CN110629321B - 一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，包括(1)将壳聚糖、聚氧化乙烯和乙酰水杨酸完全溶解于90％乙酸溶液，搅拌均匀，得到芯质纺丝液；(2)将壳聚糖、聚氧化乙烯和蚓激酶完全溶解于90％乙酸溶液，搅拌均匀，得到壳质纺丝液；(3)采用同轴静电纺丝法，得到乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维；(3)将乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维用DMEM培养基洗涤至中性，冻干之后经等离子处理器处理活化；(4)活化的纳米纤维浸泡在含有低分子量肝素钠的DMEM培养基中进行负压闪爆，之后进行接枝反应，离心冻干。本发明提供的抗凝血溶纤纳米纤维能够能够更好地阻止血栓形成。

Description

一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法
技术领域
本发明涉及生物医学工程领域，具体涉及一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法。
背景技术
抗凝血与溶纤是心脑血管栓塞的主要治疗方法，肝素是心脑血管栓塞治疗中的常用抗凝药。肝素是由己糖醛酸(L-艾杜糖醛酸、D-葡萄糖醛酸)和D-硫酸氨基葡萄糖以1→4糖苷键交替形成的粘多糖，具有六糖或八糖的重复单位的线性链状结构，其分子量在3000-37000Da之间，在医药方面作为抗凝试剂和抗栓试剂使用。此外，肝素还具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌、调血脂等多种生物学功能。但是，由于肝素具有抗凝活性，所以大量使用肝素会引起出血和诱导血小板减少等副作用，从而大大限制了肝素在临床上的应用。肝素的主要不良反应是易引起自发性出血，表现为各种黏膜出血、关节腔积血和伤口出血等，而肝素诱导的血小板减少症是一种药物诱导的血小板减少症，是肝素治疗中的一种严重并发症。如何克服肝素使用的不良反应并进一步增强材料的抗凝血与溶纤活性成为心脑血管栓塞治疗中亟需解决的关键问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，本发明提供的制备方法获得的抗凝血溶纤纳米纤维材料具有较好的抗凝血与溶纤效果。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，包括如下步骤：
S1：将壳聚糖、聚氧化乙烯和乙酰水杨酸溶解于乙酸溶液中，搅拌均匀后，得到芯质纺丝液；
S2：将壳聚糖、聚氧化乙烯和蚓激酶溶解于乙酸溶液，搅拌均匀后，得到壳质纺丝液；
S3：以所述芯质纺丝液为芯，所述壳质纺丝液为壳进行同轴静电纺丝，得到乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维；
S4：将所述乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维用DMEM培养基洗涤至pH为7.2，冻干之后经等离子处理器处理活化，得到活化纳米纤维；
S5：将所述活化纳米纤维浸泡在含有低分子量肝素钠的DMEM培养基中进行负压闪爆，进行接枝反应，离心冻干，得抗凝血溶纤纳米纤维材料。
优选的，所述壳聚糖的粘均分子量为5.0×105、脱乙酰度为80％；所述聚氧化乙烯的平均分子量为1.0×106；所述乙酸溶液的浓度为90v/v％。
优选的，所述芯质纺丝液中壳聚糖与聚氧化乙烯的总浓度为10～30g/L，乙酰水杨酸的浓度为5～10g/L，其中，所述壳聚糖与所述聚氧化乙烯的质量比为1:1～4。
优选的，所述壳质纺丝液中，壳聚糖和聚氧化乙烯的总浓度为10-30g/L，所述蚓激酶的浓度为0.1～1g/L，其中，壳聚糖与聚氧化乙烯的质量比为1:1～4，蚓激酶的酶活力为5～10U/mg。
优选的，步骤S3中，所述静电纺丝工艺中，针头规格为同轴针头；静电纺丝条件为，电压12～25KV，距离7～20cm，芯质纺丝液进样速率0.5～1.0ml/h，壳质纺丝液进样速率0.3～0.5ml/h，温度25～35℃。
优选的，步骤S4中，所述冻干的温度为-30～-20℃，真空度为0.100～0.024mBar，时间为3～5d。
优选的，步骤S5中，所述含有低分子量肝素钠的DMEM培养基中低分子量肝素钠的浓度为40～80mg/L，所述低分子量肝素钠的分子量范围为4000～8000。
优选的，步骤S5中，所述接枝反应的浸泡浴比为1:100～1:300，浸泡温度为0～4℃，浸泡时间为12～24h。
优选的，步骤S5中，所述负压闪爆的真空度为0.100～0.024mBar。
优选的，步骤S5中，所述冻干的温度为-30～-20℃，真空度为0.100～0.024mBar，冻干时间为3～5d。
本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：
1)本发明的纳米纤维制备方法利用多项技术，包括同轴电纺技术、低温等离子处理技术、负压闪爆技术等，构建了一种芯/壳/接枝的三层抗凝血溶纤纳米纤维体系。芯层中具有乙酰水杨酸抗血小板，壳层中有蚓激酶促进溶纤，外层还接枝了低分子量肝素用于进一步抗凝血。
2)将乙酰水杨酸与壳聚糖、聚氧化乙烯等含羟基聚合物进行酯化混纺，使其高分子化，所得产物的抗炎性和解热止痛性比游离的乙酰水杨酸更为长效。
3)负压闪爆技术和低温等离子处理技术大大提高了低分子量肝素钠与纳米纤维的结合率，负载量更大，制得的纳米纤维材料能够更好地阻止血栓形成。
具体实施方式
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为了进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的限制。
本发明所有原料，对其来源没有特别限制，在市场上购买的或按照本领域技术人员熟知的常规方法制备的即可。
本发明提供了一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，包括如下步骤：
S1：将壳聚糖、聚氧化乙烯和乙酰水杨酸溶解于乙酸溶液中，搅拌均匀后，得到芯质纺丝液；
S2：将壳聚糖、聚氧化乙烯和蚓激酶溶解于乙酸溶液，搅拌均匀后，得到壳质纺丝液；
S3：以所述芯质纺丝液为芯，所述壳质纺丝液为壳进行同轴静电纺丝，得到乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维；
S4：将所述乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维用DMEM培养基洗涤至pH为7.2，冻干之后经等离子处理器处理活化，得到活化纳米纤维；
S5：将所述活化纳米纤维浸泡在含有低分子量肝素钠的DMEM培养基中进行负压闪爆后进行接枝反应，离心冻干，得抗凝血溶纤纳米纤维材料。
步骤S1中，将壳聚糖、聚氧化乙烯和乙酰水杨酸溶解于乙酸溶液中，搅拌均匀后，得到芯质纺丝液。本发明中，壳聚糖、聚氧化乙烯和乙酰水杨酸均为市售商品，其中壳聚糖优选采用粘均分子量为5.0×105、脱乙酰度为80％的壳聚糖；聚氧化乙烯优选采用平均分子量为1.0×106的聚氧化乙烯；乙酸溶液的浓度优选为90v/v％。芯质纺丝液中壳聚糖与聚氧化乙烯的总浓度为10～30g/L，乙酰水杨酸的浓度为5～10g/L，其中，壳聚糖与聚氧化乙烯的质量比为1:1～4。本发明中采用的乙酰水杨酸，是一种白色结晶或结晶性粉末，无臭或微带醋酸臭，微溶于水，易溶于乙酸，溶液呈酸性。近年来发现乙酰水杨酸对血小板聚集有抑制作用，能阻止血栓形成，临床上用于预防短暂脑缺血发作、心肌梗死、人工心脏瓣膜和静脉瘘或其他手术后血栓的形成。
步骤S2中，将壳聚糖、聚氧化乙烯和蚓激酶溶解于乙酸溶液，搅拌均匀后，得到壳质纺丝液。本发明中，蚓激酶为市售商品，是从特种蚯蚓中提取的一组蛋白水解酶(酸性蛋白质)，分子量为1.6万～4.5万。蚓激酶为抗血栓药，临床上主要用于血栓性疾病，尤其是伴纤维蛋白原增高及血小板聚集率增高的患者；用于缺血性心脑血管疾病，可改善症状、防止病情发展。本发明中，壳质纺丝液中壳聚糖和聚氧化乙烯的总浓度优选为10-30g/L，蚓激酶的浓度优选为0.1～1g/L，其中，壳聚糖与聚氧化乙烯的质量比优选为1:1～4，蚓激酶的酶活力优选为5～10U/mg。
步骤S3中，以芯质纺丝液为芯，壳质纺丝液为壳进行同轴静电纺丝，得到乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维。本发明同轴静电纺丝工艺中，针头规格优选同轴针头；同轴静电纺丝条件优选为，电压12～25KV，距离7～20cm，芯质纺丝液进样速率0.5～1.0ml/h，壳质纺丝液进样速率0.3～0.5ml/h，温度25～35℃。
步骤S4中，将乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维用DMEM培养基洗涤至pH为7.2，冻干之后经等离子处理器处理活化，得到活化纳米纤维；本发明中，冻干的温度优选-30～-20℃，真空度优选0.100～0.024mBar，时间优选3～5d。
步骤S5中，将所述活化纳米纤维浸泡在含有低分子量肝素钠的DMEM培养基中进行负压闪爆，进行接枝反应，离心冻干，得抗凝血溶纤纳米纤维材料。本发明中，负压闪爆的真空度优选为0.100～0.024mBar。含有低分子量肝素钠的DMEM培养基中低分子量肝素钠的浓度优选为40～80mg/L；接枝反应时，浸泡浴比优选1:100～1:300，浸泡温度优选0～4℃，浸泡时间优选12～24h；冻干时，冻干的温度优选-30～-20℃，真空度优选0.100～0.024mBar，冻干时间优选3～5d。低分子量肝素(低分子量肝素寡糖，简称LMWH)的分子量通常是指在3000-8000Da之间，且分子量可以在4000Da、5000Da、6000Da、7000Da或其在3000-8000Da内的任何组合之间。本发明中采用的低分子量肝素钠的分子量范围优选为4000～8000。与普通肝素相比，通过体内、体外实验发现，在同等剂量下，低分子量肝素的抗凝作用小于肝素，但其体内和体外抗血栓作用明显强于肝素。此外，低分子量肝素还具有一些其它优势，如分子量小，生物利用度高，血浆半衰期长；不与肝素结合蛋白结合，因此有更稳定的量效关系，按体重给药，控制剂量，不需要进行实验室监测；较少与血小板结合，不易引起血小板减少。所以低分子量肝素既能有效防止血栓形成，又能减少出血等不良反应，是一种安全有效的抗血栓药物，可作为肝素的替代物。
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法进行详细说明，本发明的保护范围不受以下实施例的限制。
抗凝血实验：取0.2g实验样品放入试管中，将实验兔固定，从兔子心脏处采集血液3ml，沿管壁向待测样品试管缓慢注入血液2ml，轻轻倒立试管使血液与抗凝剂混和均匀，然后将试管浸没在37℃恒温水浴中。从血液进入注射器时开始记录时间，3min后，每隔30s缓慢将试管倾斜一次，直至血液不能流动为止，记录该时间，即为该样品全血凝固时间(CT)。每个样品测量三次，取平均值。
溶纤实验：采用纤维蛋白平板法，测定材料的溶纤活性。配制5ml 10mg/ml纤维蛋白原溶液和1ml 20U/ml凝血酶加入到2％琼脂糖溶液中摇匀，倒入培养皿中室温静置30min后用打孔器打孔。每个孔中分别加入0.1g实施例或对比例材料，37℃保温3h，测定乳白色平板上的透明圈直径。
体外溶血实验：取5支洁净的离心管，分别加入0.05、0.10、0.15、0.20和0.40g样品，向各离心管加入4.5ml 37℃预热的兔心脏血液，轻轻晃动混匀，再放入37℃恒温水浴中60min后。慢慢取出1000r/min离心5min，取上层清液，在570nm波长下，测定其吸光值。以9g/L NaCl溶液作为阴性对照，以蒸馏水作为阳性对照，用溶血率对样品的溶血性能进行评价。
根据下式计算样品的溶血率：
溶血率＝(D-D0)/(D1-D0)×100％
式中：D：样品吸光值；D0：阴性对照吸光值；D1：阳性对照吸光值。
实施例1
S1、将0.5g粘均分子量5.0×105、脱乙酰度80％的壳聚糖、1.5g平均分子量1.0×106的聚氧化乙烯和0.8g乙酰水杨酸完全溶解于100ml 90％(v/v)乙酸溶液，搅拌均匀后，得到芯质纺丝液；
S2、将0.5g粘均分子量5.0×105、脱乙酰度80％的壳聚糖、1.5g平均分子量1.0×106的聚氧化乙烯和0.05g酶活力为8U/mg的蚓激酶完全溶解于100ml 90％(v/v)乙酸溶液，搅拌均匀后，得到壳质纺丝液；
S3、以芯质纺丝液为芯，壳质纺丝液为壳进行同轴静电纺丝，针头规格为同轴针头；静电纺丝条件为，电压为15KV，距离为12cm，芯质纺丝液进样速率为0.8ml/h，壳质纺丝液进样速率为0.4ml/h，温度为30℃，得到乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维；
S4、将乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维用DMEM培养基洗涤至pH为7.2，在-30℃下，真空度为0.024mBar，冻干4d之后经等离子处理器处理活化，等离子体处理的条件为：气体采用氧气，处理功率为280W，压强55Pa，处理时间为12min；
S5、将步骤S4得到的纳米纤维浸泡在含有60mg/L分子量为4100低分子量肝素钠的DMEM培养基中进行负压闪爆，负压闪爆的真空度为0.024mBar，之后进行接枝反应，接枝反应的浸泡浴比为1:200，浸泡温度为4℃，浸泡时间为24h。将完成接枝反应的纳米纤维离心之后冻干，温度为-30℃，真空度为0.024mBar，冻干时间为4d，即得一种抗凝血溶纤纳米纤维材料。
实施例2
S1、将0.5g粘均分子量5.0×105、脱乙酰度80％的壳聚糖、0.5g平均分子量1.0×106的聚氧化乙烯和0.5g乙酰水杨酸完全溶解于100ml 90％(v/v)乙酸溶液，搅拌均匀后，得到芯质纺丝液；
S2、将0.5g粘均分子量5.0×105、脱乙酰度80％的壳聚糖、0.5g平均分子量1.0×106的聚氧化乙烯和0.01g酶活力5U/mg的蚓激酶完全溶解于100ml 90％(v/v)乙酸溶液，搅拌均匀后，得到壳质纺丝液；
S3、以芯质纺丝液为芯，壳质纺丝液为壳进行同轴静电纺丝，针头规格为同轴针头；静电纺丝条件为，电压为12KV，距离为7cm，芯质纺丝液进样速率为0.5ml/h，壳质纺丝液进样速率为0.3ml/h，温度为25℃，得到乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维；
S4、将乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维用DMEM培养基洗涤至pH为7.2，在-30℃下，真空度为0.100mBar，冻干3d之后经等离子处理器处理活化，等离子体处理的条件为：气体采用氮气，处理功率为250W，压强50Pa，处理时间为10min；
S5、将步骤S4得到的纳米纤维浸泡在含有40mg/L分子量为4000低分子量肝素钠的DMEM培养基中进行负压闪爆，负压闪爆的真空度为0.100mBar，之后进行接枝反应，接枝反应的浸泡浴比为1:100，浸泡温度为0℃，浸泡时间为12h。将完成接枝反应的纳米纤维离心之后冻干，温度为-30℃，真空度为0.100mBar，冻干时间为5d，即得一种抗凝血溶纤纳米纤维材料。
实施例3
S1、将0.6g粘均分子量5.0×105、脱乙酰度80％的壳聚糖、2.4g平均分子量1.0×106的聚氧化乙烯和1.0g乙酰水杨酸完全溶解于100ml 90％(v/v)乙酸溶液，搅拌均匀后，得到芯质纺丝液；
S2、将0.6g粘均分子量5.0×105、脱乙酰度80％的壳聚糖、2.4g平均分子量1.0×106的聚氧化乙烯和0.1g酶活力10U/mg的蚓激酶完全溶解于100ml 90％(v/v)乙酸溶液，搅拌均匀后，得到壳质纺丝液；
S3、以芯质纺丝液为芯，壳质纺丝液为壳进行同轴静电纺丝，针头规格为同轴针头；静电纺丝条件为，电压为25KV，距离为20cm，芯质纺丝液进样速率为1.0ml/h，壳质纺丝液进样速率为0.5ml/h，温度为35℃，得到乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维；
S4、将乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维用DMEM培养基洗涤至pH为7.2，在-20℃下，真空度为0.024mBar，冻干5d之后经等离子处理器处理活化，等离子体处理的条件为：气体采用氧气，处理功率为300W，压强60Pa，处理时间为15min；
S5、将步骤S4得到的纳米纤维浸泡在含有80mg/L分子量为8000低分子量肝素钠的DMEM培养基中进行负压闪爆，负压闪爆的真空度为0.024mBar，之后进行接枝反应，接枝反应的浸泡浴比为1:300，浸泡温度为4℃，浸泡时间为24h。将完成接枝反应的纳米纤维离心之后冻干，温度为-20℃，真空度为0.024mBar，冻干时间为3d，即得一种抗凝血溶纤纳米纤维材料。
对比例1
1、将0.5g粘均分子量5.0×105、脱乙酰度80％的壳聚糖和1.5g平均分子量1.0×106的聚氧化乙烯完全溶解于100ml 90％(v/v)乙酸溶液，搅拌均匀，得到纺丝液；
2、采用纺丝液进行静电纺丝，使用的注射器规格为10ml，针头规格为平头，7号针；静电纺丝条件为，电压15KV，距离8cm，进样速率0.5ml/h，温度30℃得到壳聚糖/聚氧化乙烯纳米纤维；
3、将壳聚糖/聚氧化乙烯纳米纤维用DMEM培养基洗涤至pH为7.2，37℃烘4h之后经等离子处理器处理活化，等离子体处理的条件为：气体采用氧气，处理功率为280W，压强55Pa，处理时间为15min；
4、将步骤三得到的纳米纤维浸泡在DMEM培养基中进行负压闪爆，负压闪爆的真空度为0.024mBar，之后进行接枝反应，接枝反应的浸泡浴比为1:200，浸泡温度为4℃，浸泡时间为24h；
5、将完成接枝反应的纳米纤维离心之后冻干，温度为-30℃，真空度为0.024mBar，冻干时间为4d，即得一种等离子体处理的纳米纤维。
对比例2
1、将0.5g粘均分子量5.0×105、脱乙酰度80％的壳聚糖和1.5g平均分子量1.0×106的聚氧化乙烯完全溶解于100ml 90％(v/v)乙酸溶液，搅拌均匀，得到纺丝液；
2、采用纺丝液进行静电纺丝，使用的注射器规格为10ml，针头规格为平头，7号针；静电纺丝条件为，电压15KV，距离8cm，进样速率0.5ml/h，温度30℃得到壳聚糖/聚氧化乙烯纳米纤维；
3、将壳聚糖/聚氧化乙烯纳米纤维用DMEM培养基洗涤至pH为7.2，37℃烘4h之后经等离子处理器处理活化，等离子体处理的条件为：气体采用氧气，处理功率为280W，压强55Pa，处理时间为15min；
4、将步骤三得到的纳米纤维浸泡在含有80mg/L分子量为4100低分子量肝素钠的DMEM培养基中，之后进行接枝反应，接枝反应的浸泡浴比为1:200，浸泡温度为4℃，浸泡时间为24h；
5、将完成接枝反应的纳米纤维离心之后冻干，温度为-30℃，真空度为0.024mBar，冻干时间为4d，即得一种等离子体表面接枝肝素的纳米纤维。
对比例3
1、将0.5g粘均分子量5.0×105、脱乙酰度80％的壳聚糖和1.5g平均分子量1.0×106的聚氧化乙烯完全溶解于100ml 90％(v/v)乙酸溶液，搅拌均匀，得到纺丝液；
2、采用纺丝液进行静电纺丝，使用的注射器规格为10ml，针头规格为平头，7号针；静电纺丝条件为，电压15KV，距离8cm，进样速率0.5ml/h，温度30℃得到壳聚糖/聚氧化乙烯纳米纤维；
3、将壳聚糖/聚氧化乙烯纳米纤维用DMEM培养基洗涤至pH为7.2，37℃烘4h；
4、将步骤三得到的纳米纤维浸泡在含有80mg/L分子量为4100低分子量肝素钠的DMEM培养基中进行负压闪爆，负压闪爆的真空度为0.024mBar，之后进行接枝反应，接枝反应的浸泡浴比为1:200，浸泡温度为4℃，浸泡时间为24h；
5、将完成接枝反应的纳米纤维离心之后冻干，温度为-30℃，真空度为0.024mBar，冻干时间为4d，即得一种表面接枝肝素的纳米纤维。
表1实施例与对比例全血凝固时间、溶纤圈直径及溶血率
全血凝固时间 溶纤圈直径(mm) 溶血率(％)
实施例1 >200’ 17.4 1.2
实施例2 195’ 16.5 2.3
实施例3 180’ 16.1 2.5
对比例1 5’38” 10.5 1.4
对比例2 29’34” 9.7 3.2
对比例3 56’23” 8.9 2.9
对实施例1～3和对比例1～3进行抗凝血实验、溶纤实验和体外溶血实验，实验结果如表1所示。结果表明，本发明实施例处理的血液凝固时间大大超过对比例处理的血液凝固时间，实施例的溶纤效果也明显优于对比例。血液相容性研究结果表明，本发明的纳米纤维溶血率<5％，符合生物材料和医疗器械对溶血性的要求，证实本发明产品具有良好的稳定性和生物相容性。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点，对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：将壳聚糖、聚氧化乙烯和乙酰水杨酸溶解于乙酸溶液中，搅拌均匀后，得到芯质纺丝液；
S2：将壳聚糖、聚氧化乙烯和蚓激酶溶解于乙酸溶液，搅拌均匀后，得到壳质纺丝液；
S3：以所述芯质纺丝液为芯，所述壳质纺丝液为壳进行同轴静电纺丝，得到乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维；
S4：将所述乙酰水杨酸/蚓激酶纳米纤维用DMEM培养基洗涤至pH为7.2，冻干之后经等离子处理器处理活化，得到活化纳米纤维；
S5：将所述活化纳米纤维浸泡在含有低分子量肝素钠的DMEM培养基中负压闪爆后进行接枝反应，离心冻干，得抗凝血溶纤纳米纤维材料。
2.根据权利要求1所述抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，其特征在于，所述壳聚糖的粘均分子量为5.0×105、脱乙酰度为80％；所述聚氧化乙烯的平均分子量为1.0×106；所述乙酸溶液的浓度为90v/v％。
3.根据权利要求1所述的一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，其特征在于，所述芯质纺丝液中壳聚糖与聚氧化乙烯的总浓度为10～30g/L，乙酰水杨酸的浓度为5～10g/L，其中，所述壳聚糖与所述聚氧化乙烯的质量比为1:1～4。
4.根据权利要求1所述的一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，其特征在于，所述壳质纺丝液中，壳聚糖和聚氧化乙烯的总浓度为10-30g/L，所述蚓激酶的浓度为0.1～1g/L，其中，壳聚糖与聚氧化乙烯的质量比为1:1～4，蚓激酶的酶活力为5～10U/mg。
5.根据权利要求1所述的一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述同轴静电纺丝工艺中，针头规格为同轴针头，电压12～25kV ，距离7～20cm，芯质纺丝液进样速率0.5～1.0mL /h，壳质纺丝液进样速率0.3～0.5mL /h，温度25～35℃。
6.根据权利要求1所述的一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述冻干的温度为-30～-20℃，真空度为0.100～0.024mBar，时间为3～5d。
7.根据权利要求1所述的一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，其特征在于，步骤S5中，所述含有低分子量肝素钠的DMEM培养基中低分子量肝素钠的浓度为40～80mg/L，所述低分子量肝素钠的分子量范围为4000～8000。
8.根据权利要求1所述的一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，其特征在于，步骤S5中，所述负压闪爆的真空度为0.100～0.024mBar。
9.根据权利要求1所述的一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，其特征在于，步骤S5中，所述接枝反应的浸泡浴比为1:100～1:300，浸泡温度为0～4℃，浸泡时间为12～24h。
10.根据权利要求1所述的一种抗凝血溶纤纳米纤维材料的制备方法，其特征在于，步骤S5中，所述冻干的温度为-30～-20℃，真空度为0.100～0.024mBar，冻干时间为3～5d。
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