CN111053741B - 一种用于治疗炎症性肠病的基于β-谷甾醇与5-ASA的口服多敏感胶束前药 - Google Patents

一种用于治疗炎症性肠病的基于β-谷甾醇与5-ASA的口服多敏感胶束前药 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种用于治疗炎症性肠病的基于β‑谷甾醇与5‑ASA的口服多敏感胶束前药，涉及药物合成技术领域，包括如下步骤：BSMA的合成：将β‑谷甾醇用二氯甲烷溶解，使用二氯甲烷将固体溶解形成乳化液，白色固体即为BSMA；ASAPPDMA的合成：用四氢呋喃溶解N‑boc‑p‑苯二胺，得到的白色固体即为Boc‑PPDMA；用二氯甲烷溶解Boc‑PPDMA，加入三氟乙酸，得到固体即为PPDMA；将PPDMA溶于盐酸中，向溶液中加入NaNO2形成中间产物，将得到固体命名为ASAPPDMA，甲基丙烯酸甲酯溶于10mL N,N‑二甲基甲酰胺于烧瓶中混合，得到固体为PMMA‑PEGMA聚合物；将PMMA‑PEGMA聚合物溶解于N,N‑二甲基甲酰胺中，将溶液泵入水中，形成空白胶束P(MMA‑BSMA‑ASAPPDMA)‑PEGMA聚合物，泵入水中，形成荧光胶束。本发明作用效果好，稳定性高。

Description

一种用于治疗炎症性肠病的基于β-谷甾醇与5-ASA的口服多 敏感胶束前药
技术领域
本发明属于药物合成技术领域，本发明涉及一种用于治疗炎症性肠病的基于β-谷甾醇与5-ASA的口服多敏感胶束前药。
背景技术
炎症性肠病(IBD)是一种全球性疾病，其发病率在西方国家呈稳步上升趋势，在世界范围内不断出现和发展。克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)是IBD的两种常见形式。IBD没有治愈方法，目前的治疗策略旨在达到并维持炎症发作的缓解。因此，患者只能接受旨在阻断或抑制各种免疫炎症水平的药物治疗。
水杨酸唑磺胺吡啶(SASP)和5-ASA治疗轻中度IBD有效，而类固醇治疗严重急性IBD更有效。SASP是由磺胺嘧啶(SP)和5-ASA之间的偶氮键形成的化合物，口服SASP后，大部分SASP被富含于结肠的azo还原酶裂解为SP和5-ASA。SP虽然具有一定的抗炎作用，但也是SASP不良反应的主要成分。5-ASA是SASP发挥治疗作用的主要有效成分。但由于溶于盐酸，不经代谢和降解很难通过胃酸环境。因此，5-ASA很难在结肠内靶向和浓缩，因此其疗效降低。类固醇通过影响体内激素水平以不同的方式治疗IBD。虽然类固醇对严重急性结肠炎更有效，但长期使用会导致全身副作用。因此，类固醇经常与其他药物结合使用，或制成缓释材料，以减少全身副作用。甾醇是一种广泛存在于动植物细胞和组织中的甾醇。根据其原料来源，可分为三类：动物甾醇、植物甾醇和真菌甾醇。动物甾醇以胆固醇为代表，植物甾醇主要以β-谷甾醇、大豆甾醇和油菜甾醇为代表，麦角甾醇属于真菌甾醇。动物性食物摄入过多会导致血清胆固醇浓度过高、高血压和冠心病，从而导致机体调节功能紊乱。植物甾醇能促进胆固醇的异化，抑制胆固醇在肝脏的生物合成，抑制胆固醇在肠道的吸收，从而预防心血管疾病。植物甾醇最大的功能是甾体类功能的“智能管理”，它在体内表现出一定的激素活性，没有激素副作用。当人体激素水平高于正常水平时，植物甾醇就会“起作用”，说明它会阻碍胆固醇的吸收，降低人体激素水平。当人体激素水平低于正常水平时，植物甾醇会“转化”成激素，从而达到平衡。β-谷甾醇作为天然植物甾醇和中药有效成分，具有抗氧化、抗炎、降胆固醇、抗肿瘤等特性，广泛应用于动脉粥样硬化、糖尿病、癌症、炎症等疾病的治疗。但β-谷甾醇不溶于水、碱和酸，限制了其临床应用。
近年来，纳米药物载体工程的发展为IBD靶向药物研究提供了新的策略，IBD靶向药物已成为靶向药物的研究范式。以IBD为靶点的口服给药的设计挑战包括胃内酸性pH值(1.0-2.5)、唾液、胃、小肠和结肠中丰富的酶、可变的胃肠道转运时间、结肠中的细菌负荷以及炎症部位复杂的微环境。基于壳聚糖、PLGA和Eudragit三种聚合物的IBD实验模型的研究较多。壳聚糖是一种天然多糖，具有良好的黏附性。PLGA是一种生物可降解的聚合物，可以在体内水解为乳酸和乙醇酸，在柠檬酸循环中进一步代谢。Eudragit是由甲基丙烯酸二甲胺乙酯、甲基丙烯酸和甲基丙烯酸按不同比例聚合而成的一种阳离子或阴离子共聚物。Eudragit是一种pH敏感材料，类似于传统大批量制剂中使用的聚合物，广泛应用于经皮给药制剂的胃粘膜、肠粘膜、缓控释膜、保护隔离膜、缓释骨架材料和骨架粘合剂等。Eudragit作为一种pH敏感材料，广泛应用于制备胃粘膜、肠粘膜、保护隔离膜和缓释骨架。
因此，急需一种作用效果好，稳定性高的用于治疗炎症性肠病的基于β-谷甾醇与5-ASA的口服多敏感胶束前药。
发明内容
为了解决现有一种用于治疗炎症性肠病药物问题，本发明提供一种用于治疗炎症性肠病的基于β-谷甾醇与5-ASA的口服多敏感胶束前药。
本发明提供了如下的技术方案：
一种用于治疗炎症性肠病的基于β-谷甾醇与5-ASA的口服多敏感胶束前药，包括如下步骤：
S1.BSMA的合成：将β-谷甾醇用二氯甲烷(DCM)溶解，加入三乙胺平衡反应，在0℃条件下滴入甲基丙烯酰氯，反应稳定后，在室温下搅拌12h，饱和NaHCO3萃取反应产物3次后用无水Na2SO4脱水，溶剂挥发后，使用DCM将固体溶解形成乳化液，将乳化液使用甲醇进行重沉淀，通过旋转蒸发器干燥后得到的白色固体即为BSMA；
S2.ASAPPDMA的合成：用四氢呋喃(THF)溶解N-boc-p-苯二胺，加入三乙胺平衡反应，在氮气保护下于0℃将甲基丙烯酰氯滴入并回流4h，饱和Na2CO3萃取反应产物，除去过量的甲基丙烯酰氯后用无水Na2SO4脱水，溶剂挥发后，使用DCM将固体溶解形成乳化液，将乳化液使用石油醚进行重沉淀，通过旋转蒸发器干燥后得到的白色固体即为Boc-PPDMA；
S3.PPDMA的合成：用DCM溶解Boc-PPDMA，在0℃条件下缓慢加入三氟乙酸，待溶液澄清后在室温下搅拌2h，蒸发溶剂后得到的橙色固体使用20mLDCM稀释，饱和Na2CO3萃取反应产物，除去过量的三氟乙酸后用无水Na2SO4脱水，溶剂挥发后，使用DCM将固体溶解形成乳化液，将乳化液使用正己烷进行重沉淀，通过旋转蒸发器干燥后得到固体即为PPDMA；
S4.ASAPPDMA的合成：将PPDMA溶于盐酸中，向溶液中加入NaNO2形成中间产物，将中间产物缓慢滴入水杨酸硼酸缓冲溶液，室温下搅拌12h，将溶液pH调至3后，加入等体积DCM提取产物后用无水Na2SO4脱水，溶剂挥发后，使用DCM将固体溶解形成乳化液，将乳化液使用正己烷进行重沉淀，通过旋转蒸发器干燥后得到固体命名为ASAPPDMA；
S5.PMMA-PEGMA聚合物的合成：将甲基丙烯酸甲酯(MMA)溶于10mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)于烧瓶中混合，超声溶解后溶液经氩气搅拌脱氧30min，将纯化的溴化亚铜(CuBr)在氩气保护下于烧瓶后，用恒压滴定漏斗将上述溶液缓慢滴入烧瓶反应10min，在0℃条件下将配体N,N,N',N”,N”-五甲基二乙烯基三胺(PMDETA)加入溶液中，将引发剂2-溴异丁酸乙酯(EBriB)在85℃条件下加入溶液中，溶液在氩气保护下在85℃下搅拌2h后，加入亲水单体聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯(PEGMA)，反应24h后将溶液冷却至室温，使用浸出剂四氢呋喃(THF)和中性氧化铝柱层析法除去催化剂CuBr通过旋转蒸发器浓缩浸出液，将浸出液使用正己烷进行重沉淀，将沉淀在50℃条件下干燥，得到固体命名为PMMA-PEGMA聚合物；
S6.聚合物的组装：将PMMA-PEGMA聚合物溶解于DMF中，将溶液通过微型注射泵泵入水中，形成空白胶束P(MMA-BSMA-ASAPPDMA)-PEGMA聚合物，将P(MMA-BSMA-ASAPPDMA)-PEGMA聚合物溶解于DCM中，通过微注射泵泵入水中，形成前药胶束，将PMMA-PEGMA聚合物、5-ASA和β-谷甾醇溶于有机溶液中，用微量注射泵泵入水中，形成药物载体胶束，将PMMA-PEGMA聚合物和心脏绿溶解于DMF中，经微注射泵泵入水中，形成荧光胶束。
优选的,步骤S4中将PPDMA溶于25mL 0.1M盐酸中，向溶液中加入5mL 0.25M NaNO2形成中间产物，将中间产物缓慢滴入50mL 0.04m pH 9.3水杨酸硼酸缓冲溶液。
优选的,步骤S6中有机溶液是DMF和甲苯体积比为1:1的溶液。
本发明的有益效果是：本申请以β-谷甾醇和ASA为原料，设计合成了一种具有pH敏感性和酶反应特性的口服胶束前药，如图1所示，口服后，在胃酸环境中，药物团被紧紧包裹在胶束的核心，防止药物团在酸性条件下降解；当胶束转移到小肠和结肠时，胶束颗粒会随着pH值的升高而膨胀，从而使药效团暴露在肠道环境中，大量的微生物降解暴露在外的药效团，从而释放出药物分子；在正常结肠区，粘膜内外层相对完整，药物分子不易保留；在炎症区，药物分子更容易滞留在黏膜层并穿透肠壁细胞，从而治疗炎症巨噬细胞，作用效果好，稳定性高。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1是基于β-谷甾醇与5-ASA的口服多敏感胶束前药治疗炎症性肠病的示意图；
图2是P(MMA-BSMA-ASAPPDMA)-PEGMA聚合物材料的合成路线图；
图3是聚合物单体与聚合物分子的NMR表征图，A、B、C、D和E分别表示BSMA、ASAPPDMA、PMMA、PMMA-PEGMA和P(MMA-BSMA-ASAPPDMA)-PEGMA的NMR表征图；
图4是纳米颗粒的粒径与形貌表征图：A表示空白和前体胶束在pH为1.2和7.4的DLS中的粒度分布图；在pH 7.4下TEM对空白B和前体C胶束的形态表征；
图5中A表示载药胶束的体外释放特性图，B表示前药胶束在SIF(pH 7.4)中5-ASA的释放图，C表示前药胶束中β-谷甾醇在SGF(pH 1.2)中的释放图；
图6是药物和胶束材料的细胞毒性图，A表示添加酯酶和偶氮还原酶并没有显著降低巨噬细胞的活性，B、C和D分别表示空白对照、药物载体和前药胶束的细胞毒性；
图7是结肠炎的组织学评价图，A表示HE染色观察不同处理对结肠炎(DSS诱导)的组织学影响，B大鼠和健康对照组口服前药胶束的体内荧光显像，C表示DSS诱导大鼠的体重变化和不同治疗小鼠的每日体重变化；D表示结肠MPO、TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6，ELISA法测定不同处理小鼠IL-12活性。
具体实施方式
实施例
一种用于治疗炎症性肠病的基于β-谷甾醇与5-ASA的口服多敏感胶束前药，包括如下步骤：
S1.BSMA的合成：将β-谷甾醇用DCM溶解，加入三乙胺平衡反应，在0℃条件下滴入甲基丙烯酰氯，反应稳定后，在室温下搅拌12h，饱和NaHCO3萃取反应产物3次后用无水Na2SO4脱水，溶剂挥发后，使用DCM将固体溶解形成乳化液，将乳化液使用甲醇进行重沉淀，通过旋转蒸发器干燥后得到的白色固体即为BSMA；
S2.ASAPPDMA的合成：用THF溶解N-boc-p-苯二胺，加入三乙胺平衡反应，在氮气保护下于0℃将甲基丙烯酰氯滴入并回流4h，饱和Na2CO3萃取反应产物，除去过量的甲基丙烯酰氯后用无水Na2SO4脱水，溶剂挥发后，使用DCM将固体溶解形成乳化液，将乳化液使用石油醚进行重沉淀，通过旋转蒸发器干燥后得到的白色固体即为Boc-PPDMA；
S3.PPDMA的合成：用DCM溶解Boc-PPDMA，在0℃条件下缓慢加入三氟乙酸，待溶液澄清后在室温下搅拌2h，蒸发溶剂后得到的橙色固体使用20mLDCM稀释，饱和Na2CO3萃取反应产物，除去过量的三氟乙酸后用无水Na2SO4脱水，溶剂挥发后，使用DCM将固体溶解形成乳化液，将乳化液使用正己烷进行重沉淀，通过旋转蒸发器干燥后得到固体即为PPDMA；
S4.ASAPPDMA的合成：将PPDMA溶于盐酸中，向溶液中加入NaNO2形成中间产物，将中间产物缓慢滴入水杨酸硼酸缓冲溶液，室温下搅拌12h，将溶液pH调至3后，加入等体积DCM提取产物后用无水Na2SO4脱水，溶剂挥发后，使用DCM将固体溶解形成乳化液，将乳化液使用正己烷进行重沉淀，通过旋转蒸发器干燥后得到固体命名为ASAPPDMA；
S5.PMMA-PEGMA聚合物的合成：将MMA溶于10mL DMF于烧瓶中混合，超声溶解后溶液经氩气搅拌脱氧30min，将纯化的CuBr在氩气保护下于烧瓶后，用恒压滴定漏斗将上述溶液缓慢滴入烧瓶反应10min，在0℃条件下将配体PMDETA加入溶液中，将引发剂EBriB在85℃条件下加入溶液中，溶液在氩气保护下在85℃下搅拌2h后，加入亲水单体PEGMA，反应24h后将溶液冷却至室温，使用浸出剂THF和中性氧化铝柱层析法除去催化剂CuBr通过旋转蒸发器浓缩浸出液，将浸出液使用正己烷进行重沉淀，将沉淀在50℃条件下干燥，得到固体命名为PMMA-PEGMA聚合物；
S6.聚合物的组装：将PMMA-PEGMA聚合物溶解于DMF中，将溶液通过微型注射泵泵入水中，形成空白胶束P(MMA-BSMA-ASAPPDMA)-PEGMA聚合物，将P(MMA-BSMA-ASAPPDMA)-PEGMA聚合物溶解于DCM中，通过微注射泵泵入水中，形成前药胶束，将PMMA-PEGMA聚合物、5-ASA和β-谷甾醇溶于有机溶液中，用微量注射泵泵入水中，形成药物载体胶束，将PMMA-PEGMA聚合物和心脏绿(NIF染料)溶解于DMF中，经微注射泵泵入水中，形成近红外荧光胶束。合成线路图如图2所示。
实验例
用核磁共振(1hnmr)对聚合物及其前驱体的化学结构进行了表征，结果如图3所示，在图(3，A)中，BSMA的CH2＝C(CH3)-(A，b)的特征峰分别出现在5.8-6.2ppm和2.0ppm，与羟基相连的第三系烃的特征峰(c)出现在4.7ppm，β-谷甾醇的四环三萜类化合物在0.7-2.0ppm时出现大量质子峰，其中甲基(e)是β-谷甾醇在0.7ppm时的特征峰；在图(3，B)中，ASAPPDMA的CH2＝C(CH3)-(B，d)和-NH(a)的特征峰分别出现在5.6-5.8ppm、2.0ppm和10.2ppm，而苯环的特征峰由于偶氮键的影响而移到7.8ppm(C)；图(3，C)显示了PMMA聚合物的NMR图，0.75-1.2ppm和1.72-1.9ppm分别对应于主链上的-CCH3(d)和-CH2–(c)，而支链上的-OCH3特征峰(a)出现在3.6ppm，聚合物末端-OCH2-(b)的特征峰出现在4.1ppm，MMA[CH2＝C(CH3)-]的特征质子峰在5.6-6.2ppm和2.0ppm处消失，表明MMA聚合成功；PMMA和PEGMA继续聚合形成PMMA-PEGMA聚合物，如图(3，D)所示，与PMMA相比，PEG的-OCH2CH2O-(b)的特征峰出现在3.58ppm处，这与PMMA支链上-OCH3的特征峰(a)在3.6ppm处有所区别，在5.6-6.2ppm和2.0ppm下，CH2＝C(CH3)特征峰消失，表明PEGMA在PMMA上成功地聚集；前药胶束P(MMA-BSMA-ASAPPDMA)-PEGMA的1hnmr如图(3，E)所示。除具有其他两种聚合物的质子峰特征外，在0.7ppm和5.5-10.2ppm出现β-谷甾醇(a)和ASAPPDMA(b，f，d，e，c)的特征峰。此外，CH2＝C(CH3)-(5.6-6.2ppm的特征峰，2.0ppm)消失，表明β-谷甾醇和ASAPPD成功地负载在胶束聚合物上。
聚合物胶束的粒径分布如图(4，A)所示，结果显示胶束和前药胶束，无论是在模拟肠液(SIF)或模拟胃液(SGF)，其大小分布呈现出明显的单峰正态分布，没有尾部或双峰，这表明胶束的大小是相对均匀的，随着药效块的加入，胶束的大小增加了约140nm，同时，药效块的加入增加了胶束疏水段的疏水性，提高了胶束核心的致密化程度，溶液pH值对胶束粒径有明显的溶胀作用，当pH值从1.2增加到7.4时，空白胶束的平均粒径从125nm增加到200nm，加入药效块的胶束平均粒径从260nm增加到350nm，分布范围更广。
载药胶束的体外释放特性如图(5，A)所示，载药胶束对5-ASA和β-谷甾醇的释放特性存在显著差异，在SGF(pH 1.2)中，5-ASA的释放速率快，0.5h内达到47％，然而，在接下来的1.5h内，5-ASA的释放量不足10％，当透析液pH值升高到6时，5-ASA的释放速率增加，在2h内达到80％，ASA的快速释放主要是由于其良好的水溶性，在胶束组装过程中，胶束核心包裹少量5-ASA，而大部分5-ASA漂浮在胶束外，当透析液的pH值从1.2上升到6时，胶束的核心膨胀，5-ASA从胶束的核心释放出来，β-谷甾醇在药物载体胶束中的体外释放特性与5-ASA不同，SGF(pH 1.2)中β-谷甾醇的释放速率慢，2h内仅释放8％的β-谷甾醇，当pH值增加到6时，β-谷甾醇的释放速率缓慢增加，当透析液pH值增加到7.4时，β-谷甾醇的释放量急剧增加，β-谷甾醇在胶束组装过程中，由于其高脂溶性，大部分被胶束疏水核包裹，β-谷甾醇的释放也与溶胀度有关，溶胀度与溶液pH值关系更大；前药胶束释放β-谷甾醇和5-ASA更多地依赖于酶，如图5(B，C)所示。由于β-谷甾醇和5-ASA在胶束内结合，解离药物在没有酶的情况下释放，然而，当酶加入透析液中时，与药物结合的化学键被破坏，释放出β-谷甾醇和5-ASA；图5(C)显示了前药胶束中β-谷甾醇在SGF(pH 1.2)中的释放。结果显示在没有酶的情况下几乎没有β-谷甾醇释放，在透析袋中加入酯酶后，在透析袋外检测到β-谷甾醇，说明SGF中的酶已经破坏了聚合物材料与β-谷甾醇之间的酯键，通过调节透析液的pH值至7.4，β-谷甾醇的释放率在10h内由14.3％提高到52.3％，表明大部分酯键已断裂；图5(B)显示了前药胶束在SIF(pH 7.4)中5-ASA的释放，结果表明，在添加azo还原酶之前，仅检测到少量5-ASA，当在透析袋中加入偶氮还原酶时，在透析袋外检测到5-ASA，这表明SIF中的酶已经破坏了高分子材料与5-ASA之间的偶氮键，5-ASA在2h内的释放率由10.3％提高到48.5％；通过比较空白胶束和前药胶束的释放特性，发现将水溶性5-ASA制成前药胶束可以延缓5-ASA的释放，增加药物的载药量。同时，前药胶束的pH响应和酶响应特性保证了药物在体内运输时不会被提前裂解，保证了前药胶束在结肠炎区域的富集。
药物和胶束材料的细胞毒性如图6所示，LPS激活的巨噬细胞的细胞活力与正常人相似，如图(6，A)所示，添加酯酶和偶氮还原酶并没有显著降低巨噬细胞的活性，解离5-ASA显示出明显的细胞毒性，当培养基中5-ASA浓度上升到500ug/mL时，活化巨噬细胞的活力下降到63％,，β-谷甾醇具有比5-ASA少的细胞毒性，活化的巨噬细胞的存活率仅下降26％，β-谷甾醇的浓度高达500μg/mL。然而，含有5-ASA和β-谷甾醇的制剂在活化巨噬细胞上具有比5-ASA单体更大的细胞毒性，β-谷甾醇对5-ASA有很强的协同增强作用，细胞活力由63％下降到44％；空白对照、药物载体和前药胶束的细胞毒性显示在图(6，B,C，D)中，无论酶的添加与否，当空白胶束浓度达到500μg/mL时，活化巨噬细胞的存活率均保持在80％以上，表现为低浓度的胶束；药物载体胶束对活化的巨噬细胞有很大的毒性，而前药胶束在酶的作用下起作用，在缺乏酶的情况下，前药胶束对活化的巨噬细胞毒性较小，细胞活力达到79％。然而，前药胶束、酯酶和偶氮还原酶的共同孵育对活化的巨噬细胞有毒性作用，细胞存活率从79％下降到55％，表明在酶的作用下，前药胶束会裂解和分解。
HE染色观察不同处理对结肠炎(DSS诱导)的组织学影响如图(7，A)所示，结肠炎(DSS处理)小鼠表现为上皮细胞侵蚀、细胞边界模糊、杯状细胞丢失、基质水肿，固有层中的炎性细胞明显增多，这是明显的炎症迹象，分离ASA和ASA&sito治疗也观察到明显的组织损伤，相反，药物载体胶束和前药胶束处理组的组织形态与健康小鼠相似，表明上皮细胞恢复，细胞浸润减少。切片的组织学评价证实，与其他治疗方法相比，胶束材料治疗的小鼠炎症反应明显减轻。
近红外荧光显示了摄入NIF胶束后胶束在体内的代谢分布如图(7，B)所示，24h后胃肠区出现少量荧光，48h后荧光基本消失，说明胶束基本完全代谢，然而，对于结肠炎小鼠，无论是24h还是48h，小鼠体内都存在大量的荧光胶束，广泛分布于胃肠道。这表明胶束可以有效地滞留在结肠炎中，达到延长药物释放的目的。
长期监测小鼠体重如图(7，C)所示，在喂养期间，正常小鼠体重一直在增加，而未经治疗的结肠炎小鼠体重则下降了35％，离解性5-ASA和β-谷甾醇对结肠炎小鼠的增重作用不明显，但体重下降趋势有所减缓，用药物载体胶束治疗结肠炎小鼠，减肥效果迅速逆转，尤其是前药胶束治疗的结肠炎小鼠，其体重基本恢复到初始水平的102％，说明前药胶束具有很好的疗效。
ELISA法测定不同处理小鼠结肠MPO、TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-12活性，如图(7，D)所示，结肠炎组的炎症水平明显高于正常对照组，而5-ASA的解离治疗则略有降低，β-谷甾醇对5-ASA有协同增强作用，β-谷甾醇与5-ASA联合应用可使炎症水平降低30％，胶束治疗组进一步降低了结肠炎的炎症水平，前药胶束组效果最好，结肠炎症恢复到几乎正常水平。
本实施例以5-ASA和β-谷甾醇为主要药物载体，合成了前药胶束，随着溶液pH值的变化，颗粒具有明显的溶胀效应，在pH 7.4条件下，胶束的平均粒径约为360nm，前药胶束的释放能力受pH值和酶的影响，表明前药胶束在胃液中几乎不降解，在富含酶和肠液pH值升高的影响下，前药胶束的药效团暴露并解离为β-谷甾醇和5-ASA，细胞毒性显示5-ASA对炎性细胞有明显毒性作用，β-谷甾醇对5-ASA有协同增强作用，空白胶束具有轻微毒性，而前药胶束材料的细胞毒性随孵育时间的增加而增加，通过动物实验评价胶束的治疗效果。在长期治疗中，前药胶束的治疗效果最好，药物包裹胶束的治疗效果明显优于游离药物，因此前药胶束在IBD治疗中具有广阔的临床应用前景。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种用于治疗炎症性肠病的基于β-谷甾醇与5-ASA的口服多敏感胶束前药，其特征在于，其通过包括如下步骤的制备方法所制备得到 ：
Figure FDA0003201458510000011
其中：
BSMA的合成：将β-谷甾醇用二氯甲烷溶解，加入三乙胺平衡反应，在0℃条件下滴入甲基丙烯酰氯，反应稳定后，在室温下搅拌12h，饱和NaHCO3萃取反应产物3次后用无水Na2SO4脱水，溶剂挥发后，使用二氯甲烷将固体溶解形成乳化液，将乳化液使用甲醇进行重沉淀，通过旋转蒸发器干燥后得到的白色固体即为BSMA；
boc-PPDMA的合成：用四氢呋喃溶解N-boc-p-苯二胺，加入三乙胺平衡反应，在氮气保护下于0℃将甲基丙烯酰氯滴入并回流4h，饱和Na2CO3萃取反应产物，除去过量的甲基丙烯酰氯后用无水Na2SO4脱水，溶剂挥发后，使用二氯甲烷将固体溶解形成乳化液，将乳化液使用石油醚进行重沉淀，通过旋转蒸发器干燥后得到的白色固体即为Boc-PPDMA；
PPDMA的合成：用二氯甲烷溶解Boc-PPDMA，在0℃条件下缓慢加入三氟乙酸，待溶液澄清后在室温下搅拌2h，蒸发溶剂后得到的橙色固体使用20mL二氯甲烷稀释，饱和Na2CO3萃取反应产物，除去过量的三氟乙酸后用无水Na2SO4脱水，溶剂挥发后，使用二氯甲烷将固体溶解形成乳化液，将乳化液使用正己烷进行重沉淀，通过旋转蒸发器干燥后得到固体即为PPDMA；ASAPPDMA的合成：将PPDMA溶于盐酸中，向溶液中加入NaNO2形成中间产物，将中间产物缓慢滴入水杨酸硼酸缓冲溶液，室温下搅拌12h，将溶液pH调至3后，加入等体积二氯甲烷提取产物后用无水Na2SO4脱水，溶剂挥发后，使用二氯甲烷将固体溶解形成乳化液，将乳化液使用正己烷进行重沉淀，通过旋转蒸发器干燥后得到固体命名为ASAPPDMA；
聚合物的组装：将P(MMA-BSMA-ASAPPDMA)-PEGMA聚合物溶解于二氯甲烷中，通过微注射泵泵入水中，形成前药胶束。
2.根据权利要求1所述的用于治疗炎症性肠病的基于β-谷甾醇与5-ASA的口服多敏感胶束前药，其特征在于， ASAPPDMA的合成中将PPDMA溶于25mL 0.1M盐酸中，向溶液中加入5mL 0.25M NaNO2形成中间产物，将中间产物缓慢滴入50mL 0.04M pH 9.3水杨酸硼酸缓冲溶液。
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