CN110624097A - 一种珍珠贝小分子肽在皮肤创伤修复中的应用 - Google Patents
一种珍珠贝小分子肽在皮肤创伤修复中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110624097A CN110624097A CN201910813960.2A CN201910813960A CN110624097A CN 110624097 A CN110624097 A CN 110624097A CN 201910813960 A CN201910813960 A CN 201910813960A CN 110624097 A CN110624097 A CN 110624097A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pearl oyster
- small molecular
- peptide
- wound
- pearl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 238
- 241000490567 Pinctada Species 0.000 title claims abstract description 219
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 title claims abstract description 45
- 230000037314 wound repair Effects 0.000 title claims abstract description 43
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims abstract description 88
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 claims abstract description 87
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 63
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 49
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 43
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims abstract description 18
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 15
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 85
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 64
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 claims description 53
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 51
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 51
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 42
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 40
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 40
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 40
- 238000010041 electrostatic spinning Methods 0.000 claims description 39
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims description 38
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 31
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 30
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 27
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 27
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims description 27
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 25
- 238000009987 spinning Methods 0.000 claims description 25
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 23
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 21
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 claims description 20
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims description 20
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 20
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims description 20
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 19
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 claims description 18
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 18
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 18
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 16
- 208000028990 Skin injury Diseases 0.000 claims description 14
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 14
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 14
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 claims description 13
- 230000037319 collagen production Effects 0.000 claims description 13
- 239000006072 paste Substances 0.000 claims description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 241000251511 Holothuroidea Species 0.000 claims description 12
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 11
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 11
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 102100033601 Collagen alpha-1(I) chain Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims description 9
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 claims description 9
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 9
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims description 9
- 108010029483 alpha 1 Chain Collagen Type I Proteins 0.000 claims description 9
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 9
- BYEAHWXPCBROCE-UHFFFAOYSA-N 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-ol Chemical compound FC(F)(F)C(O)C(F)(F)F BYEAHWXPCBROCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 8
- -1 TGF- β 1 Proteins 0.000 claims description 8
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 241001212699 Pinctada martensii Species 0.000 claims description 7
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 7
- 230000008733 trauma Effects 0.000 claims description 7
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 6
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000000465 moulding Methods 0.000 claims description 5
- 241000382840 Hyriopsis cumingii Species 0.000 claims description 4
- 241001331480 Hyriopsis schlegelii Species 0.000 claims description 4
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 4
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 claims description 4
- 239000004632 polycaprolactone Substances 0.000 claims description 4
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 4
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 claims description 3
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 3
- 108010004032 Bromelains Proteins 0.000 claims description 3
- 241000272194 Ciconiiformes Species 0.000 claims description 3
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 claims description 3
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 claims description 3
- 235000019835 bromelain Nutrition 0.000 claims description 3
- 108010007119 flavourzyme Proteins 0.000 claims description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 3
- 241000382825 Cristaria plicata Species 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 54
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 44
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 abstract description 17
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 abstract description 8
- 231100000075 skin burn Toxicity 0.000 abstract description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 34
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 29
- 239000011049 pearl Substances 0.000 description 25
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 22
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 21
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 14
- 230000036573 scar formation Effects 0.000 description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 11
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 9
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 8
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 239000009416 jing wan hong Substances 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 7
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 7
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 7
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 7
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 7
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 6
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 6
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 6
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 6
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 6
- 239000003822 epoxy resin Substances 0.000 description 6
- 210000003195 fascia Anatomy 0.000 description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 6
- 230000036541 health Effects 0.000 description 6
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 6
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 6
- 229920000647 polyepoxide Polymers 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 238000004080 punching Methods 0.000 description 6
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 6
- BSWGGJHLVUUXTL-UHFFFAOYSA-N silver zinc Chemical compound [Zn].[Ag] BSWGGJHLVUUXTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 4
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 4
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 4
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 4
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 4
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 4
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 4
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 3
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 3
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 3
- 241001518135 Shewanella algae Species 0.000 description 3
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 3
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 3
- 241000607594 Vibrio alginolyticus Species 0.000 description 3
- 241000607272 Vibrio parahaemolyticus Species 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 238000001804 debridement Methods 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 239000009306 yunnan baiyao Substances 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010058546 Cyclin D1 Proteins 0.000 description 2
- 102000006311 Cyclin D1 Human genes 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 2
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 2
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 2
- 108091092584 GDNA Proteins 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000237536 Mytilus edulis Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 238000010806 PrimeScriptTM RT Reagent kit Methods 0.000 description 2
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 2
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 2
- 229910052770 Uranium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000010420 art technique Methods 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000002247 constant time method Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000012137 double-staining Methods 0.000 description 2
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 2
- 238000001523 electrospinning Methods 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 235000020638 mussel Nutrition 0.000 description 2
- 239000002121 nanofiber Substances 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 2
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- 238000009966 trimming Methods 0.000 description 2
- JFALSRSLKYAFGM-UHFFFAOYSA-N uranium(0) Chemical compound [U] JFALSRSLKYAFGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- 241000607528 Aeromonas hydrophila Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 241000183300 Pteria penguin Species 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 1
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008556 epithelial cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 210000001126 granulation tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009442 healing mechanism Effects 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 description 1
- 238000005461 lubrication Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000000651 myofibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000007838 tissue remodeling Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000009941 weaving Methods 0.000 description 1
- 230000010388 wound contraction Effects 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/716—Glucans
- A61K31/722—Chitin, chitosan
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
- A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
- A61K9/7007—Drug-containing films, membranes or sheets
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/225—Mixtures of macromolecular compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/42—Use of materials characterised by their function or physical properties
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/42—Use of materials characterised by their function or physical properties
- A61L15/425—Porous materials, e.g. foams or sponges
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/42—Use of materials characterised by their function or physical properties
- A61L15/44—Medicaments
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/42—Use of materials characterised by their function or physical properties
- A61L15/46—Deodorants or malodour counteractants, e.g. to inhibit the formation of ammonia or bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D01—NATURAL OR MAN-MADE THREADS OR FIBRES; SPINNING
- D01D—MECHANICAL METHODS OR APPARATUS IN THE MANUFACTURE OF ARTIFICIAL FILAMENTS, THREADS, FIBRES, BRISTLES OR RIBBONS
- D01D5/00—Formation of filaments, threads, or the like
- D01D5/0007—Electro-spinning
- D01D5/0015—Electro-spinning characterised by the initial state of the material
- D01D5/003—Electro-spinning characterised by the initial state of the material the material being a polymer solution or dispersion
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D01—NATURAL OR MAN-MADE THREADS OR FIBRES; SPINNING
- D01D—MECHANICAL METHODS OR APPARATUS IN THE MANUFACTURE OF ARTIFICIAL FILAMENTS, THREADS, FIBRES, BRISTLES OR RIBBONS
- D01D5/00—Formation of filaments, threads, or the like
- D01D5/0007—Electro-spinning
- D01D5/0061—Electro-spinning characterised by the electro-spinning apparatus
- D01D5/0092—Electro-spinning characterised by the electro-spinning apparatus characterised by the electrical field, e.g. combined with a magnetic fields, using biased or alternating fields
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D04—BRAIDING; LACE-MAKING; KNITTING; TRIMMINGS; NON-WOVEN FABRICS
- D04H—MAKING TEXTILE FABRICS, e.g. FROM FIBRES OR FILAMENTARY MATERIAL; FABRICS MADE BY SUCH PROCESSES OR APPARATUS, e.g. FELTS, NON-WOVEN FABRICS; COTTON-WOOL; WADDING ; NON-WOVEN FABRICS FROM STAPLE FIBRES, FILAMENTS OR YARNS, BONDED WITH AT LEAST ONE WEB-LIKE MATERIAL DURING THEIR CONSOLIDATION
- D04H1/00—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres
- D04H1/40—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres from fleeces or layers composed of fibres without existing or potential cohesive properties
- D04H1/42—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres from fleeces or layers composed of fibres without existing or potential cohesive properties characterised by the use of certain kinds of fibres insofar as this use has no preponderant influence on the consolidation of the fleece
- D04H1/4282—Addition polymers
- D04H1/4309—Polyvinyl alcohol
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D04—BRAIDING; LACE-MAKING; KNITTING; TRIMMINGS; NON-WOVEN FABRICS
- D04H—MAKING TEXTILE FABRICS, e.g. FROM FIBRES OR FILAMENTARY MATERIAL; FABRICS MADE BY SUCH PROCESSES OR APPARATUS, e.g. FELTS, NON-WOVEN FABRICS; COTTON-WOOL; WADDING ; NON-WOVEN FABRICS FROM STAPLE FIBRES, FILAMENTS OR YARNS, BONDED WITH AT LEAST ONE WEB-LIKE MATERIAL DURING THEIR CONSOLIDATION
- D04H1/00—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres
- D04H1/40—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres from fleeces or layers composed of fibres without existing or potential cohesive properties
- D04H1/42—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres from fleeces or layers composed of fibres without existing or potential cohesive properties characterised by the use of certain kinds of fibres insofar as this use has no preponderant influence on the consolidation of the fleece
- D04H1/4326—Condensation or reaction polymers
- D04H1/435—Polyesters
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D04—BRAIDING; LACE-MAKING; KNITTING; TRIMMINGS; NON-WOVEN FABRICS
- D04H—MAKING TEXTILE FABRICS, e.g. FROM FIBRES OR FILAMENTARY MATERIAL; FABRICS MADE BY SUCH PROCESSES OR APPARATUS, e.g. FELTS, NON-WOVEN FABRICS; COTTON-WOOL; WADDING ; NON-WOVEN FABRICS FROM STAPLE FIBRES, FILAMENTS OR YARNS, BONDED WITH AT LEAST ONE WEB-LIKE MATERIAL DURING THEIR CONSOLIDATION
- D04H1/00—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres
- D04H1/70—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres characterised by the method of forming fleeces or layers, e.g. reorientation of fibres
- D04H1/72—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres characterised by the method of forming fleeces or layers, e.g. reorientation of fibres the fibres being randomly arranged
- D04H1/728—Non-woven fabrics formed wholly or mainly of staple fibres or like relatively short fibres characterised by the method of forming fleeces or layers, e.g. reorientation of fibres the fibres being randomly arranged by electro-spinning
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
- A61L2300/23—Carbohydrates
- A61L2300/236—Glycosaminoglycans, e.g. heparin, hyaluronic acid, chondroitin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
- A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/404—Biocides, antimicrobial agents, antiseptic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/41—Anti-inflammatory agents, e.g. NSAIDs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/412—Tissue-regenerating or healing or proliferative agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
- A61L2400/04—Materials for stopping bleeding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Textile Engineering (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Mechanical Engineering (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
Abstract
本发明提供一种珍珠贝小分子肽在皮肤创伤修复中的应用，所述珍珠贝小分子肽具有修复皮肤创伤的新用途；所述珍珠贝小分子肽的制备方法包括以下步骤：S1.珍珠贝酶解物的制备；S2.将步骤S1所得到的上清液，选用孔径为0.05‑0.5um陶瓷膜，充分过滤后，采用不同截留分子量的超滤膜进行分离，收集分子量不同的肽段，包括分子量小于3000Da活性肽、分子量3000Da‑5000Da活性肽、分子量5000Da‑10000Da活性肽中的任一种，冷冻干燥即得珍珠贝小分子肽。本发明提供了一种珍珠贝小分子肽在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，促创伤修复效果更明显。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种珍珠贝小分子肽在皮肤创伤修复中的应用。
背景技术
在世界范围内，每年遭受皮肤创伤人数超过4000万。如果受损的皮肤不能及时修复，创面很容易受到感染，演变成慢性伤口，严重的创伤甚至危及生命。良好的重塑效果会使皮肤瘢痕减小，甚至达到无痕愈合。
创伤愈合主要包含止血凝血期、炎症期、增殖期和组织重塑期四个时期。在机体遭受创伤后，血小板激活，分泌相关因子促使血液凝集成血栓，达到凝血作用，同时刺激机体产生炎症反应等。在炎症期，免疫吞噬组织碎片并杀灭入侵的细菌等环境中的污染物，同时分泌各种细胞因子，刺激成纤维细胞分裂、胶原合成和血管生成。增殖期时，成纤维细胞则产生胶原蛋白、纤连蛋白、透明质酸、蛋白多糖等各种细胞外基质成分，合成肉芽组织，同时分化成肌成纤维细胞，促进伤口收缩。重塑期为愈合后期胶原蛋白和纤连蛋白等在相关细胞因子和细胞的共同调节下，进行不断地合成和分解，达到一个平衡，进行不断地重塑，一直持续到1年或者更长时间。
根据愈合机理开发的常用创伤修复药物主要有：细胞因子、抗菌药物、酶清创（enzymatic debridement）制剂、中药制剂，抗氧化剂和皮质类固醇等。其中，用于伤口消毒清创的药物主要有医用酒精、碘伏、抗生素等，其刺激性较大，清创效果不理想，伤口愈合缓慢，修复效果不明显，常见明显疤痕。因而，急需要开发出天然高效的组织创伤愈合的物质。
皮肤是人体最大的器官，其主要功能是隔绝机体和环境的保护屏障。其主要的蛋白质是胶原蛋白，手术等创伤会造成皮肤损伤，加速胶原蛋白的破坏与流失。胶原蛋白广泛分布于动物结缔组织和皮肤，在机体中参与组织的形成、成熟、细胞间信息的传递，以及关节润滑、伤口愈合、钙化作用、血液凝固和衰老等有着密切的关系。而胶原蛋白肽除了具有胶原蛋白诸多的生理活性以外，由于其分子量低，具有消化吸收性快，可直接被肠道吸收，进入血液，达到身体各个部位。胶原蛋白肽具有抗氧化、抗疲劳、增强免疫力、促进矿物质吸收、延缓皮肤衰老、促进骨骼形成等方面的作用。直接接触皮肤或创面组织，与周围组织的亲和性好，能够诱导生长因子，促进皮肤及神经增长，利于上皮细胞的增生修复，促进创面的愈合，修复小型皮肤缺损及组织缺损。
珍珠贝为产珍珠的属于双壳类，主要有两大类，包括淡水珍珠贝和海水珍珠贝。淡水珍珠贝，也称珍珠蚌，主要有三角帆蚌、池蝶蚌、褶纹冠蚌在我国，主要分布在广西、浙江、湖南、安徽等省，在大连的部分河段中也有一定数量的分布，日本和前苏联地区也有分布并均育出淡水珍珠。海水珍珠贝为暖海产，在我国的福建，特别是广东沿海十分普遍主要有珠母贝、大珠母贝、马氏珍珠贝、企鹅珍珠贝等。其中以马氏珍珠贝最普通，马氏珠母贝是我国主要经济贝类和南海重要的渔业资源之一。珍珠贝在采珠后，大量的贝肉尚未被充分利用。珍珠贝肉是一种高蛋白低脂肪的优质蛋白源，且具有多种活性物质，如牛磺酸、精氨酸、锌、活性肽等。其中，外套膜组织具有组织自我修复能力和形成珍珠袋分泌珍珠层的特性，含有丰富的胶原蛋白。现代医药研究表明，珍珠贝肉具有抗氧化、调节免疫、预防骨质疏松活性研究、抗菌、等功效。这些研究基础为珍珠贝开发具有促进创伤愈合的保健食品或药品提供理论依据。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用。本发明提供了一种珍珠贝小分子肽在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
本发明的技术方案为：
一种珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述珍珠贝小分子肽具有修复皮肤创伤的新用途；
所述珍珠贝小分子肽的制备方法包括以下步骤：
S1.珍珠贝酶解物的制备；
通过预处理分离出珍珠贝外套膜；所述珍珠贝外套膜酶解选用的蛋白酶包括：中性蛋白酶、动物蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶中的任一种，蛋白酶的添加量为3000-5000U/g，pH值6.5-10，酶解温度45-55℃，酶解时间3-5小时，100℃灭酶10分钟后，离心取上清液；
S2.将步骤S1所得到的上清液，选用孔径为0.05-0.5um陶瓷膜，充分过滤后，采用不同截留分子量的超滤膜进行分离，收集分子量不同的肽段，包括分子量小于3000Da活性肽、分子量3000Da-5000Da活性肽、分子量5000Da-10000Da活性肽中的任一种，冷冻干燥即得珍珠贝小分子肽（即为SMPs）。
进一步的，所述珍珠贝包括马氏珠母贝、企鹅珍珠贝、三角帆蚌、池蝶蚌、褶纹冠蚌中的任一种。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽为分子量小于3000Da活性肽。本发明制备的珍珠贝小分子肽为黄色粉末，具有合适pH值，稳定性能好。
本发明中选用的珍珠贝，其总蛋白含量65-75 g/100g，其中小分子肽占总蛋白75-85%，游离氨基酸占总蛋白15-20%，Zn含量 10-16 g/100g，水分含量8.0-10.0 g/100g，是优质的原料。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，包括以下步骤：
（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5~6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取珍珠贝小分子肽5-50mg总氮含量/ml水(膏状)涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
进一步的，所述止血活性评价的方法为：将新鲜抗凝血兔血在1000rpm下离心10分钟，血浆分离使用；将0.1 mL的血浆添加到每管中，加入浓度为1mg/mL的0.1 mL样品，加入0.1mL、2%柠檬酸溶液作为阴性对照，加入0.1mL浓度为1mg/mL的药物为阳性对照，并在37°C水浴中孵育；1分钟，然后加入0.1 mL的0.025 mol/L氯化钙溶液，混合并放入37°C水浴中，同时启动秒表，每15秒缓慢倾斜试管一次，并开始在混合物中出现扩散；当使用白色粒状纤维蛋白时，记录顽固化的时间。
进一步的，所述抗菌活性评价的方法为：选用与感染相关的菌种，将活化好的菌液用无菌生理盐水稀释，在96孔板中加入50uL生理盐水为空白对照、加入50uL，5-50mg/mL样品，样品浓度以总氮含量计，，加入50uLTSB培养基和50uL稀释后的菌液，混匀，在550nm波长，记录为0h的OD值，37℃培养，分别测定8h和24h的OD值，分别计算抑菌率。
具体的，所述抗菌活性评价的方法为：将大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、海藻希瓦氏菌、李斯特氏菌、铜绿假单胞菌、泥鳅嗜水汽菌、无乳链球菌等种于3%TSB液体培养基中进行活化，将溶藻弧菌、副溶血性弧菌利用3%TSB-3%NaCl培养基活化。将活化好的菌液用无菌生理盐水稀释至OD550值为0.1，在96孔板中加入50uL生理盐水为空白对照、加入50 uL，20-70 mg/mL样品（以总氮算）为样品组，各组均加入50uLTSB培养基和50uL稀释后的菌液，混匀，550 nm测定吸光度，记录为0 h OD值，然后放入37℃培养箱中培养8 h测定一次OD值，24 h测定一次OD值。分别计算抑菌率，公式如下(1)所示：
。
进一步的，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法为：所述步骤（2）中涂抹给药后，从第0天开始，每2天在同一固定高度拍照记录伤口创面情况，用软件计算伤口愈合率、记录掉痂时间；伤口愈合率测定的公式（2）为：
，
公式中n是造模后天数，单位：天。
进一步的，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)。具体方法为：使用RNAIso Plus和匀浆器从伤口组织中提取总RNA。使用Prime ScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)试剂盒进行逆转录合成cDNA，用TB GreenTM Premix Ex TaqTM II(Tli RNaseH Plus)(*2)试剂盒进行荧光定量。反应条件为：95℃30s，95℃5s，60℃30s，40个循环。每延伸一次，都进行实时荧光定量测量。用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参基因，用于校正计算靶基因的表达水平，使用∆∆CT方法进行计算。第7天测定TNF-a、IL-1β和TGF-β1，第14、21和28天测定COL1A1(I型胶原蛋白)mRNA水平。
进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM）。具体为：取造模后第21天的皮肤伤口组织放入2.5%戊二醛，于4℃固定过夜。将戊二醛固定后的组织，浸入PBS(0.1mol/L)中，漂洗3次，离心去上清，每次20 min，再用4℃预冷的1%锇酸，在4℃固定2-3 h，然后用PBS（0.1mol/L）浸洗3 次，每次20 min。按梯度30%、50%、70%、80%、85%、90%、95%、100%乙醇脱水，每种浓度乙醇1次，每次15 min，再用100%乙醇彻底脱水2次，每次10 min。接着用丙酮：环氧树脂(2：1)、丙酮：环氧树脂(1：1)、环氧树脂，于37℃恒温箱依次进行渗透，每次12 h。接着包埋、固化和修块，用铅和铀双染色后，于200 KV加速电压和放大倍率5000观察拍照。使用ImageJ软件分析测量每个图像中每个胶原纤维的直径。
本发明中，阳性对照组可选用现有技术中创伤修复功效明显的药物，比如云南白药、京万红软膏、银锌抑菌霜等。所述云南白药为现有技术由云南白药集团股份有限公司生产的云南白药粉剂，国药准字Z53020798；所述京万红软膏为现有技术天津达仁堂京万红药业有限公司生产的京万红软膏，国药准字Z12020440；所述银锌抑菌霜为现有技术河南汇博医疗股份有限公司生产的邦尔康银锌抑菌霜，注册证号（豫）卫消证字（2004）第0056号。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述珍珠贝小分子肽是通过预处理分离出珍珠贝的外套膜，通过蛋白酶酶解，依次通过陶瓷膜、超滤系统分离、干燥制得的珍珠贝小分子肽。
本发明的海洋贝类活性肽为海洋贝类外套膜酶解产物，海洋贝类的外套膜组织具有组织自我修复能力和分泌珍珠层的特性；外套膜是加工的副产物之一，其主要成分为蛋白质（胶原蛋白）和多糖类物质，同时含有内源性抗菌蛋白，是开发天然创伤愈合活性物质的重要来源。
本发明珍珠贝小分子肽具有良好的生物学特性，与创伤周围组织的亲和性好，能通过诱导生长因子，促进皮肤及神经增长，利于上皮细胞的增生修复，促进创面的愈合，修复皮肤缺损及组织缺损；皮肤对活性肽也具有很好的吸收作用，快速组合成自身的胶原蛋白，从而形成正常的结缔组织，使受损的皮肤得到填充和修复，减少疤痕的形成。由于珍珠贝小分子肽分子量低，具有消化吸收性快，可直接被肠道吸收，进入血液，达到身体各个部位。通过外源补充胶原蛋白肽后，皮肤和结缔组织中成纤维细胞、脂肪细胞及毛细血管等能够合成自身的胶原蛋白，从而形成正常的结缔组织，使受损、老化的皮肤得到填充和修复，达到延缓皮肤衰老的目的。因此，珍珠贝小分子肽可作用于伤口的止血期、炎症期、增殖期和重塑期四个创伤愈合时期，可以作为抗异常瘢痕形成的再生愈合活性物质用于真皮损伤的治疗。
本发明提供了一种珍珠贝小分子肽在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
进一步的，所述复合纤维膜状产品为通过静电纺丝技术制得的静电纺丝复合纤维膜，所述的制备方法为：
a.将珍珠贝小分子肽溶于超纯水中，充分搅拌使其完全溶解，以制得珍珠贝小分子肽溶液；
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为1:1-4:1；所述基料为聚乙烯醇或聚己内酯，所述辅料为海参胶原蛋白或壳聚糖；所述溶剂为六氟异丙醇、三氟乙酸、三氟乙醇中的任一种；所述载体材料溶液的浓度为5％-10％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中珍珠贝小分子肽的浓度为0.05-0.25％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇、三氟乙酸、三氟乙醇中的任一种。
本发明中，所述海参胶原蛋白可采用任一现有技术实现，例如中国专利“200710159245.9、海参胶原、胶原蛋白的提取方法”制备的海参胶原蛋白。海参胶原蛋白（PSC）所含氨基酸种类齐全，具有典型胶原蛋白的组成。氨基酸总量达PSC的33.07%。其中，必需氨基酸总量达PSC的5.29%，占氨基酸总量的16%；鲜味氨基酸总量达PSC的19．04%;药效氨基酸总量达PSC的17．69%，这些成分中，具有促进伤口修复的功能因子，可与珍珠贝小分子肽协效复配，在复合纤维膜中增强其创口的快速愈合、预防瘢痕形成的功效。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽溶液的浓度为10-20mg/ml。
进一步的，步骤d中静电纺丝电压为15-30kV，注射器针头与接收板之间的距离可为10-15cm，注射泵的推进速度可为0.01-0.50mL/min，纺丝环境温度可为35-39℃。
本发明将和静电纺丝技术联合起来，辅以载体材料制备一种可以调节免疫微环境，具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成，可发挥持久作用的新型生物敷料。
特别的，本发明提供一种珍珠贝小分子肽复合纤维膜用于创伤修复药物中的用途。
静电纺丝技术制备的纤维膜具有很高的孔隙率及良好的透气性，即可使伤口保持理想的湿润程度，又有利于细胞的呼吸作用。在静电纺丝过程中将药物成分加入纺丝液中，可以得到复合了一些药物成分的纳米纤维，当纳米纤维降解或者遇到水溶胀后，可以将药物成分缓慢释放出来，这种方式不仅可以提高药物的药效，降低了药物的毒副作用。而同轴静电纺丝技术可以在纤维表面进行功能化修饰，同时也可以将功能材料包裹于纤维内部，以起到持久发挥功效的作用。
本发明通过添加珍珠贝小分子肽，利用静电纺丝技术，制备获得生物活性敷料，作为创面敷料，具有较大的比表面积和孔隙结构，很好的黏附支持细胞生长，可以提供天然仿生的类细胞外基质，具有抗炎作用，保护其不被伤口微环境降解失活，促进胶原蛋白和细胞因子的合成、分泌，极大改善胶原蛋白沉积，形成有序的篮筐编织样式排列，使之具备正常真皮的特征。本发明提供的方法操作方便，可重复性强，在创伤修复药物中有巨大的应用前景。
本发明的珍珠贝小分子肽复合纤维膜，采用海参胶原蛋白或壳聚糖作为载体，由于海参胶原蛋白或壳聚糖本身具有良好的功能活性，能够协效放大珍珠贝小分子肽复合纤维膜的抗炎作用以及促进创口快速愈合的效果，使得其在创伤修复中的功效优于单独使用珍珠贝小分子肽直接对伤口进行涂抹的功效。所述静电纺丝原料均可通过任一现有技术实现。
本发明敷料制备方法简单易行，所制得的生物敷料伤口黏附良好，安全无毒，应用方便。具有生物活性的珍珠贝小分子肽敷料在隔绝创面，透气性好的同时又有止血、抗菌、保湿，同时具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成。
附图说明
图1是本发明一实施例珍珠贝小分子肽质谱总离子图；
图2是本发明一实施例珍珠贝小分子肽促进创伤愈合效果；
图3是本发明一实施例珍珠贝小分子肽对小鼠皮肤创伤愈合率的影响；
图4是本发明一实施例珍珠贝小分子肽对创面炎症因子IL-6的影响；
图5是本发明一实施例珍珠贝小分子肽对创面炎症因子IL-10的影响；
图6是本发明一实施例珍珠贝小分子肽作用后第18天小鼠皮肤Masson染色结果图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例对本发明技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述珍珠贝小分子肽具有修复皮肤创伤的新用途；
所述珍珠贝小分子肽的制备方法包括以下步骤：
S1.珍珠贝酶解物的制备；
通过预处理分离出珍珠贝外套膜；所述珍珠贝外套膜酶解选用的蛋白酶为动物蛋白酶，蛋白酶的添加量为4000U/g，pH值7.5，酶解温度50℃，酶解时间4小时，100℃灭酶10分钟后，离心取上清液；
S2.将步骤S1所得到的上清液，选用孔径为0.05-0.5um陶瓷膜，充分过滤后，采用不同截留分子量的超滤膜进行分离，收集分子量不同的肽段，包括分子量小于3000Da活性肽、分子量3000Da-5000Da活性肽、分子量5000Da-10000Da活性肽中的任一种，冷冻干燥即得珍珠贝小分子肽（即为SMPs）。
进一步的，所述珍珠贝为马氏珠母贝。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽为分子量小于3000Da活性肽。本发明制备的珍珠贝小分子肽为黄色粉末，具有合适pH值，稳定性能好。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，包括以下步骤：
（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5~6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取珍珠贝小分子肽30mg总氮含量/ml水(膏状)涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
进一步的，所述止血活性评价的方法为：将新鲜抗凝血兔血在1000rpm下离心10分钟，血浆分离使用；将0.1 mL的血浆添加到每管中，加入浓度为1mg/mL的0.1 mL样品，加入0.1mL、2%柠檬酸溶液作为阴性对照，加入0.1mL浓度为1mg/mL的药物为阳性对照，并在37°C水浴中孵育；1分钟，然后加入0.1 mL的0.025 mol/L氯化钙溶液，混合并放入37°C水浴中，同时启动秒表，每15秒缓慢倾斜试管一次，并开始在混合物中出现扩散；当使用白色粒状纤维蛋白时，记录顽固化的时间。
进一步的，所述抗菌活性评价的方法为：选用与感染相关的菌种，将活化好的菌液用无菌生理盐水稀释，在96孔板中加入50uL生理盐水为空白对照、加入50 uL，20mg/mL样品，样品浓度以总氮含量计，，加入50uLTSB培养基和50uL稀释后的菌液，混匀，在550nm波长，记录为0h的OD值，37℃培养，分别测定8h和24h的OD值，分别计算抑菌率。
具体的，所述抗菌活性评价的方法为：将大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、海藻希瓦氏菌、李斯特氏菌、铜绿假单胞菌、泥鳅嗜水汽菌、无乳链球菌等种于3%TSB液体培养基中进行活化，将溶藻弧菌、副溶血性弧菌利用3%TSB-3%NaCl培养基活化。将活化好的菌液用无菌生理盐水稀释至OD550值为0.1，在96孔板中加入50uL生理盐水为空白对照、加入50 uL，20-70 mg/mL样品（以总氮算）为样品组，各组均加入50uLTSB培养基和50uL稀释后的菌液，混匀，550 nm测定吸光度，记录为0 h OD值，然后放入37℃培养箱中培养8 h测定一次OD值，24 h测定一次OD值。分别计算抑菌率，公式如下(1)所示：
。
进一步的，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法为：所述步骤（2）中涂抹给药后，从第0天开始，每2天在同一固定高度拍照记录伤口创面情况，用软件计算伤口愈合率、记录掉痂时间；伤口愈合率测定的公式（2）为：
，
公式中n是造模后天数，单位：天。
进一步的，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)。具体方法为：使用RNAIso Plus和匀浆器从伤口组织中提取总RNA。使用Prime ScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)试剂盒进行逆转录合成cDNA，用TB GreenTM Premix Ex TaqTM II(Tli RNaseH Plus)(*2)试剂盒进行荧光定量。反应条件为：95℃30s，95℃5s，60℃30s，40个循环。每延伸一次，都进行实时荧光定量测量。用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参基因，用于校正计算靶基因的表达水平，使用∆∆CT方法进行计算。第7天测定TNF-a、IL-1β和TGF-β1，第14、21和28天测定COL1A1(I型胶原蛋白)mRNA水平。
进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM）。具体为：取造模后第21天的皮肤伤口组织放入2.5%戊二醛，于4℃固定过夜。将戊二醛固定后的组织，浸入PBS(0.1mol/L)中，漂洗3次，离心去上清，每次20 min，再用4℃预冷的1%锇酸，在4℃固定2-3 h，然后用PBS（0.1mol/L）浸洗3 次，每次20 min。按梯度30%、50%、70%、80%、85%、90%、95%、100%乙醇脱水，每种浓度乙醇1次，每次15 min，再用100%乙醇彻底脱水2次，每次10 min。接着用丙酮：环氧树脂(2：1)、丙酮：环氧树脂(1：1)、环氧树脂，于37℃恒温箱依次进行渗透，每次12 h。接着包埋、固化和修块，用铅和铀双染色后，于200 KV加速电压和放大倍率5000观察拍照。使用ImageJ软件分析测量每个图像中每个胶原纤维的直径。
本实施例中阳性对照组选用云南白药。所述云南白药为现有技术由云南白药集团股份有限公司生产的云南白药粉剂，国药准字Z53020798。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述珍珠贝小分子肽是通过预处理分离出珍珠贝的外套膜，通过蛋白酶酶解，依次通过陶瓷膜、超滤系统分离、干燥制得的珍珠贝小分子肽。
本发明提供了一种珍珠贝小分子肽在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
实施例2
一种珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述珍珠贝小分子肽具有修复皮肤创伤的新用途；
所述珍珠贝小分子肽的制备方法包括以下步骤：
S1.珍珠贝酶解物的制备；
通过预处理分离出珍珠贝外套膜；所述珍珠贝外套膜酶解选用的蛋白酶为中性蛋白酶，蛋白酶的添加量为3000U/g，pH值6.5，酶解温度45℃，酶解时间3小时，100℃灭酶10分钟后，离心取上清液；
S2.将步骤S1所得到的上清液，选用孔径为0.05-0.5um陶瓷膜，充分过滤后，采用不同截留分子量的超滤膜进行分离，收集分子量不同的肽段，包括分子量小于3000Da活性肽、分子量3000Da-5000Da活性肽、分子量5000Da-10000Da活性肽中的任一种，冷冻干燥即得珍珠贝小分子肽（即为SMPs）。
进一步的，所述珍珠贝为三角帆蚌。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽为分子量3000Da-5000Da活性肽。本发明制备的珍珠贝小分子肽为黄色粉末，具有合适pH值，稳定性能好。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，包括以下步骤：
（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5~6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取珍珠贝小分子肽45mg总氮含量/ml水(膏状)涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
进一步的，所述止血活性评价的方法与实施例1一致。
进一步的，所述抗菌活性评价的方法与实施例1一致
进一步的，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)，具体方法与实施例1一致。
进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM），具体测试方法与实施例1一致。
本发明中，阳性对照组选用现有技术中京万红软膏。所述京万红软膏为现有技术天津达仁堂京万红药业有限公司生产的京万红软膏，国药准字Z12020440。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述珍珠贝小分子肽是通过预处理分离出珍珠贝的外套膜，通过蛋白酶酶解，依次通过陶瓷膜、超滤系统分离、干燥制得的珍珠贝小分子肽。
本发明提供了一种珍珠贝小分子肽在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
实施例3
一种珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述珍珠贝小分子肽具有修复皮肤创伤的新用途；
所述珍珠贝小分子肽的制备方法包括以下步骤：
S1.珍珠贝酶解物的制备；
通过预处理分离出珍珠贝外套膜；所述珍珠贝外套膜酶解选用的蛋白酶为碱性蛋白酶，蛋白酶的添加量为5000U/g，pH值10，酶解温度55℃，酶解时间5小时，100℃灭酶10分钟后，离心取上清液；
S2.将步骤S1所得到的上清液，选用孔径为0.05-0.5um陶瓷膜，充分过滤后，采用不同截留分子量的超滤膜进行分离，收集分子量不同的肽段，包括分子量小于3000Da活性肽、分子量3000Da-5000Da活性肽、分子量5000Da-10000Da活性肽中的任一种，冷冻干燥即得珍珠贝小分子肽（即为SMPs）。
进一步的，所述珍珠贝为褶纹冠蚌。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽为分子量5000Da-10000Da活性肽。本发明制备的珍珠贝小分子肽为黄色粉末，具有合适pH值，稳定性能好。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，包括以下步骤：
（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5~6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取珍珠贝小分子肽10mg总氮含量/ml水(膏状)涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
进一步的，所述止血活性评价的方法与实施例1一致。
进一步的，所述抗菌活性评价的方法与实施例1一致
进一步的，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)，具体方法与实施例1一致。
进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM），具体测试方法与实施例1一致。
本发明中，阳性对照组选用现有技术中银锌抑菌霜，所述银锌抑菌霜为现有技术河南汇博医疗股份有限公司生产的邦尔康银锌抑菌霜，注册证号（豫）卫消证字（2004）第0056号。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述珍珠贝小分子肽是通过预处理分离出珍珠贝的外套膜，通过蛋白酶酶解，依次通过陶瓷膜、超滤系统分离、干燥制得的珍珠贝小分子肽。
本发明提供了一种珍珠贝小分子肽在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
实施例4
一种珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述珍珠贝小分子肽具有修复皮肤创伤的新用途；
所述珍珠贝小分子肽的制备方法包括以下步骤：
S1.珍珠贝酶解物的制备；
通过预处理分离出珍珠贝外套膜；所述珍珠贝外套膜酶解选用的蛋白酶为风味蛋白酶，蛋白酶的添加量为3500/g，pH值7，酶解温度48℃，酶解时间3.8小时，100℃灭酶10分钟后，离心取上清液；
S2.将步骤S1所得到的上清液，选用孔径为0.05-0.5um陶瓷膜，充分过滤后，采用不同截留分子量的超滤膜进行分离，收集分子量不同的肽段，包括分子量小于3000Da活性肽、分子量3000Da-5000Da活性肽、分子量5000Da-10000Da活性肽中的任一种，冷冻干燥即得珍珠贝小分子肽（即为SMPs）。
进一步的，所述珍珠贝为企鹅珍珠贝。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽为分子量小于3000Da活性肽。本发明制备的珍珠贝小分子肽为黄色粉末，具有合适pH值，稳定性能好。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，包括以下步骤：
（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5~6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取珍珠贝小分子肽35mg总氮含量/ml水(膏状)涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
进一步的，所述止血活性评价的方法与实施例1一致。
进一步的，所述抗菌活性评价的方法与实施例1一致
进一步的，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)，具体方法与实施例1一致。
进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM），具体测试方法与实施例1一致。
本实施例中阳性对照组选用云南白药。所述云南白药为现有技术由云南白药集团股份有限公司生产的云南白药粉剂，国药准字Z53020798。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述珍珠贝小分子肽是通过预处理分离出珍珠贝的外套膜，通过蛋白酶酶解，依次通过陶瓷膜、超滤系统分离、干燥制得的珍珠贝小分子肽。
本发明提供了一种珍珠贝小分子肽在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
实施例5
一种珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述珍珠贝小分子肽具有修复皮肤创伤的新用途；
所述珍珠贝小分子肽的制备方法包括以下步骤：
S1.珍珠贝酶解物的制备；
通过预处理分离出珍珠贝外套膜；所述珍珠贝外套膜酶解选用的蛋白酶为菠萝蛋白酶，蛋白酶的添加量为4200U/g，pH值7.5，酶解温度46℃，酶解时间4.2小时，100℃灭酶10分钟后，离心取上清液；
S2.将步骤S1所得到的上清液，选用孔径为0.05-0.5um陶瓷膜，充分过滤后，采用不同截留分子量的超滤膜进行分离，收集分子量不同的肽段，包括分子量小于3000Da活性肽、分子量3000Da-5000Da活性肽、分子量5000Da-10000Da活性肽中的任一种，冷冻干燥即得珍珠贝小分子肽（即为SMPs）。
进一步的，所述珍珠贝为池蝶蚌。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽为分子量小于3000Da活性肽。本发明制备的珍珠贝小分子肽为黄色粉末，具有合适pH值，稳定性能好。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，包括以下步骤：
（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5~6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取珍珠贝小分子肽25mg总氮含量/ml水(膏状)涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
进一步的，所述止血活性评价的方法与实施例1一致。
进一步的，所述抗菌活性评价的方法与实施例1一致
进一步的，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)，具体方法与实施例1一致。
进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM），具体测试方法与实施例1一致。
本实施例中阳性对照组选用云南白药。所述云南白药为现有技术由云南白药集团股份有限公司生产的云南白药粉剂，国药准字Z53020798。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述珍珠贝小分子肽是通过预处理分离出珍珠贝的外套膜，通过蛋白酶酶解，依次通过陶瓷膜、超滤系统分离、干燥制得的珍珠贝小分子肽。
本发明提供了一种珍珠贝小分子肽在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
实施例6
本实施例中，可将实施例1-5任一制备的珍珠贝小分子肽制成复合纤维膜状产品。优选的，所述珍珠贝小分子肽是通过预处理分离出珍珠贝的外套膜，通过蛋白酶酶解，依次通过陶瓷膜、超滤系统分离、干燥制得的珍珠贝小分子肽。
进一步的，所述复合纤维膜状产品为通过静电纺丝技术制得的静电纺丝复合纤维膜，所述的制备方法为：
a.将珍珠贝小分子肽溶于超纯水中，充分搅拌使其完全溶解，以制得珍珠贝小分子肽溶液；
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为2:1；所述基料为聚乙烯醇，所述辅料为海参胶原蛋白；所述溶剂为六氟异丙醇；所述载体材料溶液的浓度为8％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中珍珠贝小分子肽的浓度为0.15％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽溶液的浓度为15g/ml。
进一步的，步骤d中静电纺丝电压为22kV，注射器针头与接收板之间的距离可为12cm，注射泵的推进速度可为0.2mL/min，纺丝环境温度可为37℃。
本发明将和静电纺丝技术联合起来，辅以载体材料制备一种可以调节免疫微环境，具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成，可发挥持久作用的新型生物敷料。
特别的，本发明提供一种珍珠贝小分子肽复合纤维膜用于创伤修复药物中的用途。
本发明的珍珠贝小分子肽复合纤维膜，采用海参胶原蛋白或壳聚糖作为载体，由于海参胶原蛋白或壳聚糖本身具有良好的功能活性，能够协效放大珍珠贝小分子肽复合纤维膜的抗炎作用以及促进创口快速愈合的效果，使得其在创伤修复中的功效优于单独使用珍珠贝小分子肽直接对伤口进行涂抹的功效。所述静电纺丝原料均可通过任一现有技术实现。
实施例7
本实施例中，可将实施例1-5任一制备的珍珠贝小分子肽制成复合纤维膜状产品。优选的，所述珍珠贝小分子肽是通过预处理分离出珍珠贝的外套膜，通过蛋白酶酶解，依次通过陶瓷膜、超滤系统分离、干燥制得的珍珠贝小分子肽。
进一步的，所述复合纤维膜状产品为通过静电纺丝技术制得的静电纺丝复合纤维膜，所述的制备方法为：
a.将珍珠贝小分子肽溶于超纯水中，充分搅拌使其完全溶解，以制得珍珠贝小分子肽溶液；
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为1:1；所述基料为聚己内酯，所述辅料为海壳聚糖；所述溶剂为三氟乙酸；所述载体材料溶液的浓度为5％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中珍珠贝小分子肽的浓度为0.05％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽溶液的浓度为10mg/ml。
进一步的，步骤d中静电纺丝电压为15kV，注射器针头与接收板之间的距离可为10cm，注射泵的推进速度可为0.01mL/min，纺丝环境温度可为35℃。
本发明将和静电纺丝技术联合起来，辅以载体材料制备一种可以调节免疫微环境，具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成，可发挥持久作用的新型生物敷料。
特别的，本发明提供一种珍珠贝小分子肽复合纤维膜用于创伤修复药物中的用途。
实施例8
本实施例中，可将实施例1-5任一制备的珍珠贝小分子肽制成复合纤维膜状产品。优选的，所述珍珠贝小分子肽是通过预处理分离出珍珠贝的外套膜，通过蛋白酶酶解，依次通过陶瓷膜、超滤系统分离、干燥制得的珍珠贝小分子肽。
进一步的，所述复合纤维膜状产品为通过静电纺丝技术制得的静电纺丝复合纤维膜，所述的制备方法为：
a.将珍珠贝小分子肽溶于超纯水中，充分搅拌使其完全溶解，以制得珍珠贝小分子肽溶液；
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为4:1；所述基料为聚乙烯醇，所述辅料为海参胶原蛋白；所述溶剂为三氟乙醇；所述载体材料溶液的浓度为10％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中珍珠贝小分子肽的浓度为0.25％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为三氟乙醇。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽溶液的浓度为20mg/ml。
进一步的，步骤d中静电纺丝电压为30kV，注射器针头与接收板之间的距离可为15cm，注射泵的推进速度可为0.50mL/min，纺丝环境温度可为39℃。
本发明将和静电纺丝技术联合起来，辅以载体材料制备一种可以调节免疫微环境，具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成，可发挥持久作用的新型生物敷料。
特别的，本发明提供一种珍珠贝小分子肽复合纤维膜用于创伤修复药物中的用途。
实施例9
本实施例中，可将实施例1-5任一制备的珍珠贝小分子肽制成复合纤维膜状产品。优选的，所述珍珠贝小分子肽是通过预处理分离出珍珠贝的外套膜，通过蛋白酶酶解，依次通过陶瓷膜、超滤系统分离、干燥制得的珍珠贝小分子肽。
进一步的，所述复合纤维膜状产品为通过静电纺丝技术制得的静电纺丝复合纤维膜，所述的制备方法为：
a.将珍珠贝小分子肽溶于超纯水中，充分搅拌使其完全溶解，以制得珍珠贝小分子肽溶液；
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为3:1；所述基料为聚己内酯，所述辅料为壳聚糖；所述溶剂为三氟乙醇；所述载体材料溶液的浓度为7％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中珍珠贝小分子肽的浓度为0.2％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇。
进一步的，所述珍珠贝小分子肽溶液的浓度为18mg/ml。
进一步的，步骤d中静电纺丝电压为25kV，注射器针头与接收板之间的距离可为14cm，注射泵的推进速度可为0.3mL/min，纺丝环境温度可为38℃。
本发明将和静电纺丝技术联合起来，辅以载体材料制备一种可以调节免疫微环境，具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成，可发挥持久作用的新型生物敷料。
特别的，本发明提供一种珍珠贝小分子肽复合纤维膜用于创伤修复药物中的用途。
功能评价结果
1.1 结构鉴定
对于实施例1制备的珍珠贝小分子肽进行还原烷基化和脱盐，然后进行液质联用仪器进行一级质谱总离子测定。从图1的一级质谱结果可以看出，珍珠贝小分子肽分子量分布集中。对于珍珠贝小分子肽的肽序列组成分析，如下表所示。
1.2 抗菌活性评价
在实施例1的抗菌活性评价中，SMPs对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、海藻希瓦氏菌、李斯特氏菌、铜绿假单胞菌、嗜水气单胞菌、无乳链球菌、副溶血性弧菌和溶藻弧菌等9种与创伤相关的细菌均有一定的抑制作用。8 h时对9种菌均具有抑制作用。
1.3止血活性评价
在实施例1的止血活性评价中，从下表珍珠贝小分子肽对血浆复钙时间影响的止血活性结果可以看出，其中“*”表示组间有极显著性差异（P<0.01）；珍珠贝小分子肽可通过缩短血浆覆盖时间，加快止血。
1.4 皮肤创伤愈合评价
在实施例1的皮肤创伤愈合评价中，从图2的直观照片效果图可以看出，珍珠贝小分子肽可有效促进小鼠皮肤创伤愈合，并具有一定的瘢痕抑制的作用。
从图3创伤愈合试验数据可以看出，珍珠贝小分子肽对小鼠皮肤创伤创面具有显著促愈合作用，随着天数增加，其愈合率呈稳定增长，来自珍珠贝小分子肽有显著促愈效果。
从图4和图5可以看出，从第三天到第五天，对照组的IL-6含量没有显著变化，珍珠贝小分子肽组显著增加。但在第三天，珍珠贝小分子肽组的IL-6含量明显低于对照组（p<0.01）。同时，第三天，与对照组相比，SMPs组显著提升IL-10分泌；第五天，阴性对照组和珍珠贝小分子肽组的IL-10含量与第三天相比显著增加（p<0.05）。
从下表珍珠贝小分子肽对创面生长因子CCND1和TGF-β的影响可以看出，其中不同的上标字母代表显著性差异（p<0.05），珍珠贝小分子肽组组实验小鼠皮肤TGF-β含量明显高于阴性对照组（P<0.05）。珍珠贝小分子肽组组中的CCND1含量没有显着高于其他实验组（P>0.05）。
需注意的是，在图3、图4、图5中，同一时间下，标有不同字母者表示组间有显著性差异（P<0.05）；标有相同字母表示组间无显著性差异（P>0.05）；“*”表示组间有极显著性差异（P<0.01）。
1.5 组织学检查：
在实施例1中，珍珠贝小分子肽处理组第18天取皮肤组织，运用Masson染色法对第18天的组织切片染色，于显微镜下观察病理变化，样品处理组第18天组织切片图，如图6所示。
从图6可以看出，本发明样品处理组第18天组织切片图中，有胶原蛋白生成，且形成的胶原蛋白尤为致密。由此可见，珍珠贝小分子肽不仅能促进创伤愈合，而且能抑制瘢痕增生。
将实施例6-9制备的复合纤维膜生物敷料，取少量目标纤维，在其表面喷金，于扫描电镜下观察纤维形貌。结果显示，携载珍珠贝小分子肽的复合纤维膜材料，电纺纤维较为光滑，排列不规则，也没有明显的液滴形成，最后形成的纤维膜类物质是呈现多孔状。
值得注意的是，本发明的实施例2-5，在止血活性评价、抗菌活性评价、皮肤创伤愈合评价中可达到与实施例1相当的水平，其促进伤口愈合和抑制瘢痕形成的水平相当；本发明的实施例6–9制备的复合纤维膜生物敷料，在止血活性评价、抗菌活性评价、皮肤创伤愈合评价中优于实施例1的水平，其促进伤口愈合和抑制瘢痕形成的效果更佳。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。需注意的是，本发明中所未详细描述的技术特征，均可以通过任一现有技术实现。
Claims (10)
1.一种珍珠贝小分子肽在皮肤创伤修复中的应用，其特征在于，所述珍珠贝小分子肽具有修复皮肤创伤的新用途；
所述珍珠贝小分子肽的制备方法包括以下步骤：
S1.珍珠贝酶解物的制备；
通过预处理分离出珍珠贝外套膜；所述珍珠贝外套膜酶解选用的蛋白酶包括：中性蛋白酶、动物蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶中的任一种，蛋白酶的添加量为3000-5000U/g，pH值6.5-10，酶解温度45-55℃，酶解时间3-5小时，100℃灭酶10分钟后，离心取上清液；
S2.将步骤S1所得到的上清液，选用孔径为0.05-0.5um陶瓷膜，充分过滤后，采用不同截留分子量的超滤膜进行分离，收集分子量不同的肽段，包括分子量小于3000Da活性肽、分子量3000Da-5000Da活性肽、分子量5000Da-10000Da活性肽中的任一种，冷冻干燥即得珍珠贝小分子肽。
2.根据权利要求1所述的珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述珍珠贝包括马氏珠母贝、企鹅珍珠贝、三角帆蚌、池蝶蚌、褶纹冠蚌中的任一种。
3.根据权利要求1所述的珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述珍珠贝小分子肽为分子量小于3000Da活性肽。
4.根据权利要求1所述的珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，包括以下步骤：
（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
5.根据权利要求4所述的珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述步骤（2）中，给药的方式为：取珍珠贝小分子肽5-50mg总氮含量/ml水涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组，连续给药28天。
6.根据权利要求5所述的珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法为：所述步骤（2）中涂抹给药后，从第0天开始，每2天在同一固定高度拍照记录伤口创面情况，用软件计算伤口愈合率、记录掉痂时间；伤口愈合率测定的公式（2）为：
，公式中n是造模后天数。
7.根据权利要求5所述的珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1 mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
8.根据权利要求1所述的珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述珍珠贝小分子肽可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。
9.根据权利要求8所述的珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，所述复合纤维膜状产品为通过静电纺丝技术制得的静电纺丝复合纤维膜，所述的制备方法为：
a.将珍珠贝小分子肽溶于超纯水中，使其完全溶解，以制得珍珠贝小分子肽溶液；
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为1:1-4:1；所述基料为聚乙烯醇或聚己内酯，所述辅料为海参胶原蛋白或壳聚糖；所述溶剂为六氟异丙醇、三氟乙酸、三氟乙醇中的任一种；所述载体材料溶液的浓度为5％-10％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中珍珠贝小分子肽的浓度为0.05-0.25％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇、三氟乙酸、三氟乙醇中的任一种。
10.根据权利要求9所述的珍珠贝小分子肽在创伤修复中的应用，其特征在于，步骤d中静电纺丝电压为15-30kV，注射器针头与接收板之间的距离可为10-15cm，注射泵的推进速度可为0.01-0.50mL/min，纺丝环境温度可为35-39℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910813960.2A CN110624097A (zh) | 2019-08-30 | 2019-08-30 | 一种珍珠贝小分子肽在皮肤创伤修复中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910813960.2A CN110624097A (zh) | 2019-08-30 | 2019-08-30 | 一种珍珠贝小分子肽在皮肤创伤修复中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110624097A true CN110624097A (zh) | 2019-12-31 |
Family
ID=68969705
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910813960.2A Pending CN110624097A (zh) | 2019-08-30 | 2019-08-30 | 一种珍珠贝小分子肽在皮肤创伤修复中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110624097A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111000974A (zh) * | 2020-02-24 | 2020-04-14 | 重庆大学 | 一种兔奶活性小肽溶液及其提取方法和应用 |
| CN112043818A (zh) * | 2020-09-16 | 2020-12-08 | 温州医科大学附属第一医院 | 一种用于皮肤创伤的药物及其制备方法和应用 |
| CN112190687A (zh) * | 2020-11-19 | 2021-01-08 | 温州医科大学附属第一医院 | 一种用于减少皮肤创伤瘢痕的药物及其应用 |
| CN112877389A (zh) * | 2021-01-20 | 2021-06-01 | 广州市尚梓化工科技有限公司 | 一种珍珠亮白肽的制备方法及在美白化妆品中的应用 |
| CN115444924A (zh) * | 2022-09-29 | 2022-12-09 | 广东海洋大学 | 一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6936280B1 (en) * | 1999-10-05 | 2005-08-30 | Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) | Method for preparing a composition by extraction of mother-of-pearl, composition obtained by said method and use thereof in cosmetics and dermatology |
| CN107693835A (zh) * | 2017-09-21 | 2018-02-16 | 滨州医学院 | 一种聚乙烯醇/胶原蛋白/季铵化壳聚糖静电纺丝复合纤维膜及其制备方法 |
-
2019
- 2019-08-30 CN CN201910813960.2A patent/CN110624097A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6936280B1 (en) * | 1999-10-05 | 2005-08-30 | Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) | Method for preparing a composition by extraction of mother-of-pearl, composition obtained by said method and use thereof in cosmetics and dermatology |
| CN107693835A (zh) * | 2017-09-21 | 2018-02-16 | 滨州医学院 | 一种聚乙烯醇/胶原蛋白/季铵化壳聚糖静电纺丝复合纤维膜及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 杨发明 等: "珍珠贝外套膜酶解产物促进小鼠皮肤创伤愈合作用研究", 《大连海洋大学学报》, 17 July 2019 (2019-07-17), pages 12 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111000974A (zh) * | 2020-02-24 | 2020-04-14 | 重庆大学 | 一种兔奶活性小肽溶液及其提取方法和应用 |
| CN111000974B (zh) * | 2020-02-24 | 2021-07-27 | 重庆大学 | 一种兔奶活性小肽溶液及其提取方法和应用 |
| CN112043818A (zh) * | 2020-09-16 | 2020-12-08 | 温州医科大学附属第一医院 | 一种用于皮肤创伤的药物及其制备方法和应用 |
| CN112190687A (zh) * | 2020-11-19 | 2021-01-08 | 温州医科大学附属第一医院 | 一种用于减少皮肤创伤瘢痕的药物及其应用 |
| CN112877389A (zh) * | 2021-01-20 | 2021-06-01 | 广州市尚梓化工科技有限公司 | 一种珍珠亮白肽的制备方法及在美白化妆品中的应用 |
| CN115444924A (zh) * | 2022-09-29 | 2022-12-09 | 广东海洋大学 | 一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用 |
| CN115444924B (zh) * | 2022-09-29 | 2023-03-10 | 广东海洋大学 | 一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110624097A (zh) | 一种珍珠贝小分子肽在皮肤创伤修复中的应用 | |
| Wang et al. | Three dimensional printing bilayer membrane scaffold promotes wound healing | |
| Sato et al. | Ultrastructural observations of the capsule of chronic subdural hematoma in various clinical stages | |
| CN110538198A (zh) | 一种方格星虫水提取物在创伤修复中的应用 | |
| CN110339393B (zh) | 一种基于水凝胶-核壳微球的创伤敷料及其制备方法 | |
| CN110638836A (zh) | 一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用 | |
| Mohammadzadeh et al. | A novel egg-shell membrane based hybrid nanofibrous scaffold for cutaneous tissue engineering | |
| Chen et al. | Nanoscaled pearl powder accelerates wound repair and regeneration in vitro and in vivo | |
| Zhang et al. | PDGF-BB/SA/Dex injectable hydrogels accelerate BMSC-mediated functional full thickness skin wound repair by promoting angiogenesis | |
| CN110538312A (zh) | 一种皮肤创伤修复软膏及其制备方法 | |
| CN114058663A (zh) | 一种多功能牡蛎活性多肽及其制备方法和应用 | |
| Yuan et al. | Anti-inflammatory, antibacterial, and antioxidative bioactive glass-based nanofibrous dressing enables scarless wound healing | |
| Feng et al. | Injectable Antibacterial Hydrogel with Asiaticoside‐Loaded Liposomes and Ultrafine Silver Nanosilver Particles Promotes Healing of Burn‐Infected Wounds | |
| Zhou et al. | Hyaluronic acid-based dual network hydrogel with sustained release of platelet-rich plasma as a diabetic wound dressing | |
| Tan et al. | In situ formed scaffold with royal jelly-derived extracellular vesicles for wound healing | |
| CN107427535A (zh) | 经修饰的血凝块 | |
| CN110638999A (zh) | 一种方格星虫胶原肽在创伤修复中的应用 | |
| Chen et al. | A novel wound dressing based on a gold nanoparticle self-assembled hydrogel to promote wound healing | |
| CN113274410A (zh) | 外泌体水凝胶复合物在制备修复皮肤瘢痕的药物中的应用 | |
| WO2020225336A1 (en) | Novel polysaccharide-based hydrogel scaffolds for wound care | |
| Zihayat et al. | Wound healing activity of sheep’s bladder extracellular matrix in diabetic rats | |
| Sabzevari et al. | SA/G hydrogel containing NRF2-engineered HEK-293-derived CM improves wound healing efficacy of WJ-MSCs in a rat model of excision injury | |
| US20150328268A1 (en) | Marine Plants Extract for Wound Healing | |
| CN110522900A (zh) | 一种牡蛎活性肽在创伤修复中的应用 | |
| CN114984295A (zh) | 多孔纳米医用敷料及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20191231 |