KR20190088383A - 국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 섬유증 예방, 치료, 또는 개선용 조성물 - Google Patents

국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 섬유증 예방, 치료, 또는 개선용 조성물 Download PDF

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김예진
권은영
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Abstract

본 발명은 국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 섬유증 예방, 치료, 또는 개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 국화잎 추출물은 지방조직에서 결합조직의 축적을 억제하고 대식세포의 침윤을 억제한다. 또한, 상기 국화잎 추출물은 지방조직의 섬유화 관련 ECM 콜라겐, 상기 ECM 발현을 조절하는 인자, 카텝신, 및 지방조직의 섬유화 관련 염증 유도성 케모카인 전사체 발현을 억제하는 효과가 있다. 따라서, 본 발명의 국화잎 추출물은 지방조직의 섬유증 예방, 치료, 또는 개선용 천연물 식의약 소재 개발에 유용하게 이용 가능하다.

Description

국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 섬유증 예방, 치료, 또는 개선용 조성물 {Composition for preventing, treating or improving fibrosis comprising extracts of Chrysanthemum leaf}
본 발명은 국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 섬유증 예방, 치료, 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.
조직은 세포 외 기질에 결합되어 있고, 혈관 네트워크에 의해 둘러싸여 있는 잘 정돈된 세포 군집을 포함한다. 섬유화 또는 섬유증(Fibrosis)은 다양한 조직의 구조 및 기능을 변화시키는 손상(injury) 또는 염증에 따른 콜라겐 매트릭스의 비정상적인 축적이다. 대부분의 장기는 조직 손상 후 염증과 치유과정을 거치게 되는데 지속적인 손상이 있으면 치유과정에서 조직의 섬유화가 일어나게 된다. 이 섬유화 과정은 콜라겐(collagen)이나 피브로넥틴(fibronectin) 등의 세포 외 기질이 조직에 축적되어 정상 구조를 파괴하여 기능의 장애를 가져온다. 섬유증의 발생 위치에 무관하게, 섬유증의 대부분의 병인학은 정상 조직을 대체하는 콜라겐 매트릭스의 과도한 축적을 포함한다. 신장, 간, 지방, 폐, 심장, 뼈 또는 골수, 그리고 피부에서의 진행성 섬유화는 사망 또는 고통의 주요한 요인이다.
고지방 식이 등에 의해 염증유발 케모카인 및 사이토카인이 분비될 경우, 지방 조직에서는 교원질(collagen)과 같은 과도한 세포 외 기질 (extracellular matrix)의 합성이 유도되어 지방세포 사이에 섬유성 물질(fibrotic material)의 축적을 야기할 뿐만 아니라, 간 조직의 간성상세포를 활성화시켜 지방 조직과 마찬가지로 세포 외 기질이 생성된다. 이때 생성된 세포 외 기질은 디세강(space of Disse) 주위로 흘러 들어가 침착되면서 간섬유증을 유발하며, 이 과정이 지속되면 간경변증으로 진행된다 (Henegar, 2008; Mutch, 2009; Bataller, 2005).
또한, 지방세포는 대식세포의 동원과 침윤에 의해 세포 외 기질의 합성과 분비를 증가시키며, 이로인해 섬유증이 가속화된다. MMPs(matrix metalloproteinases)는 세포 외 기질의 리모델링을 가능하게 하여 세포 외 기질 발현을 조절하며, MMPs와 함께 lumican (Lum)은 상피세포의 간질세포로의 변이(epithelialmesenchymal transition)를 유도하여 섬유화 상태를 악화시킨다(Rada, 1993). 사이토카인 중 TGF-β(transforming growth factor-beta)는 조직의 보수에 중요한 역할을 수행하는 다기능 인자의 일종으로, 대식세포와 같은 침윤세포에 의해서 생산되거나 분비되며, 거의 모든 조직에서 발견된다. 일반적으로 TGF-β의 분비와 활성 증가는 다양한 세포 외 기질 단백질의 생성을 자극하고, 분해를 저해함으로써 조직 섬유증을 촉진한다(한국등록특허 KR 10-1497935 참조).
한편, 국화(Chrysanthemum)는 국화과에 속하는 다년생 초본식물로서, 중국이 원산이며, 우리나라에 언제 전래되었는지는 알 수 없다. 국화과 Chrysanthemum속 식물은 flavonoids, phenols 및 phenolic acids를 다양하게 함유하여 항산화 효과가 있으며, 최근에는 국화가 혈압강하, 항균, 소염, 이뇨 및 항진균작용 등의 여러 가지 약리 작용이 있는 것으로 보고되고 있다. 민간에서는 국화꽃을 두통으로 인한 어지러움증이나 귀울림 증세 또는 눈이 침침하여 잘 안보일 때 달여 먹으면 눈을 맑게 하고, 혈맥을 이롭게 하며 장과 위를 안정시키는 효과가 있다고 보고되어 있다.
그러나, 현재까지 국화의 섬유증 예방, 치료, 또는 개선 효과에 대해서는 알려진 바가 없다.
본 발명자들은 새로운 천연물 유래의 섬유증 예방, 치료, 또는 개선용 조성물을 개발하고자 연구를 수행한 결과, 본 발명의 국화잎 추출물이 지방 조직의 섬유화를 억제시킬 수 있음을 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하게 되었다.
이에, 본 발명은 국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 섬유증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 섬유증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 일구현예로, 상기 섬유증은 지방 조직 섬유증일 수 있다.
본 발명의 다른 일구현예로, 상기 국화잎 추출물은 세포 외 기질 콜라겐들의 발현을 억제시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 일구현예로, 상기 국화잎 추출물은 대식세포 침윤과 관련된 마커인 Cd68 또는 Emr1의 발현을 억제시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 일구현예로, 상기 국화잎 추출물은 세포 외 기질의 발현을 조절하는 Cd44항원, 형질전환 성장인자 베타1(Tgfb1), 형질전환 성장인자 베타 유도 단백질(Tgfbi), 또는 매트릭스 메탈로프로테이나아제(MMPs)의 전사체 발현을 억제시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 일구현예로, 상기 국화잎 추출물은 세포 외 기질의 리모델링에 관여하는 카텝신의 전사체 발현을 억제시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 일구현예로, 상기 국화잎 추출물은 지방 조직의 섬유화와 관련된 염증 유도성 케모카인들의 전사체 발현을 억제시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 일구현예로, 상기 국화잎 추출물은 물, C1내지 C4의 저급알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합용매로 구성된 군으로부터 선택된 용매로 추출할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 섬유증 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 조성물의 섬유증 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
본 발명에 따른 국화잎 추출물은 지방조직에서 결합조직의 축적을 억제하고 대식세포의 침윤을 억제한다. 또한, 상기 국화잎 추출물은 지방조직의 섬유화 관련 ECM 콜라겐, 상기 ECM 발현을 조절하는 인자, 카텝신, 및 지방조직의 섬유화 관련 염증 유도성 케모카인 전사체 발현을 억제함으로써, 지방조직 섬유증의 예방 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일구현예에 따른 국화잎 추출물의 섬유증 개선 효과를 평가하기 위하여 식이성 비만 유도 마우스 모델을 이용한 개략적인 실험디자인을 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 일구현예에 따른 정상식이군, 섬유증유도군, 및 실험군 마우스들의 지방 조직에서의 섬유화 정도를 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명의 일구현예에 따른 지방 조직의 섬유화 관련 세포 외 기질(extracellular matrix, ECM)에서 풍부하게 존재하는 성분인 콜라겐들의 전사체 발현정도를 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 일구현예에 따른 지방 조직의 대식세포 침윤과 관련된 대표적 마커인 Cd68(CD antigen 68) 및 EMr1(Epidermal growth factor module-containing mucin-like receptor 1) 전사체 발현을 분석한 결과를 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명의 일구현예에 따른 지방조직의 섬유화 관련 세포 외 기질(extracellular matrix, ECM) 발현을 조절하는 인자인 Cd44(CD antigen 44), Tgfb1(Transforming growth factor beta 1), Tgfbi(Transforming growth factor beta-induced), 및 MMPs(Matrix metalloproteinases) 전사체 발현을 분석한 결과를 나타낸 도면이다.
도 6은 본 발명의 일구현예에 따른 지방조직의 섬유화 관련 세포 외 기질(extracellular matrix, ECM) 리모델링에 관여하는 단백질 가수분해성 리소좀 효소(lysosome)인 카텝신(cathepsin)의 전사체 발현을 분석한 결과를 나타낸 도면이다.
도 7은 본 발명의 일구현예에 따른 지방조직의 섬유화 관련 염증 유도성 케모카인(chemokine) 전사체 발현을 분석한 결과를 나타낸 도면이다.
본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 예방 또는 치료 대상 질병인 "섬유증(fibrosis)"은 재생(reparative)이나 반응 과정에서 기관이나 조직에 과도한 섬유성 결합조직이 형성되는 것으로, 세포 외 기질의 비정상적 생성, 축적 및 침착이 일어나는 질환이다.
본 발명에서 상기 섬유증은 지방 조직 섬유증일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 섬유증 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은, 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 섬유증을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "치료"는, 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 섬유증에 대한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
또한, 본 발명에서 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
또한, 본 발명에서 "개체"란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는, 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다.
본 발명에서 "추출물"은, 상기 국화잎의 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명의 상기 국화잎 추출물에 있어서, 상기 국화잎을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2 종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.
본 발명에서 상기 국화잎을 추출하는 데에 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 천연물로부터 추출물을 추출하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도, 압력의 조건 하에서 통상적인 용매를 사용하여 추출할 수 있다. 예컨대, 본 발명에서 국화잎 추출물은 물, 탄소 수 1 내지 4의 저급 알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출할 수 있으며, 바람직하게는 에탄올을 사용하여 추출할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 제조된 추출물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 예컨대, 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 농축은 감압 농축기, 건조는 동결건조법 등을 수행할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일실험예에서는, 수컷 C57BL/6J 마우스를 정상군, 섬유증 유도군, 및 국화잎 추출물 급여군(실험군)으로 분류하여 16주간 지방 조직의 섬유화 관련 콜라겐의 전사체 발현을 분석한 결과, 섬유증 유도군에 비해 국화잎 추출물을 섭취한 실험군에서 Colla1, Colla2, Col3a1, Col4a5, Col5a1, Col5a2, Col6a1, Col6a2, Col6a3, Col6a5, Col6a6, Col8a1, Col12a1, Col14a1, Col16a1, Col26a1 및 N-말단에 콜라겐 유사영역을 가지는 C1Q complex (C1qa, C1qb, C1qc) 전사체들의 발현이 감소됨을 확인함으로써 국화잎 추출물이 섬유증 유도시에 증가하는 세포 외 기질 콜라겐들의 발현을 감소시키는 효과가 있음을 확인하였다(실험예 2 및 도 3 참조).
이 때, 상기 콜라겐(collagen)은 동물의 뼈와 피부에 주로 존재하며 연골, 장기 막, 머리카락 등에도 분포되어 있는 경단백질로 물고기 비늘의 성분이기도 하다. 콜라겐은 교원질 이라고도 하며 섬유상 고체로 존재한다. 또한, 세포 외 기질의 구조를 담당하고 탄성력과 세포 부착기작 및 세포이동과 조직의 발달에 관여한다.
본 발명의 다른 일실험예에서는, 지방 조직의 대식세포 침윤 관련 전사체 발현을 분석한 결과, 섬유증 유도군에 비해 국화잎 추출물을 섭취한 실험군에서 Cd68(CD antigen 68) 및 Emr1(Epidermal growth factor module-containing mucin-like receptor 1)의 전사체 발현이 현저하게 감소한 것을 확인하였다(실험예 3 및 도 4 참조).
본 발명의 또 다른 일실험예에서는, 지방 조직의 섬유화 관련 세포 외 기질의 발현을 조절하는 인자들의 전사체 발현을 분석한 결과, 섬유증 유도군에 비해 국화잎 추출물을 섭취한 실험군에서 Cd44, Tgfb1, Mmp2, Mmp3, Mmp12, Mmp13, Mmp14, Mmp19, 및 Mmp27의 전사체 발현이 감소한 것을 확인하였다(실험예 4 및 도 5 참조).
본 발명의 또 다른 일실험예에서는, 지방 조직의 섬유화 관련 세포 외 기질의 리모델링에 관여하는 카텝신의 전사체 발현을 분석한 결과, 섬유증 유도군에 비해 국화잎 추출물을 섭취한 실험군에서 Ctsa, Ctsb, Ctsd, Ctsh, Ctsk, Ctss, 및 Ctsz의 전사체 발현이 감소한 것을 확인하였다(실험예 5 및 도 6 참조).
이 때, 상기 카텝신(cathepsin)은 동물세포 내의 리소좀(lysosome)에 존재하는 많은 종류의 단백질 분해효소의 총칭이며, 기질 특이성 등에 의한 알파벳 순서로 분류한다.
본 발명의 또 다른 일실험예에서는, 지방 조직의 섬유화 관련 염증 유도성 케모카인의 전사체 발현을 분석한 결과, 섬유증 유도군에 비해 국화잎 추출물을 섭취한 실험군에서 Ccl4, Ccl5, Ccl6, Ccl8, Ccl9, Ccl22의 전사체 발현이 유의적으로 감소한 것을 확인하였다(실험예 6 및 도 7 참조).
이 때, 상기 케모카인(chemokine)은 백혈구유주 작용, 활성화 작용을 하는 염기성 헤파린 결합성 저분자 단백질로, 케모카인은 염증반응에 있어 백혈구 유주나, 생체내에서의 림프구의 서브세트의 이동, 림프계조직의 형성, 유지, 또한 면역응답, 조혈, 발생, 생식 등에도 관여하며, 그 생물 활성은 여러 가지다.
상기 본 발명의 실험예 결과를 통하여 국화잎 추출물은 비만에서 이환되는 지방 조직의 섬유화를 억제하는 효능이 있음을 알 수 있었다.
한편, 본 발명에서 "약학적 조성물"은 질병의 예방 또는 치료를 목적으로 제조된 것을 의미하며, 각각 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨대, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형으로 제형화할 수 있고, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 유효성분 이외에 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 이때, 약제학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아고무, 인산칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피로리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필 히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
또한, 본 발명은 국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 섬유증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "개선"은, 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 이 때 상기 건강기능식품 조성물은 섬유증의 예방 또는 개선을 위하여 해당 질환의 발병 단계 이전 또는 발병 후, 치료를 위한 약제와 동시에 또는 별개로서 사용될 수 있다.
본 발명에서 "건강기능식품 조성물"은, 담체, 희석제, 부형제 및 첨가제 중 하나 이상을 포함하여 정제, 환제, 산제, 과립제, 분말제, 캡슐제 및 액제 제형으로 이루어진 군에서 선택된 하나로 제형된 것을 특징으로 한다.
본 발명의 추출물에 첨가 할 수 있는 식품으로는, 각종 식품류, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽제, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다. 상기 본 발명에 더 포함될 수 있는 첨가제로는, 천연 탄수화물, 향미제, 영양제, 비타민, 광물(전해질), 풍미제(합성 풍미제, 천연 풍미제 등), 착색제, 충진제, 팩트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH조절제, 안정화제, 방부제, 산화 방지제, 글리세린, 알코올, 탄산화제, 및 과육으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 성분을 사용할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토오스, 수크로오스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상기 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
상기 외에 본 발명에 따른 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제, 팩트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
그밖에 본 발명에 다른 조성물은 천연 과일 주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
상기 담체, 부형제, 희석제 및 첨가제의 구체적인 예로는 이에 한정하는 것은 아니나, 락토오스, 덱스트로즈, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 에리스리톨, 전분, 아카시아 고무, 인산칼슘, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 미세결정성 셀룰로오스, 폴리비닐키롤리돈, 셀룰로오스, 폴리비닐피로리돈, 메틸셀룰로오스, 물, 설탕시럽, 메틸 하이드록시 벤조에이트, 프로필하이드록시 벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 및 미네랄 오일로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1종 이상이 사용되는 것이 바람직하다.
이하, 본 발명의 바람직한 실시예 및 실험예를 첨부도면을 참조하여 상세히 설명하기로 한다. 다만, 이들 실시예 및 실험예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예 및 실험예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다 할 것이다.
실시예 1. 국화잎 추출물의 수득
국화잎 (Chrysanthemum morifolium Ramat leaf)은 추출이 용이하도록 분쇄한 후 국화잎 10kg에 70% 에탄올(ethanol)을 가하여 65-75℃에서 2시간 동안 추출하였으며, 추출횟수는 3회로 하였다. 추출액은 농축한 후 120℃에서 분무 건조시켜 사용하였으며, 국화잎 추출물의 수율은 10%로 산출되었다.
실시예 2. 실험 디자인
국화잎 추출물의 섬유증 예방, 개선 및 치료 효과를 평가하기 위하여 도 1에 도시한 것과 같이 실험을 디자인하여 진행하였다. 구체적으로, 4주령 수컷 C57BL/6J 마우스를 미국 잭슨사로부터 구입하여 일주일 동안 Lab chow로 적응 사육시키고, 정상식이군(ND, AIN-76), 고지방식이(칼로리의 45%가 지방으로 구성) 및 고지방식이군에 상기 실시예 1에서 준비한 국화잎 추출물을 투여한 실험군(고지방식이+1.5%의 국화잎 추출물)으로 분류하여 총 16주간 실험하였고 이후 실험예를 수행하였다. 고지방 식이는 지방 세포 사이, 섬유질, 세포 외 기질과 체액으로 구성된 결합 조직 (connective tissue)의 축적을 유도함으로써 섬유화를 야기하는 것으로 알려져 있다.
실험예 1. 지방 조직의 섬유화 분석
지방 조직의 형태학적 관찰을 위해, 콜라겐과 근섬유를 염색하는 Masson's Trichrome 염색을 수행한 후, 광학현미경으로 200배 배율에서 관찰하였다. Masson's trichrome 염색법에서 결합조직 (connective tissue, CT)은 푸른빛, 핵은 검붉은색으로 염색된다. 파란색으로 염색되는 CT는 세포, 섬유질 (fibers), 세포 외 기질 (extracellular matrix, ECM)과 체액으로 구성되며 섬유화의 지표로 사용된다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 섬유증 유도군은 지방 세포 사이에 결합조직이 많이 축적되어 있었으며, 상기 실시예 1에서 수득한 국화잎 추출물을 섭취한 실험군은 이러한 섬유화 정도가 크게 억제되어 있음을 확인하였다.
실험예 2. 지방 조직의 섬유화 관련 콜라겐의 전사체 발현 분석
섬유증 유도 마우스 모델에서 국화잎 추출물의 섭취가 지방 조직의 섬유화에 미치는 영향을 알아보기 위해, 섬유화 관련 전사체들의 발현을 분석하였다.
구체적으로, 부고환 백색지방조직으로부터 RNA를 추출하고 mRNA 염기서열을 분석하였다. Illumina사의 Truseq RNA sample Prep Kit를 이용하여 cDNA를 얻었다. 최종 산물은 2100 Bioananlyzer를 이용하여 확인하였고 Hiseq 2500을 이용하여 서열해독을 실시하였다. 생산된 서열은 quality check를 위해 FastQC v0.11.2을 이용하였고, Tophat V.2.0.12를 이용하여 유전체 서열에 정렬되었다. 유전자 별 발현량의 측정은 Cufflinks V.2.2.1을 이용하여 계산되었으며 추출된 유전자는 표준화 과정을 거쳤다. 추출된 differentially expressed genes(DEG)는 fold change 1.5배 초과, q-value 0.05이하를 cut off하였고, 섬유증 유도군 대비 정상군과 실험군으로 제시하였다.
그 결과, 도 3에 도시된 바와 같이, 섬유증 유도군에 비하여 상기 실시예 1에서수득한 국화잎 추출물을 섭취한 실험군에서 Col1a1, Col1a2, Col3a1, Col4a5, Col5a1, Col5a2, Col6a1, Col6a2, Col6a3, Col6a5, Col6a6, Col8a1, Col12a1, Col14a1, Col16a1, Col26a1 및 N-말단에 콜라젠 유사영역을 가지는 C1Q complex (C1qa, C1qb, C1qc) 전사체들의 발현이 감소됨을 확인하였다.
상기로부터, 국화잎 추출물이 섬유증 유도시에 증가하는 세포 외 기질(ECM) 콜라겐들의 발현을 감소시키는 효과가 있음을 확인하였다.
실험예 3. 지방 조직의 대식세포 침윤 관련 전사체 발현 분석
고지방식이에 의해 지방세포는 대식세포의 동원과 침윤에 의해 세포 외 기질의 합성과 분비를 증가시키며, 이로 인해 섬유증이 가속화되는 것으로 알려져 있다.
도 4에 도시된 바와 같이, 섬유증 유도군의 지방조직에서 대식세포 침윤과 관련된 대표적인 마커인 Cd68과 Emr1의 전사체 발현이 정상군에 비해 증가하였으나 상기 실시예 1에서 수득한 국화잎 추출물 섭취에 의해 Cd68과 Emr1의 발현이 현저하게 감소되었다.
실험예 4. 지방 조직의 섬유화 관련 ECM 발현을 조절하는 인자들의 전사체 발현 분석
지방 조직의 섬유화와 관련된 extracellular matrix (ECM)의 발현을 조절하는 인자들 (Cd44, Tgfb1, Tgfbi, matrix metalloproteinases (MMPs))의 전사체 발현을 분석한 결과, 도 5에 도시된 바와 같이, 상기 실시예 1에서 수득한 국화잎추출물을 섭취한 실험군은 섬유증 유도군에 비해 지방 조직에서 Cd44, Tgfb1, Tgfbi, Mmp2, Mmp3, Mmp12-14, Mmp19, Mmp27의 전사체 발현이 감소되었다.
상기로부터, 국화잎 추출물은 콜라겐 발현뿐만 아니라 ECM의 발현을 조절하는 인자들의 전사체 발현도 감소시키는 것을 확인하였다.
실험예 5. 지방 조직의 섬유화 관련 ECM 리모델링에 관여하는 카텝신의 전사체 발현 분석
ECM의 ECM의 리모델링에 관여하는 단백질 가수분해성 리소좀 (lysosome)인 카텝신(cathepsin)들의 전사체 발현 분석 결과, 도 6에 도시된 바와 같이, 섬유증 유도군에서 증가한 Ctsa, Ctsb, Ctsd, Ctsh, Ctsk, Ctsl, Ctss, 및 Ctsz의 전사체 발현이 상기 실시예 1에서 수득한 국화잎 추출물을 섭취한 실험군에서는 유의적으로 감소하였다.
상기로부터, 국화잎추출물이 섬유증이 유도된 지방 조직에서 카텝신의 전사체 발현을 억제시킴으로써 섬유증 예방, 개선 및 치료 효과를 가지고 있음을 확인하였다.
실험예 6. 지방 조직의 섬유화 관련 염증 유도성 케모카인 전사체 발현 분석
도 7에 도시된 바와 같이, 지방조직의 섬유화 관련 염증 유도성 케모카인 (chemokine)들의 전사체 발현 분석 결과, 섬유증 유도군에 비해 상기 실시예 1에서 수득한 국화잎 추출물을 섭취한 실험군에서 Ccl4, Ccl5, Ccl6, Ccl8, Ccl9, Ccl22의 전사체 발현이 유의적으로 감소하였다.
상기 결과를 통해, 국화잎추출물은 비만에서 이환되는 지방 조직의 섬유화를 억제하는 효능이 입증되었다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (16)

  1. 국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 섬유증은 지방 조직 섬유증인 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 국화잎 추출물은 세포 외 기질 콜라겐들의 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 국화잎 추출물은 대식세포 침윤과 관련된 마커인 Cd68 또는 Emr1의 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 국화잎 추출물은 세포 외 기질의 발현을 조절하는 Cd44항원, 형질전환 성장인자 베타1(Tgfb1), 형질전환 성장인자 베타 유도 단백질(Tgfbi), 또는 매트릭스 메탈로프로테이나아제(MMPs)의 전사체 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 국화잎 추출물은 세포 외 기질의 리모델링에 관여하는 카텝신의 전사체 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 국화잎 추출물은 지방 조직의 섬유화와 관련된 염증 유도성 케모카인들의 전사체 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 국화잎 추출물은 물, C1내지 C4의 저급알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합용매로 구성된 군으로부터 선택된 용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  9. 국화잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 섬유증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 섬유증은 지방 조직 섬유증인 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  11. 제9항에 있어서,
    상기 국화잎 추출물은 세포 외 기질 콜라겐들의 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  12. 제9항에 있어서,
    상기 국화잎 추출물은 대식세포 침윤과 관련된 마커인 Cd68 또는 Emr1의 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  13. 제9항에 있어서,
    상기 국화잎 추출물은 세포 외 기질의 발현을 조절하는 Cd44, 형질전환 성장인자 베타1(Tgfb1), 형질전환 성장인자 베타 유도 단백질(Tgfbi), 또는 매트릭스 메탈로프로테이나아제(MMPs)의 전사체 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  14. 제9항에 있어서,
    상기 국화잎 추출물은 세포 외 기질의 리모델링에 관여하는 카텝신의 전사체 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  15. 제9항에 있어서,
    상기 국화잎 추출물은 지방 조직의 섬유화 관련 염증 유도성 케모카인들의 전사체 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  16. 제9항에 있어서,
    상기 국화잎 추출물은 물, C1내지 C4의 저급알코올, n-헥산, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합용매로 구성된 군으로부터 선택된 용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 섬유증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
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