CN111363696A - 一种链霉菌及其筛选方法与应用 - Google Patents

Abstract

一种链霉菌及其筛选方法与应用，属于微生物学领域。为了提高番茄对植物病害的抵抗能力，本发明提供一种链霉菌(Streptomyces sp.)NEAU‑HV9，其菌种保藏编号为CGMCC 19436。本发明还提供该菌株在抑制引起植物病害的病原细菌活性以及生产放线菌素D中的应用，利用该链霉菌菌株NEAU‑HV9可制备菌剂，可用于抑制植物番茄青枯病，本发明为研究开发环境友好型的放线菌菌剂提供优质的材料。

Description

一种链霉菌及其筛选方法与应用

技术领域

本发明属于微生物学领域，具体涉及一种链霉菌及其筛选方法与应用。

背景技术

番茄是世界上最重要的蔬菜作物之一，全球年产量约为1.6亿吨。在我国，长期连作是番茄的主要栽培方式，已导致严重的青枯病，它是由茄科雷尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)引起的一种会导致全株萎蔫的土传细菌性疾病。番茄青枯病不但危害严重，发病地带也尤为广泛，是热带、亚热带、温带地区番茄生产的重要病害。由于这种病害地理分布范围广，寄主范围广，且具有毁灭性和长期性，目前尚无有效的化学防治方法，并且化学农药的大量使用带来了一系列的环境问题。生物防治因其成本低、环境友好和无药物残留等特点已成为当前国内外防治植物土传病害的研究热点，并将逐步取代传统的化学防治手段，具有广阔的应用前景。

放线菌在自然界中分布极广，在含水量低、有机质丰富的土壤(pH中性或微碱性)中放线菌含量最多，并且从土壤中分离到的放线菌经鉴定多为链霉菌属。链霉菌作为生物控制剂，在农业上越来越受到重视。许多链霉菌已被用于控制土传疾病，例如Streptomycesaureofaciens，Streptomyces avermitilis，Streptomyces lividans，Streptomyceshumidus等。链霉菌的防病机制主要包括以下三方面：营养竞争及空间位点竞争；生防菌产生一种或多种物质在较低浓度下能抑制其他生物的生长或杀死；通过代谢产生抗生素、葡聚糖酶酶、几丁质酶、淀粉酶、纤维素酶、半纤维素酶等胞外酶，使病原菌的芽管生长变慢、变细或菌体消解。

链霉菌是生物活性化合物的重要来源，其产量占市面上可用抗生素的三分之二。且具有孢子抗逆性强、菌剂保藏时间长及诱导寄主植物产生系统抗性等优点。因此筛选具有抗病活性的链霉菌资源，开发可逐步替代化学农药的新型微生物产品对实现农产品产量与质量安全、农业生态环境保护相协调的可持续发展具有重要意义。

发明内容

为了提高番茄对植物病害的抵抗能力，本发明提供了一种链霉菌(Streptomycessp.)NEAU-HV9，菌种保藏编号为CGMCC 19436。

本发明还提供了上述链霉菌的筛选方法，步骤如下：

采集土样，以每5g土样计，将5g晾干的土样溶解到45ml无菌水中，在180rpm转速下振荡30-45分钟，静置后，取上层液体稀释1000倍，吸取200μl的稀释液涂布于HV培养基上，置于28℃中培养，挑取单菌落接种到ISP3培养基，经反复转接得到纯化菌株，命名为NEAU-HV9。

进一步地限定，所述土样采集于中国广西壮族自治区河池市巴马瑶族自治县。

本发明还提供了上述链霉菌在抑制引起植物病害的病原细菌活性中的应用。

进一步地限定，所述引起植物病害的病原细菌为番茄青枯病原菌(Pseudomonassolanacearum)。

本发明还提供了一种抑制植物番茄青枯病的菌剂组合物，所述菌剂组合物含有上述的链霉菌(Streptomyces sp.)NEAU-HV9和农业上可接受的辅剂。

本发明还提供了上述链霉菌(Streptomyces sp.)NEAU-HV9在生产放线菌素D中的应用。

进一步地限定，所述放线菌素D的生产方法如下：将上述的链霉菌(Streptomycessp.)NEAU-HV9接种到ISP2液体培养基中，28℃，250rpm条件下培养得到种子液，然后将种子液接种于发酵培养基中，28℃，250rpm进行发酵培养，将所得发酵液离心，获得的上清液依次经萃取、层析后得到放线菌素D。

本发明还提供了上述生产方法获得的放线菌素D在抑制引起植物病害的病原细菌活性中的应用。

进一步地限定，所述引起植物病害的病原细菌为番茄青枯病原菌(Pseudomonassolanacearum)。

有益效果

本发明提供了一种具有植物抗病能力的链霉菌(Streptomyces sp.)NEAU-HV9，其对番茄青枯病有显著拮抗作用，将该菌株的孢子水悬浮液作用番茄，可明显抑制番茄青枯病的发生。本发明提供的放线菌(Streptomyces sp.)NEAU-HV9还可产生放线菌素D，放线菌素D的水溶液可以有效防治番茄青枯病的发生。本发明为研究开发环境友好型的放线菌菌剂提供优质的材料。

附图说明

图1为菌株NEAU-HV9在扫描电镜下的菌丝和孢子形态；

图2为菌株NEAU-HV9的16S rDNA序列系统发育地位；

图3为菌株NEAU-HV9对病原细菌的平皿拮抗效果；

图4为菌株NEAU-HV9的孢子水悬浮液在番茄苗期对番茄青枯病的拮抗效果；

图5为菌株NEAU-HV9的孢子水悬浮液对番茄青枯病的生物防治特性测定；

图6为放线菌素D结构；

图7为放线菌素D对番茄苗期番茄青枯病的拮抗效果；

图8为放线菌素D对番茄青枯病的生物防治特性测定。

具体实施方式

以下通过具体实施实例对本发明作进一步说明，但不用以限制本发明，凡在本发明精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

本发明提供的培养基、试剂等如无特殊说明均可由市场购得。

实施例1.链霉菌Streptomyces sp.NEAU-HV9的筛选和鉴定。

1.菌株的分离和培养

土样采集于中国广西壮族自治区河池市巴马瑶族自治县(24°15′N,107°26′E)，将5g晾干的土样溶解到45ml无菌水的三角瓶中(带玻璃珠)，在180rpm转速下振荡30-45分钟，静置10分钟后，取上层液体稀释1000倍后，吸取200μl的稀释液涂布于HV培养基(腐殖酸0.1g，MgSO₄·7H₂O 0.05g，KCl 0.17g，Na₂HPO₄·3H₂O 0.05g，FeSO₄ 0.001g，CaCO₃ 0.002g，复合维生素0.1ml，琼脂2g，无菌水100ml)平板培养基上，置于28℃中培养7天，挑取单菌落接种到新鲜ISP3平板培养基(燕麦2g，K₂HPO₄·3H₂O 0.05g，MgSO₄·7H₂O 0.02g，KNO₃0.02g，琼脂2g，无菌水100ml)，经反复转接得到纯化菌株，将纯化的菌株命名为NEAU-HV9，用20％甘油保存于-80℃超低温冰箱中。

2.菌株的鉴定

鉴定方法：通过形态学特征，生理生化实验，细胞化学组分和16S rDNA序列分析对该菌株进行鉴定。

菌体形态特征：革兰氏染色阳性，在ISP 3培养基上培养2周，气生菌丝颜色为白色，基内菌丝为黄色，并产生大量的黄色色素；扫描电镜下观察Streptomyces sp.NEAU-HV9气生菌丝呈螺旋状的孢子链，孢子表面粗糙，见图1。生长温度范围：10-37℃，最适宜生长温度28℃，生长pH范围：5-9；最适pH7.0，生长NaCl范围：0-7％。

生理生化特征：好氧，产生淀粉酶、酯酶、脲酶和过氧化氢酶，其淀粉水解、黄嘌呤分解、酪氨酸分解、酪蛋白分解、吐温水解、脲酶、纤维素分解，H₂S产生、过氧化氢分解和七叶苷水解实验阳性，明胶水解、腺嘌呤分解、次黄嘌呤分解、牛奶的胨化和液化和硝酸盐利用实验阴性；可以利用麦芽糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、甘露醇、棉子糖、蔗糖、肌醇等碳源，不能利用阿拉伯糖、核糖、果糖、乳糖、山梨醇、木糖、甜醇等碳源；可以利用甘氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、精氨酸等氮源；不能利用肌酸等氮源(表1)。

表1 NEAU-HV9生理生化特性

注：“+”为阳性，“-”为阴性。

细胞化学组分分析：

甲基萘醌的主要类型为MK-9(H₂)、MK-9(H₄)、MK-9(H₆)、MK-9(H₈)和MK-10，全细胞水解糖包括半乳糖、甘露糖和核糖。

16S rRNA基因扩增和序列分析：

将长势良好的菌株Streptomyces sp.NEAU-HV9接种于ISP2(酵母浸粉0.4g，麦芽浸粉1g，葡萄糖0.4g，无菌水100ml)液体培养基中，在28℃、250rpm条件下，摇床培养1周左右，12000rpm离心5min，收集菌丝体于EP管中，用无菌水洗2次，采用天根生化科技有限公司的细菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，以提取的DNA产物作为模板，用16S rRNA扩增通用引物27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1541R(5’-AAGGAGGTGATCCAGCC-3’)从基因组DNA中扩增出16S rDNA基因片段。

PCR产物序列由吉林省库美生物科技有限公司进行测定。16S rDNA序列如SEQ IDNO:1所示。通过BLAST程序在EzBioCloud中进行序列比对分析，并运用NEGA7.0构建菌株系统发育树。结果表明该菌株的16S rRNA序列与目前发表的链霉菌Streptomycespanaciradicis NBRC 109811^T和Streptomyces sasae NBRC 109809^T相似性均为98.9％。

综合菌体形态特征、生理生化特性、细胞组分和16S rRNA基因序列，将分离的菌株鉴定为Streptomyces sp.NEAU-HV9，系统发育树见图2。

本发明筛选获得的菌株Streptomyces sp.NEAU-HV9于2020年2月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC 19436。

实施例2.链霉菌Streptomyces sp.NEAU-HV9拮抗活性测定。

植物病原菌菌种及来源：番茄青枯病原菌Pseudomonas solanacearum为本领域公知的引起番茄青枯病的病原菌，本发明中所用的菌株由中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室提供。

番茄青枯病原菌菌悬液制备：用100mL的生理盐水(0.9％)将茄子瓶中的青枯病原菌洗出于锥形瓶中备用。

拮抗活性测定：采用琼脂井扩散法。具体步骤如下：将菌株接种于ISP2液体培养基中，在28℃、250rpm条件下，摇瓶培养到对数期，按照4％的接种量将种子液接种于发酵培养基(麦芽糊精4g，乳糖4g，酵母浸粉0.5g，Mops 2g)中，摇瓶培养7d，上清用同体积的乙酸乙酯萃取，沉淀中加入同体积的甲醇，超声3h以上，将乙酸乙酯和甲醇旋转蒸干，用1mL甲醇溶解。分别吸取100μl于每个孔中。37℃孵育12h，检测抗菌活性。用游标卡尺测定抑菌区直径，结果见图3和表2。可以看出上清与沉淀有较好的抑菌效果，抑菌直径分别为32.8mm和30.5mm。

表2菌株NEAU-HV9的发酵液对青枯病原菌拮抗活性结果

发酵液处理	抑菌直径(mm)
		发酵液上清	32.8
发酵液沉淀	30.5

实施例3.链霉菌Streptomyces sp.NEAU-HV9在番茄苗期对番茄青枯病生物防治特性测定。

在无菌容器中装入约15-20ml的青枯病原菌菌悬液(OD₆₀₀＝0.3)，取萌发出的幼苗，共设置3组处理，第一组，阳性对照，幼苗的根部浸入无菌水中，约30s，之后将幼苗转移到空的1.5或2毫升无菌EP管中；第二组，阴性对照，将幼苗的根部浸入细菌菌悬液(直至根-茎接合处)，约30s，之后将幼苗转移到空的1.5或2毫升无菌EP管中；第三组，处理组，将幼苗的根部浸入细菌菌悬液(直至根-茎接合处)，约30s，之后将幼苗的根部分别浸入到本发明筛选的拮抗菌NEAU-HV9孢子悬浮液(10⁷、10⁸、10⁹cfu/ml)中，之后同样将幼苗转移到空的1.5或2毫升无菌EP管中；三组处理过的番茄幼苗均在空气中暴露5分钟后，在每个试管中加入1-1.5毫升无菌水，将番茄幼苗置于人工气候室中，人工气候室环境设置分为两个阶段，第一阶段：100％光照，28℃，12h；第二阶段：0％光照，28℃，12h。1周后统计结果。结果见图4和表3。可以看出当菌株NEAU-HV9孢子悬浮液浓度为10⁹cfu/ml时，与阴性对照相比，番茄幼苗健康，对青枯病有较好的防治效果。

表3菌株NEAU-HV9在番茄苗期的防治效果

处理	病情指数	防病效果(％)
			NEAU-HV9(10<sup>7</sup>cfu/ml)	100±0<sup>a</sup>	0±0<sup>a</sup>
NEAU-HV9(10<sup>8</sup>cfu/ml)	93±11.6<sup>b</sup>	6.6±11.5<sup>b</sup>
			NEAU-HV9(10<sup>9</sup>cfu/ml)	0±0<sup>c</sup>	100±0<sup>c</sup>
阴性对照	100±0<sup>a</sup>	…

实施例4.链霉菌Streptomyces sp.NEAU-HV9对番茄青枯病的生物防治特性测定。

番前幼苗的准备：番茄种子在5％的次氯酸钠中浸泡15min，用无菌水冲洗3遍。将处理后的番茄种子放入垫有浸湿滤纸的灭菌平板里，保持湿润，在30℃培养箱中催芽72h。将萌发的番茄种子转移到育苗盘里，置于30℃、16h光照条件的温室培养，培养约20天后(4叶期)，挑选长势一致的健康幼苗进行移栽，用于试验。

番茄青枯病原菌菌悬液制备：用100mL的生理盐水(0.9％)将茄子瓶中的青枯病原菌洗出于锥形瓶中备用(OD₆₀₀＝0.3)。

盆栽试验：将准备的供试土壤混匀，称重装盆，每盆400g土。挑选长势一致的番茄幼苗，每盆1棵苗，每个处理5盆。采用灌根法接种番茄青枯病。共设置3组处理，第一组(阳性对照)，移栽土壤不接种病原菌和拮抗菌；第二组(阴性对照)，移栽土壤接种病原菌；第三组(处理组)，移栽前，将本发明筛选的拮抗菌NEAU-HV9孢子与土壤混匀，使孢子浓度为10⁹cfu/g。在接种后连续观察番茄的发病情况。按照陈庆河等人的方法，记录和计算病情指数病情分级标准为：0级为无症状；1级为植株开始出现萎蔫症状；2级为植物50％的叶片萎蔫；3级为叶片除顶叶2-3片叶外，全部萎蔫；4级为全株叶片萎蔫，茎大部变黑，结果见图5和表4。阴性对照的病情指数为73.9，处理组番茄病情指数为13.3。与对照组相比，生防效率为82％，拮抗菌NEAU-HV9孢子对青枯病表现出较好的防治效果。

表4菌株NEAU-HV9在盆栽试验中的防治效果

处理	病情指数	防病效果(％)
			NEAU-HV9	13.3±5.8<sup>b</sup>	82±6<sup>a</sup>
阴性对照	73.9±6.6<sup>a</sup>	…

实施例5.菌株Streptomyces sp.NEAU-HV9产放线菌素D的能力。

在无菌条件下，刮取已在ISP3平板上活化好的菌株Streptomyces sp.NEAU-HV9孢子转接到ISP2液体培养基中，在28℃，250rpm条件下培养3天，然后将种子液5％接种于发酵培养基，28℃，250rpm培养7天。离心去除菌体，上清液用等体积乙酸乙酯萃取3-4次，将萃取液浓缩后，依次进行硅胶柱层析、凝胶层析、HPLC分析后得到该化合物。通过13C-NMR，1H-NMR，MS波谱分析确定该化合物结构，结构式如图6所示。

实施例6.放线菌素D在番茄苗期对番茄青枯病的拮抗特性测定。

在无菌容器中装入约15-20ml的青枯病原菌菌悬液(OD₆₀₀＝0.3)，取出约7天大的萌发的幼苗，同样设置3组处理，第一组，阳性对照，幼苗的根部浸入无菌水中，约30s，之后将幼苗转移到空的1.5或2毫升无菌EP管中；第二组，阴性对照，将幼苗的根部浸入细菌菌悬液(直至根-茎接合处)，约30s，之后将幼苗转移到空的1.5或2毫升无菌EP管中；第三组，处理组，与第一组做相同的处理，将幼苗的根部浸入无菌水中，约30s，之后将幼苗转移到空的1.5或2毫升无菌EP管；三组处理过的番茄幼苗均在空气中暴露5分钟，然后在每个试管中加入1-1.5毫升无菌水，在第三组的试管中加入放线菌素D，至终浓度为0.6和1.2mg/L。将番茄幼苗置于人工气候室中，人工气候室环境设置分为两个阶段，第一阶段：100％光照，28℃，12h；第二阶段：0％光照，28℃，12h。1周后统计结果，结果见图7和表5。可以看出在第三组中，含有放线菌素D时，与第一组对照相比，番茄幼苗健康，无萎蔫和死亡现象出现，对青枯病有很好的防治效果。

表5放线菌素D在番茄苗期的防治效果

处理	病情指数	防病效果(％)
			actinomycin D(0.6mg/L)	0±0<sup>b</sup>	100±0<sup>a</sup>
actinomycin D(1.2mg/L)	0±0<sup>b</sup>	100±0<sup>a</sup>
			阴性对照	100±0<sup>a</sup>	…

实施例7.放线菌素D对番茄青枯病的盆栽生物防治特性测定。

番前幼苗的准备：番茄种子在5％的次氯酸钠中浸泡15min，用无菌水冲洗3遍。将处理后的番茄种子放入垫有浸湿滤纸的灭菌平板里，保持湿润，在30℃培养箱中催芽72h。将萌发的番茄种子转移到育苗盘里，置于30℃、16h光照条件的温室培养，培养约20天后(4叶期)，挑选长势一致的健康幼苗进行移栽，用于试验。

番茄青枯病原菌菌悬液制备：用100mL的生理盐水(0.9％)将茄子瓶中的青枯病原菌洗出于锥形瓶中备用(OD₆₀₀＝0.3)。

盆栽试验：将准备的供试土壤混匀，称重装盆，每盆400g土。挑选长势一致的番茄幼苗，每盆1棵苗，每个处理5盆。采用灌根法接种番茄青枯病。共设置3组处理，第一组(阳性对照)，移栽土壤不接种病原菌和拮抗菌；第二组(阴性对照)，移栽土壤接种病原菌；第三组(处理组)，将放线菌素D用无菌水稀释至浓度为0.6mg/L，将稀释好的放线菌素D施用于番茄根部,一天后接种病原菌。在接种后连续观察番茄的发病情况。按照陈庆河等人的方法，记录和计算病情指数病情分级标准为：0级为无症状；1级为植株开始出现萎蔫症状；2级为植物50％的叶片萎蔫；3级为叶片除顶叶2-3片叶外，全部萎蔫；4级为全株叶片萎蔫，茎大部变黑，结果见图8和表6。阴性对照的病情指数为73.9，处理组番茄病情指数为0。与对照组相比，生防效率为100％，放线菌素D对青枯病表现出较好的防治效果。

表6放线菌素D在盆栽试验中的防治效果

处理	病情指数	防病效果(％)
			actinomycin D	0±0<sup>b</sup>	100±0<sup>a</sup>
阴性对照	73.9±6.6<sup>a</sup>	…

核苷酸序列表

<110> 东北农业大学

<120> 一种链霉菌及其筛选方法与应用

<130>

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1510

<212> DNA

<213> 16S rDNA序列

<400> 1

tttgatcctg gctcaggacg aacgctggcg gcgtgcttaa cacatgcaag tcgaacgatg 60

aagcccttcg gggtggatta gtggcgaacg ggtgagtaac acgtgggcaa tctgcccttc 120

actctgggac aagccctgga aacggggtct aataccggat aacaccctcg cgggcatctg 180

cgagggttga aagctccggc ggtgaaggat gagcccgcgg cctatcagct tgttggtgag 240

gtaatggctc accaaggcgg cgacgggtag ccggcctgag agggcgaccg gccacactgg 300

gactgagaca cggcccagac tcctacggga ggcagcagtg gggaatattg cacaatgggc 360

gaaagcctga tgcagcgacg ccgcgtgagg gatgacggcc ttcgggttgt aaacctcttt 420

cagcagggaa gaagcgagag tgacggtacc tgcagaagaa gcgccggcta actacgtgcc 480

agcagccgcg gtaatacgta gggcgcaagc gttgtccgga attattgggc gtaaagagct 540

cgtaggcggc ttgtcacgtc gattgtgaaa gcccgaggct taacctcggg tctgcagtcg 600

atacgggcta gctagagtgt ggtaggggag atcggaattc ctggtgtagc ggtgaaatgc 660

gcagatatca ggaggaacac cggtggcgaa ggcggatctc tgggccatta ctgacgctga 720

ggagcgaaag cgtggggagc gaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccgtaaacgg 780

tgggaattag gtgttggcga cattccacgt cgtcggtgcc gcagctaacg cattaagttc 840

cccgcctggg gagtacggcc gcaaggctaa aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca 900

agcggcggag catgtggctt aattcgacgc aacgcgaaga accttaccaa ggcttgacat 960

acaccggaaa cgtctggaga caggcgcccc cttgtggtcg gtgtacaggt ggtgcatggc 1020

tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aacccttgtt 1080

ctgtgttgcc agcatgccct tcggggtgat ggggactcac aggagaccgc cggggtcaac 1140

tcggaggaag gtggggacga cgtcaagtca tcatgcccct tatgtcttgg gctgcacacg 1200

tgctacaatg gccggtacaa agagctgcga taccgtgagg tggagcgaat ctcaaaaagc 1260

cggtctcagt tcggattggg gtctgcaact cgaccccatg aagtcggagt cgctagtaat 1320

cgcagatcag cattgctgcg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcacg 1380

tcacgaaagt cggtaacacc cgaagccggt ggcccaaccc cttgtgggag ggagctgtcg 1440

aaggtgggac tggcgattga gacgaagtcg taacaaggta gccgtaccgg aaggtgcggc 1500

tggatcacct 1510

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 27F

<400> 2

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 3

<211> 17

<212> DNA

<213> 1541R

<400> 3

aaggaggtga tccagcc 17

Claims (10)

1.一种链霉菌(Streptomyces sp.)NEAU-HV9，菌种保藏编号为CGMCC 19436。

2.权利要求1所述的链霉菌的筛选方法，其特征在于，步骤如下：

采集土样，以每5g土样计，将5g晾干的土样溶解到45ml无菌水中，在180rpm转速下振荡30-45分钟，静置后，取上层液体稀释1000倍，吸取200μl的稀释液涂布于HV培养基上，置于28℃中培养，挑取单菌落接种到ISP3培养基，经反复转接得到纯化菌株，命名为NEAU-HV9。

3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，所述土样采集于中国广西壮族自治区河池市巴马瑶族自治县。

4.权利要求1所述的链霉菌在抑制引起植物病害的病原细菌活性中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述引起植物病害的病原细菌为番茄青枯病原菌(Pseudomonas solanacearum)。

6.一种抑制植物番茄青枯病的菌剂组合物，其特征在于，所述菌剂组合物含有权利要求1所述的链霉菌(Streptomyces sp.)NEAU-HV9和农业上可接受的辅剂。

7.权利要求1所述的链霉菌在生产放线菌素D中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述放线菌素D的生产方法如下：将权利要求1所述的链霉菌(Streptomyces sp.)NEAU-HV9接种到ISP2液体培养基中，28℃，250rpm条件下培养得到种子液，然后将种子液接种于发酵培养基中，28℃，250rpm进行发酵培养，将所得发酵液离心，获得的上清液依次经萃取、层析后得到放线菌素D。

9.权利要求8所述应用获得的放线菌素D在抑制引起植物病害的病原细菌活性中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述引起植物病害的病原细菌为番茄青枯病原菌(Pseudomonas solanacearum)。

Images