CN110551659A - 一种具有抗线虫活性的蜡样芽孢杆菌菌株及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种具有抗根结线虫活性的蜡样芽孢杆菌菌株及其应用，所述菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)菌株Bc‑cm103，其保藏编号为CGMCCNO.17580。所述菌株分离自刺角瓜的根际土壤。本发明提供了一种新的蜡样芽孢杆菌Bc‑cm103菌株，该菌株具有较高的抗根结线虫的活性，对根结线虫有很好的防治作用，在应用中具有安全性，适用于根结线虫的生物防治。本发明通过将蜡样芽孢杆菌Bc‑cm103菌株发酵，得到三种抗根结线虫化合物，该化合物对根结线虫具有高的致死率。

Description

一种具有抗线虫活性的蜡样芽孢杆菌菌株及其应用
技术领域
本发明属于微生物的技术领域，具体涉及一种具有抗线虫活性的蜡样芽孢杆菌菌株及其应用。
背景技术
根结线虫是重要的植物寄生性线虫，寄主范围广，危害重，是农业生产中的重要病害之一。根结线虫可以寄生在多达3000种植物上，对植物造成严重的经济损失。随着我国北方地区种植结构和方式的调整，在设施栽培的环境条件下，根结线虫病害的发生也越来越普遍和严重。因此根结线虫严重的威胁农业正常生产。最常见的为南方根结线虫(M.incognita)、爪哇根结线虫(M.javanica)、花生根结线虫(M.arenaria)、和北方根结线虫(M.hapla)。
根结线虫侵染植物的危害主要表现为两个方面：一方面根结线虫在植物的根系上形成根结，从而破坏水分和养分的吸收能力，导致减产。在这种情况下其危害与线虫的密度紧密相关。另一方面根结线虫与其他的病原物发生联合侵染，形成复合病害加重对寄主的危害。在根结线虫侵染时造成的伤口有利于疫病、枯萎病、及立枯病菌的侵染，在这种情况下根结线虫往往很小的群体就可以造成严重的危害。特别是南方根结线虫几乎侵染所有的栽培植物，一般情况下对农作物的造成绝产，严重的绝收。
根结线虫的防治是一个世界性的农业难题，目前化学药剂防治蔬菜根结线虫病仍是我国线虫病害综合防治的主要措施，但其对人畜有毒、污染环境、破坏土壤生物区系，而且防治效果不是十分理想。随着无公害蔬菜生产的大面积推广，化学药剂的使用受到了限制，安全、无污染的生物防治越来越受到重视。
利用微生物控制根结线虫的危害是农业上防治根结线虫的一个重要策略，这些微生物既包括拮抗微生物也包括植物内生菌。虽然对于根结线虫的生物防治研究了多年，但是生防作用在根结线虫的防治中仍然没有重大的进展。因此，开发研究一种防治根结线虫效果良好的菌株，具有重要的意义。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种具有抗线虫活性的蜡样芽孢杆菌菌株及其应用。
一方面，本发明提供了一种具有抗根结线虫活性的蜡样芽孢杆菌菌株，所述菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)菌株Bc-cm103，其保藏编号为CGMCCNO.17580。
优选的，所述菌株分离自刺角瓜的根际土壤。
另一方面，本发明还提供了一种菌剂，其含有权利要求1或2所述的菌株。
另一方面，本发明还提供了所述的菌株或权利要求3所述的菌剂在防治根结线虫中的应用。
优选的，所述应用的方法包括：将蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)菌株Bc-cm103进行发酵培养。
优选的，所述发酵培养使用的培养基为LB培养基，温度为25～30℃，时间为1～3天。
另一方面，本发明还提供了一种抗根结线虫化合物，所述化合物为13-甲基十四烷酰胺，和/或14-甲基十五烷酰胺，和/或15-甲基十六烷酰胺。
优选的，所述化合物通过将蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)菌株Bc-cm103进行发酵，得到的发酵液经提取、分离、纯化获得。
优选的，所述发酵使用的培养基为LB培养基，温度为25～30℃，时间为1～3天；使用乙酸乙酯浸泡提取，浸泡时间为12～24h；分离的方式为减压蒸馏；使用葡聚糖凝胶柱层析进行纯化，葡聚糖凝胶柱层析中，流动相为100％甲醇。
另一方面，本发明还提供了一种防治根结线虫的方法，使用所述的菌株或菌剂，或使用所述的化合物。
本发明的有益效果：
(1)本发明提供了一种新的蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌株，该菌株具有较高的抗根结线虫的活性，对根结线虫有很好的防治作用，在应用中具有安全性，适用于根结线虫的生物防治。
(2)本发明通过将蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌株发酵，得到三种新的抗根结线虫化合物，该化合物对根结线虫具有高的致死率。
(3)本发明的蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌株发酵液对根结线虫二龄幼虫的致死率达到100％，在盆栽实验中的防治效果达到84.7％，防治效果高且稳定，适于农业生产需求。
生物材料保藏信息：
蜡样芽孢杆菌菌株Bc-cm103，已于2019年4月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。保藏编号CGMCCNO.17580，建议的分类命名：蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus。
附图说明
图1为本发明菌株Bc-cm103的细菌形态图；
图2为本发明菌株Bc-cm103的菌落图；
图3为本发明式I所示化合物的高分辨质谱图；
图4为本发明式I所示化合物的氢谱图；
图5为本发明式I所示化合物的碳谱图；
图6为本发明式I所示化合物的COSY分析图；
图7为本发明式I所示化合物的HMQC分析图；
图8为本发明式I所示化合物的HMBC分析图；
图9为本发明式II所示化合物的高分辨质谱图；
图10为本发明式II所示化合物的氢谱图；
图11为本发明式II所示化合物的碳谱图；
图12为本发明式II所示化合物的COSY分析图；
图13为本发明式II所示化合物的HMQC分析图；
图14为本发明式II所示化合物的HMBC分析图；
图15为本发明式III所示化合物的高分辨质谱图；
图16为本发明式III所示化合物的氢谱图；
图17为本发明式III所示化合物的碳谱图；
图18为本发明式III所示化合物的COSY分析图；
图19为本发明式III所示化合物的HMQC分析图；
图20为本发明式III所示化合物的HMBC分析图；
图21为本发明化合物处理后南方根结线虫死亡率；
图22为本发明化合物处理后的根结线虫体壁降解。
具体实施方式
下面通过实施例的方式和附图进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
下述实施例中，如非特别说明，所用试剂和材料均为常规市售可得。
实施例1：蜡样芽孢杆菌的分离、纯化及鉴定
从廊坊黄瓜种植田块中刺角瓜根际均匀取土壤样品，共六份，各取10g，混合均匀；将60g土壤加入1000mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置1min，取上清液在80℃水浴30min，加热时充分及搅动，使得受热均匀，静置后15min，冷却到室温后，摇匀，取1mL上清液，灭菌水稀释100倍，然后取稀释后的液体0.25mL涂布在LB平板(即酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，琼脂粉1.3-1.5g/100mL，定容至1L，封口。121℃，20min，高温高压灭菌，在培养皿中铺制成平板)上，涂抹均匀，倒置于28℃恒温培养箱中培养2～4d，每天检查菌落大小。待组织块长出菌落后，进行单孢分离，挑取单菌落在LB培养基上纯化，用于分类鉴定。根据《伯杰氏细菌鉴定手册》对菌株进行形态学测定。
用灭菌的牙签挑取单菌落，放入盛有300μL菌细裂解液SDS的EP管中，65℃裂解2小时，然后用细菌基因组DNA提取试剂盒(天根生物科技有限公司)提取细菌DNA，以DNA为模板，用引物27F和1492R分别进行16srRNA序列扩增。
PCR扩增反应体系为50μL，含有25μL ExTaq酶，1μL正向引物，1μL反向引物，3μLDNA模板，无菌水20μL。扩增条件：94℃5min，94℃30S，45℃30S，72℃2.5min，30个循环；72℃10min。扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳分离鉴定，PCR产物直接进行双向测序。
参见图1和图2，获得Bc-cm103菌株在LB培养基平板上，30℃，培养3天后，单菌落乳白色，光滑且边缘整齐，呈杆状，大小为0.5μm×(1.5-3.5μm)，聚合在一起呈短链或念珠状排列，芽孢椭圆形，中生，末端膨大为孢子囊。菌体杆状，革兰氏染色呈现为阳性。依照《伯杰氏细菌鉴定手册》对Bc-cm103菌株形态进行测定，确定该菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)。
用引物27F、1492R进行16SrRNA序列扩增：
27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’
1492R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’。
PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳。经测序分析菌株扩增的16SrRNA序列长为1512bp，如SEQ NO.1所示。将菌株的16SrRNA序列进行BLAST分析后，结果显示，Bc-cm103菌株与蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)相似度达到了100％。鉴定菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)。
实施例2：蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌株发酵液的杀线虫效果
1、蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌株发酵液的制备
将蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌株(浓度为106cfu/ml)接种到含有LB液体培养基100mL的500mL三角瓶中，在28℃中震荡(220rpm)培养2天，将发酵液及其10倍、100倍稀释液分别处理根结线虫(Meloidogyne spp.)二龄幼虫，测定蜡样芽孢杆菌发酵产物对根结线虫的致死作用。
2、制备试验用线虫
根结线虫采自中国农业科学院蔬菜花卉研究所温室。将根结线虫发病辣椒的根系取出，用水轻轻冲洗，从根系表面小心取下卵块，放在0.5％的次氯酸钠中消毒3min，再用无菌水冲洗3次，放在含有少量无菌水的培养皿中，在25℃恒温箱中培养，24h-48h收集孵化的根结线虫二龄幼虫，用无菌水悬浮用于试验研究。
3、试验方法
在无菌的24孔细胞培养板上，分别向孔内加入不同浓度的发酵液个1mL，并以无菌水作为对照，然后分别向处理和对照中加入100μL线虫悬浮液(100条线虫)，放在室温下24h，观察根结线虫的死亡情况，计算校正死亡率，即为杀线虫效果，每个处理做24个孔(样本)，每个试验重复3次。
4、试验结果：
通过上述试验，测定不同倍数发酵液处理24h对根结线虫的杀死效果，结果表明不同发酵液倍数对线虫的作用效果不同，发酵液原液的作用根结线虫的校正死亡率为100％，发酵液稀释后防治效果降低，但在10倍稀释液中杀线虫效果仍然达到96.1％，而在100倍稀释液中线虫死亡率很低(11.6％)，与对照的差异很小。试验说明发酵液在具有良好的防治根结线虫效果。
表1不同浓度的Bc-cm103菌株发酵液杀线虫效果
线虫死亡率 原液(％) 10倍液(％) 100倍液(％) 清水对照(％)
重复1 100 96.8 12.5 1.3
重复2 100 94.1 11.8 1.5
重复3 100 97.5 11.2 1.2
校正死亡率 100％ 96.1％ 11.6％ -
实施例3：蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌株的杀线虫物质分离、鉴定及杀线虫作用
3-1、杀线虫物质的制备
a.蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌株的液体发酵
蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌株的活化。LB固体培养基：酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，琼脂粉1.3-1.5g/100mL，纯净水1000mL，121℃高压蒸汽灭菌30分钟。LB液体培养基：酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，纯净水1000mL，121℃高压蒸汽灭菌30分钟。用涂布法将-80℃冰箱保存的蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌株涂于LB平板上，37℃过夜培养。挑取LB平板上长出的蜡样芽孢杆菌Bc-cm103单菌落接种于LB液体培养基中，37℃过夜培养，获得蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌种。
蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌株液体发酵。LB液体培养基：酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，纯净水1000mL，分装100ml培养基于500mL三角瓶中，121℃高压蒸汽灭菌30分钟，冷却待用。将1ml蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌种(浓度为106cfu/mL)接种于LB液体培养基，在28℃摇床无菌培养48h，获得发酵培养物，共培养100L发酵培养物。
b.粗提物的提取
步骤a得到的发酵培养物10mL用100mL乙酸乙酯浸泡24h，将乙酸乙酯加入500mL三角瓶中(共1000瓶，每瓶100mL)。超声震荡1h，静置分层。将上层有机相倒出，为粗提液；将粗提液减压蒸馏至干燥，得到5g的粗提物。
c.粗提物的分离纯化
将上述粗提物装入葡聚糖凝胶柱(葡聚糖凝胶柱(60cm×1.8cm)，购白新维尔玻璃仪器公司；所用的凝胶填料为葡聚糖凝胶SephadexLH-20(购白GEIleal thcare BioSciences AB公司)，柱子中装30g凝胶]，所用流动相为甲醇，按照分子量由小到大的顺序将粗提物分成20个组分，在活性跟踪[测试20个组分对南方根结线虫抑制活性，具体的测试方法如实施例3-3所述，抑制率大于50％视为有抑制活性]指导下，发现第5组分有抑制活性，收集活性组分5(1.3g)。
将活性组分5通过HPLC进行分离，其中HPLC的条件是：采用Agilent1260型半制备高压液相色谱仪，Agilent C1s反相半制备色谱柱(5μm、9.4×250mm)，流速2.0mL/min，用甲醇和水作为流动相；制备条件：0-2min，甲醇/水(10/90，v/v)；2.1-20min，甲醇比例逐渐增加(由10％至100％)，水比例逐渐减少(由90％至10％)；20.1-35，100％甲醇洗脱。按照时间，将整个35分钟的分离程序分成14个组分(2.5min一个组分)分别收集，在活性跟踪[测试14个亚组分对南方根结线虫抑制活性，具体的测试方法如实施例3-3所述，抑制率大于50％视为有抑制活性]指导下，发现第27.5min-35min(即第11-14亚组分)有抑制活性，命名为5-27.5-35亚组分。27.5min-35min有明显的7个吸收峰，对27.5min-35min按照吸收峰进一步分离并收集，获得7个组分，在活性跟踪[测试7个组分对南方根结线虫抑制活性，具体的测试方法如实施例3-3所述，抑制率大于50％视为有抑制活性]指导下，发现第3(28.65min-29.50min)、4(29.51min-30.75min)、5(30.76min-32.2min)亚组分有抑制活性，分别命名为5-27.5-3-3亚组分、5-27.5-35-4亚组分、5-27.5-35-5亚组分，收集活性亚组分5-27.5-35-3(12.8mg)、5-27.5-35-4(5.5mg)、5-27.5-35-5(18.3mg)。
综上，5g粗提物经过分离纯化而得到12.8mg组分5-27.5-35-3化合物，收率为0.256％；5.5mg组分5-27.5-35-4化合物，收率为0.11％；18.3mg组分5-27.5-35-3化合物，收率为0.366％。
3-2.式I所示化合物、式II所示化合物、式III所示化合物的结构表征
将实施例3-1制备的组分5-27.5-35-3化合物、组分5-27.5-35-4化合物、组分5-27.5-35-5化合物进行高分辨质谱(HRESIMS)、核磁共振谱(NMR)分析，其中高分辨质谱由中国科学院微生物研究所质谱测试中心提供测试(测试仪器型号为Agilent Accurate-Mass-Q-TOF LC/MS6520B)，核磁共振谱由中国科学院微生物研究所核磁测试中心提供测试(测试仪器型号为Bruker AVANCE III 500MHz)。
经过测试分析，如图3-8所示，实施例3-1制备的组分5-27.5-35-3化合物的理化数据为：褐色油状；分子式：C15H31NO；分子量：241；高分辨质谱HRESIMS：m/z 242.2480[M+H]+(计算的C15H32NO+，242.2478)；m/z 264.2306[M+Na]+(计算的C15H31NONa+，264.2298)；氢谱(1H-NMR)和碳谱(13C-NMR)数据见表2。以氘代甲醇为溶剂测试。通过将上述组分5-27.5-35-3化合物的高分辨质谱、核磁共振氢谱、碳谱，结合组分5-27.5-35-3化合物的二维核磁共振谱1H-1H COSY谱、HMQC谱和HMBC谱，确证此化合物的结构如式I所示：
式I
表2式I化合物的氢和碳核磁数据(氘代甲醇)
aRecorded at 500MHz.bRecorded at 125MHz.c可互换
经过测试分析，如图9-14所示，实施例3-1制备的组分5-27.5-35-4化合物的理化数据为：褐色油状；分子式：C16H33NO；分子量：255；高分辨质谱HRESIMS：m/z 256.2634[M+H]+(计算的C16H34NO+，256.2635)；m/z 278.2457[M+Na]+(计算的C16H33NONa+，278.2454)；氢谱(1H-NMR)和碳谱(13C-NMR)数据见表3。以氘代甲醇为溶剂测试。通过将上述组分5-27.5-35-4化合物的高分辨质谱、核磁共振氢谱、碳谱，结合组分5-27.5-35-4化合物的二维核磁共振谱1H-1H COSY谱、HMQC谱和HMBC谱，确证化合物的结构如式II所示：
式II
表3式II化合物的氢和碳核磁数据(氘代甲醇)
aRecorded at 500MHz.bRecorded at 125MHz.c可互换
经过测试分析，如图15-20所示，实施例3-1制备的组分5-27.5-35-5化合物的理化数据为：褐色油状；分子式：C17H35NO；分子量：259；高分辨质谱HRESIMS：m/z 270.2792[M+H]+(计算的C17H36NO+，270.2791)；m/z 292.2616[M+Na]+(计算的C17H35NONa+，292.2611)；氢谱(1H-NMR)和碳谱(13C-NMR)数据见表4。以氘代甲醇为溶剂测试。通过将上述组分5-27.5-35-5化合物的高分辨质谱、核磁共振氢谱、碳谱，结合组分5-27.5-35-5化合物的二维核磁共振谱1H-1H COSY谱、HMQC谱和HMBC谱，确证化合物的结构如式III所示：
式III
表4式III化合物的氢和碳核磁数据(氘代甲醇)
aRecorded at 500MHz.bRecorded at 125MHz.c可互换
综上所述，从蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌株中提取并分离了式I、式II、式III所示的天然化合物，经过进一步的纯化，结合高分辨质谱和核磁共振技术分析鉴定该化合物的结构特征。
3-3、式I、式II、式III所示化合物的杀线虫效果
1、制备试验用线虫
根结线虫采自中国农业科学院蔬菜花卉研究所温室。将根结线虫发病辣椒的根系取出，用水轻轻冲洗，从根系表面小心取下卵块，放在0.5％的次氯酸钠中消毒3min，再用无菌水冲洗3次，放在含有少量无菌水的培养皿中，在25℃恒温箱中培养，24h-48h收集孵化的根结线虫二龄幼虫，用无菌水悬浮用于试验研究。
2、试验方法
以甲醇作为溶剂将式I、式II、式III所示化合物，依次配成以下浓度的溶液：
20mg/ml；40mg/ml；80mg/ml；160mg/ml；320mg/ml；640mg/ml；1280mg/ml在无菌的24孔细胞培养板上，分别向孔内加入以上浓度的式I、式II、式III所示化合物溶液各5μl(使甲醇溶剂占总体积的1％)，并以无菌水、1％甲醇作为对照，然后分别向处理和对照中加入100μL线虫悬浮液(约100条线虫)以及395μl无菌水，使总体积为500μl。放在室温下24h，观察根结线虫的死亡情况，计算校正死亡率，即为杀线虫效果，每个处理做3个孔(样本)，每个试验重复3次。
最终式I、式II、式III所示化合物测试浓度为
50ug/ml；100ug/ml；200ug/ml；400ug/ml；800ug/ml；1600ug/ml；3200ug/ml
24小时后，不同浓度式I、式II、式III所示化合物处理后南方根结线虫死亡率数据见表5，不同浓度式I、式II、式III所示化合物处理后南方根结线虫死亡率折线图如图21所示，式I、式II、式III所示化合物的EC50值见表6。
表5不同浓度式I、式II、式III所示化合物处理后南方根结线虫死亡率
Xn为最高反应组剂量的对数；i为相邻2组对数剂量之差值(即组距)；m为各组反应数；∑m为各组线虫反应数的总和；∑m2为各组线虫反应数的平方和；n为每组线虫数；h为首末2组反应数的平均值
表6式I、式II、式III所示化合物的EC50值
分子量 EC<sub>50</sub>值
13-甲基十四烷酰胺 241 5.33μM
14-甲基十五烷酰胺 255 8.02μM
15-甲基十六烷酰胺 269 6.22μM
如表5、6可得，三种化合物13-甲基十四烷酰胺、14-甲基十五烷酰胺、15-甲基十六烷酰胺具有较高的根结线虫致死率，如图22所示，三种化合物通过对根结线虫壁降解达到杀死线虫的作用。
实施例4：蜡样芽孢杆菌Bc-cm103对黄瓜根结线虫的盆栽实验防治效果
将Bc-cm103菌种分别接种到500mL的三角瓶中，每瓶含有LB液体培养基100mL，在28℃中震荡(220rpm)培养2天，得到大量蜡样芽孢杆菌(OD＝1.0)。液体发酵培养基配方为LB培养基，即酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，定容至1L，封口。将中农6号黄瓜种子用1％次氯酸钠消毒，催芽后，种到灭菌的草炭和细沙混合基质中育苗。至第一片真叶长出时，移苗至7cm*7cm*10cm的塑料钵中，以灭菌的草炭和细沙作为混合基质，待中农6号黄瓜幼苗长至两片真叶，在黄瓜幼苗土壤中接种15mL该菌培养液，1天后，接种根结线虫二龄幼虫，每株接种300条，在室温下正常管理，并在5周后检测根结数量，计算对根结线虫的防治效果。每个处理30株黄瓜苗，每个处理重复3次。并以清水处理、农药“阿维菌素”处理作为对照。
防治效果计算公式：
试验结果
通过试验可以看出，在蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌株处理后黄瓜根系上的根结数量显著降低，在对照处理中根结数量平均为62.8个/株，而在Bc-cm103菌株处理的黄瓜中的根结数量平均为9.6个/株，Bc-cm103菌株对根结线虫的防治效果达到了84.7％，说明蜡样芽孢杆菌Bc-cm103菌剂可以有效的防治黄瓜根结线虫。在农业生产中防治根结线虫病具有重要价值。
表7不同处理根结数量及防治效果
处理效果 重复1 重复2 重复3 平均 防治效果％
对照 61.3 62.9 64.2 62.8 -
Bc-cm103发酵液 8.2 9.9 10.7 9.6 84.7％
阿维菌素 4.2 4.4 4.7 4.43 92.9％
以上对本发明所提供的一种具有抗线虫活性的蜡样芽孢杆菌菌株及其应用进行了详细介绍。本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种具有抗根结线虫活性的蜡样芽孢杆菌菌株，其特征在于，所述菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)菌株Bc-cm103，其保藏编号为CGMCCNO.17580。
2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株分离自刺角瓜的根际土壤。
3.一种菌剂，其特征在于，其含有权利要求1或2所述的菌株。
4.权利要求1或2所述的菌株或权利要求3所述的菌剂在防治根结线虫中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用的方法包括：将蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)菌株Bc-cm103进行发酵培养。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述发酵培养使用的培养基为LB培养基，温度为25～30℃，时间为1～3天。
7.一种抗根结线虫化合物，其特征在于，所述化合物为13-甲基十四烷酰胺，和/或14-甲基十五烷酰胺，和/或15-甲基十六烷酰胺。
8.根据权利要求7所述的抗根结线虫化合物，其特征在于，所述化合物通过将蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)菌株Bc-cm103进行发酵，得到的发酵液经提取、分离、纯化获得。
9.根据权利要求7所述的抗根结线虫化合物，其特征在于，所述发酵使用的培养基为LB培养基，温度为25～30℃，时间为1～3天；使用乙酸乙酯浸泡提取，浸泡时间为12～24h；分离的方式为减压蒸馏；使用葡聚糖凝胶柱层析进行纯化，葡聚糖凝胶柱层析中，流动相为100％甲醇。
10.一种防治根结线虫的方法，其特征在于，使用权利要求1或2所述的菌株或权利要求3所述的菌剂，或使用权利要求7～9任一项所述的化合物。
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