CN110592283B - 一种鉴别禽腺病毒c型和鸭腺病毒3型的实时荧光定量pcr-hrm引物及其方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种鉴别禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的实时荧光定量PCR‑HRM引物及其方法，所述引物的核苷酸序列为：上游引物qDPF：5’‑CCTGGCGAATGTACTTRAAC‑3’，下游引物qDPR：5’‑CACCATCCCCAGCAATAC‑3’；本发明所设计的引物特异性强，利用该引物仅禽腺病毒C型与鸭腺病毒3型可见特异性阳性扩增信号，而其他家禽常见病原没有出现阳性扩增信号；本发明仅需上述一组引物，即可同时对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行进行鉴别诊断。本发明建立的方法简单、经济、方便高效、准确率高，可应用于禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的快速区分。

Description

一种鉴别禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的实时荧光定量PCR- HRM引物及其方法
技术领域
本发明属于动物传染病学领域，具体涉及一种鉴别禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的实时荧光定量PCR-HRM引物及其方法。
背景技术
按照国际病毒分类委员会(ICTV)分类(https://talk.ictvonline.org/taxonomy/)，腺病毒科(Adenoviridae)下设5个属(Genus)：禽腺病毒属(Aviadenovirus)、富AT腺病毒属(Atadenovirus)、唾液酸酶腺病毒属(Siadenovirus)、哺乳动物腺病毒属(Mastadenovirus)和美洲白鲟腺病毒属(Ichtadenovirus)。腺病毒为双链DNA无囊膜病毒，呈二十面体对称，衣壳由252个壳粒组成，其中240个为六邻体(hexon)，12个则是五邻体基底(penton)，每个五邻体基底结合着1根至2根纤突。不同腺病毒的基因组大小有所差异，一般在26-45kb之间。按照腺病毒DNA复制的起始时间不同，其基因组可以划分为早期转录基因(E)和晚期转录基因(L)。早期转录基因包含有El(E1A和E1B)、E2(E2A和E2B)、E3和E4四个区，主要负责调节控制病毒的增殖复制。晚期转录基因包括Ll、L2、L3、L4和L5共五个区，主要功能为负责编码病毒的结构蛋白。
禽腺病毒C型(Fowl aviadenovirus C，FAdV-C)和鸭腺病毒3型(Duck adenovirus3，DAdV-3)都属于腺病毒科(Adenoviridae)、禽腺病毒属(Aviadenovirus)。禽腺病毒C型自2015年以来，在全国大范围流行，多呈急性发病，主要引起鸡包涵体肝炎、心包炎综合征，给养鸡业造成巨大的经济损失。近年来禽腺病毒C型的宿主普扩大，不仅感染鸡，鸭也会感染该病毒，感染鸭剖检病变为心包积液和肝坏死。鸭腺病毒3型也是近年来新发现的鸭源腺病毒，该病毒感染主要引起鸭出现肝脏肿大、出血及坏死，近年来鸭群感染该病毒的现象日益普遍，严重影响养鸭业的健康发展。禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型均能感染鸭，引起肝脏坏死，临床上不好准确区分，目前急需一种快速准确区分禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的分子生物学方法，且国内外还没有仅需一组实时荧光定量PCR引物同时对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型感染情况进行鉴别诊断的相关研究报道，本发明的建立可填补国内外相关领域空白。
发明内容
本发明的目的在于提供一种鉴别禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的实时荧光定量PCR-HRM引物及其方法，该方法能够快速有效区分禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型。
本发明根据禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的DNA polymerase基因特征，设计一组引物，该引物对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型均可扩增，该引物扩增出的禽腺病毒C型的DNA片段与鸭腺病毒3型的DNA片段存在较大的GC含量差异，实时荧光定量PCR反应结束后的熔解曲线存在峰值(Tm值)差异，根据熔解曲线峰值的差异可直接可对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行准确区分。可达到仅需一组引物，即可特异性的对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行快速区分。
本发明的目的通过如下技术方案实现：一种鉴别禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的实时荧光定量PCR-HRM引物，所述引物的核苷酸序列如下所示：
上游引物qDPF：5’-CCTGGCGAATGTACTTRAAC-3’，
下游引物qDPR：5’-CACCATCCCCAGCAATAC-3’。
其中，R＝A/G。
利用所述引物鉴别禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的实时荧光定量PCR-HRM方法，它包括以下步骤：
(1)提取待测样品基因组DNA；
(2)以提取的DNA为模板，利用所述的引物qDPF和qDPR进行实时荧光定量PCR反应；反应完成后作出熔解曲线；
其中，所述的实时荧光定量PCR反应的反应体系为：在20μL体系中含有以下成分：
Figure BDA0002222665680000021
所述的实时荧光定量PCR反应的反应条件为：95℃2min，预变性；95℃15s，55℃15s，68℃20s，共40个循环，循环结束后，做出熔解曲线。
(3)根据熔解曲线特异性峰值Tm值的差异，对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行鉴别诊断。
若在Tm＝(86.85±0.26)℃出现单一的特异性峰判为禽腺病毒C型阳性；若在Tm＝(89.77±0.25)℃出现单一的特异性峰判为鸭腺病毒3型阳性；若出现双峰且这两个峰分别在Tm＝(86.85±0.26)℃和Tm＝(89.77±0.25)℃，则判为禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型共阳性。
所述PCR-HRM引物在制备鉴别诊断禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型试剂盒上的应用。
其中，本发明的引物设计需满足以下要求：
(1)所述实时荧光定量PCR-HRM引物是根据禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的DNApolymerase基因进行设计，该引物进行常规PCR时，均可对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行扩增，扩增禽腺病毒C型的片段大小为197bp，扩增鸭腺病毒3型的片段大小为179bp，扩增的PCR产物用常规琼脂糖凝胶电泳无法区别。
(2)该引物扩增出的禽腺病毒C型的DNA片段与鸭腺病毒3型的DNA片段存在较大的GC含量差异，实时荧光定量PCR反应结束后的熔解曲线存在峰值(Tm值)差异，通过与电脑连接的分析软件，即可对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行准确区分。可达到仅需一组引物，即可特异性的对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行快速区分。
较之现有技术而言，本发明的优点在于：
1.本发明所设计的引物特异性强，利用该引物对样品的DNA进行实时荧光定量PCR反应，反应结束后可得扩增产物的熔解曲线，从熔解曲线分析可见，仅禽腺病毒C型与鸭腺病毒3型可见特异性阳性扩增信号，而其他家禽常见病原(如(DPV、GPV、MDPV、EDSV、E.coli、PM、RA)没有出现阳性扩增信号。
2.本组引物对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行实时荧光定量PCR反应均可有效扩增，但根据其反应后生成的溶解曲线的Tm值和核苷酸GC含量正相关的特点，通过观察进行实时荧光定量PCR扩增反应后的Tm值差异，即可对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行准确区分，当前国内外未见相关研究报道，本发明可填补相关领域空白。加之配合实时荧光定量PCR仪器连接的电脑并利用仪器自带的分析软件，可达到仅需一组引物，即可特异性地对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行快速区分。
3.本发明建立的方法简单、经济、方便高效、准确率高，可应用于禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的快速区分。使用本发明的方法对临床送检的47份死亡鸭源病料样品进行检测后发现，禽腺病毒C型有1份阳性，Tm值为86.9℃，阳性率为2.1％；鸭腺病毒3型有2份阳性，Tm值分别为89.9℃和89.7℃，阳性率为4.3％。未检测到禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型共阳性的样品。
附图说明
图1是本发明引物对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行检测的熔解曲线。其中，1为禽腺病毒C型；2为鸭腺病毒3型；3为禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型混合；4为阴性对照。
图2是本发明特异性试验的熔解曲线。其中，1为禽腺病毒C型；2为鸭腺病毒3型；3为鸭瘟病毒(DPV)、番鸭细小病毒(MDPV)、鹅细小病毒(GPV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、鸭源大肠杆菌(E.coli)、鸭源禽多杀性巴氏杆菌(PM)、鸭疫里默氏杆菌(RA)等家禽常见病原。
具体实施方式
下面结合说明书附图和实施例对本发明内容进行详细说明：
实施例1：
1.材料
1.1实验试剂与耗材：病毒核酸提取试剂盒EasyPure Viral DNA/RNA Kit、细菌基因组提取试剂盒EasyPure Bacteria Genomic DNAKit均购自北京全式金生物技术有限公司；实时荧光定量八排管(Axygen)购自Corning公司；实时荧光定量试剂SYBR Premix ExTaq II(Tli RNaseH Plus)购自宝生物工程(大连)有限公司。
1.2毒株：禽腺病毒C型(FJ1674株)、鸭腺病毒3型(LJ02株)、鸭瘟病毒(DPV)、鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、鸭源大肠杆菌(E.coli)、鸭源禽多杀性巴氏杆菌(PM)、鸭疫里默氏杆菌(RA)均由福建省农业科学院畜牧兽医研究所保存。
2.引物设计与合成
根据禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的DNApolymerase基因设计实时荧光定量PCR-HRM引物qDPF和qDPR，其中引物qDPF和qDPR序列如下：
上游引物qDPF：5’-CCTGGCGAATGTACTTRAAC-3’，
下游引物qDPR：5’-CACCATCCCCAGCAATAC-3’。
3.实时荧光定量PCR扩增：
利用北京全式金生物技术有限公司的Easy
Figure BDA0002222665680000052
Viral DNA/RNAKit核酸提取试剂盒，按照说明书的操作方法提取禽腺病毒C型(FJ1674株)、鸭腺病毒3型(LJ02株)的核酸DNA。以提取的DNA为模板，利用所设计的引物qDPF和qDPR进行实时荧光定量PCR扩增反应。
本发明使用的实时荧光定量试剂SYBR Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)购自宝生物工程(大连)有限公司，在结合试剂盒推荐的反应体系配置的基础上对实时荧光定量PCR反应液进行了优化，优化出的20μL最佳反应体系的具体配置方法见表1，最佳反应条件为：95℃2min，预变性；95℃15s，55℃15s，68℃20s，共40个循环，循环结束后，做出熔解曲线。
表1实时荧光定量PCR反应液的配置
Figure BDA0002222665680000051
4.实时荧光定量PCR溶解曲线分析
实时荧光定量PCR反应结束后，观察扩增曲线，判断建立的方法有无特异性扩增，实时荧光定量PCR反应结束后做出的熔解曲线，直接在和实时荧光定量PCR仪器连接的电脑上软件进行分析，对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行判断，如图1所示，判断方法为：若在Tm＝(86.85±0.26)℃出现单一的特异性峰判为禽腺病毒C型阳性；若在Tm＝(89.77±0.25)℃出现单一的特异性峰判为鸭腺病毒3型阳性；若出现双峰且这两个峰分别在Tm＝(86.85±0.26)℃和Tm＝(89.77±0.25)℃，则判为禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型共阳性。
5.实时荧光定量PCR的特异性试验
利用北京全式金生物技术有限公司的Easy
Figure BDA0002222665680000061
Viral DNA/RNAKit核酸提取试剂盒，按照说明书的操作方法提取禽腺病毒C型(FJ1674株)、鸭腺病毒3型(LJ02株)、鸭瘟病毒(DPV)、鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)、减蛋综合征病毒(EDSV)的核酸DNA。利用北京全式金生物技术有限公司的细菌基因组提取试剂盒EasyPure Bacteria GenomicDNA Kit，按照说明书的操作方法提取鸭源大肠杆菌(E.coli)、鸭源禽多杀性巴氏杆菌(PM)、鸭疫里默氏菌(RA)的核酸DNA。
以提取的DNA为模板，利用上述优化的条件进行SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测，反应结束后可得扩增产物的熔解曲线如图2所示：从图2的熔解曲线分析可见，仅禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型可见特异性阳性扩增信号；禽腺病毒C型在Tm＝86.8℃出现单一的特异性峰，鸭腺病毒3型在Tm＝90.0℃出现单一的特异性峰，对家禽常见病原(DPV、GPV、MDPV、EDSV、E.coli、PM、RA)进行检测，没有出现阳性扩增信号，说明该引物的特异性好。
6.临床检测
对临床送检的47份死亡鸭源病料样品利用本发明的方法进行检测后发现，禽腺病毒C型有1份阳性，Tm值为86.9℃，阳性率为2.1％；鸭腺病毒3型有2份阳性，Tm值分别为89.9℃和89.7℃，阳性率为4.3％。未检测到禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型共阳性的样品。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
序列表
<110> 福建省农业科学院畜牧兽医研究所
<120> 一种鉴别禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的实时荧光定量PCR-HRM引物及其方法
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 1
cctggcgaat gtacttraac 20
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 2
caccatcccc agcaatac 18

Claims (5)

1.一种鉴别禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的实时荧光定量PCR-HRM引物，其特征在于：所述引物的核苷酸序列如下所示：
上游引物qDPF：5’- CCTGGCGAATGTACTTRAAC-3’ ，
下游引物qDPR：5’- CACCATCCCCAGCAATAC-3’。
2.一种如权利要求1所述的PCR-HRM引物在制备鉴别诊断禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型试剂盒上的应用，该应用不属于疾病诊断和治疗方法。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：利用所述试剂盒进行禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的鉴别诊断采用如下步骤：
（1）提取待测样品基因组DNA；
（2）以提取的DNA为模板，利用所述的引物qDPF和qDPR进行实时荧光定量PCR反应；反应完成后作出熔解曲线；
（3）根据熔解曲线特异性峰值Tm 值的差异，对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行鉴别诊断。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：步骤（2）所述的实时荧光定量PCR反应的反应体系为：在20 μL体系中含有以下成分：
反应成分 体积/反应（µL ） 2×SYBR Premix Ex Taq Ⅱ(Tli RNaseH Plus) 10 上游引物qDPF（10 µM ） 0.5 下游引物qDPR（10 µM ） 0.5 模板DNA 2 dd H<sub>2</sub>O 7
。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：步骤（2）所述的实时荧光定量PCR反应的反应条件为：95 ℃ 2 min，预变性；95 ℃ 15 s，55℃ 15 s，68℃ 20 s，共40个循环，循环结束后，做出熔解曲线。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112725532B (zh) * 2021-01-21 2022-04-22 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 用于鉴别FAdV-4和DAdV-4的实时荧光定量PCR检测引物及其试剂盒

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108531663A (zh) * 2018-07-06 2018-09-14 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 鸭腺病毒DAdV-3和DAdV-A通用型检测引物及其应用
CN108842004A (zh) * 2018-07-28 2018-11-20 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 区分鸭腺病毒c型和鸭腺病毒b型的实时荧光定量pcr引物及其区分方法以及应用
CN108913813A (zh) * 2018-07-23 2018-11-30 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组
CN108950070A (zh) * 2018-07-28 2018-12-07 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 鉴别鸭腺病毒c型和鸭腺病毒b型的pcr引物及其鉴别方法以及应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108531663A (zh) * 2018-07-06 2018-09-14 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 鸭腺病毒DAdV-3和DAdV-A通用型检测引物及其应用
CN108913813A (zh) * 2018-07-23 2018-11-30 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组
CN108842004A (zh) * 2018-07-28 2018-11-20 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 区分鸭腺病毒c型和鸭腺病毒b型的实时荧光定量pcr引物及其区分方法以及应用
CN108950070A (zh) * 2018-07-28 2018-12-07 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 鉴别鸭腺病毒c型和鸭腺病毒b型的pcr引物及其鉴别方法以及应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Fowl adenovirus-induced diseases and strategies;Anna Schachner等;《Avian Pathology》;20171025;第47卷(第2期);参见全文 *
Two novel monoclonal antibodies against fiber-1 protein of FAdV-4 and their application in detection of FAdV-410;Hongxia Shao等;《BMC Veterinary Research》;20190708;第15卷;参见全文 *
鸭腺病毒3型MGB TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立;陈翠腾等;《农业生物技术学报》;20190227;第27卷(第3期);参见全文 *
鸭腺病毒3型PCR检测方法的建立;万春和等;《中国家禽》;20190125;第41卷(第2期);参见全文 *

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