CN115444924B - 一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用 - Google Patents

一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN115444924B
CN115444924B CN202211203028.6A CN202211203028A CN115444924B CN 115444924 B CN115444924 B CN 115444924B CN 202211203028 A CN202211203028 A CN 202211203028A CN 115444924 B CN115444924 B CN 115444924B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pearl oyster
protein peptide
composition
pearl
extract
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202211203028.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN115444924A (zh
Inventor
高加龙
温财兴
章超桦
李钰金
秦小明
曹文红
于海桥
李宗宝
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Ocean University
Original Assignee
Guangdong Ocean University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Ocean University filed Critical Guangdong Ocean University
Priority to CN202211203028.6A priority Critical patent/CN115444924B/zh
Publication of CN115444924A publication Critical patent/CN115444924A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN115444924B publication Critical patent/CN115444924B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
    • A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56—Materials from animals other than mammals
    • A61K35/63—Arthropods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明提供了一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用。所述珍珠贝蛋白肽组合物包含珍珠贝蛋白肽和方格星虫浸提物，不仅可实现对炎症反应和肾脏脂质过氧化的抑制，还可改善肺损伤，进而在治疗和/或预防急性肺损伤方面表现出优异的效果，为急性肺损伤患者提供一种优异的药物选择。

Description

一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用
技术领域
本发明属于生物制药技术领域。更具体地，涉及一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用。
背景技术
急性肺损伤是肺内因素(直接损伤)或肺外因素(间接损伤)等各种致伤因素导致的肺泡上皮细胞和毛细血管内皮细胞损伤，造成弥漫性肺间质及肺泡水肿，导致的急性低氧性呼吸功能不全或呼吸衰竭，是重症医学科中极为常见的有可能危及患者生命的疾病。
临床上针对急性肺损伤的治疗方法主要有原发病治疗法、呼吸支持治疗法(如氧疗、无创呼吸机、有创通气)等，但这些方法都相对比较昂贵、复杂，因此，药物治疗的出现成为了急性肺损伤患者的福音，能大大降低治疗成本，但现有治疗急性肺损伤的药物多为抗生素，长期使用易产生耐药性，因而寻找新的可治疗急性肺损伤的药物对患者而言十分重要。
珍珠贝蛋白肽，是珍珠贝肉经酶解、离心、喷雾干燥等过程得到的生物肽，具有多种生理调节功能，包括减轻炎症、降血压、抗氧化、降低胆固醇等多种生理活性，是海洋活性肽的重要来源，被广泛应用在特医食品和保健食品领域，如现有技术将珍珠贝蛋白肽用于皮肤创伤修复，或者用于制备孕妇保健品等，但目前尚未见珍珠贝蛋白肽在制备防治急性肺损伤药物中的相关应用。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，旨在提供一种珍珠贝蛋白肽组合物，用于制备防治急性肺损伤的药物，为急性肺损伤患者提供一种新的药物选择。
本发明的第二目的是提供一种珍珠贝蛋白肽组合物的制备方法。
本发明的第三目的是提供上述组合物或上述方法制备得到的组合物在制备治疗和/或预防急性肺损伤的药物中的应用。
本发明的第四目的是提供一种治疗和/或预防急性肺损伤的药物。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明提供了一种珍珠贝蛋白肽组合物，该组合物包含珍珠贝蛋白肽和方格星虫浸提物。
优选地，所述珍珠贝蛋白肽和方格星虫浸提物的质量比为2～4：1～3，进一步优选为3～4：1～2，最优选为3：1～2。
本发明还提供了一种珍珠贝蛋白肽组合物的制备方法，具体是将珍珠贝蛋白肽和方格星虫浸提物混匀即得。
优选地，所述珍珠贝蛋白肽的制备方法包括如下步骤：
S1.将珍珠贝肉依次进行绞碎、加水、调pH至11～13、3～5℃下搅拌2.5～3.5h、离心，再将离心所得上清液的pH调至4.3～4.7，在3～5℃下静置0.8～1.2h后继续离心，离心所得沉淀为珍珠贝肉蛋白；
S2.将S1所得珍珠贝肉蛋白加水匀浆后，所得珍珠贝肉蛋白浆依次进行酶解、离心、过滤，即得到所述珍珠贝蛋白肽。
进一步优选地，S1所述珍珠贝肉为珍珠贝全脏器。
进一步优选地，S1所述珍珠贝包括马氏珠母贝、企鹅珍珠贝、三角帆蚌、池蝶蚌中的一种或几种。
进一步优选地，S1所述加水为：加水至绞碎后的珍珠贝肉与水的质量体积比为1g：1～6mL。
进一步优选地，S1所述离心为：在3～5℃、9000～11000r/min下离心13～17min。
进一步优选地，S2所述加水为：加水至珍珠贝肉蛋白与水的质量体积比为1g：1～6mL。
进一步优选地，S2所述酶解前还调节pH至5～7。
进一步优选地，S2所述酶解使用的酶为蛋白酶，更优选为木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、动物蛋白水解复合酶中的一种或几种。
进一步优选地，S2所述酶解使用的酶量为1000～3000U/g珍珠贝肉蛋白。
进一步优选地，S2所述酶解为在40～70℃下酶解至珍珠贝肉蛋白浆的水解度为12～28％。
进一步优选地，S2所述酶解后，采用沸水浴进行灭酶，更优选沸水浴的时间为8～12min。
进一步优选地，S2所述离心为：在7000～9000r/min下离心8～12min。
进一步优选地，S2所述过滤为采用截留分子量1～3ku的超滤膜进行过滤。
进一步优选地，S2所述过滤后还进行蒸发浓缩、冷冻干燥。
优选地，所述方格星虫浸提物的制备方法为：将方格星虫依次进行去肠、去沙、清洗、打碎、匀浆、加水、水浴提取、灭菌、离心、蒸发浓缩、冻干即得。
进一步优选地，所述制备方法为：将方格星虫依次进行去肠、去沙、清洗、打碎、充分匀浆，加水至方格星虫与水的质量体积比为1g：2.8～3.2mL，50～60℃水浴提取4～6h，95～105℃灭菌，7800～8200g离心18～22min，取离心所得上清液旋转蒸发浓缩，冷冻干燥，即得到所述方格星虫浸提物。
最优选地，将方格星虫依次进行去肠、去沙、清洗、打碎、充分匀浆，加水至方格星虫与水的质量体积比为1g：3mL，置于55℃恒温搅拌水浴锅中提取5h，100℃灭菌，8000g离心20min，取离心所得上清液旋转蒸发浓缩，冷冻干燥，即得到所述方格星虫浸提物。
本发明的珍珠贝蛋白肽组合物不仅可显著提升小鼠肺组织中IL-6的含量、髓过氧化物酶(MPO)的活力，显著降低丙二醛(MDA)和TNF-α的含量，进而实现对炎症反应和肾脏脂质过氧化的抑制；还可将小鼠的肺泡大小、肺组织出血现象、肺泡腔和血管壁的炎性细胞或红细胞浸润或聚集现象、肺泡壁厚度恢复正常，上调ACE2的表达量，进而改善肺损伤，且效果显著优于单用珍珠贝蛋白肽和单用方格星虫浸提物。表明本发明的珍珠贝蛋白肽组合物在治疗和/或预防急性肺损伤方面表现出优异的效果，且组合物中两种成分发挥了协同增效的作用。因此，上述组合物或上述方法制备得到的组合物在制备治疗和/或预防急性肺损伤的药物中的应用，以及包含上述组合物或上述方法制备得到的组合物的治疗和/或预防急性肺损伤的药物均应在本发明的保护范围之内。
优选地，所述药物还包含药学上可接受的辅料，制成不同的制剂，如片剂、胶囊剂、口服液体制剂、粉剂、颗粒剂等，最优选为粉剂。
本发明具有以下有益效果：
本发明的珍珠贝蛋白肽组合物不仅可显著提升小鼠肺组织中IL-6的含量、髓过氧化物酶(MPO)的活力，显著降低丙二醛(MDA)和TNF-α的含量，进而实现对炎症反应和肾脏脂质过氧化的抑制；还可将小鼠的肺泡大小、肺组织出血现象、肺泡腔和血管壁的炎性细胞或红细胞浸润或聚集现象、肺泡壁厚度恢复正常，上调ACE2的表达量，进而改善肺损伤，且效果显著优于单用珍珠贝蛋白肽和单用方格星虫浸提物。表明本发明的珍珠贝蛋白肽组合物在治疗和/或预防急性肺损伤方面表现出优异的效果，且组合物中两种成分发挥了协同增效的作用，为急性肺损伤患者提供一种优异的药物选择。
附图说明
图1的A为空白组小鼠肺组织切片HE染色结果，图1的B为模型组小鼠肺组织切片HE染色结果，图1的C为珍珠贝蛋白肽组合物低剂量组小鼠肺组织切片HE染色结果，图1的D为珍珠贝蛋白肽组合物中剂量组小鼠肺组织切片HE染色结果，图1的E为珍珠贝蛋白肽组合物高剂量组小鼠肺组织切片HE染色结果，图1的F为珍珠贝蛋白肽组小鼠肺组织切片HE染色结果，图1的G为方格星虫浸提物组小鼠肺组织切片HE染色结果。
图2的A为空白组小鼠肺组织切片免疫组化结果，图2的B为模型组小鼠肺组织切片免疫组化结果，图2的C为珍珠贝蛋白肽组合物低剂量组小鼠肺组织切片免疫组化结果，图2的D为珍珠贝蛋白肽组合物中剂量组小鼠肺组织切片免疫组化结果，图2的E为珍珠贝蛋白肽组合物高剂量组小鼠肺组织切片免疫组化结果，图2的F为珍珠贝蛋白肽组小鼠肺组织切片免疫组化结果，图2的G为方格星虫浸提物组小鼠肺组织切片免疫组化结果。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1一种珍珠贝蛋白肽组合物的制备
一、珍珠贝蛋白肽的制备：
S1.将200g珍珠贝肉(马氏珠母贝肉)绞碎后，加水至绞碎后的珍珠贝肉与水的质量体积比为1g：3mL，用1mol/L NaOH溶液调pH至12，在4℃下匀速搅拌3h后，再在4℃、10000r/min下离心15min，再将离心所得上清液的pH用1mol/L HCl溶液调至4.5，在4℃下静置1h后继续离心(在4℃、10000r/min下离心15min)，离心所得沉淀为珍珠贝肉蛋白；
S2.将S1所得珍珠贝肉蛋白加水至珍珠贝肉蛋白与水的质量体积比为1g：3mL，匀浆得到珍珠贝肉蛋白浆，用1mol/L盐酸调节pH至6，加入2000U/g珍珠贝肉蛋白的木瓜蛋白酶，在55℃下酶解至珍珠贝肉蛋白浆的水解度为20％，采用沸水浴10min进行灭酶，再在8000r/min下离心10min，离心所得上清液采用截留分子量3ku的超滤膜进行过滤，收集<3ku的超滤透过组分，最后蒸发浓缩、冷冻干燥即得。
二、方格星虫浸提物的制备：
将300g方格星虫依次进行去肠、去沙、清洗、打碎、充分匀浆，加水至方格星虫与水的质量体积比为1g：3mL，置于55℃恒温搅拌水浴锅中提取5h，100℃灭菌，8000g离心20min，取离心所得上清液旋转蒸发浓缩，冷冻干燥，即得到所述方格星虫浸提物。
三、珍珠贝蛋白肽组合物的制备：
将前述珍珠贝蛋白肽与方格星虫浸提物混匀即得。
实施例2一种珍珠贝蛋白肽组合物的制备
一、珍珠贝蛋白肽的制备：
S1.将200g珍珠贝肉(企鹅珍珠贝肉)绞碎后，加水至绞碎后的珍珠贝肉与水的质量体积比为1g：1mL，用1mol/L NaOH溶液调pH至13，在3℃下匀速搅拌3.5h后，再在3℃、11000r/min下离心17min，再将离心所得上清液的pH用1mol/L HCl溶液调至4.7，在5℃下静置0.8h后继续离心(在3℃、11000r/min下离心17min)，离心所得沉淀为珍珠贝肉蛋白；
S2.将S1所得珍珠贝肉蛋白加水至珍珠贝肉蛋白与水的质量体积比为1g：1mL，匀浆得到珍珠贝肉蛋白浆，用1mol/L盐酸调节pH至5，加入3000U/g珍珠贝肉蛋白的中性蛋白酶，在40℃下酶解至珍珠贝肉蛋白浆的水解度为28％，采用沸水浴12min进行灭酶，再在9000r/min下离心12min，离心所得上清液采用截留分子量3ku的超滤膜进行过滤，收集<3ku的超滤透过组分，最后蒸发浓缩、冷冻干燥即得。
二、方格星虫浸提物的制备：
将300g方格星虫依次进行去肠、去沙、清洗、打碎、充分匀浆，加水至方格星虫与水的质量体积比为1g：2.8mL，置于50℃恒温搅拌水浴锅中提取6h，105℃灭菌，7800g离心22min，取离心所得上清液旋转蒸发浓缩，冷冻干燥，即得到所述方格星虫浸提物。
三、珍珠贝蛋白肽组合物的制备：
将前述珍珠贝蛋白肽与方格星虫浸提物混匀即得。
实施例3一种珍珠贝蛋白肽组合物的制备
一、珍珠贝蛋白肽的制备：
S1.将200g珍珠贝肉(三角帆蚌肉)绞碎后，加水至绞碎后的珍珠贝肉与水的质量体积比为1g：6mL，用1mol/L NaOH溶液调pH至11，在5℃下匀速搅拌2.5h后，再在5℃、9000r/min下离心13min，再将离心所得上清液的pH用1mol/L HCl溶液调至4.3，在3℃下静置1.2h后继续离心(在5℃、9000r/min下离心13min)，离心所得沉淀为珍珠贝肉蛋白；
S2.将S1所得珍珠贝肉蛋白加水至珍珠贝肉蛋白与水的质量体积比为1g：6mL，匀浆得到珍珠贝肉蛋白浆，用1mol/L盐酸调节pH至6，加入1000U/g珍珠贝肉蛋白的动物蛋白水解复合酶，在70℃下酶解至珍珠贝肉蛋白浆的水解度为12％，采用沸水浴8min进行灭酶，再在7000r/min下离心8min，离心所得上清液采用截留分子量3ku的超滤膜进行过滤，收集<3ku的超滤透过组分，最后蒸发浓缩、冷冻干燥即得。
二、方格星虫浸提物的制备：
将300g方格星虫依次进行去肠、去沙、清洗、打碎、充分匀浆，加水至方格星虫与水的质量体积比为1g：3.2mL，置于60℃恒温搅拌水浴锅中提取4h，95℃灭菌，8200g离心18min，取离心所得上清液旋转蒸发浓缩，冷冻干燥，即得到所述方格星虫浸提物。
三、珍珠贝蛋白肽组合物的制备：
将前述珍珠贝蛋白肽与方格星虫浸提物混匀即得。
实验例1珍珠贝蛋白肽组合物可有效治疗和/或预防急性肺损伤
一、急性肺损伤模型的制备
将70只SPF级BALB/c雄性小鼠(4～5周龄)随机分成7组：空白组、模型组、珍珠贝蛋白肽组合物低剂量组(实施例1珍珠贝蛋白肽组合物)、珍珠贝蛋白肽组合物中剂量组(实施例1珍珠贝蛋白肽组合物)、珍珠贝蛋白肽组合物高剂量组(实施例1珍珠贝蛋白肽组合物)、珍珠贝蛋白肽组(实施例1珍珠贝蛋白肽)、方格星虫浸提物组(实施例1方格星虫浸提物)，每组10只，按照以下分组情况，每天上午8～9点灌胃1次，各组小鼠连续给予灌胃处理15天：
(1)空白组：按照小鼠体重灌胃0.1mL/10g·BW的0.9％氯化钠溶液；
(2)模型组：按照小鼠体重灌胃0.1mL/10g·BW的0.9％氯化钠溶液；
(3)珍珠贝蛋白肽组合物低剂量组：按照小鼠体重灌胃0.04mL/10g·BW的珍珠贝蛋白肽组合物-0.9％氯化钠溶液(珍珠贝蛋白肽组合物在氯化钠溶液中的浓度为25mg/mL)；
(4)珍珠贝蛋白肽组合物中剂量组：按照小鼠体重灌胃0.08mL/10g·BW的珍珠贝蛋白肽组合物-0.9％氯化钠溶液(珍珠贝蛋白肽组合物在氯化钠溶液中的浓度为25mg/mL)；
(5)珍珠贝蛋白肽组合物高剂量组：按照小鼠体重灌胃0.16mL/10g·BW的珍珠贝蛋白肽组合物-0.9％氯化钠溶液(珍珠贝蛋白肽组合物在氯化钠溶液中的浓度为25mg/mL)；
(6)珍珠贝蛋白肽组：按照小鼠体重灌胃0.08mL/10g·BW的珍珠贝蛋白肽-0.9％氯化钠溶液(珍珠贝蛋白肽在氯化钠溶液中的浓度为25mg/mL)；
(7)方格星虫浸提物组：按照小鼠体重灌胃0.08mL/10g·BW的方格星虫浸提物-0.9％氯化钠溶液(方格星虫浸提物在氯化钠溶液中的浓度为25mg/mL)。
灌胃处理15天后，所有小鼠经腹腔注射镇静剂盐酸赛拉嗪注射液(1.0mL/kg)，待小鼠稳定安静后，空白组小鼠经鼻腔滴入50μL 0.9％氯化钠溶液，其余三组小鼠经鼻腔滴入50μL 2.5mg/mL LPS溶液，滴入5h即得到脂多糖诱导急性肺损伤模型，造模结束后，将小鼠断颈处死，迅速取出肺组织，保存备用。
二、珍珠贝蛋白肽组合物可实现对炎症反应和肾脏脂质过氧化的抑制
将各组小鼠肺组织分别置于预冷的生理盐水中进行匀浆，离心(4℃，3000rpm，10min)后取上清，根据丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)检测试剂盒(购自南京建成生物工程研究所)的说明书，对小鼠肺组织中丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)活力进行检测，并根据ELISA酶联免疫检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)的说明书，对炎症因子IL-6、TNF-α的含量进行测定，测定结果如表1所示(其中，“低剂量”表示“珍珠贝蛋白肽组合物低剂量组”，“中剂量”表示“珍珠贝蛋白肽组合物中剂量组”，“高剂量”表示“珍珠贝蛋白肽组合物高剂量组”)。
表1小鼠肺组织中氧化指标与炎症指标测定结果
Figure BDA0003873174420000071
Figure BDA0003873174420000081
由表1可知：
(1)与空白组相比，模型组小鼠肺组织的MDA含量和TNF-α含量均明显上升(p<0.05)，其余指标均呈下降趋势，说明LPS造成肺组织严重损伤，急性肺损伤模型构建成功。
(2)与模型组相比，珍珠贝蛋白肽组合物(低剂量、中剂量、高剂量)组的MPO活力和IL-6含量均呈上升趋势，MDA含量和TNF-α含量均呈下降趋势，表明本发明的珍珠贝蛋白肽组合物可改善LPS对小鼠肺组织的损伤，进而实现对炎症反应和肾脏脂质过氧化的抑制，从而有效治疗和/预防急性肺损伤。
(3)与珍珠贝蛋白肽组或方格星虫浸提物组相比，珍珠贝蛋白肽组合物(低剂量、中剂量、高剂量)组的MPO活力、IL-6含量、MDA含量和TNF-α含量整体上更接近于空白组，说明珍珠贝蛋白肽组合物的效果优于珍珠贝蛋白肽或方格星虫浸提物，即本发明的珍珠贝蛋白肽组合物中，这两种成分发挥了协同增效的作用。
三、珍珠贝蛋白肽组合物可改善肺损伤
取各组小鼠肺组织的右肺上叶，用4％多聚甲醛固定、石蜡包埋后，取最大面切片，并进行小鼠肺组织病理学分析(HE染色)以及免疫组化分析，再在光学显微镜下进行组织形态观察。
小鼠肺组织切片HE染色结果(×200)如图1所示，小鼠肺组织切片免疫组化结果(×400)如图2所示。其中，图1的A为空白组小鼠肺组织切片HE染色结果，图1的B为模型组小鼠肺组织切片HE染色结果，图1的C为珍珠贝蛋白肽组合物低剂量组小鼠肺组织切片HE染色结果，图1的D为珍珠贝蛋白肽组合物中剂量组小鼠肺组织切片HE染色结果，图1的E为珍珠贝蛋白肽组合物高剂量组小鼠肺组织切片HE染色结果，图1的F为珍珠贝蛋白肽组小鼠肺组织切片HE染色结果，图1的G为方格星虫浸提物组小鼠肺组织切片HE染色结果；图2的A为空白组小鼠肺组织切片免疫组化结果，图2的B为模型组小鼠肺组织切片免疫组化结果，图2的C为珍珠贝蛋白肽组合物低剂量组小鼠肺组织切片免疫组化结果，图2的D为珍珠贝蛋白肽组合物中剂量组小鼠肺组织切片免疫组化结果，图2的E为珍珠贝蛋白肽组合物高剂量组小鼠肺组织切片免疫组化结果，图2的F为珍珠贝蛋白肽组小鼠肺组织切片免疫组化结果，图2的G为方格星虫浸提物组小鼠肺组织切片免疫组化结果。
结合图1～2可知：
(1)空白组小鼠肺泡大小正常未见充血，肺组织未见出血，肺泡腔和血管壁无明显的炎性细胞或红细胞浸润或聚集，未见肺泡壁增厚；
(2)与空白组比较，模型组小鼠部分肺泡断裂且完整肺泡结构较少，肺泡变小，肺泡壁增厚，血管周围浸润严重；
(3)与模型组比较，珍珠贝蛋白肽组合物(低剂量、中剂量、高剂量)组对小鼠肺损伤情况有所改善，表明本发明的珍珠贝蛋白肽组合物对小鼠肺损伤具有改善效果；
(4)与珍珠贝蛋白肽组或方格星虫浸提物组相比，珍珠贝蛋白肽组合物(低剂量、中剂量、高剂量)组小鼠肺组织肺泡壁厚度有所减少，肺组织被破坏程度也有所减轻，说明珍珠贝蛋白肽组合物的效果优于珍珠贝蛋白肽或方格星虫浸提物，即本发明的珍珠贝蛋白肽组合物中，这两种成分发挥了协同增效的作用。
(5)与空白组相比，模型组小鼠肺组织ACE2的表达明显下降；
(6)与模型组相比，珍珠贝蛋白肽组合物组小鼠肺组织ACE2的表达情况得到显著改善，且效果优于珍珠贝蛋白肽组和方格星虫浸提物组。
以上均表明本发明的珍珠贝蛋白肽组合物可将小鼠的肺泡大小、肺组织出血现象、肺泡腔和血管壁的炎性细胞或红细胞浸润或聚集现象、肺泡壁厚度恢复正常，上调ACE2的表达量，进而改善肺损伤，从而实现对急性肺损伤的有效治疗和/或预防，且这种功效显著优于单用组(珍珠贝蛋白肽或方格星虫浸提物)，表明本发明的珍珠贝蛋白肽组合物在防治急性肺损伤方面发挥了协同增效的作用。
此外，本发明还将实施例2、3所得珍珠贝蛋白肽组合物按照本实验例的方法对其防治急性肺损伤的作用进行了测试，测试结果与本实验例效果十分接近，表明本发明的珍珠贝蛋白肽组合物不仅可显著提升小鼠肺组织中IL-6的含量、髓过氧化物酶(MPO)的活力，显著降低丙二醛(MDA)和TNF-α的含量，进而实现对炎症反应和肾脏脂质过氧化的抑制；还可将小鼠的肺泡大小、肺组织出血现象、肺泡腔和血管壁的炎性细胞或红细胞浸润或聚集现象、肺泡壁厚度恢复正常，上调ACE2的表达量，进而改善肺损伤。因此，本发明的珍珠贝蛋白肽组合物在治疗和/或预防急性肺损伤方面表现出协同增效的效果，可为急性肺损伤患者提供一种优异的药物选择。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种珍珠贝蛋白肽组合物，其特征在于，包含珍珠贝蛋白肽和方格星虫浸提物；
其中，所述珍珠贝蛋白肽的制备方法包括如下步骤：
S1. 将珍珠贝肉依次进行绞碎、加水、调pH至11～13、3～5℃下搅拌2.5～3.5h、离心，再将离心所得上清液的pH调至4.3～4.7，在3～5℃下静置0.8～1.2h后继续离心，离心所得沉淀为珍珠贝肉蛋白；
S2. 将S1所得珍珠贝肉蛋白加水匀浆后，所得珍珠贝肉蛋白浆依次进行酶解、离心、过滤，即得到所述珍珠贝蛋白肽；
所述方格星虫浸提物的制备方法为：将方格星虫依次进行去肠、去沙、清洗、打碎、匀浆、加水、水浴提取、灭菌、离心、蒸发浓缩、冻干即得。
2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述珍珠贝蛋白肽和方格星虫浸提物的质量比为2～4：1～3。
3.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，将所述珍珠贝蛋白肽和方格星虫浸提物混匀即得。
4.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，S1所述珍珠贝肉为珍珠贝全脏器。
5.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，S2所述酶解使用的酶为蛋白酶。
6.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，S2所述酶解为在40～70℃下酶解至珍珠贝肉蛋白浆的水解度为12～28%。
7.权利要求1～6任一所述组合物在制备治疗和/或预防急性肺损伤的药物中的应用。
8.一种治疗和/或预防急性肺损伤的药物，其特征在于，包含权利要求1～6任一所述组合物。
9.根据权利要求8所述药物，其特征在于，还包含药学上可接受的辅料，制成不同的制剂。
10.根据权利要求9所述药物，其特征在于，所述制剂为片剂、胶囊剂、口服液体制剂、粉剂、颗粒剂中的一种或几种。
CN202211203028.6A 2022-09-29 2022-09-29 一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用 Active CN115444924B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211203028.6A CN115444924B (zh) 2022-09-29 2022-09-29 一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211203028.6A CN115444924B (zh) 2022-09-29 2022-09-29 一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN115444924A CN115444924A (zh) 2022-12-09
CN115444924B true CN115444924B (zh) 2023-03-10

Family

ID=84309190

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211203028.6A Active CN115444924B (zh) 2022-09-29 2022-09-29 一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115444924B (zh)

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101982114A (zh) * 2010-09-26 2011-03-02 广东海洋大学 一种马氏珍珠贝肉抗疲劳口服液的生产方法
JP2014074016A (ja) * 2012-09-13 2014-04-24 Mikimoto Pharmaceut Co Ltd メタロチオネイン産生促進剤
CN106666707A (zh) * 2016-11-23 2017-05-17 广西壮族自治区海洋研究所 方格星虫抗氧化提取物的制备方法和用途
CN109453188A (zh) * 2018-12-22 2019-03-12 广东医科大学 一种沙虫多糖在制备防治骨质疏松药物或保健品中的应用
CN109892661A (zh) * 2019-03-27 2019-06-18 集美大学 一种珍珠贝肽及其生产方法
CN110538198A (zh) * 2019-08-30 2019-12-06 广东海洋大学 一种方格星虫水提取物在创伤修复中的应用
CN110538312A (zh) * 2019-08-30 2019-12-06 广东海洋大学 一种皮肤创伤修复软膏及其制备方法
CN110624097A (zh) * 2019-08-30 2019-12-31 广东海洋大学 一种珍珠贝小分子肽在皮肤创伤修复中的应用
CN110638999A (zh) * 2019-08-30 2020-01-03 广东海洋大学 一种方格星虫胶原肽在创伤修复中的应用
CN113101416A (zh) * 2021-04-13 2021-07-13 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 一种方格星虫脱细胞生物材料、制备方法及其应用

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101982114A (zh) * 2010-09-26 2011-03-02 广东海洋大学 一种马氏珍珠贝肉抗疲劳口服液的生产方法
JP2014074016A (ja) * 2012-09-13 2014-04-24 Mikimoto Pharmaceut Co Ltd メタロチオネイン産生促進剤
CN106666707A (zh) * 2016-11-23 2017-05-17 广西壮族自治区海洋研究所 方格星虫抗氧化提取物的制备方法和用途
CN109453188A (zh) * 2018-12-22 2019-03-12 广东医科大学 一种沙虫多糖在制备防治骨质疏松药物或保健品中的应用
CN109892661A (zh) * 2019-03-27 2019-06-18 集美大学 一种珍珠贝肽及其生产方法
CN110538198A (zh) * 2019-08-30 2019-12-06 广东海洋大学 一种方格星虫水提取物在创伤修复中的应用
CN110538312A (zh) * 2019-08-30 2019-12-06 广东海洋大学 一种皮肤创伤修复软膏及其制备方法
CN110624097A (zh) * 2019-08-30 2019-12-31 广东海洋大学 一种珍珠贝小分子肽在皮肤创伤修复中的应用
CN110638999A (zh) * 2019-08-30 2020-01-03 广东海洋大学 一种方格星虫胶原肽在创伤修复中的应用
CN113101416A (zh) * 2021-04-13 2021-07-13 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 一种方格星虫脱细胞生物材料、制备方法及其应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Jiang SQ等.Radioprotective effects of Sipunculus nudus L. polysaccharide combined with WR-2721, rhIL-11 and rhG-CSF on radiation-injured mice.2015,56(3),第515-522页. *
JunLi等.Expression of allograft inflammatory factor-1 (AIF-1) in response to bacterial challenge and tissue injury in the pearl oyster, Pinctada martensii.2013,34(1),第365-371页. *
孙瑞坤，等.方格星虫酶解工艺优化及酶解物免疫活性.2018,38(3),第54-61页. *
王利霞，等.马氏珠母贝肉提取物对小鼠急性酒精性肝损伤的影响.2021,41(6),第99-107页. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN115444924A (zh) 2022-12-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2022204450B2 (en) Uses of oxygenated cholesterol sulfates (OCS)
Mahomoodally et al. Momordica charantia extracts inhibit uptake of monosaccharide and amino acid across rat everted gut sacs in-vitro
CN115444924B (zh) 一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用
JPH02154693A (ja) 機能性新規ペプチド及びその利用
KR930002011B1 (ko) 혈압 조절제
CN115444923A (zh) 牡蛎肽在制备治疗和/或预防急性肺损伤的药物中的应用
CN116196338B (zh) 一种方格星虫酶解液的应用
CN112891362B (zh) 一种用于治疗脓毒症的药物组合物及其应用
EP3962471B1 (en) Composition for the prevention and treatment of urinary stones
CN108969517B (zh) 一种银杏内酯组合物在制备用于肾组织纤维化的药物中的应用
Prioleau et al. Penicillin and epluchage treatment of hepatic actinomycosis
WO2009115429A1 (en) Food preparation and pharmaceutical composition containing an embryonic extract
Al-Shiharbi et al. Cervical thymic cyst case report
AU749673B2 (en) Use of glycosaminoglycans for producing pharmaceutical preparations for treating diabetes-associated diseases of the eye
CN116478243B (zh) 血吸虫来源肽在防治代谢性疾病中的应用
RU2673555C2 (ru) Способ применения &#34;Ягель детокс&#34; в качестве средства для лечения туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью
TWI838163B (zh) 預防及/或改善口腔黏膜下纖維化之組成物及其用途
CN111643498B (zh) 一种治疗肾结石的药物组合物及其用途
RU2058788C1 (ru) Способ получения препарата инсулина для перорального применения
TWI262081B (en) Immunopotentiator and method for preparing the same
RU2122418C1 (ru) Средство для лечения хронического гепатита неинфекционной этиологии
CN114948989A (zh) 氢化镁在制备防治肾结晶结石病的药物中的应用
Luciani Human physiology v. 2, 1913
WO2020029221A1 (zh) 具有抑制脂肪形成及抗氧化活性的组合物及其用途
KR20030028855A (ko) 렉틴으로 강화된 겨우살이 추출물을 유효성분으로 하는항암제용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant