CN108913813A - 用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组 - Google Patents

用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组 Download PDF

Info

Publication number
CN108913813A
CN108913813A CN201810809165.1A CN201810809165A CN108913813A CN 108913813 A CN108913813 A CN 108913813A CN 201810809165 A CN201810809165 A CN 201810809165A CN 108913813 A CN108913813 A CN 108913813A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dadv
aviadenovirus
primer sets
duck
adenovirus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810809165.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108913813B (zh
Inventor
万春和
黄瑜
程龙飞
傅光华
施少华
陈翠腾
刘荣昌
陈红梅
傅秋玲
林建生
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Animal Husbandry and Veterinary of Fujian Academy of Agricultural Sciences
Original Assignee
Institute of Animal Husbandry and Veterinary of Fujian Academy of Agricultural Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Animal Husbandry and Veterinary of Fujian Academy of Agricultural Sciences filed Critical Institute of Animal Husbandry and Veterinary of Fujian Academy of Agricultural Sciences
Priority to CN201810809165.1A priority Critical patent/CN108913813B/zh
Publication of CN108913813A publication Critical patent/CN108913813A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108913813B publication Critical patent/CN108913813B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供用于鉴别DAdV‑2和DAdV‑3的引物组，属于禽病学研究领域。采用了如SEQ ID NO.1‑2所示的引物组（2条引物），对鸭群中的属于腺病毒科禽腺病毒属的两种鸭源禽腺病毒（DAdV‑2和DAdV‑3）的鉴别诊断方法，本发明基于DAdV‑2和DAdV‑3的pVⅢ基因特点，建立一种仅需一套引物组（2条引物）的检测方法，即可科学对DAdV‑2和DAdV‑3进行鉴别，为在鸭群中开展DAdV‑2和DAdV‑3分子流行病毒学调查和科学防控相关疫病提供技术支撑，具有十分重要的研究意义。

Description

用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组
技术领域
本发明属于禽病学研究领域，具体涉及用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组。
背景技术
根据国际病毒分类委员会（International Committee on Taxonomy ofViruses，ICTV）的最新分类（https://talk.ictvonline.org/），腺病毒科（Family:Adenoviridae）下设5个属（Genera），分别为富AT腺病毒属(Genus: Atadenovirus)、禽腺病毒属(Genus: Aviadenovirus)、鱼腺病毒属(Genus:Ichtadenovirus)、哺乳动物腺病毒属(Genus: Mastadenovirus)和唾液酸酶病毒属(Genus:Siadenovirus)。
研究发现，禽类中存在多种腺病毒感染，其中感染鸡的腺病毒有5种：禽腺病毒A型（Fowl aviadenovirus A，FAdV-A）、禽腺病毒B型（Fowl aviadenovirus B，FAdV-B）、禽腺病毒C型（Fowl aviadenovirus C，FAdV-C）、禽腺病毒D型（Fowl aviadenovirus D，FAdV-D）、禽腺病毒E型（Fowl aviadenovirus E，FAdV-E），均属于禽腺病毒属。感染火鸡（Turkey）的腺病毒有4种，分别属于腺病毒科的两个属，其中火鸡腺病毒B型（Turkey aviadenovirusB）、火鸡腺病毒C型（Turkey aviadenovirus C）和火鸡腺病毒D型（Turkey aviadenovirusD）属于禽腺病毒属；而火鸡唾液酸酶病毒A型（Turkey siadenovirus A）属于唾液酸酶病毒属。感染鹦鹉(Psittacine)的腺病毒有2种，分别属于腺病毒科的两个属，其中鹦鹉富AT腺病毒属A型（Psittacine atadenovirus A）属于富AT腺病毒属；而鹦鹉腺病毒B型（Psittacine aviadenovirus B）属于禽腺病毒属。
当前研究表明，鸭群中已报道的腺病毒有属于富AT腺病毒属的鸭腺病毒A型（duckadenovirus A，缩写为DAdV-A）。2014年，随着高通量技术的发展，Marek A等测定了1株鸭源腺病毒（GR株，GenBank登录号NC024486）全基因组序列，并将其命名为鸭腺病毒2型（duckadenovirus 2，DAdV-2），属于禽腺病毒属新成员（Marek A, Kaján GL, Kosiol C, et al.Complete genome sequences of pigeon adenovirus 1 and duck adenovirus 2 extendthe number of species within the genus Aviadenovirus[J]. Virology, 2014, 462-463: 107-114.），随后ICTV将其科学命名为鸭腺病毒B型（duck aviadenovirus B，用来区别鸭腺病毒A型，为了便于研究的一致性，本发明还是将其写为DAdV-2）。随后2014年以来，在我国番鸭中出现一种新的鸭腺病毒（CH-GD-2014株，GenBank登录号KR135164），该病毒和鸭腺病毒2型（duck adenovirus 2）GR株存在以下明显区别：①其全基因组序列和GR株的核苷酸同源性仅为92.3%；②CH-GD-2014株和GR株的Hexon基因的核苷酸同源性仅为76.6%，低于80.0%；③CH-GD-2014株有2个纤突蛋白（Fiber 1、Fiber 2），而GR株只有1个纤突蛋白（Fiber）。基于上述特征表明在我国鸭群中流行一种新的鸭腺病毒，并将其命名为鸭腺病毒3型（duck adenovirus 3，DAdV-3）（周镇海．鸭腺病毒3型基因组序列分析及致病性研究[D]．华南农业大学硕士论文，2016．）。上述研究表明，当前在鸭群中已发现3种腺病毒：属于富AT腺病毒属的DAdV-A、属于禽腺病毒属的DAdV-2和DAdV-3。
腺病毒颗粒为无囊膜、核衣壳呈二十面体对称、线性、双链DNA病毒，其基因组全长约为33kd左右。pVⅢ蛋白是腺病毒的主要结构蛋白，位于衣壳的内面，与六邻体紧密相连，属六邻体相关蛋白，内有3个蛋白酶切位点，其对完整病毒粒子的形成是必不可少的，且与其他腺病毒和哺乳动物腺病毒的同源性差别很大。利用分子生物学软件对DAdV-2和DAdV-3的pVⅢ基因分析比对发现，DAdV-2代表株（GR株）的pVⅢ基因全长为786bp，编码261个aa残基的pVⅢ蛋白；DAdV-3代表株（CH-GD-2014株）的pVⅢ基因全长为732bp，编码243个aa残基的pVⅢ蛋白，其核苷酸同源性为97.3%。
PCR技术因其具有高效性、系统性和经济简便性被广泛应用于多种病原微生物的检测。一般而言，对两个病原进行鉴别诊断，需要针对2个病原分别设计引物（即共需要4条引物），来建立鉴别诊断方法。本发明的目的是建立针对禽腺病毒属的2中鸭源腺病毒（DAdV-2和DAdV-3）得鉴别诊断PCR方法，为解决上述问题，本发明基于DAdV-2和DAdV-3的pVⅢ基因特点，建立一种仅需一套引物组（2条引物）的检测方法，即可科学对DAdV-2和DAdV-3进行鉴别，为鸭群中开展属于禽腺病毒属的DAdV-2和DAdV-3的2种病原的流行病学调查奠定基础，具有十分重要的研究意义。
发明内容
本发明的目的在于提供用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组，建立一种仅需一套引物组（2条引物）的检测方法，即可科学对DAdV-2和DAdV-3进行鉴别，为鸭群中开展属于禽腺病毒属的DAdV-2和DAdV-3的2种病原的流行病学调查奠定基础。
为实现上述目的采用以下技术方案：
用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组，所述引物组如下：
DAdV-23-F：5’- CGATCAACAACCCTACGCCAAC -3’，
DAdV-23-R：5’- CTGAGCTGTACGCGACCTT -3’ 。
按照DreamTaq Green PCR Master Mix(2×)试剂盒推荐的的50μL体系进行扩增，其中2×PCR Master Mix扩增反应液25 μL、引物组（DAdV-23-F和DAdV-23-R，10μM）分别为1.0 μL、提取的核酸模板1.0 μL、补充灭菌去离子水至终体积50μL，混匀后进行PCR扩增。
扩增条件为95 ℃预变性3 min后进入循环，95 ℃变性30 s 、△T（52 ℃-62 ℃）退火30 s、72 ℃延伸50s，35个循环结束后，72℃终延伸10 min，反应结束后按照常规琼脂糖凝胶电泳鉴定。△T（52 ℃-62 ℃）表示退火温度在此区间进行优化，经优化后的最佳退火温度为54 ℃。
本发明的另一目的是提供所述的引物组在制备检测DAdV-2和DAdV-3试剂盒中的应用。
本发明的优点在于：
本发明基于DAdV-2和DAdV-3的pVⅢ基因特点，建立一种仅需一套引物组（2条引物）的PCR方法，结果判定如下：当目的条带约213bp时判为DAdV-2阳性；当目的条带约159bp时判为DAdV-3阳性；当目的条带约213bp和159bp时判为DAdV-2和DAdV-3混合感染阳性；本发明方法简单实用、方便快捷，即可科学对DAdV-2和DAdV-3进行鉴别，具有十分重要的研究意义。
附图说明
图1 DAdV-3与DAdV-2的基因缺失区。
图2 PCR产物电泳分析，其中M：DL500分子量标准；1：DAdV-2；2：DAdV-3；3：DAdV-2和DAdV-3混合感染；4：DEV；5：MDPV；6：DuCV；7：GPV；8：E. coli；9：R.A.；10：S.S.；11：P.M.。
具体实施方式
实施例1
1、材料
1.1 毒株和菌株
试验用病原DAdV-3、DAdV-2、鸭肠炎病毒（DEV）、番鸭细小病毒（MDPV）、鸭圆环病毒（DuCV）、鸭源鹅细小病毒（GPV）；试验用对照菌株鸭大肠杆菌（E. coli）、鸭疫里氏杆菌(R.A.)、沙门氏菌(S.S.)和鸭源禽多杀性巴氏杆菌(P.M.)，均由福建省农业科学院畜牧兽医研究所保存。
引物设计
根据美国国家生物技术信息中心(National Center of BiotechnologyInformation，NCBI）数据库GenBank上腺病毒科DAdV-2代表株GR株（NC024486）、 DAdV-3代表株（CH-GD-2014株）的pVⅢ基因，利用Lasergene DNAStar MegAlign进行核苷酸系列分析比对，确定DAdV-2和DAdV-3的pVⅢ基因核苷酸同源性为97.3%，但DAdV-3比DAdV-2存在一个54bp连续核苷酸序列（GCGGGTGGGGCGATTCCGCTCTACACGAGCGGATCGGAAGGTGACGTGCAATTA）缺失(图1)。
针对此基因缺失区，利用引物设计软件Oligo 7.0设计一套引物组（2条），跨过该基因缺失区，设计的特异性引物序列为：
DAdV-23-F：5’- CGATCAACAACCCTACGCCAAC -3’，
DAdV-23-R：5’- CTGAGCTGTACGCGACCTT -3’ 。
主要试剂
DreamTaq Green PCR Master Mix(2×)购自Thermo Scientific公司，EasyPureGenomic DNA Kit、EasyPure Bacteria Genomic DNA Kit均购自北京全式金生物技术有限公司。
试验方法的建立
2.1 基因组DNA的提取
DAdV-2、DAdV-3、DEV、MDPV、DuCV、GPV按照EasyPure Genomic DNA Kit试剂盒的方法提取相应的基因组DNA，-80℃冻存备用。
E. coli、R.A.、S.S.和P.M.按照 EasyPure Bacteria Genomic DNA Kit试剂盒的方法提取相应的基因组DNA，-80℃冻存备用。
2.2 反应液的配置和退火温度的优化
按照DreamTaq Green PCR Master Mix(2×)试剂盒推荐的的50μL体系进行扩增，其中2×PCR Master Mix扩增反应液25 μL、引物DAdV-23-F（10μM）2.0 μL、引物DAdV-23-R（10μM）1.0 μL、提取的核酸模板（DAdV-3、DAdV-2、DAdV-3和DAdV-2混合）各1.0 μL、补充灭菌去离子水至终体积50μL，混匀后进行PCR扩增。
扩增条件为95 ℃预变性3 min后进入循环，95 ℃变性30 s 、△T（52 ℃-62 ℃）退火30 s、72 ℃延伸50s，35个循环结束后，72℃终延伸10 min，反应结束后按照常规琼脂糖凝胶电泳鉴定。△T（52 ℃-62 ℃）表示退火温度在此区间进行优化。经优化后的最佳退火温度为54 ℃。
结果可见（图2），当模板仅加入DAdV-2时，出现大小为213bp的条带（第1泳道）；当模板仅加入DAdV-3时，出现大小为159bp的条带（第2泳道）；当模板加入DAdV-2和DAdV-3混合时，出现大小为213bp和159bp的两条带（第3泳道）。
2.3 特异性试验
将优化后的PCR体系和条件，对DEV、MDPV、DuCV、GPV、E. coli、R.A.、S.S.和P.M.进行扩增，均未见扩增条带。结果见图2，DEV（第4泳道）、MDPV（第5泳道）、DuCV（第6泳道）、GPV（第7泳道）、E. coli（第8泳道）、R.A.（第9泳道）S.S.（第10泳道）和P.M.（第11泳道），表明建立的方法特异性强，对常见水禽病原均无交叉反应。
临床试验
对179份送检鸭源病料按照常规方法研磨处理后，利用EasyPure Genomic DNA Kit提取相应的核酸DNA，利用优化后的PCR方法进行DAdV-2和DAdV-3感染的检测。结果可见，检测到3份DAdV-2感染阳性，阳性率为1.68%；检测到15份DAdV-3感染阳性，阳性率为8.38%；检测到2份DAdV-2和DAdV-3共感染阳性，阳性率为1.12%。
将PCR反应结束后的阳性目的片段利用琼脂糖凝胶回收试剂盒（DP209，天根生化科技（北京）有限公司）分别进行切胶回收。按照pEASY-T1 Simple Cloning Kit克隆连接试剂盒（CT111-01，北京全式金生物技术有限公司）说明书将PCR扩增基因片段克隆到pEASY-T1载体上，随机挑取8个单菌落于氨苄青霉素（含量为100 μg/mL）抗性的LB液体培养基培养14 h后，利用快速质粒小提试剂盒（DP105，天根生化科技（北京）有限公司）提取相应的质粒。采用PCR扩增时的引物和条件对提取的质粒分别进行PCR鉴定，将筛选出的阳性重组质粒送宝日医生物技术（北京）有限公司进行测序。将测序结果在NCBI上进行BLAST分析验证，均为相应的DAdV-2和DAdV-3的pVⅢ片段，其中DAdV-2阳性片段和DAdV-2（GR株）的pVⅢ基因同源性在99.1%以上；DAdV-3阳性片段和DAdV-3（CH-GD-2014株）的pVⅢ基因同源性在99.3%以上。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 福建省农业科学院畜牧兽医研究所
<120> 用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组
<130> 2
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
cgatcaacaa ccctacgcca ac 22
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ctgagctgta cgcgacctt 19
<210> 3
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
gcgggtgggg cgattccgct ctacacgagc ggatcggaag gtgacgtgca atta 54

Claims (2)

1.用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组，其特征在于：所述引物组如下：
DAdV-23-F：5’- CGATCAACAACCCTACGCCAAC -3’，
DAdV-23-R：5’- CTGAGCTGTACGCGACCTT -3’ 。
2.权利要求1所述的引物组在制备检测DAdV-2和DAdV-3试剂盒中的应用。
CN201810809165.1A 2018-07-23 2018-07-23 用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组 Active CN108913813B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810809165.1A CN108913813B (zh) 2018-07-23 2018-07-23 用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810809165.1A CN108913813B (zh) 2018-07-23 2018-07-23 用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108913813A true CN108913813A (zh) 2018-11-30
CN108913813B CN108913813B (zh) 2022-04-12

Family

ID=64415490

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810809165.1A Active CN108913813B (zh) 2018-07-23 2018-07-23 用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108913813B (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108842004A (zh) * 2018-07-28 2018-11-20 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 区分鸭腺病毒c型和鸭腺病毒b型的实时荧光定量pcr引物及其区分方法以及应用
CN108842005A (zh) * 2018-07-28 2018-11-20 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 同时检测鸭腺病毒c型和鸭腺病毒b型的mgb探针及其配套引物以及方法
CN108950070A (zh) * 2018-07-28 2018-12-07 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 鉴别鸭腺病毒c型和鸭腺病毒b型的pcr引物及其鉴别方法以及应用
CN110373496A (zh) * 2019-06-13 2019-10-25 温氏食品集团股份有限公司 用于i亚群血清8型禽腺病毒检测的试剂盒及检测方法
CN110592283A (zh) * 2019-09-30 2019-12-20 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一种鉴别禽腺病毒c型和鸭腺病毒3型的实时荧光定量pcr-hrm引物及其方法
CN110628726A (zh) * 2019-09-30 2019-12-31 山东信得科技股份有限公司 一种番鸭新型腺病毒株、二价灭活疫苗及其制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103757137A (zh) * 2014-01-22 2014-04-30 广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 同步检测三种猪病毒的共有引物核酸扩增方法与试剂盒
CN106011315A (zh) * 2016-08-12 2016-10-12 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一组1型和新血清型鸭肝炎病毒的rt-pcr鉴别诊断引物
CN107058634A (zh) * 2017-06-13 2017-08-18 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 鸭腺病毒2型和鸭腺病毒a型双重pcr检测引物及试剂盒
WO2017161302A1 (en) * 2016-03-17 2017-09-21 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for the rapid differential detection of zika virus

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103757137A (zh) * 2014-01-22 2014-04-30 广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 同步检测三种猪病毒的共有引物核酸扩增方法与试剂盒
WO2017161302A1 (en) * 2016-03-17 2017-09-21 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for the rapid differential detection of zika virus
CN106011315A (zh) * 2016-08-12 2016-10-12 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一组1型和新血清型鸭肝炎病毒的rt-pcr鉴别诊断引物
CN107058634A (zh) * 2017-06-13 2017-08-18 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 鸭腺病毒2型和鸭腺病毒a型双重pcr检测引物及试剂盒

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
XINHENG ZHANG等: "Molecular characterization, phylogeny analysis and pathogenicity of a Muscovy duck adenovirus strain isolated in China in 2014", 《VIROLOGY》 *
万春和等: "鸭肠炎病毒疫苗株EvaGreen实时荧光定量PCR方法的建立", 《畜牧兽医学报》 *
周镇海: "鸭腺病毒3型基因组序列分析及致病性研究", 《万方学位论文数据库》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108842004A (zh) * 2018-07-28 2018-11-20 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 区分鸭腺病毒c型和鸭腺病毒b型的实时荧光定量pcr引物及其区分方法以及应用
CN108842005A (zh) * 2018-07-28 2018-11-20 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 同时检测鸭腺病毒c型和鸭腺病毒b型的mgb探针及其配套引物以及方法
CN108950070A (zh) * 2018-07-28 2018-12-07 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 鉴别鸭腺病毒c型和鸭腺病毒b型的pcr引物及其鉴别方法以及应用
CN110373496A (zh) * 2019-06-13 2019-10-25 温氏食品集团股份有限公司 用于i亚群血清8型禽腺病毒检测的试剂盒及检测方法
CN110592283A (zh) * 2019-09-30 2019-12-20 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一种鉴别禽腺病毒c型和鸭腺病毒3型的实时荧光定量pcr-hrm引物及其方法
CN110628726A (zh) * 2019-09-30 2019-12-31 山东信得科技股份有限公司 一种番鸭新型腺病毒株、二价灭活疫苗及其制备方法
CN110592283B (zh) * 2019-09-30 2022-05-20 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一种鉴别禽腺病毒c型和鸭腺病毒3型的实时荧光定量pcr-hrm引物及其方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108913813B (zh) 2022-04-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108913813A (zh) 用于鉴别DAdV-2和DAdV-3的引物组
CN108531663A (zh) 鸭腺病毒DAdV-3和DAdV-A通用型检测引物及其应用
CN107058634B (zh) 鸭腺病毒2型和鸭腺病毒a型双重pcr检测引物及试剂盒
Hanson et al. A broadly applicable method to characterize large DNA viruses and adenoviruses based on the DNA polymerase gene
CN105176932A (zh) 利用对大肠杆菌具有广泛抗菌活性的噬菌体防止及处理大肠杆菌感染的方法
CN112063594B (zh) 一株耐高温沙门氏菌噬菌体rdp-sa-18056及其微胶囊的制备工艺
CN107043831A (zh) 鸭腺病毒A型和2型Real time PCR检测引物、探针及试剂盒
CN107012261A (zh) 鸭腺病毒A型和2型双重EvaGreen实时荧光定量PCR检测引物
CN111849979B (zh) 一种靶向敲除RPSA基因的sgRNA及RPSA基因敲除细胞系的构建方法
CN113583973B (zh) 一株高裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体rdp-kp-20007及其应用
CN109321535A (zh) 一种热稳定的新城疫病毒弱毒疫苗候选株
CN114164184B (zh) 一种新城疫病毒基因ⅵ型疫苗株及其应用
CN105200085A (zh) 重组人成纤维细胞生长因子-18的生产方法及其用途
CN102732545A (zh) 鸭瘟病毒转移载体pUC-ΔgC-EGFP及gC缺失重组株DPV-ΔgC-EGFP
CN108866240A (zh) 用于鉴别DAdV-3和DAdV-A的引物和酶及其应用
Xu et al. Development of two brain cell lines from goldfish and silver crucian carp and viral susceptibility to Cyprinid herpesivirus-2
Mu et al. FV3-like ranavirus infection outbreak in black-spotted pond frogs (Rana nigromaculata) in China
CN108842000A (zh) 用于鉴别DAdV-3和DAdV-A的引物组
CN113201508A (zh) 一种重组新城疫溶瘤病毒及制备方法与应用
Gong et al. Establishment and characterization of a spinal cord tissue cell line from mandarin fish, Siniperca chuatsi and its susceptibility to several viruses
CN112891528B (zh) 一种鸡传染性支气管炎疫苗株
CN110904056B (zh) 一种传染性支气管炎病毒rH120-YZS1Δ5a及其构建方法和应用
CN113564165B (zh) 一种胞内编辑伪狂犬病毒关键基因的细胞株及其构建方法和应用
CN110205307A (zh) 去除vgf基因的重组天坛株溶瘤痘苗病毒及制备和应用
KR20180102040A (ko) 신규한 비브리오 파라헤몰리티쿠스 박테리오파지 Ｖｉｂ-ＰＡＰ-4 및 이의 비브리오 파라헤몰리티쿠스 균 증식 억제 용도

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant