溶剂，阴性对照组为仅含细胞、MTT及DMSO，平行设置6组；上述各组与细胞共孵育24h后，弃去旧培养基，加入新鲜培养基，每孔加入20μLMTT(5mg/mL)溶液，在37℃含5％CO2孵箱中继续孵育4h。弃去培养基，加入100μLDMSO溶解活细胞中产生的甲臜结晶，用酶标仪在570nm处测定其吸收光度值，计算细胞存活率(结果如图8所示)。
游离阿霉素组的IC50值为1.482μg/mL，PDA/DOX组IC50值为1.737μg/mL，经过蛋白修饰后其IC50降至1.040μg/mL，当其联合近红外光后，该组IC50仅为0.5902μg/mL。上述结果表明经过载脂蛋白apoA-I修饰后能显著提高纳米递释系统的靶向能力，同时联合近红外光，该仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统能够协同光热治疗和化学治疗来高效发挥抗肿瘤治疗效果。
实施例52
仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统的细胞摄取实验
通过体外细胞摄取实验考察仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统对肿瘤细胞的靶向作用，选用4T1乳腺癌细胞作为研究对象。
具体步骤如下：将4T1乳腺癌细胞于含有10％胎牛血清的DMEM高糖培养基中培养，待细胞生长至对数期，采用胰酶进行消化，离心收集细胞，接种于24孔板中，细胞密度约为1×105个/孔，在37℃含5％CO2孵箱中培养过夜后，弃去原有培养基并且加入PBS洗涤两次后，每孔加入500μL无血清培养基稀释后的游离阿霉素(记为DOX组)、实施例10所制备的包载阿霉素多巴胺聚合载药纳米粒(记为PDA/DOX组)和实施例26所制备的包载阿霉素的仿生多巴胺聚合载药纳米粒(记为apoA-I-PDA/DOX组)(阿霉素浓度：5μg/mL)，于37℃，5％CO2恒温培养箱中继续培养6h。弃去含药的培养基，用预冷的PBS清洗三次后，用0.25％的胰酶消化液消化制成单细胞悬液收集细胞，加入一定量的PBS后于流式细胞仪中检测4T1细胞对DOX的摄取效率。
细胞摄取定量结果如图9所示，结果显示游离DOX组较PDA/DOX，胞内的荧光更强，主要由于游离DOX组带正电荷，有利于细胞摄取，当DOX荷载到PDA，PDA/DOX带负电荷并且药物从载体释放需要一定时间，因此相对比与游离DOX组，细胞摄取能力减弱。当修饰肿瘤靶向配体apoA-I后能提高纳米递释系统肿瘤靶向能力，此能够提高药物的细胞摄取能力。经流式细胞术实验结果显示apoA-I-PDA/DOX组4T1细胞内阿霉素的荧光强度是PDA/DOX组荧光强度的2.3倍，结果表明经载脂蛋白修饰后能显著提高多巴胺聚合载药纳米递释系统靶向肿瘤细胞的能力，提高抗肿瘤药物在肿瘤部位蓄积能力。
以上所述，仅是本发明的较佳实施方式进行描述，并非对本发明作任何限制，在不脱离本发明设计的精神的前提下，本领域普通工程技术人员来说，还可以作出若干改进和变动，这些改进和变动也视为本发明的保护范围。

Claims (11)

1.一种仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统，其特征在于包括由多巴胺和抗肿瘤药物制备得到的多巴胺聚合载药纳米粒、接枝在聚多巴胺表面的仿生肿瘤靶向蛋白或多肽；所述的纳米递释系统的载药量30％～75％；
所述的抗肿瘤药物为具有芳香结构的抗肿瘤药物，抗肿瘤药物通过π-π共轭作用包载于聚多巴胺内；
所述的多巴胺聚合载药纳米粒的制备方法：以pH8.0～10.0缓冲液为溶剂，将多巴胺和抗肿瘤药物混合使多巴胺终浓度为0.1mg/mL～1mg/mL，在室温、通氧气条件下避光搅拌反应6～72h；将反应液装于透析袋中，在避光条件下透析或离心或凝胶过滤色谱法除去未被包载的抗肿瘤药物，得到多巴胺聚合载药纳米粒；
所述的仿生肿瘤靶向蛋白或多肽在碱性介质与聚多巴胺醌基反应共价接枝到多巴胺聚合载药纳米粒上，所述的多巴胺聚合载药纳米粒和仿生肿瘤靶向蛋白或多肽的质量比为1:1.5～1:3.5。
2.根据权利要求1所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统，其特征在于所述的多巴胺和抗肿瘤药物的质量比为1:0.5～1:5。
3.根据权利要求2所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统，其特征在于所述的多巴胺和抗肿瘤药物的质量比为1:2～1:3。
4.根据权利要求1所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统，其特征在于所述的多巴胺聚合载药纳米粒和仿生肿瘤靶向蛋白或多肽的质量比为1:1.5～1:2.5。
5.根据权利要求1所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统，其特征在于所述的纳米递释系统在pH，ROS和NIR三重响应刺激条件下，载体聚多巴胺结构发生改变，促进包载的药物快速释放。
6.根据权利要求1所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统，其特征在于所述的纳米递释系统为类球状结构，其平均粒径为70～200nm。
7.根据权利要求1所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统，其特征在于所述的抗肿瘤药物选自阿霉素、喜树碱、姜黄素、棉酚、索拉非尼、咪喹莫特、雷西莫特和吲哚菁绿中的一种或多种。
8.根据权利要求1所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统，其特征在于所述的仿生肿瘤靶向蛋白为内源性蛋白选自载脂蛋白、转铁蛋白、白蛋白中的一种；所述的仿生肿瘤靶向多肽选自肿瘤归巢肽、细胞穿膜肽、核定位信号肽中的一种。
9.一种权利要求1所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤(1)、以pH8.0～10.0缓冲液为溶剂，将多巴胺和抗肿瘤药物混合使多巴胺终浓度为0.1mg/mL～1mg/mL，在室温、通氧气条件下避光搅拌反应6～72h；
步骤(2)、将步骤(1)得到的反应液装于透析袋中，在避光条件下透析或离心或凝胶过滤色谱法除去未被包载的抗肿瘤药物，得到多巴胺聚合载药纳米粒；
步骤(3)、取步骤(2)制得的多巴胺聚合载药纳米粒溶液，将其和仿生肿瘤靶向蛋白或多肽混合，调节pH至8.0～10.0，室温避光搅拌12～24h；
步骤(4)、步骤(3)制得的反应液采用凝胶过滤色谱法去除未被接枝的仿生肿瘤靶向蛋白或多肽，冷冻干燥，得仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统。
10.根据权利要求9所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统的制备方法，其特征在于步骤(1)中，所述的多巴胺终浓度0.1～0.2mg/mL；
步骤(2)中，所述的透析袋的截留分子量为1000～7000Da；所述的离心的转数为13000～18000rpm，离心的时间为30～60min；所述的凝胶过滤色谱法选用葡聚糖凝胶，葡聚糖凝胶型号为SephadexG15、SephadexG25、SephadexG100，采用的洗脱液为磷酸盐缓冲液。
11.权利要求1-8任一项所述的仿生多巴胺聚合载药纳米递释系统在制备用于肿瘤光热与化疗联合治疗药物中的应用。
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