CN110522739A - 一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒及其制备方法 - Google Patents

一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒的制备方法，将聚合物聚(甲基丙烯酸甲酯‑co‑甲基丙烯酸)‑b‑聚甲基丙烯酸单甲氧基聚乙二醇酯P(MMA‑co‑MAA)‑b‑PPEGMA和聚合物聚(甲基丙烯酸甲酯‑co‑甲基丙烯酸)‑b‑聚甲基丙烯酸氨乙酯P(MMA‑co‑MAA)‑b‑PAEMA在机溶剂中溶解成聚合物溶液，将胰岛素溶解于pH＝2～3的酸溶液中，充分溶解后将胰岛素溶液与聚合物溶液混合均匀，再将混合液转入透析袋在pH＝5～5.5的环境中透析，形成聚合物载药胶束，且除有机溶剂，冷冻干燥得到大小均一微球状、载药和包封率高、且具有明显pH敏感性和优良膜粘附性的载胰岛素混合胶束纳米粒。

Description

一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒及其 制备方法
技术领域
本发明涉及一种胰岛素混合胶束纳米粒及其制备方法，具体涉及一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒及其制备方法，属于医药材料技术领域。
背景技术
随着生活质量提高，饮食摄入糖量增加，患糖尿病的风险增加，世界组织预测，到2030年糖尿病将成为第七位主要死因。
胰岛素是治疗一型糖尿病必须药物和二型糖尿病辅助治疗药物。胰岛素目前的主要给药方式通过注射给药，但是注射给药会给病人带来剧烈的疼痛感，还会造成皮下脂肪萎缩，低血糖反应等不良反应。可能无法复制内源性胰岛素分泌的正常动态，这可能会降低血糖控制效率并导致糖尿病并发症。
长期以来，口服途径被认为是最方便，最舒适的给药方式。据报道吸收效率不到1％。为了克服胃肠道屏障并改善胰岛素通过肠上皮细胞膜的渗透，近年来已经开发了各种口服载体，并且已经测试了几种口服胰岛素制剂的临床试验。
在过去二十年中，刺激响应性纳米胶束已被广泛用于药物递送系统，归因于它们响应于周围环境的变化而快速膨胀-消溶胀转变。鉴于其小尺寸，快速响应和环境触发的释放方式，胶束纳米粒为口服途径中的药物施用提供了独特环境，包括口服胰岛素递送。
发明内容
有鉴于此，本发明综合利用两亲性聚合物优点，使用两种不同特点的嵌段聚合物合成新型成胶束方法，提供了一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒及其制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒，粒径为150～350nm，所制备的载胰岛素混合胶束纳米粒为壳核结构，胰岛素被包载在口服胰岛素胶束纳米粒核内，纳米胶束中所包载胰岛素质量占所投胰岛素总质量的60％～95％，纳米胶束中所包载胰岛素质量占所得载胰岛素纳米胶束总质量的8～16％；其同时具有pH敏感性和膜粘附性：pH敏感性由疏水性pH敏感嵌段聚(甲基丙烯酸甲酯-co-甲基丙烯酸)[P(MMA-co-MAA)]产生，亲水性由聚甲基丙烯酸单甲氧基聚乙二醇酯(PEGMA)产生，膜粘附性由嵌段聚甲基丙烯酸氨乙基酯(PAEMA)产生。
进一步，P(MMA-co-MAA)-b-PEGMA的相对分子量为6000～12000，结构式为：
P(MMA-co-MAA)-b-PAEMA的相对分子量为8000～16000，结构式为：
其中，x为30～50，y为25～45，w为10～30，z为30～50。
本发明的有益效果为，
1、本发明设计载胰岛素混合胶束纳米粒具有pH敏感性和膜黏附性，一方面，载药胶束带正电，使胶束能够粘附在小肠上皮细胞，延长胶束在肠道内的停留时间，并打开细胞间紧密连接，促进药物吸收；另一方面，pH敏感段使得胶束在胃液中保持稳定，到达肠道后则溶胀破裂释放出胰岛素，pH敏感性和膜黏附性各自发挥作用，互不干扰。
2、根据HepG2细胞毒性测试结果，随着胶束纳米粒药物浓度的增加，与对比空白细胞培养液中的细胞活性相比，加入载药胶束的细胞培养液细胞活性没有明显降低，存活率都在100％以上，故可认为混合胶束纳米粒对生物细胞没有明显毒性。
3、利用两亲性嵌段聚合物两端的亲疏水性差异、聚合物临界胶束浓度低、载胰岛素胶束纳米粒径小投入少量聚合物可包载更多胰岛素，因此具有较高载药量和包封率，且在水溶液中稳定性和分散性较好。
本发明还提供了上述pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒的制备方法，步骤如下：
(1)将浓度为0.5～2mg/mL的胰岛素酸溶液滴加至浓度为1.5～5mg/mL的聚合物溶液中使聚合物与胰岛素的质量比为5～20:1，得到混合溶液；
(2)将混合溶液转移到透析袋内，在缓冲液中，透析24～48h，其中前12h内每2h更换一次缓冲液，透析12h后每6h更换一次缓冲液至透析结束，得到混合胶束；
(3)微孔滤膜过滤混合胶束，冷冻干燥48～72h即得pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒；
其中，聚合物溶液中的聚合物为具有pH敏感性嵌段聚合物及亲水嵌段分子刷模块的聚合物聚(甲基丙烯酸甲酯-co-甲基丙烯酸)-b-聚甲基丙烯酸单甲氧基聚乙二醇酯P(MMA-co-MAA)-b-PEGMA和/或具有pH敏感及膜粘附性模块的聚合物聚(甲基丙烯酸甲酯-co-甲基丙烯酸)-b-聚甲基丙烯酸氨乙酯共聚物P(MMA-co-MAA)-b-PAEMA，优选的，二者的质量比为1:0～3，更优选的，二者质量比为1:1。
进一步，聚合物溶液的制备方法为：将聚合物溶于DMF中，20～30℃搅拌15～18h；胰岛素酸溶液的制备方法为：将胰岛素溶于pH值为2～3的药用稀盐酸中，20～30℃搅拌20～40min。
进一步，缓冲液为pH值＝4.5～5.5的醋酸-醋酸钠缓冲液。
附图说明
图1为本发明实施例1中聚合物混合溶液临界胶束浓度(CMC)测试结果图；
图2为本发明实施例1中所制备的载胰岛素混合胶束纳米粒放大到40000倍的SEM图；
图3为本发明实施例1中所制备的载胰岛素混合胶束纳米粒在模拟胃液和模拟肠液中的释放曲线；
图4为本发明实施例1中所制备的载胰岛素混合胶束纳米粒HepG2生物细胞毒性测试结果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒，由以下方法制备得到：
(1)将聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PPEGMA10(平均分子量9179)和聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PAEMA40(平均分子量＝11529)各25mg(即1:1质量比)，按照0.025:1的质量比溶于有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺20ml中，25℃下混合搅拌12h，形成聚合物混合溶液，临界胶束浓度如图1，可见其在低浓度下能形成稳定的胶束纳米粒，保证了载药胶束纳米粒的稳定性；
取10mg胰岛素溶于浓度为0.001mol/L的药用盐酸溶液10ml按照0.001:1的质量比在25℃下搅拌30min充分溶解配成胰岛素酸液；
将胰岛素酸液逐滴加入聚合物混合溶液，使聚合物与胰岛素的质量比为10:1，滴加完毕后继续搅拌混和30min，得到混合溶液；
(2)将混合溶液转移到透析袋(截留分子量MWCO＝7000D)内，用pH＝5.0的醋酸-醋酸钠缓冲液透析24h，以除去胶束溶液中的有机溶剂和未包载的游离胰岛素，其中聚合物胶束溶液与醋酸-醋酸钠缓冲液的体积比为1:100，透析过程中需要定时跟换缓冲液，其间隔时间前12h内每2h更换一次缓冲液，透析12h后每6h更换一次，得到混合胶束；
(3)450nm微孔滤膜过滤混合胶束，-45℃冷冻干燥48h即得pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒，SEM图如图2，可见载胰岛素胶束纳米粒为球形、大小分布均匀、且平均尺寸在80～150nm。
对上述制备的pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒进行性能评定，方法及结果如下：
1、载胰岛素纳米胶束载药量和包封率的测定
载药百分数和质量包封率常用来表示聚合物胶束的载药能力，本发明采用直接法，利用高效液相色谱测量载胰岛素纳米胶束中包载胰岛素来计算包封率和载药量。
取5mg冷冻干燥好的载胰岛素混合胶束纳米粒复溶到有机溶剂中，超声振荡破坏其核壳结构，释放出胰岛素，再用药用盐酸溶液萃取出胰岛素，测量其中的胰岛素含量，然后计算出载胰岛素混合胶的载药量(loading content,LC)和包封率(encapsulationefficiency,EE)。包封率和载药量的计算公式分别如下：
其中，M total为初始胰岛素质量(mg)，V supernatant为上清液体积(mL)，Csupernatant为上清液中胰岛素浓度(mg/mL)，Wnanoparticle为所得纳米粒质量(mg)。
测得的载胰岛素混合胶束纳米粒的载药质量百分数为14.6％，质量包封率为87.6％。
2、载胰岛素聚合物胶束体外模拟释放
分别采用pH＝1.2的盐酸盐缓冲溶液和pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液作为体外模拟胃液和模拟肠液，分析胶束中胰岛素释放行为。
准确称量5.0mg载胰岛素混合胶束纳米粒分别溶解在2mL的模拟胃液和模拟肠液中,模拟肠液和模拟胃液按照美国药典的方法配置，具体配置方法如下：
模拟肠液(pH＝1.2)：量取50.0mL KCl溶液(0.2mol/L)置于200mL的容量瓶中，再加入85mL HCl溶液(0.2mol/L)，最后用蒸馏水定容至刻度。
模拟胃液(pH＝7.4)：量取50.0mL KH2PO4溶液(0.2mol/L)于200mL容量瓶中，再加入39.1mL NaOH溶液(0.2mol/L)，最后用蒸馏水定容至刻度。
于37℃释放，80次/min水平振荡，在1h、2h、4h、6h、8h和10h不同时间点取出样品液，用水性滤头过滤后，测定其中胰岛素浓度，采用下述公式计算胰岛素在不同时间的累积释放百分率：
其中，V为释放介质体积(模拟胃液或模拟肠液体积，mL)，C为离心分离载胰岛素聚合物胶束释放后的样品液所得上清液中胰岛素浓度(mg/mL)，W为载胰岛素聚合物胶束的质量(mg)，LC为载胰岛素聚合物胶束的载药质量百分数(％)。
释放曲线如图3，可见，本发明的载胰岛素混合胶束纳米粒在模拟胃液中释放缓慢，2h内释放胰岛素质量不超过40％、10小时累积释放质量小于所包载胰岛素总质量的45％，而在模拟肠液中因为pH为碱性，载胰岛素纳米胶束发生溶胀释放加快，10h释放胰岛素累积释放质量达到77.7％，由肠胃中释放曲线差异可以判断胶束有明显的酸碱敏感性，
这些数据表明本发明制备的载胰岛素混合胶束纳米粒能够感应环境的pH变化，使胰岛素顺利经过胃液，在肠液中被释放出来具有较好的缓释作用。
3、载胰岛素纳米胶束粒径和zeta电位值
取步骤(2)中所得的混合胶束1ml，用超纯水稀释4mL，用0.45μm的滤头过滤后，用ZS90电位粒度仪测得电位为10.8mV，粒径为172.5nm。
4、生物细胞毒性试验
将得到的载胰岛素混合胶束纳米粒和空白未加胰岛素的胶束进行HepG2生物细胞毒性试验，结果如图4，可见随着胶束纳米粒药物浓度增加，与对比空白细胞培养液中的细胞活性相比(图4中深色直柱体)，加入载药胶束的细胞培养液细胞活性(图4中浅色直柱体)没有明显降低，且存活率都在90％以上，故载胰岛素胶束纳米粒对生物细胞毒性较小，在安全范围以内。
实施例2
pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒，由以下方法制备得到：
(1)将聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PPEGMA10(平均分子量9179)和聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PAEMA40(平均分子量＝11529)共50mg(质量比7:3)，按照0.025:1的质量比溶于有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺20ml中，25℃下混合搅拌12h，形成聚合物混合溶液；
取10mg胰岛素溶于浓度为0.001mol/L的药用盐酸溶液10ml按照0.001:1的质量比在25℃下搅拌30min充分溶解配成胰岛素酸液；
将胰岛素酸液逐滴加入聚合物混合溶液，使聚合物与胰岛素的质量比为10:1，滴加完毕后继续搅拌混和30min，得到混合溶液；
(2)将混合溶液转移到透析袋(截留分子量MWCO＝7000D)内，用pH＝5.0的醋酸-醋酸钠缓冲液透析24h，以除去胶束溶液中的有机溶剂和未包载的游离胰岛素，其中聚合物胶束溶液与醋酸-醋酸钠缓冲液的体积比为1:100，透析过程中需要定时跟换缓冲液，其间隔时间前12h内每2h更换一次缓冲液，透析12h后每6h更换一次，得到混合胶束；
(3)450nm微孔滤膜过滤混合胶束，-45℃冷冻干燥48h即得pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒，
所得载胰岛素混合胶束的电位为-4.01V，粒径为168.7nm，载药质量百分数12.4％，质量包封率74.5％。
实施例3
pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒，由以下方法制备得到：
(1)将聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PPEGMA10(平均分子量9179)和聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PAEMA40(平均分子量＝11529)共50mg(质量比3:7)，按照0.025:1的质量比溶于有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺20ml中，25℃下混合搅拌12h，形成聚合物混合溶液；
取10mg胰岛素溶于浓度为0.001mol/L的药用盐酸溶液10ml按照0.001:1的质量比在25℃下搅拌30min充分溶解配成胰岛素酸液；
将胰岛素酸液逐滴加入聚合物混合溶液，使聚合物与胰岛素的质量比为10:1，滴加完毕后继续搅拌混和30min，得到混合溶液；
(2)将混合溶液转移到透析袋(截留分子量MWCO＝7000D)内，用pH＝5.0的醋酸-醋酸钠缓冲液透析24h，以除去胶束溶液中的有机溶剂和未包载的游离胰岛素，其中聚合物胶束溶液与醋酸-醋酸钠缓冲液的体积比为1:100，透析过程中需要定时跟换缓冲液，其间隔时间前12h内每2h更换一次缓冲液，透析12h后每6h更换一次，得到混合胶束；
(3)450nm微孔滤膜过滤混合胶束，-45℃冷冻干燥48h即得pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒，
所得载胰岛素混合胶束的电位为18.5mV，粒径为227.7nm，载药质量百分数11.3％，质量包封率68.2％。
实施例4
pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒，由以下方法制备得到：
(1)将聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PPEGMA10(平均分子量9179)50mg，按照0.025:1的质量比溶于有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺20ml中，25℃下混合搅拌12h，形成聚合物混合溶液；
取10mg胰岛素溶于浓度为0.001mol/L的药用盐酸溶液10ml按照0.001:1的质量比在25℃下搅拌30min充分溶解配成胰岛素酸液；
将胰岛素酸液逐滴加入聚合物混合溶液，使聚合物与胰岛素的质量比为10:1，滴加完毕后继续搅拌混和30min，得到混合溶液；
(2)将混合溶液转移到透析袋(截留分子量MWCO＝7000D)内，用pH＝5.0的醋酸-醋酸钠缓冲液透析24h，以除去胶束溶液中的有机溶剂和未包载的游离胰岛素，其中聚合物胶束溶液与醋酸-醋酸钠缓冲液的体积比为1:100，透析过程中需要定时跟换缓冲液，其间隔时间前12h内每2h更换一次缓冲液，透析12h后每6h更换一次，得到混合胶束；
(3)450nm微孔滤膜过滤混合胶束，-45℃冷冻干燥48h即得pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒，
所得载胰岛素混合胶束的电位为-16.4mV，粒径为212.9nm，载药质量百分数为14.9％，质量包封率为89.8％。
实施例5
pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒，由以下方法制备得到：
(1)聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PAEMA40(平均分子量＝11529)50mg，按照0.025:1的质量比溶于有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺20ml中，25℃下混合搅拌12h，形成聚合物混合溶液；
取10mg胰岛素溶于浓度为0.001mol/L的药用盐酸溶液10ml按照0.001:1的质量比在25℃下搅拌30min充分溶解配成胰岛素酸液；
将胰岛素酸液逐滴加入聚合物混合溶液，使聚合物与胰岛素的质量比为10:1，滴加完毕后继续搅拌混和30min，得到混合溶液；
(2)将混合溶液转移到透析袋(截留分子量MWCO＝7000D)内，用pH＝5.0的醋酸-醋酸钠缓冲液透析24h，以除去胶束溶液中的有机溶剂和未包载的游离胰岛素，其中聚合物胶束溶液与醋酸-醋酸钠缓冲液的体积比为1:100，透析过程中需要定时跟换缓冲液，其间隔时间前12h内每2h更换一次缓冲液，透析12h后每6h更换一次，得到混合胶束；
(3)450nm微孔滤膜过滤混合胶束，-45℃冷冻干燥48h即得pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒，
所得载胰岛素混合胶束的电位为38.2mV，粒径为200.8nm，载药质量百分数8.8％，质量包封率74.9％。
对比例1
空白混合胶束纳米粒，由以下方法制备得到：
(1)将聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PPEGMA10(平均分子量9179)和聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PAEMA40(平均分子量＝11529)各25mg(即1:1质量比)，按照0.025:1的质量比溶于有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺20ml中，25℃下混合搅拌12h，形成聚合物混合溶液；
将浓度为0.001mol/L的药用盐酸溶液10ml逐滴加入聚合物混合溶液，滴加完毕后继续搅拌混和30min，得到混合溶液；
(2)将混合溶液转移到透析袋(截留分子量MWCO＝7000D)内，用pH＝5.0的醋酸-醋酸钠缓冲液透析24h，以除去胶束溶液中的有机溶剂和未包载的游离胰岛素，其中聚合物胶束溶液与醋酸-醋酸钠缓冲液的体积比为1:100，透析过程中需要定时跟换缓冲液，其间隔时间前12h内每2h更换一次缓冲液，透析12h后每6h更换一次，得到混合胶束；
(3)450nm微孔滤膜过滤混合胶束，-45℃冷冻干燥48h即得空白混合胶束纳米粒，
所得空白混合胶束纳米粒的电位为18.9mV，粒径为143.9nm。
对比例2
空白混合胶束纳米粒，由以下方法制备得到：
(1)将聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PPEGMA10(平均分子量9179)和聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PAEMA40(平均分子量＝11529)共50mg(质量比7:3)，按照0.025:1的质量比溶于有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺20ml中，25℃下混合搅拌12h，形成聚合物混合溶液；
将浓度为0.001mol/L的药用盐酸溶液10ml逐滴加入聚合物混合溶液，滴加完毕后继续搅拌混和30min，得到混合溶液；
(2)将混合溶液转移到透析袋(截留分子量MWCO＝7000D)内，用pH＝5.0的醋酸-醋酸钠缓冲液透析24h，以除去胶束溶液中的有机溶剂和未包载的游离胰岛素，其中聚合物胶束溶液与醋酸-醋酸钠缓冲液的体积比为1:100，透析过程中需要定时跟换缓冲液，其间隔时间前12h内每2h更换一次缓冲液，透析12h后每6h更换一次，得到混合胶束；
(3)450nm微孔滤膜过滤混合胶束，-45℃冷冻干燥48h即得空白混合胶束纳米粒，
所得空白混合胶束纳米粒的电位为-4.22mV，粒径为159.6nm。
对比例3
空白混合胶束纳米粒，由以下方法制备得到：
(1)将聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PPEGMA10(平均分子量9179)和聚合物P(MMA30-co-MAA35)-b-PAEMA40(平均分子量＝11529)共50mg(质量比3:7)，按照0.025:1的质量比溶于有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺20ml中，25℃下混合搅拌12h，形成聚合物混合溶液；
将浓度为0.001mol/L的药用盐酸溶液10ml逐滴加入聚合物混合溶液，滴加完毕后继续搅拌混和30min，得到混合溶液；
(2)将混合溶液转移到透析袋(截留分子量MWCO＝7000D)内，用pH＝5.0的醋酸-醋酸钠缓冲液透析24h，以除去胶束溶液中的有机溶剂和未包载的游离胰岛素，其中聚合物胶束溶液与醋酸-醋酸钠缓冲液的体积比为1:100，透析过程中需要定时跟换缓冲液，其间隔时间前12h内每2h更换一次缓冲液，透析12h后每6h更换一次，得到混合胶束；
(3)450nm微孔滤膜过滤混合胶束，-45℃冷冻干燥48h即得空白混合胶束纳米粒，
所得空白混合胶束纳米粒的电位为20.2mV，粒径为211.6nm。

Claims (10)

1.一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤如下：
(1)将胰岛素酸溶液滴加至聚合物溶液中，得到混合溶液；
(2)将混合溶液转移到透析袋内，在缓冲液中透析得到混合胶束；
(3)过滤混合胶束，冷冻干燥即得pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒；
所述聚合物溶液中的聚合物为P(MMA-co-MAA)-b-PEGMA和/或P(MMA-co-MAA)-b-PAEMA。
2.根据权利要求1所述的一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒的制备方法，其特征在于，所述聚合物溶液中P(MMA-co-MAA)-b-PEGMA和P(MMA-co-MAA)-b-PAEMA的质量比为1:0～3。
3.根据权利要求1或2所述的一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒的制备方法，其特征在于，P(MMA-co-MAA)-b-PEGMA的相对分子量为6000～12000，结构式为：
P(MMA-co-MAA)-b-PAEMA的相对分子量为8000～16000，结构式为：
其中，x为30～50，y为25～45，w为10～30，z为30～50。
4.根据权利要求1所述的一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述聚合物溶液的浓度为1.5～5mg/mL；
所述聚合物溶液的制备方法为：将聚合物溶于DMF中，20～30℃搅拌15～18h。
5.根据权利要求1所述的一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述胰岛素酸溶液的浓度为0.5～2mg/mL；
所述胰岛素酸溶液的制备方法为：将胰岛素溶于pH值为2～3的药用稀盐酸中，20～30℃搅拌20～40min。
6.根据权利要求1、4、5任一项所述的一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒的制备方法，其特征在于，所述混合溶液中聚合物与胰岛素的质量比为5～20:1。
7.根据权利要求1所述的一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述透析的操作为：透析24～48h，其中前12h内每2h更换一次缓冲液，透析12h后每6h更换一次缓冲液至透析结束。
8.根据权利要求1或7所述的一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为pH值＝4.5～5.5的醋酸-醋酸钠缓冲液。
9.根据权利要求1所述的一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述过滤为以微孔滤膜过滤；
所述冷冻干燥的时间为48～72h。
10.一种pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒，其特征在于，所述pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒由权利要求1～9任一项所述方法制备得到，所述pH敏感/膜粘附性双功能载胰岛素混合胶束纳米粒的粒径为150～350nm。
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