TWI838163B - 預防及/或改善口腔黏膜下纖維化之組成物及其用途 - Google Patents
預防及/或改善口腔黏膜下纖維化之組成物及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- TWI838163B TWI838163B TW112108800A TW112108800A TWI838163B TW I838163 B TWI838163 B TW I838163B TW 112108800 A TW112108800 A TW 112108800A TW 112108800 A TW112108800 A TW 112108800A TW I838163 B TWI838163 B TW I838163B
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- lactobacillus
- liquid
- culture medium
- active substance
- fibroblasts
- Prior art date
Links
- 208000005207 oral submucous fibrosis Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 206010031023 Oral submucosal fibrosis Diseases 0.000 title claims abstract description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title abstract description 29
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims abstract description 56
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims abstract description 56
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims abstract description 34
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 20
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 40
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 37
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 29
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 22
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 17
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 16
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 11
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 8
- 108010029483 alpha 1 Chain Collagen Type I Proteins 0.000 claims description 6
- 210000005178 buccal mucosa Anatomy 0.000 claims description 6
- 241000186684 Lactobacillus pentosus Species 0.000 claims description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 5
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000008602 contraction Effects 0.000 abstract description 9
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 abstract description 8
- 230000005012 migration Effects 0.000 abstract description 6
- 238000013508 migration Methods 0.000 abstract description 6
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 abstract description 4
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 210000000651 myofibroblast Anatomy 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 7
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 7
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 7
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 5
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- HYOAGWAIGJXNQH-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-1-chloropropane Chemical compound CCC(Cl)Br HYOAGWAIGJXNQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 244000080767 Areca catechu Species 0.000 description 2
- 235000006226 Areca catechu Nutrition 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 2
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- -1 ampoules Substances 0.000 description 2
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N diethyl pyrocarbonate Chemical compound CCOC(=O)OC(=O)OCC FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 2
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 2
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- AXTGDCSMTYGJND-UHFFFAOYSA-N 1-dodecylazepan-2-one Chemical compound CCCCCCCCCCCCN1CCCCCC1=O AXTGDCSMTYGJND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBZFUFAFFUEMEI-UHFFFAOYSA-M Acesulfame k Chemical compound [K+].CC1=CC(=O)[N-]S(=O)(=O)O1 WBZFUFAFFUEMEI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 210000003771 C cell Anatomy 0.000 description 1
- 102100033601 Collagen alpha-1(I) chain Human genes 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108010028690 Fish Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 239000004705 High-molecular-weight polyethylene Substances 0.000 description 1
- 101001121408 Homo sapiens L-amino-acid oxidase Proteins 0.000 description 1
- 101000827703 Homo sapiens Polyphosphoinositide phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100026388 L-amino-acid oxidase Human genes 0.000 description 1
- 241000186610 Lactobacillus sp. Species 0.000 description 1
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 1
- 102000002151 Microfilament Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010040897 Microfilament Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 description 1
- 239000004384 Neotame Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 102100023591 Polyphosphoinositide phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 101100233916 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) KAR5 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 239000004376 Sucralose Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000000619 acesulfame-K Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 229960003639 laurocapram Drugs 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000037323 metabolic rate Effects 0.000 description 1
- 210000003632 microfilament Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000020763 muscle atrophy Effects 0.000 description 1
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- 235000019412 neotame Nutrition 0.000 description 1
- HLIAVLHNDJUHFG-HOTGVXAUSA-N neotame Chemical compound CC(C)(C)CCN[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 HLIAVLHNDJUHFG-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 108010070257 neotame Proteins 0.000 description 1
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003950 pathogenic mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000004526 pharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000013322 soy milk Nutrition 0.000 description 1
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 235000019408 sucralose Nutrition 0.000 description 1
- BAQAVOSOZGMPRM-QBMZZYIRSA-N sucralose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](Cl)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@]1(CCl)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CCl)O1 BAQAVOSOZGMPRM-QBMZZYIRSA-N 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 1
Abstract
本揭露提供包含戊糖乳桿菌
Lactobacillus pentosusGK4之組合物，可抑制口腔黏膜下纖維化母細胞活性、纖維化母細胞移行能力、纖維化母細胞膠體收縮能力及纖維化母細胞肌動蛋白基因表現量，以用於預防及/或改善口腔黏膜下纖維化。
Description
本揭露係關於一種預防及/或改善口腔黏膜下纖維化的益生菌組成物。具體而言，係關於包含戊糖乳桿菌（
Lactobacillus pentosus）GK4之活性物質的組成物。
口腔黏膜下纖維化(oral submucous fibrosis， OSF)的肇因與嚼食檳榔的相關性已被廣泛探討並證實，其病灶不會因為停止嚼食檳榔而自然恢復，其為不可逆的組織變化。口腔黏膜下纖維化症常見的臨床病徵包含兩頰黏膜出現上皮萎縮與在固有層及黏膜下層逐漸堆積膠原蛋白。過度僵硬的口腔除了使病人張口受限，同時也影響其說話與進食能力，但也因張口受限而無法接受牙科治療，是十分棘手的狀況。
口腔黏膜下纖維化致病機制
口腔黏膜下纖維化的病理組織特徵中可見慢性發炎的現象，並在黏膜下層有大量的結締組織沉積，一般認為這些結締組織沉積應與纖維母細胞的過度活化或是持續活化、膠原蛋白降解減少有關。
肌纖維母細胞(myofibroblast)是一種介於纖維母細胞和平滑肌细胞間並同時具有兩種特徵的細胞，其主要功能是分泌膠原蛋白，並具有重組、排列膠原蛋白的能力，因此肌纖維母細胞在傷口的癒合過程中扮演重要的角色。
傷口癒合可分為四個時期: 止血期、炎症期、增生期與重塑期。在正常傷口癒合過程中，肌纖維母細胞會在增生期出現於傷口處幫助傷口癒合。肌纖維母細胞胞質內的大量微絲束(microfilament bundles)具有收縮和遷移的能力，可以移動至傷口處，藉由其收縮能力幫助傷口縮小，並分泌膠原蛋白幫助傷口癒合；進入重塑期後，此時傷口組織已逐漸穩定，肌纖維母細胞數目會因細胞凋亡(apoptosis) 而大量減少，膠原蛋白不再被大量分泌，因此疤痕組織不會過度增生，是為正常傷口癒合過程。但是在纖維化病變的過程中，肌纖維母細胞沒有在傷癒後及時的凋亡消失，而是在組織中持續的存在並分泌合成大量的細胞外基質(extracellular matrix，ECM)在組織中沉積，使正常組織結構發生病變，功能遭到破壞，最終導致纖維化。病人張口受限與肌肉萎縮也被認為與ECM 蛋白種類逐漸被過多的第一型膠原蛋白(collagen type I alpha 1， COL1A1)取代有關，因此肌纖維母細胞便被認為是治療纖維化疾病的關鍵。
肌纖維母細胞的分化是一個複雜的過程，受到多種訊息的調控。Y. C. Chang 等人在 2014 年的實驗中發現，口腔黏膜下纖維化的組織中有大量的平滑肌肌動蛋白(alpha- smooth muscle actin，α-SMA)表現，而平滑肌肌動蛋白即是肌纖維母細胞分化過程中的一個重要標記，代表肌纖維母細胞也活躍於口腔黏膜下纖維化的組織中，應為口腔黏膜下纖維化病程演進的重要關鍵。口腔黏膜下纖維化已被公認為是一種癌前病變，具有惡性變化的可能，萬一口腔內組織出現惡性變化時，也可能因為不易檢查而造成病情的延誤，故不應置之不理。目前雖然有些藥物可供注射，但是治療效果仍有爭議，醫界普遍較認可的治療方式為疤痕切除後進行皮膚或皮瓣移植，但因侵入性較大，且術後需患者主動進行張口復健，否則可能發生疤痕攣縮，使手術結果不如預期，仍不是最理想的治療。因此除了手術切除更急需更有力的藥物來抑制病程，降低病患的不適。
為達成上述目的，本揭露係提供一種預防及/或改善口腔黏膜下纖維化之組合物，其包含乳桿菌（Lactobacillus）之活性物質。
較佳地，該乳桿菌係包含戊糖乳桿菌
Lactobacillus pentosusGK4，其寄存於財團法人食品工業發展研究所之生物資源研究中心，寄存編號為BCRC- 910858。
較佳地，該乳桿菌的活性物質係以下列方法製備：
（a）取該乳桿菌接種於固態培養基以進行固態培養以形成菌落；
（b）將步驟（a）培養的菌落（colony）接種於液體培養基進行液態培養以得含菌體之液態培養基；
（c）將步驟（b）含菌體之液態培養基接種於發酵槽進行液態放大以得菌液；
（d）將菌液離心後取其上清液並過濾得到含有該活性物質的發酵液。
較佳地，其形態為粉劑、滴劑、錠劑、造粒、栓劑、微膠囊、安瓶（ampoule/ampule）、液劑噴劑、塞劑或膏狀劑。
較佳地，其中該組合物為藥品、飼料、飲料、營養補充品、乳製品、食品或保健食品。
依據本揭露的另一目的，係提供一種乳桿菌（
Lactobacillus）之活性物質用於製備改善口腔黏膜下纖維化之醫藥組合物的用途。
較佳地，該乳桿菌為戊糖乳桿菌
Lactobacillus pentosusGK4，其寄存於財團法人食品工業發展研究所之生物資源研究中心，寄存編號為 BCRC- 910858。
較佳地，該醫藥組合物係施用。
較佳地，該醫藥組合物係降低纖維化母頰黏膜纖維母細胞的細胞增生率。
較佳地，該醫藥組合物係抑制纖維化頰黏膜纖維母細胞活性。
較佳地，該醫藥組合物係降低SMA及COL1A1基因的表現量。
較佳地，該醫藥組合物的施用量為5至20 μl/cm
2。
藉由上述技術特徵，本揭露提供了可以降低纖維化母頰黏膜纖維母細胞的細胞增生率、降低SMA及COL1A1基因的表現量，以抑制纖維化頰黏膜纖維母細胞活性的活性物質，因此可以達成改善口腔黏膜下纖維化的效果。
本文中所述「預防（prevention或preventing）」係指使一個體免於一疾病、不適、或有害症狀的發生。在一個可行態樣中，本文中所述「預防（prevention或preventing）」係指患者在未出現口腔黏膜下纖維化的症狀時，避免該患者出現口腔黏膜下纖維化的症狀。
本文中所述「改善」係指緩解症狀，具體來說係指降低疾病、不適、或有害症狀的程度。在較佳的一個具體態樣中，係指減緩口腔黏膜下纖維化的發展。
本文中所述「菌體」係指本揭露所採用的乳桿菌在各種培養階段中乳桿菌本身的結構。在一個具體態樣中，菌體係指完整或部分的乳桿菌結構。在一個具體態樣中，菌體係指由單一個細菌分裂、繁殖所形成的乳桿菌族群的菌落。在一個具體態樣中，培養階段係指固態培養、液態培養或接種於發酵槽的液態放大。
本文中所述「活性物質」係指本揭露所採用的乳桿菌菌體經過特定實驗步驟處理後所篩選出來的物質，或是菌體與培養基或培養液的混合物。在一個具體態樣中，活性物質係指經過離心分離的菌泥、冷凍乾燥的菌粉或溶劑萃取的萃取物。在一個具體態樣中，活性物質係指含有菌體的固態培養基、含菌體的液態培養基或經發酵槽液態放大後的菌液。
試驗物質培養
關於菌種固態培養，將乳桿菌菌體接種於固態培養基上，以進行固態培養來活化菌體並形成菌落（colony formation）。在一較佳的實施態樣中，該固態培養的溫度為30至55℃，更佳為32至45℃。在一較佳的實施態樣中，該固態培養的時間為0.5至3天，更佳為1至2.5天。在一較佳的實施態樣中，該固態培養基為MRS agar。
關於液態培養，待固態培養基上的菌落生長完成後，將單一菌落挑起接種於含有MRS液態培養基的試管，以液態培養來活化。在一較佳的實施態樣中，MRS液態培養的溫度為30至55℃，更佳為32至45℃。在一較佳的實施態樣中，MRS液態培養的時間為12至25小時，更佳為20小時。在一較佳的實施態樣中，液態培養的酸鹼值為pH5.0至7.0，更佳為pH5.5至6.5。在一較佳的實施態樣中，液態培養基的配方如下述表1所示。
表1
| 成分 | 比例（重量百分比） |
| 碳源 | 0至10 % |
| 豆漿 | 0.1~5 % |
| 氮源 | 0.1~5 % |
| 離子 | 0.01~2 % |
| 水 | 剩餘部分 |
關於發酵培養，將MRS液態培養基中的菌體接種於含有1L液態培養液的錐型瓶中。待液態培養基中的菌體生長完成後，將該菌體連同液態培養基接種於發酵槽中，以進行液態放大來獲得含菌液。在一較佳的實施態樣中，發酵槽培養的溫度為30至55℃，更佳為35至39℃。在一較佳的實施態樣中，發酵槽培養的時間為16至20小時，更佳為17至19小時。
乳桿菌GK4的培養基中可選用的碳源包括但不限於葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、甘露糖、山梨糖醇、甘油、糖蜜或其組合，前述成分在培養基中的重量分及百分比可視情況調整。在一具體實施例中，碳源為葡萄糖。乳桿菌GK4的培養基中可選用的氮源包括但不限於大豆蛋白、酵母萃取物、牛肉萃取物、酪蛋白粉、乳清蛋白粉、魚蛋白水解物、植物萃取蛋白或其組合，前述成分在培養基中的重量分及百分比可視情況調整。在一具體實施例中，氮源為酵母萃取物。碳源及氮源相對於培養基總重量的添加比例對於培養成效有不等的影響，分別為介於1至10重量百分比(wt%)，較佳地為3wt%至7wt%。在一具體實施例中，培養基包含葡萄糖及酵母萃取物，且葡萄糖及酵母萃取物相對於培養基總重量的添加比例分別為1wt%至10wt%，較佳地為3wt%至7wt%。在一具體實施例中，培養基僅包含葡萄糖或僅包含酵母萃取物，且葡萄糖或酵母萃取物相對於培養基總重量的添加比例為1wt%至10wt%，較佳地為3wt%至7wt%。乳桿菌GK4可培養於固體培養基或液體培養基中，其培養溫度介於32℃至42℃之間，較佳地為35℃至40℃之間，更佳地為37℃。
發酵培養之液態培養基的組成如下表2所示。
表2
| 成分 | 比例（重量百分比） |
| 碳源 | 0至10 % |
| 氮源 | 0至10 % |
| 離子 | 0.01至2 % |
| 水 | 剩餘部分 |
培養完成的乳桿菌GK4進行離心，其離心轉速介於2000 rpm至12000 rpm之間，離心時間介於2分鐘至15分鐘間。在一具體實施例中，離心轉速介於5000 rpm至10000 rpm之間，離心時間介於5分鐘至12分鐘間，接著取出上清液調整pH值至7.0後滅菌過濾，即得本案之包含乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品。
本揭露包含乳桿菌之活性物質的組合物，進一步包含添加劑。在一較佳的實施態樣中，該添加劑可為賦型劑、防腐劑、稀釋劑、填充劑、吸收促進劑、或其組合。該賦型劑可選自檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸鈣、蔗糖或其組合。該防腐劑可延長醫藥組合物的儲藏期限，例如苯甲醇、對羥基苯甲酸（parabens）。稀釋劑可選自水、乙醇、丙二醇、甘油或其組合。填充劑可選自乳糖、牛乳糖、高分子量舉乙二醇或其組合。吸收促進劑可選自二甲基亞碸（DMSO）、月桂氮卓酮、丙二醇、甘油、聚乙二醇或其組合。甜味劑可選自安塞甜（Acesulfame K）、阿斯巴甜（aspartame）、糖精（saccharin）、三氯蔗糖／蔗糖素（sucralose）、紐甜（neotame）或其組合。除上述所列舉的添加劑以外，在不影響組合物的醫藥效果前提下，可依需求選用適合的其他添加劑。
該組合物於醫藥、食品添加物領域中可開發為不同商品。在一較佳實施態樣中，該組合物為一藥品、飼料、飲料、營養補充品、乳製品、食品或保健食品。
該組合物可根據受施予者之需要，而採用不同形態。在一較佳實施態樣中，該組合物的形態為粉劑、滴劑、錠劑、造粒、栓劑、微膠囊、安瓶（ampoule/ampule）、液劑噴劑或塞劑。
本揭露的組合物可使用於動物或是人類。在不影響乳桿菌之活性物質發揮效果的前提下，包含乳桿菌之活性物質的組合物可製為任何藥物型態，並根據藥物型態以適用的途徑施予該動物或人類。本揭露的組合物根據該組合物的型態，在預定的時間點以適當的途徑施予受試者適合劑量的組合物。
在一較佳實施態樣中，施予途徑包含口服、靜脈注射、皮下注射、腹腔注射等。在一較佳實施態樣中，預定時間點包含每餐、每天、每週。
本文中所述「有效量」係指一使用量，其足以使前述改善口腔黏膜下纖維化的效果產生。
有效量於活體外細胞培養實驗，在每一個培養中所用之細胞培養液的總體積定義為「μg/ml」。經下列計算公式，由活體外細胞培養實驗所得到的有效量可轉換為供動物使用的有效量，供動物使用的有效量可再根據新陳代謝率轉換為人類的有效量。
以下將以具體實施例配合圖式說明本案所提供的乳桿菌GK4的製備方法及其效果。
試驗樣品的製備
菌種培養，將乳桿菌GK4菌體接種於固態培養基上，該固態培養的溫度為32至45℃，為1至2.5天，固態培養基為MRS agar。待固態培養基上的菌落生長完成後，將單一菌落挑起接種於含有MRS液態培養基的試管，以液態培養來活化，MRS液態培養的溫度為32至45℃，培養的時間為20小時，液態培養的酸鹼值為pH5.5至6.5。液態培養基的配方如下述表3所示。
表3
| 成分 | 比例（重量百分比） |
| 葡萄糖 | 5% |
| 酵母萃取物 | 1.5% |
| 離子 | 0.5% |
| 水 | 93% |
將MRS液態培養基中的菌體接種於含有1L液態培養液的錐型瓶中。待液態培養基中的菌體生長完成後，將該菌體連同液態培養基接種於發酵槽中，以進行液態放大來獲得含菌液，發酵槽培養的溫度為25至37℃，培養時間為17至19小時。
培養完成的乳桿菌GK4進行離心，其離心轉速為5000 rpm，離心時間為120分鐘。取出上清液(即發酵液)後，調整pH值至7.0，加熱121°C，1分鐘，以0.22 μm孔徑過濾備用，即製得本揭露含有乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品。
頰黏膜纖維母細胞
(BMF
，
Normal buccul mucosal fibroblasts
，
BMFs)
和纖維化頰黏膜纖維母細胞
(fibrotic buccul mucosal fibroblasts
，
fBMF)
初代培養
本揭露所使用的所有口腔黏膜下纖維化組織和正常組織樣本均來自中山醫學大學所招募之患者，並透過中山醫學大學人體試驗倫理審查委員會進行審查(CSMUH No:CS2-20039)。本揭露將使用第三代至第八代之間的細胞培養。
細胞存活率分析
(MTT Assay)
細胞以2x10
4的細胞數均勻種在24 孔盤每個孔中，待細胞長到8成滿，將每個GK4活性物質之試驗樣品各取12.5 μl、25 μl以及50 μl 與細胞培養於37℃培養箱中。24 小時後，移除上清液，每個孔中加入500 μl 以細胞培養液10倍稀釋之MTT (3- (4,5-cimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) 緩衝液 (最終濃度為0.5 mg/ml)，放置37℃培養箱中作用3 個小時，接著去除上清液，於各個孔加入 500 μl 的異丙醇(isopropanol)將結晶溶出，利用搖晃器室溫搖晃24 孔盤10 分鐘，均勻混合後每個孔取100 μl 至96 孔盤，以分光光度計測定波長 570 nm 吸光值，即可測得細胞相對存活率，由吸光強度可得知存活的細胞數多寡。
評估乳桿菌
GK4
於口腔黏膜下纖維化母細胞移行能力
取2×10
4細胞與不含血清的培養液 250 μl 加入轉移盤 ( Transwell®， 8 μm 孔徑， polycarbonatemembrane， Corning ® Costar ) 之上層盤，將上層盤中加入12.5 μl、25 μl 以及50 μl 之乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品，下層盤加入 750 μl 含有10 % FBS 的培養液，放入細胞培養箱培養，誘使細胞移行。24 小時後，將轉移盤取出，並以 PBS 沾濕的棉花棒將上層盤內未移行的細胞清除，加入4 % 甲醇固定10 分鐘，接著用PBS 清洗 2 次，以 0.1% 結晶紫染細胞後，最後再用 PBS 清洗2 次，將上層盤的膜小心切下放於載玻片，以顯微鏡 100 X 視野觀察，每個膜取5個視野，平均值為細胞相對移行能力。
評估乳桿菌
GK4
於口腔黏膜下纖維化母細胞膠體收縮能力影響
將細胞繼代收下後，以細胞量2×10
5加入1.5 ml 微量離心管並用300 ×g 離心5分鐘後移除上清液。加入500 μl 的含乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品之膠原蛋白溶液(配置表如下表4)混合均勻後，注入24 孔盤並置入37℃培養箱2 小時等待凝固。接著準備合適且滅菌過的刮勺，以利將凝固的膠體從24 孔盤壁面剝離，並額外加入500 μl 無血清(serum-free)培養液，再放入37℃培養箱靜置1至5天觀察膠體收縮情形，拍照並使用ImageJ (National Institutes of Health， Bethesda， MA， USA)軟體計算面積。
表4
乳桿菌
GK4
調控口腔黏膜下纖維化母細胞之肌纖維母細胞相關標記
2×10
5細胞均勻種入10公分培養皿，隔天加入不同劑量(0 μl、12.5 μl、25 μl)的乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品使其樣品濃度分別為0%、0.125%及0.25%，並放入37℃細胞培養箱培養。24小時後，細胞以胰蛋白酶 ( trypsin ) 處理使細胞懸浮後，以 1000 rpm離心 5 分鐘並吸去上清液，加入 1ml TRIzol 試劑(Invitrogen Life Technologies)，混合後靜置 5分鐘，之後加入溴氯丙烷 (bromochloropropane，BCP) 100 μl，上下搖晃使其混和均勻，靜置室溫 5 分鐘後以 12000 rpm ( 微量離心管， F45-30-11 ) 在 4℃ 離心 15 分鐘，吸取上層液體到新的微量離心管，再加入異丙酮 ( isopropanol )混合均勻靜置5 分鐘，於 4℃ 、12000 rpm ( 微量離心管， F45-30-11 ) 離心 10 分鐘，去除上清液，並且以 75% 酒精 500 μl 清洗沈澱於管底的 RNA，再於室溫 12000 rpm 離心 5 分鐘，倒掉酒精且於抽風櫃中風乾 RNA，RNA 沉澱物乾後加入 20 μl 焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate， DEPC )處理過的水回溶，測量其260 nm吸光值並計算RNA濃度。將 1 μg 之RNA 反轉錄為互補去氧核醣核酸 (cDNA)，然後於PRISM ABI7700 Sequence Detecting System(美國Applied Biosystems 公司)進行定量即時聚合酶鏈反應 (quantitative real-time transcriptional PCR) 實驗。引子設計如表4。
表4 即時PCR引子
統計分析
實驗結果使用2ΔΔCt方法計算相對於對照組的mRNA表現量變化。Ct值是以GAPDH的表現量作為標準，ΔCt值是將處理組的基因表現量與對照組的平均ΔCt值相比。數據以平均值（Mean）±標準誤差（SD）表示。試驗數據以Student's t-test 作統計分析其組間差異。若p ＜ 0.05則視為具有統計上的顯著差異。
實驗結果
乳桿菌GK4抑制纖維化頰黏膜纖維母細胞活性之效果
結果如圖1所示，乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品對初代培養正常頰黏膜纖維母細胞(BMF)較無細胞毒性，但對纖維化母頰黏膜纖維母細胞(fBMF)細胞增生率可有效抑制。
乳桿菌GK4活性物質抑制口腔黏膜下纖維化母細胞移行能力
結果如圖2所示，當fBMF未加入乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品時(控制組0 μl)，fBMF具有高度移行能力，加入乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品後，隨著濃度增加，fBMF的細胞移行能力也隨之減少，顯示乳桿菌GK4活性物質能有效抑制纖維化頰黏膜纖維母細胞活性。
乳桿菌GK4活性物質於口腔黏膜下纖維化母細胞之膠體收縮能力
fBMF可以藉由其收縮能力協助傷口癒合，但過多表現則可能造成口腔黏膜下纖維化，可以透過測量膠體面積的比例檢測其收縮能力。結果如圖3所示，當fBMF未加入乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品時(控制組0 μl)收縮能力極佳，加入乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品後，其膠體面積明顯變大，顯示其收縮能力有顯著下降，可知在發生口腔黏膜下纖維化時施用有助於改善口腔黏膜下纖維化。
乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品調節口腔黏膜下纖維母細胞相關基因表現
如圖4所示，乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品可抑制頰黏膜纖維母細胞分化相關基因表現，如SMA及COL1A1基因，因此可抑制BMF分化為fBMF，並且延緩口腔纖維化進程。
組合物製備
本揭露提供一組合物，包含有乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品且發揮改善口腔黏膜下纖維化的功效。
本揭露之乳桿菌GK4活性物質若應用於食品用途，則以下組合物1之態樣作為例示性實例。
組合物1：取乳桿菌GK4上清發酵液之凍乾粉作為乳桿菌之活性物質（20 wt%），與作為防腐劑之苯甲醇（8wt%）、作為稀釋劑之甘油（7 wt%）充分混合，並溶於純水（65 wt%）中，存放於4℃備用。前述wt%係指各成分佔組合物總重之比例。
本揭露之乳桿菌GK4活性物質若以液體劑型應用於醫藥用途，則以下組合物2之態樣作為例示性實例。
組合物2：取乳桿菌GK4上清發酵液之凍乾粉作為乳桿菌之活性物質（20 wt%），與作為防腐劑之苯甲醇（8wt%）、作為稀釋劑之甘油（7 wt%）、作為稀釋劑之蔗糖（10 wt%）充分混合，並溶於純水（55 wt%）中，存放於4℃備用。前述wt%係指各成分佔組合物總重之比例。
本揭露所提供的包含乳桿菌GK4之活性物質的組合物可以抑制纖維化母頰黏膜纖維母細胞的細胞增生率、降低SMA及COL1A1基因的表現量，以抑制纖維化頰黏膜纖維母細胞活性的活性物質，因此可以達成改善口腔黏膜下纖維化的效果。
無
圖1係繪示不同劑量的乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品對初代培養正常頰黏膜纖維母細胞(BMF)與纖維化母頰黏膜纖維母細胞(fBMF)的細胞增生率影響。
圖2係繪示不同劑量的乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品對口腔黏膜下纖維化母細胞移行能力的影響。
圖3係繪示不同劑量的乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品對口腔黏膜下纖維化母細胞之膠體收縮能力影響。
圖4係繪示不同劑量的乳桿菌GK4活性物質之試驗樣品對口腔黏膜下纖維母細胞相關基因表現的影響。
戊糖乳桿菌
Lactobacillus pentosusGK4，其寄存於財團法人食品工業發展研究所之生物資源研究中心，寄存編號為BCRC- 910858
Claims (6)
- 一種乳桿菌(Lactobacillus)之活性物質用於製備改善口腔黏膜下纖維化之醫藥組合物的用途，其中該乳桿菌為戊糖乳桿菌Lactobacillus pentosus GK4，其寄存於財團法人食品工業發展研究所之生物資源研究中心，寄存編號為BCRC-910858；其中該乳桿菌的活性物質係以下列方法製備：(a)取該乳桿菌接種於固態培養基以進行固態培養以形成菌落；(b)將步驟(a)培養的菌落(colony)接種於液體培養基進行液態培養以得含菌體之液態培養基；(c)將步驟(b)含菌體之液態培養基接種於發酵槽進行液態放大以得菌液；(d)將菌液離心後取其上清液並過濾得到含有該活性物質的發酵液。
- 如請求項1所述之用途，其中該醫藥組合物係以塗抹於患部的方式施用。
- 如請求項1所述之用途，其中該醫藥組合物係降低纖維化母頰黏膜纖維母細胞的細胞增生率。
- 如請求項3所述之用途，其中該醫藥組合物係抑制纖維化頰黏膜纖維母細胞活性。
- 如請求項1所述之用途，其中該醫藥組合物係降低SMA及COL1A1基因的表現量。
- 如請求項1所述之用途，其中該醫藥組合物的施用量為5至20μl/cm2。
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TWI838163B true TWI838163B (zh) | 2024-04-01 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW202222327A (zh) | 2020-05-06 | 2022-06-16 | 葡萄王生技股份有限公司 | 乳酸菌用於製備抗病毒組合物的用途 |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW202222327A (zh) | 2020-05-06 | 2022-06-16 | 葡萄王生技股份有限公司 | 乳酸菌用於製備抗病毒組合物的用途 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 期刊 Xu H, et al. "Inhibitory Effects of Breast Milk-Derived Lactobacillus rhamnosus Probio-M9 on Colitis-Associated Carcinogenesis by Restoration of the Gut Microbiota in a Mouse Model" Nutrients. 13(4): MDPI 2021 Apr; 1143 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2021135798A1 (zh) | 桑皮苷a及其衍生物在制备保护肠道屏障的药物中的应用 | |
| KR102084973B1 (ko) | 엔테로코커스 패칼리스를 유효성분으로 포함하는 대장염 예방 또는 치료용 조성물 | |
| CN113755409B (zh) | 一种缓解胰岛素抵抗的长双歧杆菌及其应用 | |
| JP7410336B2 (ja) | ラクトバチルス・ガセリｂｎｒ１７を含む更年期疾患治療用組成物 | |
| TW201130496A (en) | Dna damage repair promoter for oral application, and elastase activity inhibitor for oral application | |
| CN110339216A (zh) | 可预防及治疗细菌性阴道炎的乳酸菌组合物 | |
| JP2022079551A (ja) | 筋線維化抑制用組成物 | |
| TWI243673B (en) | Medicine for metabolic bone diseases | |
| WO2022073416A1 (zh) | 微囊藻毒素-rr在用于制备预防或治疗肾纤维化疾病的药物中的应用 | |
| TWI838163B (zh) | 預防及/或改善口腔黏膜下纖維化之組成物及其用途 | |
| WO2023236452A1 (zh) | 一种防治口腔溃疡的益生菌贴剂及其制备方法与应用 | |
| CN111714524A (zh) | 鼠乳杆菌在制备用于防治肠缺血再灌注损伤的组合物中的应用 | |
| CN113493491A (zh) | 一种用于预防或治疗溃疡性结肠炎的多肽 | |
| CN113413402B (zh) | 梅花草提取物在制备治疗幽门螺杆菌感染疾病药物中的应用 | |
| CN105343132B (zh) | 治疗结肠炎的组合物、药物及其制备方法 | |
| KR20190088383A (ko) | 국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 섬유증 예방, 치료, 또는 개선용 조성물 | |
| CN110354078B (zh) | 一种含有血链球菌素的抗白色念珠菌组合物及其制备方法 | |
| JP2022519330A (ja) | セリシンを含む脂肪肝の治療、予防、又は緩和用組成物及び該組成物の製造方法 | |
| EP3400937B1 (en) | Use of butylidenephthalide | |
| WO2019205506A1 (zh) | 一种缓解内毒素感染的卵形拟杆菌及其应用 | |
| TWI791918B (zh) | 奇異球菌屬（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）的菌體用於製備抑制血管新生之醫藥組合物的用途 | |
| KR20200000956A (ko) | 프로피오니바크테리움 후레우덴레이키, 이의 배양액 또는 이의 사균체를 유효성분으로 함유하는 장질환의 예방 또는 치료용 조성물 | |
| CN115444924B (zh) | 一种珍珠贝蛋白肽组合物及其制备和应用 | |
| WO2023022473A1 (ko) | 줄기세포 유래 세포외소포체를 유효성분으로 포함하는 조성물 | |
| TW200412989A (en) | Gamma delta T cell immunoactivity enhancers containing extract of Lentinus edodes mycelium |